專利名稱：用于減少注射引起的皮膚反應的腎上腺素能受體激動劑和填充劑的可注射組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及外科手術及皮膚病學領域。本發(fā)明涉及ー種可注射的組合物，其包括腎上腺素能受體激動劑(優(yōu)選地為溴莫尼定)和填充劑(優(yōu)選地為透明質酸)。本發(fā)明用于預防和/或治療由美容手術引起的表面瘀傷及流血。
背景技術：
表面瘀傷及較小程度的流血是很多美容手術(包括皮下填充劑注射、肉毒桿菌毒素注射及鐳射磨皮)的常見結果，報告顯示平均約占手術時間的三分之一。而抽脂木、豐胸術/胸部提升、面部拉皮以及腹壁整形術等外科手術中會出現(xiàn)更嚴重的瘀傷。由于填充劑的皮下或皮內(nèi)注射造成血管損傷或血管壁破裂而引起的瘀斑、瘀傷、血液成分滲出會馬上導致炎癥、發(fā)紅以及水腫，這些繼發(fā)性即時反應的處理是大家尤其關心的問題。盡管一般認為發(fā)紅、皮膚紅斑、瘀傷及流血不是大問題，但是大多數(shù)的醫(yī)師會在手術前提醒病人為這些可能發(fā)生的癥狀作好準備。特別地，醫(yī)師們通常會注意不在手術前和手術后使用阿司匹林或其它抗凝血藥物，而是在手術后立即大量使用冰袋，同時常常使用山金車(一種用于促進愈合的草藥)。這種缺陷常常會讓ー些病人沮喪，尤其是那些進行美容手術的病人。特別是對于瘀傷/流血的結果，醫(yī)師們報告指出，病人們最關注的一個問題是出現(xiàn)瘀傷時的停エ期，當出現(xiàn)瘀傷時，病人們更愿意待在家里，而不是返回工作及參加社交活動。因此，需要減輕美容或外科手術中(尤其是注射填充劑時)出現(xiàn)的瘀傷/流血。本發(fā)明經(jīng)申請人證明，腎上腺素能受體激動劑與填充劑一起注射可以減少由于注射引起的皮膚反應的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了ー種由大量腎上腺素能受體激動劑(優(yōu)選稱為溴莫尼定的產(chǎn)品)和填充劑或肉毒桿菌毒素(優(yōu)選地為透明質酸)組成的組合物。所述組合物全身性給藥于需要的個體。本發(fā)明提供了大量的腎上腺素能受體激動劑(優(yōu)選稱為溴莫尼定的產(chǎn)品)與肉毒桿菌毒素或填充劑(優(yōu)選地為透明質酸)的結合在需要的個體中的使用。本發(fā)明提供了ー種方法，用于減輕、減少或避免特別是美容手術中的瘀傷以及較 小程度地減輕、減少或避免流血，其通過給需要的個體提供包含皮膚填充劑(優(yōu)選地為透明質酸)以及大量的腎上腺素能受體激動劑(優(yōu)選稱為溴莫尼定的產(chǎn)品)實現(xiàn)。第一方面，本發(fā)明涉及一種組合物，其包括-填充劑或肉毒桿菌毒素；
-腎上腺素能受體激動劑。通過本發(fā)明的描述可以清楚地了解，本發(fā)明主要用于預防及治療皮膚缺陷，特別是那些由于皮膚老化(褶皺、皺紋、皮膚凹陷，……)或者皮膚損傷(疤痕，……)造成的皮膚缺陷。在過去的幾年里，皮膚缺陷的治療已經(jīng)獲得巨大的關注。結果，人們提出了皮內(nèi)或皮下注射的化合物。作為首選，可以局部注射能夠引起肌肉麻痹或收縮的肉毒桿菌毒素?；蛘咴趦?yōu)選實施例中，可以注射填充劑。填充劑一般定義為能夠填充皮膚組織的生物材料。所述要求保護的可注射組合物也可以定義為“皮膚填充劑”(dermal filler),該組合物包含在水性介質中的所述填充劑，并表現(xiàn)出填充性質。 在這種情況下，ー些化合物如聚丙烯酰胺凝膠、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)顆?；蚬柰伎梢允褂谩Ｗ顑?yōu)選的化合物是可再吸收的分子，如透明質酸、膠原蛋白、藻酸鹽、右旋糖酐、彈性蛋白(elastine)或聚氨酯凝膠。透明質酸或透明質酸鹽(hyaluronate)是ー種廣泛分布在結締組織、上皮組織以及神經(jīng)組織中的不含硫的粘多糖。它是細胞外基質的主要成分之一。其顯著有助于細胞增殖及細胞遷移。它對皮膚含水量及皮膚彈性起重要作用。隨著年齡增大，透明質酸的含量及質量水平都不斷下降，從而導致皮膚干燥和皺紋。透明質酸是ー種天然形成的生物聚合物，它在水中會形成高粘度溶液。因此，它作為ー種藥劑產(chǎn)品得到廣泛應用。另外，由于未觀察到任何免疫原性反應，該種化合物被認為是非常安全的。到目前為止，只出現(xiàn)了極少不良事件。因此，有利地，填充劑為透明質酸或其藥學上可接受的鹽或衍生物，特別是其鈉鹽或鉀鹽。透明質酸能夠以不同的形式使用它的鹽、它的衍生物，如線性形式或交聯(lián)的酯類或酰胺類化合物。特別地，其分子量(一般在500kDa-5000kDa之間)及交聯(lián)度取決于其應用，特別是取決于需要填充的皺紋的深度。所述要求保護的組合物的第二個成分是腎上腺素能受體激動劑。已知腎上腺素能受體激動劑能夠綁定和激活腎上腺素能受體。本領域中眾所周知的是，腎上腺素能受體包括α和β受體。二十世紀七十年代，在α腎上腺素能受體中區(qū)分出α I和α 2受體。同一年代，發(fā)現(xiàn)α 2出現(xiàn)在血管平滑肌上并顯不出對血管收縮反應(vasoconstrictor response)的介導(“免況ァof functionalCi1- and a 2~adrenoceptors (功能性 Ct1 和 α 2 腎上腺素能受體亞型)” JR Docherty;European Journal of Pharmacology 361 (1998) 1-15) 因此，表現(xiàn)出 α 腎上腺素能激動性(a adrenergic agonism)特別是α 2腎上腺素能激動性的分子具有周圍血管收縮活性。在要求保護的組合物中使用的激動劑可以指向α和/或β受體。不過，由于可能存在副作用，最好不使用表現(xiàn)出β腎上腺素能激動性的分子。在本申請的余下部分中，對β腎上腺素能受體不具有親和カ的分子將命名為“α腎上腺素能受體激動剤”。在α受體中,所述激動劑可以是α I受體和α 2受體兩者的激動劑,或者可以是特別針對α I或α 2受體的激動劑。優(yōu)選地，選定的分子對α 2的親和カ比對α I受體的親和力強，并且在本申請的余下部分中將通常被命名為“ α 2腎上腺素能受體激動剤”。在優(yōu)選實施例中，所述腎上腺素能受體激動劑為α 2腎上腺素能受體激動劑，優(yōu)選地為溴莫尼定。α 2腎上腺素能受體的激動劑已經(jīng)用于治療很多問題，包括高血壓、充血性心臟衰竭、心絞痛、痙攣、青光眼、腹瀉，以及抑制麻醉劑戒斷癥狀(J. P. Heible和R. R.RuffoIo， Therapeutic Applications οι Agents Interacting with a—Adrenoceptors(與α腎上腺素能受體相互作用的因子的治療應用)，Progress in Basic and ClinicalPharmacology(《基礎和臨床藥通學進展》),第8卷，180-206頁,P. Lomax和E. S. VesellEd. , Karger,1991)。盡管已有貼劑，但是腎上腺素能受體激動劑(如可樂定)主要采用ロ服。已知CI2激動劑介導病人的中心及周圍血管收縮。特別地，已知在受到寒冷或壓カ的刺激吋，α 2腎 上腺素能受體激動劑會引起周邊動脈的血管收縮。很多病人講述了使用溴莫尼定來治療眼睛問題及眼部疾病。在加拿大專利CA2326690中，描述了僅在眼睛中局部使用該眼科藥物來治療眼部疾病。如上所述，本發(fā)明范圍中最優(yōu)選的化合物是(5-溴-喹喔啉-6-基)-(4，5-ニ氫-IH-咪唑-2-基)-胺((5-Bromo-quinoxalin-6-yI) - (4, 5-dihydro-lH-imidazol-2-yI)-amine)(一般稱為溴莫尼定)及其藥學上可接受的鹽，特別是酒石酸鹽。其他已知的能夠用于本發(fā)明中的α 2腎上腺素能受體激動劑化合物是可樂定、apo ロ」.樂足 kapoclonidine;。更普遍地說，其他的α腎上腺素能受體激動劑化合物是辛弗林、ニ甲己胺、抗利尿激素及類似物、鳥氨加壓素(ornipressine)、米多君、苯腎上腺素、賽洛唑啉、羥甲唑啉、去甲腎上腺素、甲氧胺。對β受體也具有親和カ但某些情況下能夠使用的化合物是腎上腺素、麻黃堿、依替福林。當然，所有這些化合物的藥學上可接受的鹽也包括在內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，這里使用的術語“藥學上可接受的鹽”是指本發(fā)明可安全、有效地在哺乳動物上局部使用并具有所需生物活性的那些化合物的鹽。藥學上可接受的鹽包括存在于本發(fā)明的化合物中的酸式鹽或堿式鹽。藥學上可接受的酸式鹽包括但不限干，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸性磷酸鹽、異煙酸鹽(isonicotinate)、醋酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、延胡索酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醒酸鹽(glucaronate)、鹿糖鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽、こ磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和巴莫酸鹽(即，1，I’ -亞甲基-雙(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。本發(fā)明的某些化合物能夠與各種氨基酸反應形成藥學上可接受的鹽。合適的堿式鹽包括但不限于，鋁鹽、鈣鹽、鋰鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽和ニこ醇胺鹽。關于藥學上可接受的鹽的綜述參考BERGE ET AL.，66 J. PHARM. Sci. 1-19 (1977)。根據(jù)第一個實施例，所述要求保護的組合物僅包含填充劑(或其混合物)以及腎上腺素能受體激動劑(或其混合物)，優(yōu)選地為透明質酸和溴莫尼定。根據(jù)本發(fā)明的另ー實施例，所述要求保護的組合物還包含一種或多種其他成分。上述一種或多種其他成分可以是活性成分，例如，麻醉劑。優(yōu)選的麻醉劑是利多卡因或其藥學上可接受的鹽。其他活性成分是例如生長因子、肽……
所述要求保護的組合物還包含其他藥學上可接受的成分，如載體、賦形劑、防腐劑……在一個實施例中，本發(fā)明的化合物對需要該化合物的病人的給藥方式為全身給藥途徑，優(yōu)選地通過注射給藥。因此，本發(fā)明中的化合物在藥學上可接受的載體中遞送到皮膚的患病區(qū)域。這里使用的藥學上可接受的載體是任意藥學上可接受的藥劑，其能夠應用于皮膚，通過真皮、皮內(nèi)或透皮遞送藥物或藥品。藥學上可接受的載體和本發(fā)明化合物的組合一起稱為本發(fā)明的可注射藥劑。 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述組合物是藥學上可接受的可注射藥劑。在本發(fā)明中，“藥學上可接受的可注射藥劑”是指任何可用于全身給藥的藥學上可接受的藥劑。優(yōu)選地，所述組合物在真皮淺層、真皮中層或真皮深層通過皮下或皮內(nèi)途徑給藥。一般來說，所述要求保 護的組合物包含在溶液或凝膠中，優(yōu)選地包含在水性溶液或凝膠中。所述要求保護的組合物由治療有效量的腎上腺素能受體激動劑和填充劑組成，或包含治療有效量的腎上腺素能受體激動劑和填充劑。這里使用的“本發(fā)明化合物的治療有效量”是指能夠有效實現(xiàn)本發(fā)明目標效果的化合物的最小量。通常，所述要求保護的組合物包含
-填充劑，優(yōu)選地為HA，其占組合物重量的1%-2. 5% ；
-腎上腺素能受體激動劑，優(yōu)選地為溴莫尼定，其占組合物重量的0.0001%-1% ；
-可選的麻醉劑，其占組合物重量的O. 01%-3%。如上所述，要求保護的組合物g在對患者或病人給藥，特別是通過面部注射(前額、眼睛、鼻唇溝、……)進行給藥。這里使用的術語“患者”或“病人”是等同用語，表示任何將要或已經(jīng)給予本發(fā)明化合物或藥劑的動物，優(yōu)選地是哺乳動物，更優(yōu)選地是人類。這里使用的術語“哺乳動物”包括任何哺乳動物。因此，本發(fā)明還提供了一種藥劑，以向病人遞送全身劑量的化合物。實際上，對于給藥程序，活性化合物的量如下
-對于填充劑，優(yōu)選地為HA :在O. 05mg/kg-2mg/kg體重之間。其表示從5mg_100mg。-對于腎上腺素能受體激動劑，優(yōu)選地為溴莫尼定在5.10_3mg_0. 8mg/kg體重之間。其表示從O. 5Pg-40mg。在優(yōu)選實施例中，所述要求保護的待注射組合物的體積在O. I-IOml之間，一般在0.5-4ml之間。優(yōu)選地，所述體積以單劑量注射器的形式提供。所述注射能夠重復進行，例如在4-18個月后重注射。本發(fā)明的另一方面是ー種制品，其包括裝在合適的帶有標簽的容器中的本發(fā)明全身藥劑及使用說明。所述容器優(yōu)選地是單劑量注射器。優(yōu)選地，使用說明與本發(fā)明的藥劑包裝在一起，例如，小冊子或包裝標簽。標簽說明解釋本發(fā)明的藥劑如何以足以治療病人的量及時間段進行給藥。優(yōu)選地，標簽包括劑量和給藥說明、藥劑組成、臨床藥理學、耐藥性、藥物代謝動力學、吸收、生物利用率以及各種
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接著，要求保護的可注射組合物可整合成一試劑盒，其包括含有所述組合物的注射器。在所述試劑盒中，兩種活性成分，即填充劑和腎上腺素能受體激動劑，能夠以混合物形式裝在注射器中，或者能夠裝在兩個獨立的注射器中，使用時混合。所述要求保護的組合物優(yōu)選地在適合保存各活性成分的條件下進行滅菌。如上所述，要求保護的組合物用于預防和/或治療各種皮膚缺陷，特別是褶皺、皺紋、皮膚凹陷和疤痕。其用于美容治療或治療處理。根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)表明要求保護的組合物的主要優(yōu)點在于減輕、減少或避免紅斑、瘀斑、瘀傷或流血，特別是由于注射皮膚填充劑造成的。要求保護的組合物的其他潛在優(yōu)點如下
-當所述組合物還包含麻醉劑(如，利多卡因)時，所述麻醉劑的藥效能夠獲得提高由α腎上腺素能激動劑提供的血管收縮效果限制了麻酔劑的大面積擴散，從而導致麻酔只在嚴格的注射部位有效；
-通過減少炎癥，填充劑能夠持續(xù)更長時間，這可能是由于其降解減緩了 填充劑的炎癥越重，劇烈的組織反應越多，并且炎癥種類(inflammatory species)的水平越高,從而加速填充劑的降解。在填充劑中加入血管收縮分子能夠限制吸引至注射部位的炎癥種類；
-觀察到能夠減輕水腫和腫脹原因與上述優(yōu)點相同，填充劑的血管收縮活性限制了與注射有關的液流，從而阻礙了注射部位附近的液體濃度升高。更籠統(tǒng)地說，所述要求保護的組合物因此意圖用于減輕、減少或避免所有由注射引起的不希望的皮膚反應(即時的和/或繼發(fā)性的)。其確實包括瘀斑、瘀傷或流血，但還包括可能的發(fā)紅、紅斑、水腫、壞死、潰瘍、腫脹和炎癥。所述要求保護的包含兩種活性成分的組合物可以同時使用、単獨使用或按順序使用。換句話說，本發(fā)明提供了ー種試劑盒，其成分為大量腎上腺素能受體激動劑(優(yōu)選地為稱為溴莫尼定的產(chǎn)品)和填充劑(優(yōu)選地為透明質酸)的結合。除了上述這些，下述的實例用于闡述具體實施例，但不限制本發(fā)明的保護范圍。


圖I顯示了要求保護的組合物(試驗2)與単獨的填充劑(試驗I)相比較，原發(fā)刺激指數(shù)(Irritating Primary Index, IPI)在 0-8 天之間的演變；
圖2顯示了要求保護的組合物(試驗2)與単獨的填充劑(試驗I)相比較，在第8天時的炎癥反應的總分數(shù)。
具體實施方式
研究內(nèi)容
進行含有利多卡因和名為RADACT014的血管收縮劑藥物(溴莫尼定)的基于透明質酸的皮膚填充劑的皮內(nèi)試驗，以評估溴莫尼定減少兔子皮內(nèi)注射填充劑后引起的刺激性的潛力。兩只成年兔子通過皮內(nèi)途徑接受O. 2mL試驗產(chǎn)品RADACT014 (試驗2)、NaCl O. 9%(試驗5 :陰性對照)和10LDEEP010 (與RADACT014相同的透明質酸填充劑，但是不含利多卡因和溴莫尼定；試驗I :陽性對照)。
將使用含有溴莫尼定的填充劑(ー批RADACT014 (試驗2))測得的結果與不含溴莫尼定的皮膚填充劑(陽性對照試驗I)進行對比。注射后0-8天檢查這些部位的組織反應的大體證據(jù)(gross evidence),如紅斑、水腫和壞死(圖1)，并在第8天處死后進行組織學觀察，在顯微鏡下觀察組織反應(圖2)。該研究根據(jù)ISO 10993標準的要求進行醫(yī)療器械的生物學評價(BiologicalEvaluation of medical devices),第10部分刺激和遲發(fā)型超敏反應試驗。材料和方法
制備對照交聯(lián)透明質酸填充劑ioldeepoio 交聯(lián)的透明質酸填充劑10LDEEP010 (試驗I)通過用25%的BDDE (—種來自細菌來源的透明質酸鈉，其特征是具有2-4X IO6Da左右的高分子量)進行交聯(lián)獲得。交聯(lián)后，向交聯(lián)的透明質酸中加入鹽酸利多卡因，使?jié)舛冗_到0. 3%。通過將混合物擠出網(wǎng)狀物(mesh)得到均勻混合的利多卡因。所得到的凝膠裝入ImL注射器中，其濃度為20mg/mL，并經(jīng)蒸汽滅菌。制備含有滇莫尼定的交聯(lián)透明質酸填充劑RADACT014
對相同的透明質酸采用相同的交聯(lián)條件，得到不含利多卡因的填充劑。同時，用SgNaOH和42g純化水制備4N氫氧化鈉溶液。通過將0. 22g酒石酸溴莫尼定和0. 33g鹽酸利多卡因溶解在9. 45mL的磷酸鹽緩沖液中制得另ー種含有溴莫尼定和利多卡因的溶液。用NaOH溶液將PH調節(jié)到6。然后，將溴莫尼定和利多卡因對0. 22微米進行過濾。通過3個步驟使5g含有上述2種活性成分的溶液和50g前面的交聯(lián)透明質酸凝膠緩慢混合獲得含有溴莫尼定和利多卡因的填充劑(稱為RADACT014 (試驗2)):機械混合5分鐘后打碎15分鐘，然后再混合5分鐘。將所得凝膠裝入ImL注射器中，并采用蒸汽滅菌。透明質酸酶消化后測定各活性成分的終濃度，通過HPLC-MS-MS測得的溴莫尼定的濃度為0. 16%，通過HPLC測得的利多卡因的濃度為0. 29%。調杳即時不良反應事件的減少
通過動物研究評價RADACT014減少刺激的潛力，該研究的進行依據(jù)IS010993-10要求醫(yī)療器械的生物學評價-刺激和遲發(fā)型超敏反應試驗。研究方案
在第O天(D0)，兩只成年兔子通過皮內(nèi)途徑接受0. 2mL試驗產(chǎn)品(試驗I :10LDEEP010和試驗2 :RADACT014)和陰性對照(試驗5 :生理鹽水)，采用27G針頭注射。在這些條件下，每個產(chǎn)品注射4個部位。然后，從第O天到第8天，每天檢查2次注射部位的組織反應大體證據(jù)，如紅斑、水腫、潰瘍和壞死，用以下標準評分
權利要求
1.一種可注射組合物，其包括 -填充劑或肉毒桿菌毒素； -Ct腎上腺素能受體激動劑。
2.根據(jù)權利要求I所述的組合物，其中腎上腺素能受體激動劑是α2腎上腺素能受體激動劑，優(yōu)選地為溴莫尼定。
3.根據(jù)權利要求I或2所述的組合物，其中所述填充劑是透明質酸。
4.根據(jù)權利要求1-3中任一項所述的組合物，其中所述組合物還包括麻醉劑，優(yōu)選地為利多卡因。
5.根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的組合物，其中所述組合物包括 -填充劑，優(yōu)選地為ΗΑ，其占組合物重量的1%-2. 5% ； -腎上腺素能受體激動劑，優(yōu)選地為溴莫尼定，其占組合物重量的0.0001%-1% ； -可選的麻醉劑，其占組合物重量的O. 01%-3%。
6.一種試劑盒，其包括注射器并包括前述任一權利要求所述的組合物。
7.根據(jù)權利要求1-5中任一項所述的組合物或權利要求6所述的試劑盒，其用于預防或治療皮膚缺陷，特別是褶皺、皺紋、皮膚凹陷和疤痕。
8.一種用于預防或治療皮膚缺陷，特別是褶皺、皺紋、皮膚凹陷和疤痕的美容方法，其通過給需要的個體注射權利要求1-5中任一項所述的組合物來實現(xiàn)。
9.根據(jù)權利要求7所述的組合物或試劑盒，其用于減輕、減小或避免由注射引起的皮膚反應，特別是發(fā)紅、瘀斑、瘀傷、流血、紅斑、水腫、壞死、潰瘍、腫脹和/或炎癥。
10.根據(jù)權利要求8所述的方法，其用于減輕、減小或避免由注射引起的皮膚反應，特別是發(fā)紅、瘀斑、瘀傷、流血、紅斑、水腫、壞死、潰瘍、腫脹和/或炎癥。
11.根據(jù)權利要求1-5中任一項所述的組合物，所述組合制備物可以同時使用、獨立使用或按順序使用。
12.根據(jù)權利要求1-5中任一項所述的組合物，所述組合制備物可以同時使用、獨立使用或按順序使用，用于預防或治療皮膚缺陷，特別是褶皺、皺紋、皮膚凹陷和疤痕。
13.根據(jù)權利要求1-5任一項所述的組合物，所述組合制備物可以同時使用、獨立使用或按順序使用，用于減輕、減小或避免由注射引起的皮膚反應，特別是發(fā)紅、瘀斑、瘀傷、流血、紅斑、水腫、壞死、潰瘍、腫脹和/或炎癥。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種可注射組合物，其包括填充劑或肉毒桿菌毒素以及腎上腺素能受體激動劑，該組合物可以用于減輕、減小或避免由注射引起的皮膚反應，特別是發(fā)紅、瘀斑、瘀傷、流血、紅斑、水腫、壞死、潰瘍、腫脹和/或炎癥。
文檔編號A61K31/728GK102686226SQ201080023728
公開日2012年9月19日 申請日期2010年5月28日 優(yōu)先權日2009年5月29日
發(fā)明者B·賀巴爵, C·維拉德, F·布魯耐爾, I·博科倫 申請人:思馬特斯, 蓋爾德馬研究及發(fā)展公司