專利名稱：一種苦瓜多肽及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苦瓜多肽及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
苦瓜(Momordica charantia L.)為葫蘆科植物，整株植物包括果實(shí)均有苦味，葉 邊緣齒狀，果實(shí)長(zhǎng)方形，嫩果翡翠綠色，成熟后為橘黃色；生長(zhǎng)在亞熱帶地區(qū)，因其既可入 藥，又可用作蔬菜，在世界范圍內(nèi)廣泛種植。果實(shí)性苦，味寒，有清暑滌熱、明目解毒等功效， 局部外敷治療外傷，內(nèi)服用于驅(qū)蟲(chóng)、調(diào)經(jīng)、抗病毒、治療麻疹及肝炎。藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有治 療糖尿病、抗病毒、抗癌、抗菌及殺蟲(chóng)等作用。目前，國(guó)內(nèi)外熱衷于用苦瓜治療糖尿病，相繼研究開(kāi)發(fā)出許多類似“苦瓜素”、“苦 瓜總皂苷”、“苦瓜茶”、“苦瓜粉”等產(chǎn)品，但這些產(chǎn)品中有效物質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量較大，人體不 易吸收和利用。像“苦瓜粉”、“苦瓜茶”、“苦瓜素”類產(chǎn)品，從中醫(yī)理論上講，體質(zhì)寒的人不 宜吃或不宜多吃、常吃。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種苦瓜多肽及其制備方法。本發(fā)明所提供的苦瓜多肽是按照包括下述步驟的方法制備得到的采用木瓜蛋白 酶對(duì)苦瓜粉進(jìn)行酶解反應(yīng)，得到所述苦瓜多肽。本發(fā)明中所述苦瓜粉是將新鮮苦瓜冷凍干燥后，粉碎得到的。所述冷凍干燥可按照常規(guī)方法進(jìn)行，如在冷凍干燥機(jī)干燥12h (預(yù)凍階段先將 冷凍干燥箱內(nèi)溫度降至-30°C至-40°C，維持2 3小時(shí)；升華階段當(dāng)冷凝器的溫度達(dá) 到-30°C以下時(shí)，對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，壓強(qiáng)設(shè)置在15 20帕之間，溫度升至30 35°C，維 持10 15小時(shí)；二次升華階段將溫度升至45 50°C，維持3 5小時(shí)，制成凍干苦瓜。本發(fā)明中，所述酶解反應(yīng)的反應(yīng)溫度為38_42°C，時(shí)間為7-8小時(shí)。所述酶解反應(yīng)的反應(yīng)體系中，苦瓜粉與水的質(zhì)量份數(shù)比為1 8-10;酶解每克苦 瓜粉所需木瓜蛋白酶為150000-180000U。酶活力單位U是指在特定條件下(25°C，pH7. 0)， 每1分鐘轉(zhuǎn)化1微摩爾的底物所需的酶量或轉(zhuǎn)化1微摩爾的有關(guān)基團(tuán)所需的酶量。在酶解反應(yīng)結(jié)束后，還需對(duì)酶解液進(jìn)行酶滅活處理，所述酶滅活的條件為溫度 100°c，時(shí)間為30分鐘。之后進(jìn)行冷藏沉降處理，得到純化的苦瓜多肽濃縮液；所述冷藏沉 降的溫度為2-4°C，時(shí)間為48-72小時(shí)。為了儲(chǔ)運(yùn)方便及適用于更多劑型，還可進(jìn)一步將上述苦瓜多肽濃縮液進(jìn)行冷凍干 燥或噴霧干燥處理制成苦瓜多肽粉末。按照上述方法制備得到的苦瓜多肽，其相對(duì)分子質(zhì)量主要在130_1000Da之間，由 2-9個(gè)氨基酸組成，其營(yíng)養(yǎng)性及降糖生理活性優(yōu)良。該苦瓜多肽可以濃縮液、冷凍干燥干粉 或噴霧干燥干粉的形式存在。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述苦瓜多肽的應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的苦瓜多肽的應(yīng)用是其在制備預(yù)防和/或治療糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種預(yù)防和/或治療糖尿病的產(chǎn)品。本發(fā)明所提供的預(yù)防和/或治療糖尿病的產(chǎn)品，其活性成分為本發(fā)明所提供的苦 瓜多肽。所述產(chǎn)品可以包括藥品、保健品或食品等。以苦瓜多肽為活性成分制備的預(yù)防和/或治療糖尿病的藥物或保健品，需要的時(shí) 候，在上述藥物或保健品中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥 學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性齊U、 吸附載體、潤(rùn)滑劑等。所述預(yù)防和/或治療糖尿病的藥物可以制成口服液、片劑、沖劑、膠囊(包括軟、硬 膠囊)、噴劑以及包衣丸劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方 法制備。


圖1為本發(fā)明制備苦瓜多肽的工藝流程圖。圖2為實(shí)施例4中苦瓜多肽的凝膠色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方法進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材 料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。下述實(shí)施例中對(duì)鮮苦瓜進(jìn)行冷凍干燥的工藝如下在冷凍干燥機(jī)干燥12h(預(yù)凍 階段先將冷凍干燥箱內(nèi)溫度降至-30°C至-40°C，維持2 3小時(shí)；升華階段當(dāng)冷凝器 的溫度達(dá)到-30°C以下時(shí)，對(duì)整個(gè)系統(tǒng)抽真空，壓強(qiáng)設(shè)置在15 20帕之間，溫度升至30 35°C，維持10 15小時(shí)；二次升華階段將溫度升至45 50°C，維持3 5小時(shí)，制成凍 干苦瓜。實(shí)施例1、制備苦瓜多肽將鮮苦瓜(人工種植或野生多籽苦瓜)放進(jìn)冷凍干燥設(shè)備里進(jìn)行冷凍干燥，之后 粉碎成粉末，即成冷凍干燥苦瓜粉。然后將苦瓜粉放進(jìn)酶解罐內(nèi)，向酶解罐內(nèi)加入苦瓜粉質(zhì) 量9倍的水，按酶解每克苦瓜粉需要木瓜蛋白酶165000U的量加入木瓜蛋白酶，在溫度40°C 條件下對(duì)苦瓜粉酶解8小時(shí)。酶解結(jié)束后，對(duì)酶解液進(jìn)行酶滅活處理，酶滅活的條件為溫度 100°C，時(shí)間為30分鐘。之后在2-4°C條件下冷藏沉降處理60小時(shí)，待其雜質(zhì)基本沉淀，再 用過(guò)濾設(shè)備過(guò)濾三遍，即得苦瓜多肽濃縮液。將該苦瓜多肽濃縮液進(jìn)行冷凍干燥或噴霧干 燥處理，即得到苦瓜多肽粉末。實(shí)施例2、制備苦瓜多肽將鮮苦瓜(人工種植或野生多籽苦瓜)放進(jìn)冷凍干燥設(shè)備里進(jìn)行冷凍干燥，之后 粉碎成粉末，即成冷凍干燥苦瓜粉。然后將苦瓜粉放進(jìn)酶解罐內(nèi)，向酶解罐內(nèi)加入所述苦瓜 粉質(zhì)量8倍的水，按酶解每克苦瓜粉需要木瓜蛋白酶150000U的量加入木瓜蛋白酶，在溫度 38°C條件下對(duì)苦瓜粉酶解7小時(shí)。酶解結(jié)束后，還需對(duì)酶解液進(jìn)行酶滅活處理，所述酶滅活的條件為溫度100°c，時(shí)間為30分鐘，之后在2-4°C條件下冷藏沉降處理48小時(shí)，待其雜質(zhì) 基本沉淀，再用過(guò)濾設(shè)備過(guò)濾三遍，即得苦瓜多肽濃縮液。將該苦瓜多肽濃縮液進(jìn)行冷凍干 燥或噴霧干燥處理，即得到苦瓜多肽粉末。實(shí)施例3、制備苦瓜多肽將鮮苦瓜(人工種植或野生多籽苦瓜)放進(jìn)冷凍干燥設(shè)備里進(jìn)行冷凍干燥，之后 粉碎成粉末，即成冷凍干燥苦瓜粉。然后將苦瓜粉放進(jìn)酶解罐內(nèi)，向酶解罐內(nèi)加入所述苦瓜 粉質(zhì)量10倍的水，按酶解每克苦瓜粉需要木瓜蛋白酶180000U的量加入木瓜蛋白酶，在溫 度42°C條件下對(duì)苦瓜粉酶解8小時(shí)。酶解結(jié)束后，還需對(duì)酶解液進(jìn)行酶滅活處理，所述酶滅 活的條件為溫度100°C，時(shí)間為30分鐘。之后在2-4°C條件下冷藏沉降處理72小時(shí)，待其 雜質(zhì)基本沉淀，再用過(guò)濾設(shè)備過(guò)濾三遍，即得苦瓜多肽濃縮液。將該苦瓜多肽濃縮液進(jìn)行冷 凍干燥或噴霧干燥處理，即得到苦瓜多肽粉末。實(shí)施例4、苦瓜多肽的分子量分布檢測(cè)苦瓜多肽的分子量分布的測(cè)定方法采用高效凝膠過(guò)濾色譜法，由江南大學(xué)分析測(cè) 試中心進(jìn)行檢測(cè)。具體方法如下1、方法提要采用高效凝膠過(guò)濾色譜法測(cè)定。即以多孔性填料為固定相，依據(jù)樣品組分分子體 積大小的差別進(jìn)行分離，在肽鍵的紫外吸收波長(zhǎng)220納米條件下檢測(cè)，使用凝膠色譜測(cè)定 分子量分布的專用數(shù)據(jù)處理軟件(即GPC軟件)，對(duì)色譜圖及其數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)算得到苦 瓜多肽的相對(duì)分子質(zhì)量大小及分布范圍。2、儀器a)高效液相色譜儀，配有紫外檢測(cè)器和含有GPC數(shù)據(jù)處理軟件的色譜工作站或積 分儀；b)流動(dòng)相真空抽濾脫氣裝置；c)超聲波震蕩器；d)分析天平，感量0. 0001克。3、試劑a)乙腈，色譜純；b)三氟醋酸，分析純；C)水，超純級(jí)或二次蒸餾水。d)分子量校正曲線所用標(biāo)準(zhǔn)品1)細(xì)胞色素 C(cyyochrome，MW12500) ；2)抑肽酶(aprotinin，MW6500)3)桿菌酶(bacit racin, MW1450) ；4)乙氨酸-乙氨酸-酪氨酸-精氨酸(NW451)5)乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸(MW189)4、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)色譜柱TSKgelG2000SWXL 300毫米X 7. 8毫米或性能與此相近的同類型其他適 用于測(cè)定蛋白質(zhì)和肽的凝膠柱。流動(dòng)相乙腈水三氟乙酸，10 90 0. 1(體積比)檢測(cè)波長(zhǎng)UV220納米流速0. 5毫升/分鐘柱溫30°C
5
進(jìn)樣體積10微升為使色譜系統(tǒng)符合檢測(cè)要求，規(guī)定在上述色譜條件下，凝膠色譜柱效即理論塔板 數(shù)(N)按三肽標(biāo)準(zhǔn)品(乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸)峰計(jì)算不低于10000，苦瓜多肽的分配系 數(shù)(Kd)應(yīng)在0-1之間。5、分子量校正曲線制作分別用流動(dòng)相配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 的上述不同分子量肽標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用孔徑 0. 2微米 0. 5微米聚四氟乙烯或尼龍過(guò)濾膜后分別進(jìn)樣，得到系列標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。以分子量的對(duì)數(shù)(IgMV)對(duì)保留時(shí)間作圖或作線性回歸得到分子校正曲線及其方程。6、樣品制備稱取樣品約20. 0毫克于10毫升容量瓶中，用流動(dòng)相定寬至刻度，超聲振蕩10分 鐘，使樣品充分溶解混勻，用孔徑為0. 2微米-0. 5微米聚四氯乙烯或尼龍過(guò)濾膜過(guò)濾后，上 機(jī)進(jìn)樣。7、分子量分布的計(jì)算將6制備的樣品溶液在上述色譜條件下分析，色譜圖見(jiàn)圖2。然后用GPC數(shù)據(jù)處理 軟件，將樣品的色譜數(shù)據(jù)代入校正曲線中進(jìn)行計(jì)算，即可得到樣品的分于量及其分布范圍。 用峰面積歸一法可計(jì)得不同分子量范圍肽的相對(duì)百分比。表1苦瓜多肽分子量分布測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
一種制備苦瓜多肽的方法，包括下述步驟采用木瓜蛋白酶對(duì)苦瓜粉進(jìn)行酶解反應(yīng)，得到所述苦瓜多肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述苦瓜粉是將新鮮苦瓜冷凍干燥后粉 碎得到的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述酶解反應(yīng)的反應(yīng)溫度為 38-42°C，反應(yīng)時(shí)間為7-8小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述酶解反應(yīng)的反 應(yīng)體系中，苦瓜粉與水的質(zhì)量份數(shù)比為1 8-10;酶解每克苦瓜粉所需木瓜蛋白酶 150000-180000U。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述方法還包括下述步驟 在酶解反應(yīng)結(jié)束后，對(duì)酶解液進(jìn)行冷藏沉降處理，過(guò)濾，收集濾液；所述冷藏沉降的溫度為 2-4°C，時(shí)間為48-72小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述方法還包括將所述濾液進(jìn)行酶滅活 處理的步驟；所述酶滅活的條件為溫度100°c，時(shí)間30分鐘。
7.權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述方法制備得到的苦瓜多肽。
8.權(quán)利要求7所述的苦瓜多肽在制備預(yù)防和/或治療糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述產(chǎn)品可為藥品、保健品或食品。
10.一種預(yù)防和/或治療糖尿病產(chǎn)品，其活性成分為權(quán)利要求7所述的苦瓜多肽。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種苦瓜多肽及其制備方法與應(yīng)用。該苦瓜多肽是按照包括下述步驟的方法制備得到的采用木瓜蛋白酶對(duì)苦瓜粉進(jìn)行酶解反應(yīng)，得到所述苦瓜多肽。其相對(duì)分子質(zhì)量主要在130～1000Da之間，均由2～9個(gè)氨基酸組成，人體極易吸收，可快速被組織利用、迅速平衡血糖，且可長(zhǎng)期服用。本發(fā)明所提供的苦瓜多肽可作為醫(yī)藥原料以及食品添加劑用于制備預(yù)防和/或治療糖尿病產(chǎn)品，如藥品、保健品、食品等。本發(fā)明制備苦瓜多肽的方法工藝簡(jiǎn)單、投資少、見(jiàn)效快、附加值高，是適宜于工業(yè)化生產(chǎn)的方法。
文檔編號(hào)A61K38/01GK101985644SQ20101052606
公開(kāi)日2011年3月16日 申請(qǐng)日期2010年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月25日
發(fā)明者鄒遠(yuǎn)東 申請(qǐng)人:鄒遠(yuǎn)東