專利名稱：靶向癌癥干細(xì)胞的耐藥性癌癥療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了用于預(yù)防、治療、減少或消除癌細(xì)胞的方法和藥物組合物；更具體來說，本發(fā)明提供了用于減少或消除癌癥干細(xì)胞和耐藥性癌細(xì)胞的偏亞砷酸鈉的預(yù)防和/或治療有效的量或治療方式。
背景技術(shù)：
人類端粒酶是位于染色體末端處由(TTAGGG)n六核苷酸重復(fù)序列構(gòu)成的非編碼 DNA序列。在每次細(xì)胞分裂期間,端粒DNA (30-1OObp)由于末端復(fù)制問題而丟失(BlackburnD. H. , Nature, 408 :53-56, 2000 和 Phatak, P.等，Br. J. Pharmacol. , 152 1003-11, 2007) 端粒維持染色體完整性并防止缺陷基因的復(fù)制。因?yàn)槿旧w開始其壽命時具有有限量的端粒DNA，因此細(xì)胞在達(dá)到端粒臨界長度之前只能經(jīng)歷有限的分裂數(shù)量。當(dāng)正常細(xì)胞達(dá)到臨界端粒長度時，它們退出細(xì)胞周期，并經(jīng)歷復(fù)制性衰老(Phatak, P.等，Br. J. Pharmacol.,152 :1003-11,2007 和 Holt，S. E.等，Nature Biotechnol. , 14 :1734-1741,1996) 然而，在從正常到惡性細(xì)胞的腫瘤發(fā)生早期，端粒受到侵蝕，但是在絕大多數(shù)情況下，通過端粒酶的重激活，其隨后維持在短但是穩(wěn)定的長度(Blackburn D. H.，Nature,408 =53-56,2000 ；Phatak,P.等，Br. J. Pharmacol, 152 :1003-11, 2007 和Holt, S. E.等，Nature Biotechnol.,14 :1734-1741,1996)。端粒酶是核糖核蛋白反轉(zhuǎn)錄酶,其起到作為添加新的端粒重復(fù)序列的模板和催化亞基hTERT (人類端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶)的作用。端粒酶允許癌細(xì)胞克服無限增殖的基本限制，并賦予其永生性。因此，端粒酶和端粒顯現(xiàn)出可作為抗癌療法的有希望的靶點(diǎn)(Phatak,P.等，Br. J. Pharmacol. , 152 :1003-11,2007 ;Chumsri,S.等，Curr. Opin. Mol.Ther. 10 :323-333,2008)。開發(fā)癌癥的有效和最終治愈性治療的主要問題，在于癌癥是非均質(zhì)的并含有成熟細(xì)胞以及被稱為干細(xì)胞的負(fù)責(zé)自我更新的細(xì)胞這一事實(shí)。目前的細(xì)胞毒性抗癌劑主要目的在于殺傷成熟細(xì)胞群，但是不能根除癌癥干細(xì)胞。結(jié)果，癌癥常常復(fù)發(fā)，并且那時腫瘤包含更具攻擊性的干細(xì)胞樣耐藥性癌細(xì)胞(Chumsri, S.等，Curr. Opin. Mol. Ther. 10 :323-333,2008)。因此，對于能夠抑制端粒酶或靶向端粒以減少或消除成熟和干細(xì)胞樣癌細(xì)胞兩者、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞和成熟癌細(xì)胞的新治療藥劑和/或治療方式，存在著需求。發(fā)明概述在本發(fā)明的一個方面，提供了在患者中治療難治型癌癥的方法。這通過向患者單獨(dú)或與其他抗癌劑組合地給藥治療有效量的偏亞砷酸鈉(NaAsO2或KML001)來實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉以0. I至20mg的單位劑量每天一次或多次給藥。在某些實(shí)施方案中，在用偏亞砷酸鈉治療后監(jiān)測患者中干細(xì)胞群的存在。在某些其他實(shí)施方案中，在用偏亞砷酸鈉治療后，可以在長達(dá)四年或更長的時間段中對患者進(jìn)行這樣的監(jiān)測。在某些實(shí)施方案中，難治型癌癥是前列腺癌、肺癌、淋巴瘤或白血病。在本發(fā)明的另一方面，提供了具有高于正常的血清IL-6水平的癌癥患者的治療方法，所述方法包含向患者給藥治療有效量的偏亞砷酸鈉，并在最后的偏亞砷酸鈉治療后監(jiān)測患者的血清IL-6水平。在完成偏亞砷酸鈉治療后，監(jiān)測患者的IL-6水平可以定期執(zhí)行長達(dá)四年或更長時間。在本發(fā)明的另一方面，提供了在患有耐藥型癌癥的患者中提高抗癌劑的效能的方法，所述方法包含向患者給藥治療有效量的偏亞砷酸鈉和癌癥對其顯示出耐藥性的抗癌劑。在本發(fā)明的另一方面，提供了使患者中的難治型癌細(xì)胞對癌細(xì)胞以前耐受的抗癌劑敏感的方法，所述方法包含向患者給藥治療有效量的每種偏亞砷酸鈉和抗癌劑?？梢栽谄珌喩樗徕c治療方式給藥之前、偏亞砷酸鈉治療方式完成之后或偏亞砷酸鈉治療方式給藥期間給藥抗癌劑。在本發(fā)明的另一方面，提供了抑制或預(yù)防癌癥在患者中復(fù)發(fā)的方法。所述方法包含在使用一種或多種抗癌劑的治療方式完成之后，向患者給藥治療有效量的偏亞砷酸鈉。在某些實(shí)施方案中，在用偏亞砷酸鈉治療之四年或更長時間后監(jiān)測患者中癌癥干細(xì)胞群的存在。監(jiān)測可以定期執(zhí)行長達(dá)四年或更長時間。不受特定理論或機(jī)制的限制，癌癥干細(xì)胞群的減少或消除，減少或消除了由癌癥干細(xì)胞群產(chǎn)生的癌細(xì)胞群，并因此減少或消除了腫瘤的生長、腫瘤的主體尺寸、腫瘤的形成和/或轉(zhuǎn)移腫瘤的形成。換句話說，癌癥干細(xì)胞群的減少或消除阻止了腫瘤的形成、重新形成或生長和/或癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。根據(jù)一個方面，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥足以減少或消除耐藥性癌癥干細(xì)胞群的治療有效量的偏亞砷酸鈉。在與該方面相關(guān)的另一個實(shí)施方案中，癌癥干細(xì)胞群對紫杉醇具有耐藥性。在另一個相關(guān)實(shí)施方案中，癌癥干細(xì)胞群對多烯紫杉醇具有耐藥性。附圖簡述圖IA顯示了使用Hoechst 33342染料在DU145wt和Doc50耐藥性細(xì)胞中檢測側(cè)群(side population) (SP)。圖IB顯示了通過流式細(xì)胞術(shù)測定的Pgp在野生型和耐藥型克隆中的細(xì)胞表面表達(dá)。白色曲線=PE(藻紅蛋白)_同種型對照染色的細(xì)胞，灰色曲線=Pgp陽性細(xì)胞。圖IC顯示了在野生型和紫杉烷耐藥型DU145細(xì)胞中CD44染色(灰色曲線)與同種型對照(白色曲線)相比較的直方圖。圖ID顯示了生長曲線，對在MTT測定中用多烯紫杉醇處理時紫杉醇、多烯紫杉醇耐藥型和DU145wt細(xì)胞進(jìn)行了比較。圖IE顯示了生長曲線，對在MTT測定中用KML001處理時紫杉醇、多烯紫杉醇耐藥型和DU145wt細(xì)胞進(jìn)行了比較。圖2A顯示了使用DCV染料染色的DU145wt細(xì)胞的側(cè)群。圖2B顯示了用BCRP/ABCG2抑制劑煙曲霉毒素C(FTC)處理的DU145wt細(xì)胞的側(cè)群。圖2C顯示了用Pgp/ABCBl抑制劑維拉帕米處理的DU145wt細(xì)胞的側(cè)群。圖3A顯示了用正常(對照)培養(yǎng)基處理的DU145wt。圖3B顯示了用含有IC100濃度(13 u M)的KML的培養(yǎng)基預(yù)處理72小時的DU145wt。圖4A顯示了 MTT增殖測定，其顯示了用KML001處理的DU145/Pac200。圖4B顯示、了 MTT增殖測定，其顯示了用GRN163L處理的DU145/Pac200。圖5A顯示了只用DCV染料處理的DU145/Pac200細(xì)胞的側(cè)群。圖5B顯示了用DCV和煙曲霉毒素C (FTC)處理的DU145/Pac200細(xì)胞的側(cè)群。圖5C顯示了用DCV和維拉帕米處理的DU145/Pac200細(xì)胞的側(cè)群。圖顯示了側(cè)群測定，其顯示了用IC100濃度下的KML001處理的DU145/Pac200。圖5E顯示了側(cè)群測定，其顯示了用IC100濃度下的GRN163L處理的DU145/Pac200。圖6A和6B顯示了在產(chǎn)克隆測定中前列腺癌細(xì)胞(分別為DU145和DU145/pac200)的生長，其顯示為在未處理的與KML001處理過的細(xì)胞系中相比形成的集落平均數(shù)。圖7是來自于用KML001處理5天的標(biāo)準(zhǔn)MTT的生長曲線，比較了來自于前列腺癌細(xì)胞系DU145/Pac200的未分揀細(xì)胞、SP-和SP+級份。圖8A和8B顯示了通過定量RT-PCR測量的hTERT基因表達(dá)。A.在分揀過的級份中端粒酶mRNA轉(zhuǎn)錄本的水平DU145/Pac200SP-和SP+具有相似的表達(dá)水平。B.在IC50 和IC100下用KML001處理72小時后，通過標(biāo)準(zhǔn)MTT所測定到的hTERT表達(dá)水平降低了。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了用于在哺乳動物、特別是人類中預(yù)防、治療和/或管理癌癥的方法。方法包含向需要的對象給藥治療有效量的、減少或消除癌癥干細(xì)胞群以及耐藥性成熟癌細(xì)胞和耐藥性癌癥干細(xì)胞的偏亞砷酸鈉。本發(fā)明部分是基于下述發(fā)現(xiàn)，即一種處于I/II期臨床試驗(yàn)的用于治療前列腺癌的藥物偏亞砷酸鈉(KML001)，能夠靶向端粒酶的催化亞基和端粒兩者，并抑制未接觸過化療的和化療耐藥型前列腺癌細(xì)胞系的成熟和干細(xì)胞群的生長。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“癌癥干細(xì)胞”是指可以是高度增殖性癌細(xì)胞的祖細(xì)胞的細(xì)胞。癌癥干細(xì)胞具有重新生長腫瘤的能力，正如由其在免疫受損的哺乳動物例如小鼠中形成腫瘤，并典型地在免疫受損的哺乳動物例如小鼠中在隨后的連續(xù)移植后形成腫瘤的能力所證實(shí)的。在典型情況下，癌癥干細(xì)胞相對于腫瘤主體來說也生長較慢；也就是說，癌癥干細(xì)胞一般是靜息的。在某些但不是所有實(shí)施方案中，癌癥干細(xì)胞可以占腫瘤的約0. I至20%。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“抗癌劑”是指任何用于癌癥的治療，包括藥物、免疫治療、定向治療、激素治療、化療，包括烷基化劑、抗代謝物、蒽環(huán)類藥、植物生物堿、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、激酶抑制劑和其他抗腫瘤藥劑、手術(shù)和放療。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“治療有效量”是指足以阻止癌癥干細(xì)胞或癌癥及其一種或多種癥狀的發(fā)生、復(fù)發(fā)或發(fā)作，增強(qiáng)或提高另一種療法的預(yù)防效果，降低癌癥的嚴(yán)重性和持續(xù)時間，改善癌癥的一種或多種癥狀，阻止癌癥的進(jìn)展，引起癌癥退行，和/或增強(qiáng)或提高另一種療法的治療效果的偏亞砷酸鈉的量。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，SMA的治療有效量是在給藥后有效獲得一種、兩種、三種或更多種下列結(jié)果的量(I)減少或消除癌癥干細(xì)胞群；(2)減少或消除癌細(xì)胞群；(3)降低腫瘤或贅生物的生長；(4)破壞腫瘤的形成；(5)根除、移除或控制原發(fā)、局部和/或轉(zhuǎn)移的癌癥；(6)降低死亡率；(7)增加無疾病、無復(fù)發(fā)、無進(jìn)展和/或總體存活率、存活時間或比率；⑶增加響應(yīng)率、響應(yīng)持久性或響應(yīng)或緩解中的患者數(shù)量；(9)腫瘤尺寸得以維持并且不增加或增加少于10%、或少于5%、或少于4%或少于2% ；(10)增加緩解患者的數(shù)量；(11)增加緩解的長度或持續(xù)時間，(12)降低癌癥的復(fù)發(fā)率；(13)增加癌癥復(fù)發(fā)前的時間；(14)改善癌癥相關(guān)癥狀和/或生活質(zhì)量，以及(15)降低癌細(xì)胞的耐藥性。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“治療有效方式”是指用于治療和/或管理癌癥或其癥狀的偏亞砷酸鈉給藥的劑量、定時、頻率和持續(xù)時間的方式。在具體實(shí)施方案中，治療方式獲得一種或多種下述結(jié)果(I)減少或消除癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞；(2)減少或消除癌細(xì)胞群；(3)降低腫瘤或贅生物的生長；(4)破壞腫瘤的形成；(5)根除、移除或控制原發(fā)、局部和/或轉(zhuǎn)移的癌癥；(6)降低死亡率；(7)增加無疾病、無復(fù)發(fā)、無進(jìn)展和/或總體存活率；(8)增加響應(yīng)率、響應(yīng)持久性或響應(yīng)或緩解中的患者數(shù)量；(9)降低住院治療率；(10)減少住院治療長度；(11)腫瘤尺寸得以維持并且不增加或增加少于10%、優(yōu)選少于5%、優(yōu)選少于4%、優(yōu)選少于2%;以及(12)增加緩解患者的數(shù)量；(12)增加癌癥患者的耐藥性癌細(xì)胞、包括癌癥干細(xì)胞對癌細(xì)胞所耐受的藥物的敏感性。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“對象”和“患者”可互換使用。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語 “對象”是指動物，優(yōu)選為哺乳動物例如非靈長動物(例如奶牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)和靈長動物(例如猴和人)，最優(yōu)選為人類。在一些實(shí)施方案中，對象是非人類動物例如家畜(例如馬、豬或奶牛)和寵物(例如狗或貓)。在特定實(shí)施方案中，對象是老年人。在另一個實(shí)施方案中，對象是成年人。在另一個實(shí)施方案中，對象是兒童。在另一個實(shí)施方案中，對象是嬰兒。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“緩解”是指表現(xiàn)為不存在可檢測的癌癥，但具有癌活性恢復(fù)的可能性的對象健康狀態(tài)。癌癥干細(xì)胞包含獨(dú)特的腫瘤亞群(通常為0. 1-10%左右，但是可多達(dá)0. I至20%或以上)，其相對于腫瘤的其余90%左右(即腫瘤主體)更具致瘤性，生長相對更慢或靜息，并且通常與腫瘤主體相比相對更耐化療。由于常規(guī)療法和治療方式在很大程度上被設(shè)計(jì)成攻擊快速增殖的細(xì)胞(即構(gòu)成腫瘤主體的癌細(xì)胞)，因此通常生長緩慢的癌癥干細(xì)胞與生長更快的腫瘤主體相比，對常規(guī)療法和治療方式可能更具耐受性。癌癥干細(xì)胞可以表現(xiàn)出使其相對耐化療的其他特點(diǎn)，例如多重耐藥性和抗凋亡途徑。上面提到的特點(diǎn)構(gòu)成了標(biāo)準(zhǔn)腫瘤學(xué)治療方式不能在大多數(shù)患有晚期癌癥的患者中確保長期益處，即不能充分靶向并根除癌癥干細(xì)胞的關(guān)鍵原因。在一些情況下，癌癥干細(xì)胞是腫瘤的起始細(xì)胞(即它是構(gòu)成腫瘤主體的癌細(xì)胞的祖細(xì)胞)。在大量不同癌癥類型中已鑒定到癌癥干細(xì)胞。例如，Bonnet等，使用流式細(xì)胞術(shù)能夠分離到帶有特定表現(xiàn)型CD34+CD38-的白血病細(xì)胞，并隨后證實(shí)了是這些細(xì)胞(占給定白血病的< 1% )而不是其余99+%的白血病主體，在轉(zhuǎn)移到免疫缺陷小鼠中時能夠重演它所源于的白血病。參見例如“人類急性髓性白血病被組織成源于原始造血細(xì)胞的層次結(jié)構(gòu)，，(Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originatesfrom a primitive hematopoietic cell), Nat Med 3:730-737(1997)。也就是說，這些癌癥干細(xì)胞在10，000個白血病細(xì)胞中少于I個，但這種低頻群體能夠啟動人類白血病并將其連續(xù)轉(zhuǎn)移到與原始腫瘤具有相同組織學(xué)表型的嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷/非肥胖糖尿病(N0D/SCID)小鼠中。Cox等鑒定到人類急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)細(xì)胞中的少量亞級份，其具有CD34+/CD10-和CD34+/CD19-表型，并能夠?qū)LL腫瘤移植到免疫受損小鼠中，即它們是癌癥干細(xì)胞。相反，在使用ALL主體時，盡管在某些情況下注射了多10倍的細(xì)胞，但沒有觀察到小鼠的移植。參見C O X等，“急性成淋巴細(xì)胞性白血病祖細(xì)胞的表征，，(Characterization of acute lymphoblastic leukemia progenitor cells), Blood104(19) :2919-2925(2004)。已發(fā)現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤含有少量⑶138-的細(xì)胞亞群，它們相對于大量⑶138+骨髓瘤細(xì)胞主體群體具有更高的產(chǎn)克隆和致瘤能力。參見Matsui等，“產(chǎn)克隆多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的表征“(Characterization of clonogenic multiple myeloma cells),Blood 103(6)2332。作者得出結(jié)論，多發(fā)性骨髓瘤的⑶138-亞群是癌癥干細(xì)胞群。Kondo等從C6-神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系分離到少量細(xì)胞群，通過其自我更新以及在免疫受損小鼠中重演神經(jīng)膠質(zhì)瘤的能力將其鑒定為癌癥干細(xì)胞群。參見Kondo等，“C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中少量癌癥干細(xì)胞樣細(xì)胞群的持久性“(Persistence of a small populationof cancer stem-like cells in the C6glioma cell line), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 :781-786 (2004)。在該研究中，Kondo等確定了癌細(xì)胞系含有癌癥干細(xì)胞群，其賦予細(xì)胞系移植免疫缺陷小鼠的能力。已顯示，乳腺癌含有少量具有干細(xì)胞特征(帶有表面標(biāo)志物⑶44+⑶24低)的細(xì)胞群。參見Al-Haj j等,“致瘤乳腺癌細(xì)胞的遠(yuǎn)景鑒定”(Prospective identification oftumorigenic breast cancer cells), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:3983-3988(2003)。相當(dāng)于總腫瘤細(xì)胞群的1-10%的少至200個這些細(xì)胞，能夠在N0D/SCID小鼠中形成腫瘤。相反，植入20，000個缺少這種表型的細(xì)胞(即腫瘤主體)不能重新生長腫瘤。發(fā)現(xiàn)了源自于人類前列腺腫瘤的細(xì)胞亞群，其能夠自我更新并重演其所源自的前列腺腫瘤的表型，因此構(gòu)成了前列腺癌癥干細(xì)胞群。參見Collins等，“致瘤前列腺癌癥干細(xì)胞的遠(yuǎn)景鑒定，，(Prospective Identification of Tumorigenic Prostate cancer stemcells), Cancer Res 65(23) : 10946-10951(2005)。Fang等從黑素瘤分離了具有癌癥干細(xì)胞性質(zhì)的細(xì)胞亞群。具體來說，該細(xì)胞亞群能夠分化和自我更新。在培養(yǎng)中，亞群形成球形，但來自于病損處的分化更高的細(xì)胞級份更具黏附性。此外，當(dāng)移植到小鼠中時，含有球狀細(xì)胞的亞群比黏附性細(xì)胞更具致瘤性。參見Fang等，“黑素瘤中具有干細(xì)胞性質(zhì)的致瘤亞群”(A Tumorigenic Subpopulation withStem Cell Properties in Melanomas), Cancer Res 65 (20) :9328-9337(2005)。Singh等鑒定到腦腫瘤干細(xì)胞。當(dāng)分離并植入裸鼠中時，⑶133+癌癥干細(xì)胞與⑶133-腫瘤主體細(xì)胞不同，形成了隨后可以連續(xù)移植的腫瘤。參見Singh等，“人類腦腫瘤起始細(xì)胞的鑒定，，(Identification of human brain tumor initiating cells), Nature432 :396-401 (2004) ;Singh 等,“神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中的癌癥干細(xì)胞”(Cancer stem cells innervous system tumors), Oncogene 23:7267-7273(2004) ;Singh 等，“人類腦腫瘤中的癌癥干細(xì)胞的鑒定，，(Identification of a cancer stem cells in human brain tumors),Cancer Res. 63 :5821-5828(2003)。因?yàn)槌Ｒ?guī)癌癥療法靶向快速增殖細(xì)胞(即形成腫瘤主體的細(xì)胞)，因此據(jù)信這些治療對于靶向和損傷癌癥干細(xì)胞來說相對無效。事實(shí)上，已經(jīng)顯示癌癥干細(xì)胞、包括白血病干細(xì)胞對常規(guī)化學(xué)治療療法(例如Ara-C、柔紅霉素)以及更新的定向療法(例如Gleevec 、Velcade )相對耐受。來自各種腫瘤的對化療具有耐受性的癌癥干細(xì)胞的實(shí)例及其耐藥性機(jī)制，描述在下表中。
CSC類型耐藥性機(jī)制_參考文獻(xiàn)
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CML靜息Holyoake. Blood '99
CMLGleevec 靜息Graham. Blood '02
骨髓瘤Velcade Matsvu. ASH 04例如，白血病干細(xì)胞生長相對緩慢或靜息、表達(dá)多重耐藥基因并利用其他抗凋亡機(jī)制-特點(diǎn)，其有助于它們的化療耐受性。參見Jordan等，“作為干細(xì)胞生物學(xué)中的難題的最關(guān)鍵細(xì)胞的定向通往白血病療法”(Targeting the most critical cells approachingleukemia therapy as a problem in stem cell biology), Nat Clin Pract Oncol. 2 224-225(2005)。此外，癌癥干細(xì)胞憑借其化療耐受性可能造成了治療失敗，并且可能在臨床緩解后還繼續(xù)存在于患者中，因此這些剩余的癌癥干細(xì)胞可能造成了晚些時候的復(fù)發(fā)。參見Behbood等，“癌癥干細(xì)胞將提供新的治療祀點(diǎn)嗎？ ”(Will cancer stem cellsprovide new therapeutic targets ), Carcinogenesis 26(4) :703-711 (2004)。因此，預(yù)期靶向癌癥干細(xì)胞將為癌癥患者提供改進(jìn)的長期結(jié)果。因此，需要被設(shè)計(jì)用于靶向癌癥干細(xì)胞的新治療劑和/或治療方式來達(dá)到這一目標(biāo)。本發(fā)明通過向需要的對象給藥治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式，實(shí)現(xiàn)了該目標(biāo)。癌癥或贅生疾病，包括但不限于贅生物、腫瘤、轉(zhuǎn)移腫瘤、白血病或任何以不受控制的細(xì)胞生長為特征的疾病或障礙，可以通過向需要的對象給藥預(yù)防或治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式來預(yù)防、治療和/或管理。本發(fā)明提供了通過減少或消除成熟癌細(xì)胞以及癌癥干細(xì)胞、特別是耐藥性癌癥干細(xì)胞來預(yù)防、治療和/或管理癌癥的方法，所述方法包含向需要的對象給藥預(yù)防或治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉的量或治療方式導(dǎo)致癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞減少至少約5%。在某些實(shí)施方案中，在偏亞砷酸鈉治療完成后長達(dá)四年或更長時間，對癌癥干細(xì)胞群的減少進(jìn)行定期監(jiān)測。因此，在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在對象中防止癌癥復(fù)發(fā)、治療和/或管理癌癥的方法，所述方法包含(a)向需要的對象給藥一劑或多劑有效量的偏亞砷酸鈉；(b)在給藥一定數(shù)量藥劑之前、期間和/或之后以及在給藥后續(xù)藥劑之前監(jiān)測對象中的癌癥干細(xì)胞群；以及(C)如果需要，通過重復(fù)步驟(a)以檢測到對象中癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞的至少5%的減少。如果在監(jiān)測患者的癌癥干細(xì)胞群的過程中，干細(xì)胞群的增加變得明顯，執(zhí)業(yè)醫(yī)師可以相同或不同的劑量和/或用藥方式再次向患者給藥偏亞砷酸鈉(單獨(dú)或與另一種抗癌劑組合)。偏亞砷酸鈉可以以任何形式給藥于患者，包括腸胃外(例如靜脈內(nèi))、腹膜內(nèi)或口月艮。每日劑量可以在一天內(nèi)以一份或多份劑量給藥。偏亞砷酸鈉治療方式可以包括每日劑量給藥一日或多日，例如連續(xù)的I到10日或I到10日之間的任何日數(shù)，例如連續(xù)I到5、4、3或2日?？蛇x地，劑量用藥治療方式可以包括將偏亞砷酸鈉劑量在幾日例如一周到一月的時間內(nèi)，以不連續(xù)的方式例如每隔一日或每三日或四日給藥，或連續(xù)治療幾日例如三日然后連續(xù)幾日例如三日不治療，并且重復(fù)該模式或者如果需要修改該模式。專業(yè)醫(yī)師可以在患者健康、年齡、體重、藥物耐受性等的基礎(chǔ)上，容易地確定最有效的給藥方式和患者獲得 最佳結(jié)果所需的偏亞砷酸鈉劑量。在某些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉的量或治療方式導(dǎo)致癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞減少至少 5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%。例如，在一些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉的量或治療方式導(dǎo)致癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞減少至少約5% -99%,5% _80%、5至40%、10%至99%、10至80%,10-60%,10% -40%,20 至 99%、20% -80%,20% -60%,20% -40%,50% -98%,50% -80%或 60% -99%。在其他實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉的量或治療方式導(dǎo)致癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞降低至原來的I. I分之一、I. 2分之一、I. 5分之一、2分之一、3分之一、4分之一、5分之一、10分之一、25分之一、50分之一、75分之一、100分之一、200分之一或1000分之一。在一些實(shí)施方案中，癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞的減少，在實(shí)施治療方式的兩周、一個月、兩個月、三個月、四個月、六個月、九個月、I年、2年、3年或4年后獲得。檢測癌癥干細(xì)胞群和確定癌癥干細(xì)胞量的變化的方法描述在下文中。如果在監(jiān)測期間檢測到癌癥干細(xì)胞增加，可以用另一種偏亞砷酸鈉治療方式(與以前的治療方式相同或不同)和/或其他抗癌劑對患者進(jìn)行治療。在一些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉治療的量或方式引起癌細(xì)胞群以及癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞的減少。在某些實(shí)施方案中，定期監(jiān)測癌細(xì)胞群的減少，或者癌細(xì)胞群的減少與癌癥干細(xì)胞群的減少。因此，在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在對象中預(yù)防、治療和/或管理癌癥的方法，所述方法包含(a)向需要的對象給藥一劑或多劑治療有效量的偏亞砷酸鈉；(b)在給藥一定數(shù)量劑量之前、期間和/或之后以及在給藥后續(xù)藥劑之前監(jiān)測對象中的癌癥干細(xì)胞群和癌細(xì)胞群；以及(C)如果需要，通過重復(fù)步驟(a)以檢測到對象中癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞和癌細(xì)胞群的至少5%的減少。在某些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉的量或治療方式導(dǎo)致癌細(xì)胞群減少至少約5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%。例如，在一些實(shí)施方案中，治療方式導(dǎo)致癌細(xì)胞群減少約2% _98%、5% -80%,5至40%、10%至99 %、10 至 80 %、10-60 %、10% -40%,20 至 99%、20% -80%,20% -60%,20% -40%,50% -98%,50% -80%或60% -99%。在其他特定實(shí)施方案中，治療方式導(dǎo)致癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞降低至原來的I. I分之一、I. 2分之一、I. 5分之一、2分之一、3分之一、4分之一、5分之一、10分之一、25分之一、50分之一、75分之一、100分之一、200分之一或1000分之一。在一些實(shí)施方案中，癌細(xì)胞群的減少，在實(shí)施治療方式的兩周、一個月、兩個月、三個月、四個月、六個月、九個月、I年、2年、3年、4年、5年或10年后獲得。檢測癌細(xì)胞群和測量癌細(xì)胞量的變化的方法描述在下文中。在一些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉的量或治療方式導(dǎo)致主體腫瘤尺寸減小以及癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞的減少。在某些實(shí)施方案中，定期監(jiān)測主體腫瘤尺寸的減小，主體腫瘤尺寸的減少與癌癥干細(xì)胞群包括耐藥性癌癥干細(xì)胞的減少，或者主體腫瘤尺寸的減小、癌癥干細(xì)胞群的減少和癌細(xì)胞群的減少。因此，在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了在對象中預(yù)防、治療和/或管理癌癥的方法，所述方法包含(a)向需要的對象給藥一劑或多劑有效量的偏亞砷酸鈉；(b)在給藥一定數(shù)量劑量之前、期間和/或之后以及在給藥后續(xù)劑量之前監(jiān)測對象中的癌癥干細(xì)胞群和主體腫瘤尺寸；以及(c)如果需要，通過重復(fù)步驟(a)以檢測到對象中癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞的至少5%的減少。在某些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉的量或治療方式導(dǎo)致癌癥干細(xì)胞群包括耐藥性癌癥干細(xì)胞以及主體腫瘤尺寸減小至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、90%、95%、98%或99%。例如，在一些實(shí)施方案中，治療方式導(dǎo)致癌癥干細(xì)胞群包括耐藥性癌癥干細(xì)胞以及主體腫瘤尺寸減小約2% -98^^5% -80%、5至40 %、10% 至 99 %、10 至 80 %、10-60 %、10% -40%, 20 至 99%、20% -80%,20% -60%,20% -40%,50% -99%,50% -80%或60% -99%。在其他特定實(shí)施方案中，治療方式導(dǎo)致癌癥干細(xì)胞群包括耐藥性癌癥干細(xì)胞以及主體腫瘤尺寸減小至少I. I分之一、I. 2分之一、
I.5分之一、2分之一、2. 5分之一、3分之一、4分之一、5分之一、10分之一、20分之一、25分之一、50分之一、75分之一、100分之一、200分之一或1000分之一。在一些實(shí)施方案中，癌癥干細(xì)胞群包括耐藥性癌癥干細(xì)胞以及主體腫瘤尺寸的減少，在實(shí)施治療方式的兩周、一個月、兩個月、三個月、四個月、六個月、九個月、I年、2年、3年、4年、5年或10年后獲得。多種已知方法可用于評估腫瘤的主體尺寸。這樣的方法的非限制性實(shí)例包括成像方法(例如計(jì)算機(jī)斷層掃描術(shù)(CT)、磁共振成像(MRI)、超聲、X-射線成像、乳房造影術(shù)、PET掃描、放射性核素掃描、骨掃描)、可視方法(例如結(jié)腸鏡檢查、支氣管鏡檢查、內(nèi)窺鏡檢查)、身體檢查(例如前列腺檢查、乳腺檢查、淋巴結(jié)檢查、腹部檢查、直腸檢查、普通觸診)、血液化驗(yàn)(例如前列腺特異性抗原(PSA)化驗(yàn)、癌胚抗原(CEA)化驗(yàn)、癌抗原(CA)-125化驗(yàn)、甲胎蛋白(AFP)、肝功能化驗(yàn))、骨髓分析(例如在血液惡性腫瘤的情況下)、組織病理學(xué)、細(xì)胞學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)。在一些實(shí)施方案中，可以通過基于從成像方法測定的腫瘤病損尺寸的評估來測定主體腫瘤尺寸。在特定實(shí)施方案中，評估按照“實(shí)體腫瘤中的響應(yīng)評估判據(jù)(RECIST)準(zhǔn)則”(Response Evaluation Criteria In Solid Tumors (RECIST) Guidelines)來執(zhí)行，所述準(zhǔn)則公布在Therasse, P.等，“評估對實(shí)體腫瘤治療的響應(yīng)的新準(zhǔn)則”(New Guidelinesto Evaluate the Response to Treatment in Solid Tumors), J. of the Nat. Cane.Inst. 92 (3)，205-216 (2000)中。例如，在特定實(shí)施方案中，選擇對象中具有代表性主體腫瘤尺寸的病損，以便在基線時(治療之前)當(dāng)使用常規(guī)成像技術(shù)(例如常規(guī)CT掃描、PET掃、描、骨掃描、MRI或X-射線)時它們的最長直徑至少> 20mm,并且當(dāng)使用螺旋CT掃描時選擇在基線時最長直徑至少> IOmm的病損。在一些實(shí)施方案中，可以使用成像技術(shù)與血清標(biāo)志物檢測的組合來評估主體腫瘤尺寸的減小。這樣的血清標(biāo)志物的非限制性實(shí)例包括前列腺特異性抗原(PSA)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原(CA) 125和甲胎蛋白(AFP)。本發(fā)明提供了在緩解對象中預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)的復(fù)發(fā)，所述方法包含向?qū)ο蠼o藥治療或預(yù)防有效的偏亞砷酸鈉的量或治療方式。方法包含以等于或小于最大耐受劑量(MTD)或等于或小于“無明顯損害作用水平”(N0AEL)的劑量向?qū)ο蠼o藥偏亞砷酸鈉。偏亞砷酸鈉的MTD典型地基于I期劑量遞增試驗(yàn)的結(jié)果。在某些實(shí)施方案中，患者也用治療有效量的第二種抗癌劑進(jìn)行治療，例如在緩解患者的第一線治療中使用的抗癌劑。第二種抗癌劑可以在偏亞砷酸鈉給藥的同時、之后或之前給藥。 在動物研究中測定的NOAEL常常被用于確定人類臨床試驗(yàn)的最大推薦起始劑量?？梢詫OAEL進(jìn)行外推，以確定人體等效劑量(HED)。典型情況下，這種物種間的外推根據(jù)歸一化到身體表面積的劑量(即mg/m2)來進(jìn)行。在特定實(shí)施方案中，NOAEL在小鼠、倉鼠、大鼠、雪貂、豚鼠、兔、狗、靈長動物(猴、狨猴、鼠猴、狒狒)、微型豬(miCTopig)和小型豬中測定。關(guān)于使用NOAEL及其外推來確定人體等效劑量的討論，參見美國衛(wèi)生與人類服務(wù)部食品和藥品管理局藥物評估與研究中心(CDER)的“在成年健康志愿者中對療法的初始臨床試驗(yàn)中的最大安全起始劑量進(jìn)行工業(yè)評估的準(zhǔn)則”(Guidance for Industry Estimatingthe Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics inAdult Healthy Volunteers, U. S. Department of Health and Human Services Food andDrug Administration Center for Drug Evaluation and Research (CDER)), Pharmacologyand Toxicology，2005年7月。因此，在某些實(shí)施方案中，治療方式包含以低于HED的劑量實(shí)施療法。例如，本發(fā)明提供了在緩解對象中預(yù)防癌癥復(fù)發(fā)的方法，所述方法包含向需要的對象給藥預(yù)防或治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式，方法包含以等于或小于HED的劑量向?qū)ο蠼o藥偏亞砷酸鈉。根據(jù)本發(fā)明，預(yù)防和/或治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式被給藥于患有或預(yù)期將發(fā)生癌癥的對象(例如對特定癌癥類型具有遺傳易感性的對象，已暴露于致癌物的對象，新近診斷為患有癌癥的對象，癌癥治療失敗的對象，癌癥復(fù)發(fā)的對象，或從特定癌癥緩解的對象)。在具體實(shí)施方案中，對象處于緩解中或無癌癥通過目前使用的技術(shù)來測量，所述技術(shù)包括但不限于身體檢查(例如前列腺檢查、乳腺檢查、淋巴結(jié)檢查、腹部檢查、皮膚觀察、普通觸診)、可視方法(例如結(jié)腸鏡檢查、支氣管鏡檢查、內(nèi)窺鏡檢查)、PAP涂片分析(宮頸癌)、糞便愈創(chuàng)木脂分析、血液檢驗(yàn)(例如全血計(jì)數(shù)(CBC)化驗(yàn)、前列腺特異性抗原(PSA)化驗(yàn)、癌胚抗原(CEA)化驗(yàn)、癌抗原(CA)-125化驗(yàn)、甲胎蛋白(AFP)、肝功能化驗(yàn))、核型分析、骨髓分析(例如在血液惡性腫瘤的情況下)、組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)、痰液分析和成像方法(例如計(jì)算機(jī)斷層掃描術(shù)(CT)、磁共振成像(MRI)、超聲、X-射線成像、乳房造影成像、PET掃描、放射性核素掃描、骨掃描)。這樣的對象以前可能進(jìn)行或可能未進(jìn)行過癌癥治療。在一個實(shí)施方案中，治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式被給藥于正經(jīng)歷或已經(jīng)歷手術(shù)以移除腫瘤、癌細(xì)胞或贅生物的對象。在具體實(shí)施方案中，治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式在移除腫瘤、癌細(xì)胞或贅生物的手術(shù)的同時或之后給藥于對象。在另一個實(shí)施方案中，治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式在移除腫瘤或贅生物的手術(shù)之前給藥于對象，而在一些實(shí)施方案中，在手術(shù)期間和/或之后給藥于對象。在具體實(shí)施方案中，治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式被給藥于將要、正在或已經(jīng)經(jīng)歷放療的對象。在這些對象中包括已經(jīng)接受化療、激素治療和/或生物治療包括免疫治療的對象，以及已經(jīng)歷手術(shù)的對象。在另一個實(shí)施方案中，治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式被給藥于將要、正在或已經(jīng)接受激素治療和/或生物治療包括免疫治療和/或定向治療的對象。在這些對象中包括已接受化療和/或放療的對象以及已經(jīng)歷手術(shù)的對象。在某些實(shí)施方案中，治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式被給藥于不能或難以用一種或多種療法治療的對象。在一個實(shí)施方案中，癌癥難以用療法治療是指至少一些顯著部分的癌細(xì)胞未被殺傷或其細(xì)胞分裂未停止。確定癌細(xì)胞是否難治，可以在體內(nèi)或體外，通過本技術(shù)領(lǐng)域已知的用于測定療法對癌細(xì)胞的效果的任何方法，使用在這種情形下本技術(shù) 領(lǐng)域接受的“難治”的意義來進(jìn)行。在特定實(shí)施方案中，治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式被給藥于細(xì)胞因子IL-6水平升高的患者，所述水平升高已與癌細(xì)胞對不同治療方式例如化療和激素治療發(fā)生耐受性相關(guān)聯(lián)。按照本發(fā)明，可以預(yù)防、治療和/或管理任何癌癥類型?？梢园凑毡景l(fā)明來預(yù)防、治療和/或管理的癌癥的非限制性實(shí)例包括白血病，例如但不限于急性白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、急性髓細(xì)胞性白血病例如成髓細(xì)胞性、早幼粒細(xì)胞性、髓單核細(xì)胞性、單核細(xì)胞性和紅白細(xì)胞性白血病以及骨髓異常增生綜合征(MDS);慢性白血病，例如但不限于慢性髓細(xì)胞性(粒細(xì)胞性)白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、毛細(xì)胞白血??；真性紅細(xì)胞增多癥；淋巴瘤，例如但不限于霍奇金氏病、非霍奇金氏病；多發(fā)性骨髓瘤，例如但不限于冒煙型多發(fā)性骨髓瘤、不分泌型骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、漿細(xì)胞白血病、孤立性漿細(xì)胞瘤和髓外衆(zhòng)細(xì)胞瘤；Waldenstrom巨球蛋白血癥；意義未明的單克隆丙種球蛋白病；良性單克隆丙種球蛋白??；重鏈?。还趋篮徒Y(jié)締組織肉瘤,例如但不限于骨癌、骨肉瘤、軟骨肉瘤、Ewing肉瘤、惡性巨細(xì)胞瘤、骨纖維肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、軟組織肉瘤、血管肉瘤、纖維肉瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肉瘤、淋巴管肉瘤、神經(jīng)鞘瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤；腦腫瘤，例如但不限于神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、非神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤、聽神經(jīng)瘤、顱咽管瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦膜瘤、松果體細(xì)胞瘤、成松果體細(xì)胞瘤、原發(fā)性腦淋巴瘤；乳腺癌，包括但不限于導(dǎo)管癌、腺癌、小葉(小細(xì)胞)癌、導(dǎo)管內(nèi)癌、乳腺髓樣癌、乳腺黏液癌、乳腺小管癌、乳腺乳頭狀癌、派杰氏病和炎性乳腺癌；腎上腺癌，例如但不限于嗜鉻細(xì)胞瘤和腎上腺皮質(zhì)癌；甲狀腺癌，例如但不限于乳頭狀或?yàn)V泡性甲狀腺癌、甲狀腺髓樣癌和間變性甲狀腺癌；胰腺癌，例如但不限于胰島瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、血管活性腸肽瘤、生長抑素分泌腫瘤和類癌或胰島細(xì)胞瘤；垂體癌，例如但不限于庫興氏病、促乳素分泌腫瘤、肢端肥大癥和尿崩癥；眼癌，例如但不限于眼黑素瘤例如虹膜黑素瘤、脈絡(luò)膜黑素瘤和睫狀體黑素瘤，以及成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤；陰道癌，例如鱗狀細(xì)胞癌、腺癌和黑素瘤；外陰癌，例如鱗狀細(xì)胞癌、黑素瘤、腺癌、基底細(xì)胞癌、肉瘤和派杰氏??；宮頸癌，例如但不限于鱗狀細(xì)胞癌和腺癌；子宮癌，例如但不限于子宮內(nèi)膜癌和子宮肉瘤；卵巢癌，例如但不限于卵巢上皮癌、交界性腫瘤、生殖細(xì)胞瘤和間質(zhì)瘤；食管癌，例如但不限于鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、腺樣囊性癌、黏液表皮樣癌、腺鱗癌、肉瘤、黑素瘤、漿細(xì)胞瘤、疣狀癌和燕麥細(xì)胞(小細(xì)胞)癌；胃癌，例如但不限于腺癌、蕈狀(息肉狀)、潰瘍性、淺表擴(kuò)散性、彌散擴(kuò)散性、惡性淋巴瘤、脂肉瘤、纖維肉瘤和癌肉瘤；結(jié)腸癌；直腸癌；肝癌，例如但不限于肝細(xì)胞癌和肝胚細(xì)胞瘤；膽囊癌例如腺癌；膽管腺瘤，例如但不限于乳頭狀、結(jié)節(jié)性和彌散性；肺癌，例如非小細(xì)胞肺癌、鱗狀細(xì)胞癌(表皮樣癌)、腺癌、大細(xì)胞癌和小細(xì)胞肺癌；睪丸癌，例如但不限于胚細(xì)胞瘤、精原細(xì)胞瘤、間變性、經(jīng)典(典型)性、精母細(xì)胞性、非精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌(卵黃囊瘤)；前列腺癌，例如但不限于前列腺上皮內(nèi)瘤、腺癌、平滑肌肉瘤和橫紋肌肉瘤；陰莖癌；口腔癌，例如但不限于鱗狀細(xì)胞癌；基底細(xì)胞癌；唾 液腺癌，例如但不限于腺癌、黏液表皮樣癌和腺樣囊性癌；咽癌，例如但不限于鱗狀細(xì)胞癌和疣狀癌；皮膚癌，例如但不限于基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌和黑素瘤、淺表擴(kuò)散性黑素瘤、結(jié)節(jié)性黑素瘤、惡性小痣黑素瘤、肢端黑素瘤；腎癌，例如但不限于腎細(xì)胞癌、腺癌、腎上腺樣瘤、纖維肉瘤、移行細(xì)胞癌(腎盂和/或輸尿管)；腎母細(xì)胞瘤；膀胱癌，例如但不限于移行細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、腺肉瘤。此外，癌癥包括黏液肉瘤、骨源性肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、間皮瘤、滑膜瘤、成血管細(xì)胞瘤、上皮癌、囊腺癌、支氣管癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌和乳頭狀腺癌。預(yù)防和/或治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式也可用于治療、預(yù)防和/或管理各種癌癥或其他異常增殖性疾病，包括(但不限于)下列包括膀胱、乳腺、結(jié)腸、腎、肝、肺、卵巢、胰腺、胃、宮頸、甲狀腺和皮膚的癌；包括鱗狀細(xì)胞癌；淋巴性譜系的造血腫瘤，包括白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、B-細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤；髓性譜系的造血腫瘤,包括急性和慢性髓性白血病和早幼粒細(xì)胞白血??；間充質(zhì)來源的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；其他腫瘤，包括黑素瘤、精原細(xì)胞瘤、畸胎癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和神經(jīng)膠質(zhì)瘤；中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；間充質(zhì)來源的腫瘤,包括纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他腫瘤，包括黑素瘤、著色性干皮病、角化棘皮瘤、精細(xì)胞瘤、甲狀腺濾泡性癌和畸胎癌。在一些實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的方法預(yù)防、治療和/或管理與凋亡的畸變相關(guān)的癌癥。這樣的癌癥包括但不限于濾泡性淋巴瘤、具有P53突變的癌、乳腺、前列腺和卵巢的激素依賴性腫瘤，以及癌前期病變例如家族性腺瘤性息肉病和骨髓增生異常綜合征。在具體實(shí)施方案中，使用本發(fā)明的方法預(yù)防、治療和/或管理皮膚、肺、肝、骨、腦、胃、結(jié)腸、乳腺、前列腺、膀胱、腎、胰腺、卵巢和/或子宮的惡性腫瘤或增殖異常變化(例如化生和增生)或過度增殖障礙。在其他具體實(shí)施案中，使用本發(fā)明的方法預(yù)防、治療和/或管理肉瘤或黑素瘤。在某些實(shí)施方案中，按照本發(fā)明預(yù)防、治療和/或管理的癌癥是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤(例如多發(fā)性骨髓瘤)。可以按照本發(fā)明的方法預(yù)防、治療和/或管理的白血病和其他血液癌癥的非限制性實(shí)例,包括急性成淋巴細(xì)胞性白血病“ALL”、急性成淋巴細(xì)胞性B-細(xì)胞白血病、急性成淋巴細(xì)胞性T-細(xì)胞白血病、急性髓細(xì)胞白血病“AML”、急性早幼粒細(xì)胞白血病“APL”、急性單核細(xì)胞性白血病、急性紅白細(xì)胞性白血病、急性巨核細(xì)胞性白血病、急性髓單核細(xì)胞性白血病、急性肺淋巴細(xì)胞性白血病、急性未分化白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病“CML”、慢性淋巴細(xì)胞性白血病“CLL”、骨髓增生異常綜合征“MDS”和毛細(xì)胞白血病。
可以按照本發(fā)明的方法預(yù)防、治療和/或管理的淋巴瘤的非限制性實(shí)例，包括霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、Waldenstoom巨球蛋白血癥、重鏈病和真性紅細(xì)胞增多癥。在另一個實(shí)施方案中，按照本發(fā)明預(yù)防、治療和/或管理的癌癥是實(shí)體腫瘤?？梢园凑毡景l(fā)明的方法預(yù)防、治療和/或管理的實(shí)體腫瘤的實(shí)例，包括但不限于纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肉瘤、軟骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、內(nèi)皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管內(nèi)皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、Ewing腫瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、腎癌、胰腺癌、骨癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、食管癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、喉癌、鱗狀細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、囊腺癌、髓樣癌、支氣管癌、腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞瘤、膽管癌、絨毛膜癌、精原細(xì)胞瘤、胚胎性癌、腎母細(xì)胞瘤、宮頸癌、子宮癌、睪丸癌、小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、肺癌、上皮癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、顱咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、成血管細(xì)胞瘤、聽神經(jīng)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、腦膜瘤、皮膚癌、黑素瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤。在實(shí)施方案中，給藥于對象以在患者中預(yù)防、治療和/或管理癌癥的偏亞砷酸鈉 的劑量以患者的體重計(jì)為500mg/kg或以下,例如250mg/kg或以下、100mg/kg或以下、95mg/kg或以下、90mg/kg或以下、85mg/kg或以下、80mg/kg或以下、75mg/kg或以下、70mg/kg或以下、65mg/kg或以下、60mg/kg或以下、55mg/kg或以下、50mg/kg或以下、45mg/kg或以下、40mg/kg或以下、35mg/kg或以下、30mg/kg或以下、25mg/kg或以下、20mg/kg或以下、15mg/kg或以下、10mg/kg或以下、5mg/kg或以下、2. 5mg/kg或以下、2mg/kg或以下、I. 5mg/kg或以下或lmg/kg或以下。例如，偏亞砷酸鈉可以約0. lmg/kg至約10mg/kg或約0. 25mg/kg至約5mg/kg范圍內(nèi)的量,每天給藥I至5次。在另一個實(shí)施方案中，給藥于對象以在患者中預(yù)防、治療和/或管理癌癥的偏亞砷酸鈉的劑量，是 0. Img 至 20mg、0. Img 至 15mg、0. Img 至 12mg、0. Img 至 10mg、0. Img 至8mg、0. Img 至 7mg、0. Img 至 5mg、0. I 至 2. 5mg、0. 25mg 至 20mg、0. 25 至 15mg、0. 25 至 12mg、0. 25 至 10mg、0. 25 至 8mg、0. 25mg 至 7mg、0. 25mg 至 5mg、0. 5mg 至 2. 5mg、lmg 至 20mg、lmg至 15mg、lmg 至 12mg、lmg 至 10mg、lmg 至 8mg、lmg 至 7mg、lmg 至 5mg 或 Img 至 2. 5mg 的單位劑量。在某些實(shí)施方案中，給藥于對象以在患者中預(yù)防、治療和/或管理癌癥的偏亞砷酸鈉的劑量，以對象的體重計(jì)，在0.01至10g/m2的范圍內(nèi)，更典型情況下在0. lg/m2至7. 5g/m2的范圍內(nèi)。在一個實(shí)施方案中，給藥于對象的劑量以對象的身體表面積計(jì)，在0. 5g/m2至5g/m2或lg/m2至5g/m2的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，預(yù)防和/或治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式與一種或多種其他療法組合使用。在組合療法中使用的一種或多種其他療法的劑量，可以低于已經(jīng)用于或目前正用于在患者中預(yù)防、治療和/或管理癌癥的劑量。目前用于預(yù)防、治療和/或管理癌癥的一種或多種其他療法的推薦劑量可以從本技術(shù)領(lǐng)域的任何參考文獻(xiàn)獲得，包括但不限于Hardman等主編的《Goodman & Gilman治療學(xué)的藥理基礎(chǔ)》(Goodman & Gilman' sThe Pharmacological Basis Of Therapeutics)第 10 Mc-Graw-Hi11,New York,2001 ；《醫(yī)生桌面參考》(Physician, s Desk Reference)(第60版，2006)，在此以其全文引為參考。
其他癌癥療法的實(shí)例包括但不限于阿西維辛、阿柔比星、鹽酸阿可達(dá)佐、阿克羅寧、阿多來新、阿地白介素、六甲蜜胺、安波毒素、醋酸阿美蒽醌、氨基格魯米特、安吖啶、阿那曲唑、蒽環(huán)霉素、安曲霉素、天冬酰胺酶、曲林菌素、阿扎胞苷(維達(dá)扎)、阿扎替派、阿佐霉素、巴馬司他、苯佐替派、比卡魯胺、鹽酸比生群、二甲磺酸雙奈法德、二膦酸鹽類(例如帕米膦酸鹽(Aredria)、氯曲磷酸鈉(Bonefos)、唑來膦酸(Zometa)、阿侖膦酸鹽(Fosamax)、依替膦酸鹽、伊班膦酸鹽、斯孟膦酸鹽、利塞膦酸鹽和替魯膦酸鹽)、比折來新、硫酸博萊霉素、布喹那鈉、溴匹立明、白消安、放線菌素C、卡魯睪酮、卡醋胺、卡貝替姆、卡鉬、卡莫司汀、鹽酸卡米諾霉素、卡折來新、西地芬戈、苯丁酸氮芥、西羅霉素、順鉬、克拉屈濱、甲磺酸克立那托、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷(Ara-C)、達(dá)卡巴嗪、放線菌素D、鹽酸柔紅霉素、地西他濱(Dacogen)、去甲基化藥劑、右奧馬鉬、地扎胍寧、甲磺酸地扎胍寧、亞絲醌、多烯紫杉醇、阿霉素、鹽酸阿霉素、屈洛昔芬、檸檬酸屈洛昔芬、屈他雄酮丙酸酯、偶氮霉素、依達(dá)曲沙、鹽酸依氟鳥氨酸、EphA2抑制劑、依沙蘆星、恩洛鉬、恩普氨酯、依匹哌啶、鹽酸表阿霉素、厄布洛唑、鹽酸表柔比星、雌莫司汀、雌莫司汀磷酸鈉、依他硝唑、依托泊苷、磷酸依托泊 苷、艾托卜寧、鹽酸法倔唑、法扎拉濱、維甲酰酚胺、氟尿苷、磷酸氟達(dá)拉濱、氟尿嘧啶、氟西他濱、磷喹酮、福司曲星鈉、吉西他濱、鹽酸吉西他濱、組蛋白去乙?；敢种苿?HDAC-I)、羥基脲、鹽酸依達(dá)比星、異環(huán)磷酰胺、伊莫福新、甲磺酸伊馬替尼(Gleevecjiivec)、白介素II (包括重組白介素II或rIL2)、干擾素a-2a、干擾素a-2b、干擾素a-nI、干擾素a-n3、干擾素P _Ia、干擾素Y _Ib、異丙鉬、鹽酸伊立替康、醋酸蘭瑞肽、來那度胺(Revlimid)、來曲唑、醋酸亮丙瑞林、鹽酸利阿唑、洛美曲索鈉、洛莫司汀、鹽酸洛索蒽醌、馬索羅酚、美登素、鹽酸氮芥、抗⑶2抗體(例如希普利珠單抗(Medlmmune Inc.，國際公開號W002/098370，在此以其全文引為參考))、醋酸甲地孕酮、醋酸美侖孕酮、美法侖、美諾立爾、巰基嘌呤、甲氨喋呤、甲氨蝶呤鈉、氯苯氨啶、美妥替哌、米丁度胺、米托卡星、絲裂紅素、米托潔林、米托馬星、絲裂霉素、絲裂帕菌素、米托坦、鹽酸米托恩醌、霉酚酸、諾考達(dá)唑、諾加霉素、奧馬鉬、奧沙利鉬、奧昔舒侖、紫杉醇、培門冬酶、佩里霉素、戊氮芥、硫酸培洛霉素、培磷酰胺、哌泊溴烷、哌泊舒凡、鹽酸吡羅蒽醌、普卡霉素、普洛美坦、葉吩姆鈉、泊非霉素、松龍苯芥、鹽酸甲基芐肼、嘌呤霉素、鹽酸嘌呤霉素、吡唑呋喃菌素、利波腺苷、羅谷亞胺、沙芬戈、鹽酸沙芬戈、司莫司汀、辛曲秦、斯帕磷酸鈉、司帕霉素、鹽酸螺旋鍺、螺莫司汀、螺鉬、鏈黑菌素、鏈脲佐菌素、磺氯苯脲、他利霉素、替可加蘭鈉、替加氟、鹽酸替洛蒽醌、替莫泊芬、替尼泊苷、替羅昔隆、睪內(nèi)酯、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤、噻替派、噻唑羧胺核苷、替拉扎明、檸檬酸托瑞米芬、醋酸曲托龍、磷酸曲西瑞賓、三甲曲沙、葡萄糖醛酸三甲曲沙、曲普瑞林、鹽酸妥布氯唑、烏拉莫司汀、烏瑞替哌、伐普肽、維替泊芬、硫酸長春堿、硫酸長春新堿、長春地辛、硫酸長春地辛、硫酸長春匹定、硫酸長春甘酯、硫酸長春羅新、酒石酸長春瑞濱、硫酸長春羅定、硫酸長春利定、伏氯唑、折尼鉬、凈司他丁、鹽酸佐柔比星。在某些實(shí)施方案中，偏亞砷酸鈉可以與順鉬組合用于治療原發(fā)或繼發(fā)癌癥，例如肺癌。偏亞砷酸鈉和一種或多種其他抗癌療法可以分開、同時或相繼給藥，或以最適合于患者耐受的任何方式給藥。藥劑的組合可以通過相同或不同的給藥途徑給藥于對象。在可選實(shí)施方案中，兩種或更多種預(yù)防或治療藥劑在單一組合物中給藥。作為預(yù)防和/或治療有效的偏亞砷酸鈉量或治療方式的一部分，可以監(jiān)測癌癥干細(xì)胞群以評估療法或治療方式的效能，以用作維持或改變療法以及確定癌癥對象預(yù)后的基礎(chǔ)。在一個實(shí)施方案中，對經(jīng)歷治療方式的對象進(jìn)行監(jiān)測，以評估治療方式是否在對象中引起癌癥干細(xì)胞群、包括耐藥性癌癥干細(xì)胞減少?？梢允褂帽炯夹g(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)監(jiān)測/評估癌癥干細(xì)胞的量。可以通過例如從對象獲取樣品例如組織/腫瘤樣品、血液樣品或骨髓樣品并檢測樣品中的癌癥干細(xì)胞，來監(jiān)測癌癥干細(xì)胞。樣品中癌癥干細(xì)胞的量(其可以表示成例如占全部細(xì)胞或全部癌細(xì)胞的百分率)，可以通過檢測癌癥干細(xì)胞上抗原的表達(dá)來評估?？梢允褂帽炯夹g(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員已知的技術(shù)來測量這些活性?？乖磉_(dá)可以通過例如免疫測定法來測定，包括但不限于western印跡、免疫組織化學(xué)、放射免疫測定法、ELISA (酶聯(lián)免疫吸附測定法)、“夾心”免疫測定法、免疫沉淀測定法、沉淀素反應(yīng)、凝膠擴(kuò)散沉淀素反應(yīng)、免疫擴(kuò)散測定法、凝集測定法、補(bǔ)體結(jié)合測定法、免疫放射測定法、熒光免疫測定法、免疫熒光、蛋白A免疫測定法、流式細(xì)胞術(shù)和FACS分析。在這樣的情況下，來自于對象的測試樣品中癌癥干細(xì)胞的量，可以通過將結(jié)果與參比樣品(例如來自于沒有可檢測癌癥的對象的樣品)中干細(xì)胞的量、或與預(yù)定參比范圍、或與患者自身在較早時間點(diǎn)處(例如治療之前或期間)的干細(xì)胞量進(jìn)行比較來確定。 在具體實(shí)施方案中，從患者獲得的樣品(例如血液或腫瘤組織)中的癌癥干細(xì)胞群通過流式細(xì)胞術(shù)來測定。這種方法利用某些表面標(biāo)志物在癌癥干細(xì)胞上相對于腫瘤主體上的差異表達(dá)。可以使用標(biāo)記的抗體(例如熒光抗體)與樣品中的細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，隨后用過FACS方法對細(xì)胞進(jìn)行分揀。在一些實(shí)施方案中，為了確定樣品中癌癥干細(xì)胞的量利用了細(xì)胞表面標(biāo)志物的組合。例如，可以使用陽性和陰性細(xì)胞分揀兩者來評估樣品中癌癥干細(xì)胞的量。特定腫瘤類型的癌癥干細(xì)胞可以通過評估標(biāo)志物在癌癥干細(xì)胞上的表達(dá)來確定。在某些實(shí)施方案中，腫瘤帶有下表中顯示的癌癥干細(xì)胞及其相關(guān)標(biāo)志物，該表提供了與各種癌癥類型相關(guān)的癌癥干細(xì)胞表型的非限制性列表。
腫瘤癌癥干細(xì)胞表型
白血病(AML)CD34+/CD38-
乳腺癌CD44+/CD24-
腦癌CD133+
白血病(ALL)CD34+/CD10-/CD19-
_2]卵巢癌CD44+/CD24-
多發(fā)性骨髓瘤CD138-/CD34-/CD19+
慢性髓性白血病CD34+/CD38-
黑素瘤CD20+
室管膜瘤CD133+/RC2+
前列腺癌CD44+/a2plhi/CD133+其他癌癥干細(xì)胞標(biāo)志物包括但不限于⑶123、CLL-U SLAM(信號傳導(dǎo)淋巴細(xì)胞活化分子家族受體；參見Yilmaz等，“SLAM家族標(biāo)志物在來自于老年和重構(gòu)小鼠的造血干細(xì)胞之間是保守的并顯著增加它們的純度”(SLAM family markers are conserved amonghematopoietic stem cells from old and reconstituted mice and markedly increasetheir purity), Hematopoiesis 107 :924-930(2006))例如 CD150、CD244 和 CD48 的組合，以及在Bergstein的美國專利No. 6，004, 528、待決的美國專利申請系列號09/468，286和美國專利申請公開號 2006/0083682、2007/0036800、2007/0036801、2007/0036802、2007/0041984,2007/0036803和2007/0036804中公開的標(biāo)志物，每個上述專利和專利申請?jiān)诖艘云淙囊秊閰⒖肌⒁娎缑绹鴮＠鸑o. 6，004，528的表I和美國專利申請系列號09/468，286的表1、2和3，以及美國專利申請公開號2006/0083682,2007/0036800,2007/0036801,2007/0036802,2007/0041984,2007/0036803 和 2007/0036804。在使用樣品的流式細(xì)胞術(shù)的某些實(shí)施方案中，可以使用Hoechst染料方案來鑒定腫瘤中的癌癥干細(xì)胞。簡單來說，將兩種不同顏色(典型為紅色和藍(lán)色)的Hoechst染料與腫瘤細(xì)胞溫育。癌癥干細(xì)胞與主體腫瘤癌細(xì)胞相比在其表面上過表達(dá)染料外排泵，所述外排泵使這些細(xì)胞將染料泵回到細(xì)胞外。主體腫瘤細(xì)胞大部分具有較少的這些泵，因此對染料相對呈陽性，這可以通過流式細(xì)胞術(shù)檢測。典型情況下，當(dāng)觀察整個細(xì)胞群時，出現(xiàn)染料陽性(“染料+”)對染料陰性(“染料細(xì)胞的梯度。癌癥干細(xì)胞包含在染料-或染 料低(染料低)群體中。對于使用Hoechst染料方案表征干細(xì)胞或干細(xì)胞群的實(shí)例，參見Goodell等，“急性髓性白血病中具有固有藥物外排泵能力的白血病干細(xì)胞”(A leukemicstem cell with intrinsic drug efflux pump capacity in acute myeloid leukemia),Blood, 98 (4) :1166-1173(2001)和Kondo等，“C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中少量癌癥干細(xì)胞樣細(xì)胞群的持久性"(Persistence of a small population of cancer stem-like cells inthe C6 glioma cell line), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101:781-786(2004)。通過這種方式，可以使用流式細(xì)胞術(shù)來測量治療前和治療后的癌癥干細(xì)胞量，以評估由給定療法或治療方式引起的癌癥干細(xì)胞量的變化。在其他實(shí)施方案中，將從患者獲得的樣品(例如腫瘤或正常組織樣品、血樣或骨髓樣品)在體外系統(tǒng)中進(jìn)行培養(yǎng)，以評估癌癥干細(xì)胞群或癌癥干細(xì)胞的量。例如，可以將腫瘤樣品在軟瓊脂上培養(yǎng)，并可以將癌癥干細(xì)胞的量與樣品產(chǎn)生可以目測計(jì)數(shù)的細(xì)胞集落的能力相關(guān)聯(lián)。集落形成被認(rèn)為是干細(xì)胞含量的代用度量，因此可用于定量癌癥干細(xì)胞的量。例如，對于血液癌癥來說，集落形成測定法包括集落形成細(xì)胞(CFC)測定法、長期培養(yǎng)起始細(xì)胞(LTC-IC)測定法和懸浮培養(yǎng)起始細(xì)胞(SC-IC)測定法。通過這種方式，集落形成或相關(guān)測定法例如細(xì)胞系的長期永存/傳代，可用于測量治療前和治療后癌癥干細(xì)胞的量，以評估由給定療法或治療方式引起的癌癥干細(xì)胞量的變化。在具體實(shí)施方案中，按照包含下列步驟的方法在對象中對癌癥干細(xì)胞的量進(jìn)行體內(nèi)檢測(a)向?qū)ο蠼o藥有效量的、與癌癥干細(xì)胞上存在的細(xì)胞表面標(biāo)志物特異性結(jié)合的、標(biāo)記的癌癥干細(xì)胞標(biāo)志物結(jié)合藥劑，以及(b)在足以允許標(biāo)記藥劑集中在對象中表達(dá)癌癥干細(xì)胞表面標(biāo)志物的位點(diǎn)處的時間間隔后，檢測對象中的標(biāo)記藥劑。根據(jù)這種實(shí)施方案，通過本技術(shù)領(lǐng)域任何適合的方法，例如腸胃外(例如靜脈內(nèi))或腹膜內(nèi)方法，向?qū)ο蠼o藥癌癥干細(xì)胞表面標(biāo)志物結(jié)合藥劑。根據(jù)這種實(shí)施方案，藥劑的有效量是允許在對象中檢測藥劑的量。該量將隨著具體對象、使用的標(biāo)記物和使用的檢測方法而變。例如，在本技術(shù)領(lǐng)域中應(yīng)該理解，對象的體重和使用的成像系統(tǒng)將決定使用成像手段在對象中檢測藥劑所需的標(biāo)記藥劑的量。在用于人類對象的放射性標(biāo)記藥劑的情況下，給藥的標(biāo)記藥劑的量根據(jù)放射活性來計(jì)算，例如約5至20毫居里的99Tc。在標(biāo)記藥劑給藥后足以允許標(biāo)記藥劑集中在對象中表達(dá)癌癥干細(xì)胞表面標(biāo)志物的位點(diǎn)處的時間間隔，將隨著幾種因素而變，例如使用的標(biāo)記物類型、給藥方式和所成像的對象身體部位。在具體實(shí)施方案中，充足的時間間隔是6至48小時、6至24小時或6至12小時。在另一個實(shí)施方案中，時間間隔是5至20日或5至10日。對象中標(biāo)記的癌癥干細(xì)胞表面標(biāo)志物結(jié)合藥劑的存在可以使用本技術(shù)領(lǐng)域已知的成像手段來檢測?？偟膩碚f，使用的成像手段取決于所使用的標(biāo)記物類型。專業(yè)技術(shù)人員將能夠確定用于檢測特定標(biāo)記物的適合手段?？梢允褂玫姆椒ê脱b置包括但不限于計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)、全身掃描例如正電子發(fā)射斷層掃描(PET)、磁共振成像(MRI)、能夠檢測和定位熒光標(biāo)記物的成像儀和超聲波掃描術(shù)。在特定實(shí)施方案中，將癌癥干細(xì)胞表面標(biāo)志物結(jié)合藥劑用放射性同位素標(biāo)記，并使用輻射響應(yīng)性外科儀器在患者中檢測(Thurston等，美國專利No. 5，441，050)。在另一個實(shí)施方案中，將癌癥干細(xì)胞表面標(biāo)志物結(jié)合藥劑用熒光化合物進(jìn)行標(biāo)記，并使用熒光響應(yīng)性掃描儀器在患者中檢測。在另一個實(shí)施方案中，將癌癥干細(xì)胞表面標(biāo)志物結(jié)合藥劑用正電子發(fā)射金屬進(jìn)行標(biāo)記，并使用正電子發(fā)射斷層掃描術(shù)在患者中檢測。在另一個實(shí)施方案中，將癌癥干細(xì)胞表面標(biāo)志物結(jié)合藥劑用順磁性標(biāo)記 物進(jìn)行標(biāo)記，并使用磁共振成像(MRI)在患者中檢測?？梢允褂帽炯夹g(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員已知的能夠檢測和/或定量癌癥干細(xì)胞的任何體外或體內(nèi)(離體)測定法來監(jiān)測癌癥干細(xì)胞，以便評估偏亞砷酸鈉的預(yù)防和/或治療用途。然后可以使用這些測定的結(jié)果來可能的維持或改變癥療法或治療方式。在本說明書中提到的所有出版物、專利和專利申請，在此引入本說明書中作為參考，其程度如同每個單獨(dú)的出版物、專利或?qū)＠暾埍痪唧w并單獨(dú)地指明在本文中引為參考。本文中參考文獻(xiàn)的引用或討論不應(yīng)被解釋為承認(rèn)其是本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。
實(shí)施例在本文描述的實(shí)施例中使用了下列材料和方法。細(xì)胞系DU145wt、DU145/Pac200和 DU145/Doc50 細(xì)胞由馬里蘭大學(xué)(Universityof Mary land) UMGCC的Hussain博士提供。細(xì)胞系按照推薦方法，在增補(bǔ)有5% FBS、I %抗生素的I :1DMEM/F12培養(yǎng)基(Invitrogen)中培養(yǎng)，并在37°C和5% CO2的標(biāo)準(zhǔn)條件下生長。紫杉醇和多烯紫杉醇耐藥性克隆在藥物選擇壓力下維持。藥物KML001(偏亞砷酸鈉)從 Sigma-Aldrich Co.獲得(CAS#7784_46_5);在卩85中制備50mM的藥物儲用液，并將等份試樣儲存在_20°C下。GRN163L從Geron Corp. (MenloPark, CA)獲得。在PBS中制備IOmM藥物工作儲用液。MTT增殖測定法收獲指數(shù)生長的細(xì)胞并將其鋪板于96孔板中(對于DU 145wt來說 I, 500 個 / 孔，對于 DU 145/Pac200 和 DU 145/Doc50 來說 2，000-3，000 個 / 孔)。待測試藥物以0. 01 ii M至100 ii M的濃度添加，以評估它們的生長抑制潛力。在連續(xù)暴露于藥物5天后，向板加入活體染料3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑(MTT)。使用Gen5軟件和Synergy2讀板器在550nm處測量由活細(xì)胞引起的MTT向紫色甲臘的轉(zhuǎn)變。使用Microsoft Excel產(chǎn)生生長曲線，并確定生長抑制濃度50(IC50)和100%。細(xì)胞系的預(yù)處理在進(jìn)行側(cè)群測定之前，將DU145wt和DU145/Pac200細(xì)胞系，在用KML或GRN163L以其IC50和IC 100值(單位為y M)處理的培養(yǎng)基中培養(yǎng)48 (PAC 200)或72 小時(DU145wt)。側(cè)群測定對合生前(Sub-confluent)活細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)(需要IO6個/管)并用H33343或Dye Cycle Violet(DCV)染色；這兩種染料區(qū)分干細(xì)胞(側(cè)群)和成熟細(xì)胞。使用了由 Goodell 等描述的流程(Goode 11, M. A.等，J. Exp. Med.，183 :1797-806，19966)。每次分析三份樣品。在這些樣品中，一份樣品只用DCV處理，另一份用DCV和50 y M維拉帕米(PgP抑制劑)處理，最后一份用DCV和10 ii M煙曲霉毒素C(FTC，BCRP抑制劑)處理。然后使用流式細(xì)胞術(shù)對樣品進(jìn)行讀取和分析。流式細(xì)胞術(shù)樣品在BDLSR II流式細(xì)胞儀上讀數(shù)。405nM紫色激光激發(fā)DCV染料，根據(jù)細(xì)胞差異產(chǎn)生不同波長。檢測器在450/50(藍(lán)色)和680/30(紅色)處截取發(fā)射的波長，并將數(shù)據(jù)分別作圖在散點(diǎn)圖上。CD44和Pgp染色使用PE(Pgp)或APC(CD44)標(biāo)記的抗體及其同種型對照，按照常規(guī)表位標(biāo)記程序來進(jìn)行。實(shí)施例I在癌細(xì)胞系中鑒定癌癥干細(xì)胞在本研究中，在下列前列腺癌細(xì)胞系中鑒定了癌癥干細(xì)胞(也稱為側(cè)群(SP))和定義SP的ATP結(jié)合性盒(ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白DU145wt (親本)，DU145/Pac200 (紫杉醇耐藥性)和DU145/Doc50 (多烯紫杉醇耐藥性)。所有檢查的前列腺癌細(xì)胞系DU145wt、DU145/Pac200、DU145/Doc50都顯示出側(cè)群(

圖1、3、5)。重要的是，發(fā)現(xiàn)DU145/Pac200和DU145/Doc50細(xì)胞具有占其總細(xì)胞群約40至60 %的非常大的側(cè)群(圖I、5)，這與我們關(guān)于耐藥性細(xì)胞可以由癌癥干細(xì)胞產(chǎn)生的假設(shè)相一致。實(shí)施例2耐藥性癌癥干細(xì)胞和成熟癌細(xì)胞對偏亞砷酸鈉的敏感性將紫杉烷耐藥性細(xì)胞系DU145/Pac200 (高紫杉醇耐藥性)和DU145/Doc50 (高多烯紫杉醇耐藥性)與親代細(xì)胞系DU145以及雄激素耐藥性癌細(xì)胞系(LNCaP/C81和LAPC-4/CSS 100)及其相應(yīng)的激素響應(yīng)性親代細(xì)胞系(LNCaP和LAPC-4) —起，測試了它們對偏亞砷酸鈉的響應(yīng)。從標(biāo)準(zhǔn)MTT測定法得到的生長曲線顯示，那些細(xì)胞系無論其耐藥性如何，都對偏亞砷酸鈉具有靈敏度相似的響應(yīng)(表I)。使用DCV側(cè)群分析，分析了每種前列腺細(xì)胞系中癌癥干細(xì)胞樣細(xì)胞級份的存在。在耐藥性細(xì)胞系中鑒定到基于Dye Cycle Violet(DCV)染料外流的側(cè)群(SP)，證實(shí)了以前對DU145/Doc50使用Hoechst 33342染料的結(jié)果(未顯示)。SP的存在是基于藥物外排泵例如P-糖蛋白或BCRP的表達(dá)，所述外排泵對阻止標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞毒性療法發(fā)揮作用負(fù)有責(zé)任。對標(biāo)準(zhǔn)化療藥劑紫杉醇和多烯紫杉醇具有耐藥性的DU145前列腺癌細(xì)胞系具有最高SP (表I)。盡管激素耐藥性細(xì)胞系LnCaP/C81及其親代細(xì)胞系也顯示出可以用藥物外排泵抑制劑維拉帕米(P-gP抑制劑)或煙曲霉毒素C(FTC，BCRP抑制劑)抑制的明顯側(cè)群，但通過這種方法沒有檢測到LAPC-4及其激素耐藥性衍生株的明確側(cè)群。由于激素療法例如雄激素合成抑制劑不是藥物外排泵的底物，因此這些發(fā)現(xiàn)并不令人吃驚。表I前列腺癌細(xì)胞系和用PgP和BRCP轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑(維拉帕米和煙曲霉毒素C，、FTC)預(yù)處理的細(xì)胞中DCV側(cè)群的百分?jǐn)?shù)、對KMLOOl的敏感性、端粒長度(TRF)和相對端粒酶活性(TA)。
權(quán)利要求
1.偏亞砷酸鈉在制備用于治療人類患者腦腫瘤的藥物組合物中的應(yīng)用，其中所述偏亞砷酸鈉跨越人類血腦屏障。
2.權(quán)利要求I的應(yīng)用，其中藥物組合物被配制成用于口服給藥。
3.權(quán)利要求I的應(yīng)用，其中藥物組合物被配制成遞送2.5mg至20mg量的偏亞砷酸鈉。
4.權(quán)利要求I的應(yīng)用，其中腦腫瘤難以用至少一種化療藥劑治療。
5.權(quán)利要求I的應(yīng)用,其中腦腫瘤是少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突星形細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤、腦膜瘤、神經(jīng)鞘瘤、成血管細(xì)胞瘤或血管生成細(xì)胞瘤。
6.
7.權(quán)利要求I的應(yīng)用，其中藥物組合物被配制成用于靜脈內(nèi)遞送。
8.權(quán)利要求I的應(yīng)用，其中腦腫瘤已通過手術(shù)全部或部分移除。、
9.一種試劑盒，其包含被配制用于口服或靜脈內(nèi)遞送的一個或多個劑量單位的偏亞砷酸鈉，以及被配制用于口服或靜脈內(nèi)給藥的一個或多個劑量單位的不同于偏亞砷酸鈉的抗腦腫瘤化療藥劑。
10.權(quán)利要求9的試劑盒，其中抗腦腫瘤化療藥劑選自烷基化劑、抗葉酸劑和拓?fù)洚悩?gòu)酶。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于預(yù)防、治療和/或管理癌癥的方法，所述方法包含向需要的對象給藥治療有效量的、減少或消除耐藥性癌癥干細(xì)胞群以及耐藥性成熟癌細(xì)胞的偏亞砷酸鈉。
文檔編號A61K33/36GK102753164SQ201080040472
公開日2012年10月24日 申請日期2010年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月10日
發(fā)明者安格里卡·伯格(已逝) 申請人:柯密納克斯公司