專利名稱：一種治療腦部腫瘤的雙級靶向遞藥系統(tǒng)及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬生物醫(yī)藥技術領域，涉及靶向遞藥系統(tǒng)，具體涉及一種用于治療腦部腫瘤的雙級靶向遞藥系統(tǒng)，尤其是用于腦部腫瘤遞藥的載體系統(tǒng)-Angiopep-2修飾的聚合物納米粒及其制備方法。
背景技術：
腦膠質(zhì)瘤是臨床最常見的腫瘤之一，研究表明，它是源于神經(jīng)外胚層的腫瘤，約占顱內(nèi)腫瘤發(fā)病率的40% 50%。由于膠質(zhì)瘤呈惡性浸潤性生長，且多生長在腦重要結(jié)構， 如基底節(jié)，中央溝區(qū)，丘腦，腦干等部位，不僅手術難以全切，而且術后易復發(fā)。世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)顯示，惡性膠質(zhì)瘤是34歲以下腫瘤患者的第2位死亡原因，是35 M歲患者的第 3位死亡原因。在全球，每年惡性腦膠質(zhì)瘤無情地奪去18 60萬中青年人的寶貴生命。星狀細胞瘤(Astrocytoma)是最常見的膠質(zhì)瘤，占膠質(zhì)瘤的70、0%，可生長在腦或脊髓內(nèi)的任何地方。研究顯示，成人的星狀細胞瘤大多長在大腦，而兒童的星狀細胞瘤則常長在小腦及腦干。就腫瘤的惡性度而言，星狀細胞瘤可分為如下四級第一級-毛狀星細胞瘤(Pilocytic Astrocytoma)，第二級-星細胞瘤(Astrocytoma)屬低惡性腫瘤，第三級-分化不良星細胞瘤(Anaplastic Astrocytoma; AA)，第四級-多型性神經(jīng)膠母細胞瘤 (Glioblastoma Multiform; GBM)屬惡性腫瘤[1]。膠質(zhì)細胞瘤的生長特點為浸潤性生長，與正常腦組織無明顯界限，多數(shù)不限于一個腦葉，向腦組織外呈指狀深入破壞腦組織，偏良性者生長緩慢，病程較長，自出現(xiàn)癥狀至就診時間平均兩年，惡性者瘤體生長快，病程短，自出現(xiàn)癥狀到就診時多數(shù)在3個月之內(nèi)， 70-80%多在半年之內(nèi)。手術治療基于膠質(zhì)瘤的生長特點，理論上不可能完全切除，生長在腦干等重要部位的腫瘤有的則根本不能手術，所以手術的治療目的只能局限于減少腫瘤體積降低腫瘤細胞數(shù)量、緩解荷瘤癥狀、暫時降低顱內(nèi)壓、完成腫瘤病理診斷等四個診療目的。然而手術卻會激活處于休眠期的瘤細胞迅速進入增殖期，造成術后短期內(nèi)腫瘤惡性程度升級而復發(fā)。術后輔助放療無論從理論還是實踐上，均被證實對惡性腦膠質(zhì)瘤效果不佳，因為只有在放射劑量達到73 SOGy時，才能對膠質(zhì)瘤細胞形成有效殺傷，而正常腦組織所能耐受的劑量僅有60Gy，這一劑量實際上只是對脆弱腦組織本身的放射治療。臨床上化療是繼膠質(zhì)瘤手術切除之后的諸多治療環(huán)節(jié)中至關重要的一環(huán)，其成敗對病人的生活質(zhì)量和預后影響重大。惡性腦膠質(zhì)瘤廣泛浸潤生長和瘤細胞在遠離原發(fā)灶存在，決定了其術后應進行系統(tǒng)化療，尤其在手術和放療都難以達到療效的情況下化療是目前臨床上重要的輔助治療手段。目前該癌癥的化學治療已經(jīng)取得很大進步，但術后輔助經(jīng)靜脈系統(tǒng)化療最突出的問題是，由于腦血流量為全身血流量的1/5，同時存在腦部血腦屏障 (BBB)的特殊結(jié)構，腦膠質(zhì)瘤的化學治療效果很不理想。因此，研究腦膠質(zhì)瘤的靶向治療方法顯得尤為重要。正常組織中的微血管內(nèi)皮間隙致密、結(jié)構完整，大分子和脂質(zhì)顆粒不易透過血管壁，而實體瘤組織中血管豐富、血管壁間隙較寬、結(jié)構完整性差，淋巴回流缺失，造成大分子類物質(zhì)和脂質(zhì)顆粒具有選擇性高通透性和滯留性，這種現(xiàn)象被稱作實體瘤組織的高通透性和滯留效應，簡稱EPR效應(enhanced permeability and retention effect)。實體瘤組織的病理結(jié)構特點，使得大分子抗癌藥對實體瘤具有被動的靶向性或者選擇性的特征，全身給藥后在腫瘤組織中有較多的分布，又稱為實體瘤的被動靶向性；而小分子抗癌藥能夠自由通過正常組織和腫瘤組織的血管壁，在正常組織和腫瘤組織中的藥物分布一致，是造成抗癌效應選擇性差、毒副作用較強的重要原因之一，不具備被動靶向作用?；趯嶓w瘤組織的Era特征的腫瘤治療策略，可以在很大程度上增高抗癌藥物的靶向性，提高藥效，減輕毒副作用。納米粒是目前研究較多的一類用于腦部腫瘤治療的遞藥載體系統(tǒng)，主要因為納米粒的表面容易功能化(如PEG化延長體內(nèi)循環(huán)時間)、借助腫瘤的Era效應使攜帶化療藥物的納米粒進入腫瘤部位而增強化療效果。但是，單靠這種腫瘤的被動靶向效應很難突破性提高腦膠質(zhì)瘤的化療效果，主要是由于1)腦膠質(zhì)瘤內(nèi)部細胞致密、組織間隙壓力大、缺氧等特殊生理環(huán)境阻礙了化療藥物的進入；2)腦膠質(zhì)瘤呈浸潤性生長，浸潤到正常腦組織的腫瘤Era效應不明顯、豐富的BBB阻礙了化療藥物的滲透。目前臨床治療中，急需解決腦膠質(zhì)瘤化療同時存在的血-腦-腫瘤屏障(Blood Brain Tumor Barrier, BBTB)的問題。研究發(fā)現(xiàn)，Angiop印-2是一種分子量為2. 4K的小分子多肽，它可以同通過LRP受體介導顯著增加BBB的轉(zhuǎn)運，其腦部滲透能力是Transfferin的10倍。Angiop印-2與紫杉醇(PTX)結(jié)合物ANG1005在美國進入抗腦膠質(zhì)瘤的一期臨床研究。但是該結(jié)合物仍然水溶性差，應用時與Taxol —樣，需要借助聚氧乙烯蓖麻油和乙醇作為增溶劑，所以仍然存在致敏、毒性和體內(nèi)循環(huán)時間短等缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的缺陷和不足，提供一種治療腦部腫瘤的靶向遞藥系統(tǒng)，具體涉及一種新的用于腦部腫瘤遞藥的載體系統(tǒng)-Angiopep-2修飾的聚合物納米粒 (簡稱ANG-NP-PTX)及其制備方法。本發(fā)明的治療腦部腫瘤的靶向遞藥系統(tǒng)，以血腦屏障(BBB)和腦膠質(zhì)瘤細胞上均高表達的低密度脂蛋白受體相關蛋白(LRP)受體為作用靶點，構建通過LRP受體介導的BBB 靶向和膠質(zhì)瘤靶向雙級靶向納米遞藥系統(tǒng)。具體而言，本發(fā)明提供了 Angiop印-2修飾的PEG-PCL-PTX納米粒(簡稱 ANG-NP-PTX)。本發(fā)明的靶向遞藥系統(tǒng)通過下述方法制備
首先，將一定量MePEG-PCL、Male-PEG-PCL和PTX溶解于二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑；其次，分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min;再次，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得NP-PTX ；然后，將制備的NP-PTX用一定量HEPES液(pH 7. 0) 吹打分散，加入計算量的Angiop印-2，室溫下充氮氣、避光孵育；最后，12000 rpm 4°C離心 60 min后棄去上清液，制得ANG-NP-PTX。本發(fā)明中，PTX與 MePEG-PCL :Male-PEG_PCL=4 20 1，
4本發(fā)明中，Male與Angiop印-2摩爾比為1 10 1 本發(fā)明用于治療腦部腫瘤的靶向系統(tǒng)進行了體內(nèi)外評價
對本發(fā)明制備的Angiop印-2修飾PEG-PCL紫杉醇靶向納米粒進行了體外藥物釋放試驗、細胞毒試驗、細胞攝取試驗、體內(nèi)外雙級靶向性研究，結(jié)果表明，經(jīng)Angiopep-2修飾后， 沒有顯著改變PTX體外釋放行為，但是顯著增加U87 MG細胞的細胞毒性，增加U87 MG細胞的攝取能力，并且體內(nèi)外結(jié)果證明呈現(xiàn)出雙級靶向性。1.體外釋放試驗
對本發(fā)明的ANG-NP-PTX系統(tǒng)體外釋放試驗采用如下透析法
取1 ml納米粒溶液加入到截留分子量為1.4萬的預溶脹透析袋內(nèi)，扎緊袋口，投入 37°C恒溫，100 rpm 39 mLIM水楊酸鈉溶液中；定時從釋放介質(zhì)中取出0. 2 mL，同時補加等量37°C空白釋放介質(zhì)；樣品PTX濃度HPLC方法測定，計算累積釋放百分率F(t) (%)；結(jié)果見圖1。如圖1所示，NP-PTX與ANG-NP-PTX在12 h的累積釋放量分別為49. 2 %和50. 1 %(P > 0. 05),96 h累積釋放量分別為77. 2 %和79. 1 %(P > 0. 05)，可見兩種納米粒都呈現(xiàn)兩相釋放行為，前12快速釋放，后面基本呈零級釋放，釋藥行為相似。結(jié)果表明，對于ANG-NP-PTX，Angiop印-2的表面修飾并沒有影響PTX的釋放行為。2.細胞毒性試驗
采用MTT法測定ANG-NP-PTX對U87 MG細胞的體外抑制試驗，結(jié)果如圖2所示。如圖2 所示，Taxol, NP-PTX 和 ANG-NP-PTX 三種制劑對 U87 MG 的 IC5tl 值為 225 ng/mL、248 ng/mL和66 ng/mL，結(jié)果表明，Angiop印-2修飾的納米粒顯著增大PTX對U87 MG的細胞毒作用(p<0. 01)，其與ANG-NP/PTX通過U87 MG表面表達的LRP受體介導增加 PTX入胞攝取量有關。3.細胞攝取
通過對載體材料進行異硫氰酸羅丹明(RBITC)熒光標記后用來考察載體系統(tǒng)的細胞定性攝取情況，
結(jié)果顯示(如圖4和圖5所示)，在30-120 min內(nèi)，ANG-NP組熒光強度(圖4中的B、D、 F)明顯強于NP組(圖4中的A、C、E)，并且該種攝取情況被200 μ g/ml游離Angiop印-2 和Aprotinin所抑制(如圖5所示)。結(jié)果還顯示，4°C條件下也可抑制ANG-NP的攝取，說明 Angiopep-2修飾增加U87 MG細胞對納米粒的攝取，該種攝取是通過LRP受體介導的，具有能量依賴性。4.體外雙級靶向性評價
采用BCEC-U87 MG共培養(yǎng)模型來模擬體內(nèi)腦膠質(zhì)瘤的生理屏障，評價ANG-NP/PTX的雙級靶向作用，結(jié)果見。結(jié)果表明(如圖5所示)，ANG-NP/PTX對U87 MG細胞抑制率顯著大于Taxol和NP/ PTX (p<0. 01)，這是由于BCEC和U87 MG都表達LRP受體，ANG-NP/PTX通過LRP介導增加BBB 轉(zhuǎn)運和U87 MG攝取的雙重靶向結(jié)果，這種雙級靶向效應可被200 μ g/mL游離Angiop印-2 和Aprotinin LRP受體的配體競爭抑制(ρ<0· 01)。5.體內(nèi)雙級靶向性評價
如圖6中的A所示，WR標記的納米粒經(jīng)尾靜脈給藥后，ANG-NP組在腦部熒光強度明顯強于NP組，表明經(jīng)過ANG修飾后增加了納米粒的腦部趨向性。24 h后的離體器官熒光分布表明(見圖6中的B)，ANG-NP在腦部腫瘤部位的熒光強度明顯強于NP組，且呈現(xiàn)全腦分布狀態(tài)。結(jié)果表明，1)ANG修飾的納米粒增加血腦屏障的通透性；2)ANG修飾的納米粒增加在膠質(zhì)瘤部位的蓄積與滯留；因此，ANG-NP在體內(nèi)顯示出一定雙級靶向性。實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的靶向系統(tǒng)能增加PTX的溶解性，延長體內(nèi)循環(huán)時間；具有通過LRP受體介導透過BBB和膠質(zhì)瘤細胞的雙級靶向功能；而且，PTX從載體中釋放具有緩釋作用，載體材料無毒、可生物降解和生物相容性好，有效解決腦膠質(zhì)瘤化療同時存在的血-腦-腫瘤屏障(Blood Brain Tumor Barrier, BBTB)的問題，可應用于治療腦膠質(zhì)瘤。本發(fā)明的靶向遞藥系統(tǒng)的優(yōu)點有
1.通過采用納米技術，大大提高PTX的溶解度，避免使用過程中有機溶劑引起的安全性問題。2.通過制備成納米粒，利用納米粒的納米尺寸效應和膠質(zhì)瘤的EI3R效應，有利于 PTX在腫瘤部位富集。3. PEG化長循環(huán)納米粒延長PTX在體內(nèi)的循環(huán)時間，增加PTX向腫瘤部位聚集的機會，減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，降低PTX系統(tǒng)毒副作用。4. Angiop印-2修飾后，通過LRP介導增加了腫瘤細胞對納米系統(tǒng)的攝取，增強PTX 對腫瘤細胞的凋亡作用和G2/M的捕獲能力。5. Angiop印-2修飾后，通過LRP介導增加納米系統(tǒng)穿透血腦屏障的能力。6. Angiop印-2修飾后，通過LRP介導實現(xiàn)一個靶向頭基，BBB和腫瘤雙級靶向作用的“一頭雙靶”功能。
為了便于理解，以下將通過具體的附圖和實施例對本發(fā)明的微乳給藥系統(tǒng)進行詳細地描述。需要特別指出的是，具體實例和附圖僅是為了說明，顯然本領域的普通技術人員可以根據(jù)本文說明，在本發(fā)明的范圍內(nèi)對本發(fā)明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發(fā)明的范圍內(nèi)。


圖1是本發(fā)明中PTX體外釋放曲線圖(n = 3)。圖2是本發(fā)明中U87 MG細胞存活曲線圖(n = 3)。圖3是本發(fā)明中U87 MG細胞的攝取熒光圖，其中，圖A和圖B作用時間為30 min, 圖C和圖D作用時間為60 min，圖E和圖F作用時間為120 min，圖A、圖C、圖E是NP的攝取情況，圖B、圖D、圖F是對ANG-NP的攝取情況。圖4是本發(fā)明中U87 MG細胞在不同抑制條件下的攝取熒光圖。圖5是本發(fā)明中U87 MG在共培養(yǎng)模型中的細胞活力圖(n =3)。圖6是本發(fā)明中ANG-NP/PTX的雙級靶向作用的比較圖，其中，圖A是荷U87 MG膠質(zhì)瘤小鼠經(jīng)時熒光分布圖，圖B是M小時后小鼠離體器官熒光圖。
具體實施方式
實施例1
將PTX與MePEG-PCL :Male-PEG-PCL= 20 1加入到二氯甲烷中溶解,加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為3 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為62. 4士4. 5，每個納米粒上ANG個數(shù)為7士3。實施例2
將PTX與MePEG-PCL :Male-PEG-PCL= 15 1加入到二氯甲烷中溶解,加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為3 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為84. 5士6. 8，每個納米粒上ANG個數(shù)為25士5。實施例3
將PTX與MePEG-PCL :Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解,加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為3 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為124. 2士8. 2，每個納米粒上ANG個數(shù)為討士9。實施例4
將PTX與MePEG-PCL =Male-PEG-PCL= 4 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7. 0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2摩爾比為3 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為614. 7 士 102. 8，每個納米粒上ANG個數(shù)為85 士 23。實施例5
將PTX與MePEG-PCL :Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為10 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為73. 4士3. 1，每個納米粒上ANG個數(shù)為14士4。實施例6
將PTX與MePEG-PCL=Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為5 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為93. 5士4. 8，每個納米粒上ANG個數(shù)為34士6。實施例7
將PTX與MePEG-PCL=Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為3 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為113. 5士7. 2，每個納米粒上ANG個數(shù)為62士8。實施例8
將PTX與MePEG-PCL=Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為1 : 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為713. 5士 172. 4，每個納米粒上ANG個數(shù)為79士M。實施例9
將PTX與MePEG-PCL=Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiopep-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為1 : 1)，室溫下充氮氣、避光孵育4 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為74. 3士 1. 1，每個納米粒上ANG個數(shù)為8士2。實施例10
將PTX與MePEG-PCL=Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為1 : 1)，室溫下充氮氣、避光孵育6 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為91. 5士4. 7，每個納米粒上ANG個數(shù)為沈士7。實施例11
將PTX與MePEG-PCL=Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為1 : 1)，室溫下充氮氣、避光孵育8 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為103. 2士7. 2，每個納米粒上ANG個數(shù)為52士6。實施例12將PTX與MePEG-PCL=Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為1 1)，室溫下充氮氣、避光孵育12 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為184. 3士 10. 2，每個納米粒上ANG個數(shù)為67士6。實施例13
將PTX與MePEG-PCL=Male-PEG-PCL= 9 1加入到二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油(0/W)乳劑。分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min。40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液。用一定量HEPES液(pH 7.0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2 摩爾比為1 1)，室溫下充氮氣、避光孵育16 h。12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液即得ANG-NP-PTX。測得粒徑為694. 3 士 102. 1，每個納米粒上ANG個數(shù)為88 士 32。以上實施例的結(jié)果表明，本發(fā)明用于治療腦部腫瘤的靶向系統(tǒng)增加PTX的溶解性，延長體內(nèi)循環(huán)時間；具有通過LRP受體介導透過BBB和膠質(zhì)瘤細胞的雙級靶向功能；而且，PTX從載體中釋放具有緩釋作用，載體材料無毒、可生物降解和生物相容性好，有效解決腦膠質(zhì)瘤化療同時存在的血-腦-腫瘤屏障(Blood Brain Tumor Barrier, BBTB)問題， 可應用于治療腦膠質(zhì)瘤。
權利要求
1.一種治療腦部腫瘤的靶向遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的靶向遞藥系統(tǒng)為Angiop印-2修飾的PEG-PCL-PTX納米粒，其通過下述方法制備首先，將一定量MePEG-PCL、Male-PEG-PCL和PTX溶解于二氯甲烷中溶解，加入1%膽酸鈉水溶液，冰浴下200 W ,60 s間斷超聲形成水包油0/W乳劑；其次，分散到0.5%膽酸鈉水溶液并磁力攪拌5 min;再次，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無氣泡除去二氯甲烷，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液得NP-PTX ；然后，將制備的NP-PTX用一定量HEPES液pH 7.0吹打分散，加入計算量的Angiop印-2，室溫下充氮氣、避光孵育；用一定量HEPES液(pH 7. 0)吹打分散，加入Angiop印-2 (Male與Angiop印-2摩爾比為 1 1)，最后，12000 rpm 4°C離心60 min后棄去上清液，制得ANG-NP-PTX納米粒。
2.按權利要求1所述的治療腦部腫瘤的靶向遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的制備方法中，PTX 與 MePEG-PCL :Male-PEG-PCL=4 20 1。
3.按權利要求1所述的治療腦部腫瘤的靶向遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的制備方法中，所述的Angiop印-2中的Male與Angiop印-2摩爾比為1 10 1。
4.權利要求1的治療腦部腫瘤的靶向遞藥系統(tǒng)在治療腦膠質(zhì)瘤藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬生物醫(yī)藥技術領域，涉及治療腦部腫瘤的靶向遞藥系統(tǒng)，具體涉及用于腦部腫瘤遞藥的載體系統(tǒng)-Angiopep-2修飾的聚合物納米粒及其制備方法。本發(fā)明是以BBB和腦膠質(zhì)瘤細胞上均高表達的低密度脂蛋白受體相關蛋白受體為作用靶點，構建通過LRP受體介導的BBB靶向和膠質(zhì)瘤靶向雙級靶向納米遞藥系統(tǒng)。本發(fā)明的靶向遞藥系統(tǒng)能增加PTX的溶解性，延長體內(nèi)循環(huán)時間，而且，PTX從載體中釋放具有緩釋作用，載體材料無毒、可生物降解和生物相容性好，能有效解決腦膠質(zhì)瘤化療同時存在的血-腦-腫瘤屏障的問題，可應用于治療腦膠質(zhì)瘤。
文檔編號A61K47/42GK102552928SQ201010594309
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月19日 優(yōu)先權日2010年12月19日
發(fā)明者姜新義, 方曉玲, 沙先誼, 辛洪亮, 陳亮岑, 顧吉晉 申請人:復旦大學