專利名稱：包含含藥物小粒子的藥物組合物及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包含小粒子的藥物組合物及其制造方法，所述小粒子包含水溶性藥物和離子結(jié)晶性化合物。
背景技術(shù)：
生物技術(shù)的進(jìn)步已導(dǎo)致發(fā)現(xiàn)大量的治療化合物如肽、蛋白質(zhì)、多糖、多核酸、 siRNA、RNA、抗體、抗原等。這些化合物的物理化學(xué)特征(例如大分子量、親水性、不穩(wěn)定性) 使得難以通過注射以外的其它手段將它們對(duì)身體給藥。對(duì)于這些藥物中的一些，需要每日多次注射給藥，并且導(dǎo)致特別是較年輕患者不履行給藥(非專利文獻(xiàn)1和2)。當(dāng)經(jīng)口服途徑或經(jīng)粘膜途徑如經(jīng)肺、經(jīng)口腔(口腔粘膜)、經(jīng)陰道和經(jīng)鼻途徑等來給藥時(shí)，這些藥物因其物理尺寸和親水性而不容易通過粘膜表面被吸收。此外，這些藥物易于被酶如肽酶和蛋白酶降解，在胃腸道中這特別是問題。為了改善這些藥物通過粘膜表面的輸送，已使用了含吸收促進(jìn)劑的制劑，并特別是在通過經(jīng)鼻途徑和經(jīng)肺途徑遞送方面取得了一定程度的成功。然而，需要開發(fā)用于通過粘膜表面輸送高分子量化合物的有效方法和組合物。作為提供這種輸送的手段，已經(jīng)描述了納米粒子封裝藥物(非專利文獻(xiàn)幻。然而， 由于這些化合物的尺寸大且納米粒子的基質(zhì)中的環(huán)境通常疏水，所以將肽和蛋白質(zhì)封裝到納米粒子中很困難，并且通常導(dǎo)致非常低的負(fù)載能力并因此需要對(duì)粘膜表面給藥大量納米粒子。這在一定程度上已通過制造其中納米粒子的主要部分為純藥物的納米晶體而解決。 然而，納米晶體懸浮液通常非常不穩(wěn)定，并且除非使晶體穩(wěn)定化，否則晶體生長(zhǎng)通常以逐步的方式進(jìn)行。用于使納米晶體穩(wěn)定化的通常程序通過交聯(lián)處理來進(jìn)行，所述交聯(lián)處理在一定程度上交聯(lián)藥物本身，因此降低藥物的生物活性或者導(dǎo)致對(duì)藥物如蛋白質(zhì)的免疫原性。 此外，從文獻(xiàn)中的記載可以明顯看出，通過粘膜的輸送納米粒子不容易實(shí)現(xiàn)(非專利文獻(xiàn) 3)。作為用于通過粘膜進(jìn)行藥物遞送的載體，已經(jīng)對(duì)納米粒子進(jìn)行了廣泛研究(非專利文獻(xiàn)3巧)。納米粒子對(duì)于上文概述的肽和蛋白質(zhì)特別重要。然而，已描述了以下方面的問題用于通過粘膜遞送充分量藥物的納米粒子體系缺乏效率，藥物負(fù)載效率低且如果未封裝到納米粒子的基質(zhì)中則肽和蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性差。作為用于經(jīng)粘膜和非經(jīng)腸道遞送的藥物遞送體系，已經(jīng)在文獻(xiàn)中描述了肽或蛋白質(zhì)的納米晶體形式的納米粒子(非專利文獻(xiàn) 6-7)。然而，文獻(xiàn)中所述的納米晶體通常在物理上不穩(wěn)定，或者如果被交聯(lián)以提高穩(wěn)定性， 則會(huì)損失部分生物活性。此外，納米晶體的尺寸通常大于1 μ m，因此是微晶體而不是納米晶體?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1 :US2004/02192224專利文獻(xiàn)2 :W098/46732
專利文獻(xiàn) 3 :US7087246
專利文獻(xiàn) 4 :W002/072636專利文獻(xiàn)5 :W099/55310非專利文獻(xiàn)非專利文獻(xiàn)1 =Drug Discovery Today. 7 ；1184-1189 (2002)非專利文獻(xiàn)2 J. Control. Rel. 87 ； 187-198 (2003)非專利文獻(xiàn)3 J. Pharm. Sci. 96 ；473-483 (2007)非專利文獻(xiàn)4 =Biomaterials 23 ；3193-3201 (2002)非專利文獻(xiàn)5 Jnt J Pharm. 342 ；240-249 (2007)非專利文獻(xiàn)6 J.Biotech. 113 ； 151-170 (2004)非專利文獻(xiàn)7 Pharm. Res. 22 (9) ； 1461-1470 (2005)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題如上所述，以高效率將水溶性聚合物藥物如肽、蛋白質(zhì)等封裝在小粒子中以及以適當(dāng)尺寸制備含水溶性聚合物藥物的小粒子并不容易。另外，在使用時(shí)將含小干燥粒子的組合物再懸浮在水中時(shí)，不容易避免聚集和提供具有小尺寸的粒子的再分散。本發(fā)明的目的是提供一種藥物組合物，其可用于通過注射以外的方法有效地給藥水溶性藥物。更具體來說，本發(fā)明的目的是提供一種用于有效地經(jīng)粘膜或經(jīng)皮膚施用給藥水溶性藥物(例如肽、蛋白質(zhì)、DNA、RNA、siRNA、多糖、脂肽、脂蛋白、脂多糖、低分子量化合物、抗體、抗原、毒素、疫苗等)的含小粒子的藥物組合物，特別地，本發(fā)明的目的是提供一種含小粒子的藥物組合物，其與常規(guī)含小粒子的藥物組合物相比，使得能以高效率將水溶性藥物封裝在小粒子中并以適當(dāng)尺寸制備小粒子。本發(fā)明的另一目的是提供一種用于制造所述藥物組合物的方法。解決問題的手段本發(fā)明人關(guān)注于使用小粒子體系如納米粒子作為通過注射以外的方法來有效給藥上述水溶性藥物的經(jīng)粘膜和經(jīng)皮膚給藥，并且進(jìn)行了認(rèn)真研究。結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)的含小粒子的藥物組合物相比，其中離子結(jié)晶性化合物在小粒子中結(jié)晶化的含有水溶性藥物和離子結(jié)晶性化合物的小粒子使得能以高效率將水溶性藥物封裝在小粒子中并且以適當(dāng)尺寸制備小粒子。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，通過靜電相互作用利用合適的聚合物包覆小粒子的表面使得小粒子能夠在懸浮液中穩(wěn)定化?；谶@些發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)可以通過使用含有所述小粒子的藥物組合物而實(shí)現(xiàn)優(yōu)于常規(guī)方法的藥物遞送體系，從而完成本發(fā)明。因此，本發(fā)明如下。[1] 一種藥物組合物，其包含小粒子，所述小粒子包含(a)水溶性藥物和(b)藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物，所述藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物在室溫下為固體， 其中所述離子結(jié)晶性化合物在所述小粒子中結(jié)晶化。[2]上述[1]的藥物組合物，其中所述小粒子不含不可逆交聯(lián)。[3]上述[1]或[2]的藥物組合物，其中所述小粒子的平均粒徑為IOnm以上且 5000nm 以下。
[4]上述[1]至[3]中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述水溶性藥物選自肽、蛋白質(zhì)、 DNA、RNA、siRNA、多糖、脂肽、脂蛋白、脂多糖、低分子量化合物、抗體、抗原、毒素和疫苗。[5]上述[1]至[4]中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述離子結(jié)晶性化合物包含選自鈉離子、鉀離子、鈣離子、鎂離子、鋅離子、鐵離子和銨離子的一種或多種陽(yáng)離子電解質(zhì)以及選自氯離子、硫酸離子、乳酸離子、乙酸離子、磷酸離子、葡萄糖酸離子、碳酸根離子和碳酸氫根離子的一種或多種陰離子電解質(zhì)作為構(gòu)成成分。[6]上述[1]至[5]中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述水溶性藥物相對(duì)于所述離子結(jié)晶性化合物的重量比為0. 001以上且100以下。[7]上述[1]至[6]中任一項(xiàng)的藥物組合物，其進(jìn)一步包含(c)藥物上可接受的聚合物，其中所述小粒子在預(yù)定PH下具有正電荷或負(fù)電荷，并且所述聚合物在所述pH下具有符號(hào)與所述小粒子相反的電荷，由此所述小粒子和所述聚合物在所述PH下彼此靜電相互作用而形成復(fù)合物，其中所述聚合物附著在所述小粒子的表面。[8]上述[7]的藥物組合物，其中所述復(fù)合物的平均粒徑為15nm以上且6000nm以下。[9] 一種上述[1]至[6]中任一項(xiàng)的藥物組合物的制造方法，其包括在減壓下不加熱地干燥所述水溶性藥物和所述離子結(jié)晶性化合物的水溶液。[10]上述[9]的方法，其中所述干燥是冷凍干燥或離心濃縮干燥。[11] 一種制造上述[7]或[8]的藥物組合物的方法，其包括在減壓下不加熱地干燥所述水溶性藥物和所述離子結(jié)晶性化合物的水溶液以提供所述小粒子，以及將所述聚合物的具有所述PH的溶液與所述小粒子混合。[12]上述[11]的方法，其中所述干燥是冷凍干燥或離心濃縮干燥。發(fā)明效果本發(fā)明的藥物組合物使得能將水溶性藥物(例如肽、蛋白質(zhì)、DNA、RNA、siRNA、多糖、脂肽、脂蛋白、脂多糖、低分子化合物、抗體、抗原、毒素和疫苗等)有效地經(jīng)粘膜或經(jīng)皮膚給藥至哺乳動(dòng)物，因?yàn)榘谒幬锝M合物中的小粒子具有適當(dāng)?shù)牧讲⑶铱梢栽谛×Ｗ又袧饪s所述水溶性藥物。此外，在包含其中小粒子的表面被聚合物包覆的復(fù)合物的本發(fā)明的藥物組合物中，所述復(fù)合物具有高穩(wěn)定性(例如，保存穩(wěn)定性、對(duì)酶的穩(wěn)定性等)，并且使得可以根據(jù)制備條件和聚合物的種類來調(diào)節(jié)藥物釋放速率。因此，可以實(shí)現(xiàn)緩慢釋放制劑和疫苗所期望的釋放性質(zhì)。此外，根據(jù)本發(fā)明的制造方法，可以以高產(chǎn)率將水溶性藥物(例如肽、蛋白質(zhì)、 DNA、RNA、siRNA、多糖、脂肽、脂蛋白、脂多糖、低分子量化合物、抗體、抗原、毒素和疫苗等) 封裝在小粒子中。此外，根據(jù)本發(fā)明的制造方法，通過冷凍干燥等可以容易地獲得不含水分的干燥小粒子，由此可以確保水溶性藥物的保存穩(wěn)定性。


圖1示出實(shí)施例1中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子直徑表示。圖2示出實(shí)施例2中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子直徑表示。圖3示出比較例1中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子半徑表示。圖4示出實(shí)施例3中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子半徑表示。圖5示出比較例2中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子直徑表示。圖6示出實(shí)施例4中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子直徑表示。圖7示出實(shí)施例5中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子直徑表示。圖8示出實(shí)施例6中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子半徑表示。圖9示出實(shí)施例7中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子半徑表示。圖10示出實(shí)施例8中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子半徑表示。圖11示出實(shí)施例9中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子直徑表示。圖12示出實(shí)施例10中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子直徑表示。圖13示出實(shí)施例11中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子直徑表示。圖14示出比較例3中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子半徑表示。圖15示出比較例4中的粒徑測(cè)定結(jié)果，其中橫軸表示粒徑(nm)，縱軸表示散射強(qiáng)度分布(指數(shù)值)，并且粒徑通過粒子半徑表示。圖16示出實(shí)施例10的小粒子的TEM圖像。圖17示出實(shí)施例10的TEM圖像中的小粒子的元素分析結(jié)果。圖18示出實(shí)施例11的小粒子的TEM圖像。圖19示出實(shí)施例11的TEM圖像中的小粒子的元素分析結(jié)果。圖20示出實(shí)驗(yàn)例4中的脫乙酰殼多糖包覆的胰島素小粒子的對(duì)酶的穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果，其中橫軸表示在37°C下振蕩反應(yīng)30分鐘后的胰島素含量相對(duì)于初始含量的百分比，從上到下依次為i)表面包覆小粒子和酶的混合試樣， )表面包覆小粒子和緩沖液的混合試樣，iii)胰島素溶液和酶的混合試樣，和iv)胰島素溶液和緩沖液的混合試樣。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含小粒子，所述小粒子包含(a)水溶性藥物和 (b)藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物，所述藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物在室溫下為固體，其中所述離子結(jié)晶性化合物在所述小粒子中結(jié)晶化。所述藥物組合物可以用于例如經(jīng)粘膜或經(jīng)皮膚給藥。因此，可以通過適當(dāng)方法如涂布、噴涂、噴霧、貼付等將本發(fā)明的藥物組合物給藥至需要處理和/或治療的對(duì)象的粘膜 (例如粘膜如鼻、口腔、眼、陰道和胃腸道中的粘膜)或皮膚，由此可以將藥物遞送至粘膜或皮膚組織、或者經(jīng)由粘膜或皮膚組織而遞送至循環(huán)或免疫系統(tǒng)以提供功效、疫苗效果等。根據(jù)藥物組合物的預(yù)期用途而適當(dāng)?shù)剡x擇上述"水溶性藥物"。所述藥物可以為結(jié)晶性或非結(jié)晶性的。在本說明書中，“水溶性"是指在常溫下與水相容。藥物的選擇無特別限制，只要該藥物在常溫的水中顯示最小溶解性即可。更具體來說，盡管可用于本發(fā)明藥物組合物的水溶性藥物不限于以下所述，但例如其優(yōu)選以0. OOOlg以上，更優(yōu)選0. OOlg 以上，還更優(yōu)選0. Olg以上的量溶解在25°C的水(IOOg)中。作為其中溶解藥物的溶劑，除了單純的水之外，還可以使用有機(jī)溶劑(乙醇等)和水的混合物、酸水溶液和堿水溶液，并且可以根據(jù)藥物的化學(xué)性質(zhì)適當(dāng)?shù)剡x擇適當(dāng)溶劑。作為藥物，優(yōu)選可以溶于能與水混合的有機(jī)溶劑如甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、乙腈等中的藥物，或者可以溶于這種有機(jī)溶劑和水的混合物中的藥物。藥物的分子量無特別限制，并且可以是低分子量化合物或高分子化合物。本說明書中的低分子量化合物是指分子量小于500D的化合物，并且本說明書中的高分子化合物是指分子量為500D以上的化合物。藥物的實(shí)例包括肽、蛋白質(zhì)、DNA、RNA、siRNA、多糖、脂肽、脂蛋白、脂多糖、低分子量化合物、抗體、抗原、毒素和疫苗等。藥物的實(shí)例還包括各種肽、蛋白質(zhì)、DNA、RNA、siRNA、多糖、脂肽、脂蛋白、脂多糖、低分子量化合物、抗體、抗原、毒素、疫苗等如抗高血壓藥、抗低血壓藥、止痛藥、抗精神病藥、抗抑郁藥、抗躁狂藥、抗焦慮藥、鎮(zhèn)靜劑、催眠藥、抗癲癇藥、阿片類激動(dòng)劑、哮喘用治療劑、麻醉劑、抗心律不齊藥、關(guān)節(jié)炎治療劑、抗癲癇藥物、ACE抑制劑、減充血?jiǎng)?、抗菌素、抗心絞痛藥、利尿劑、抗帕金森藥、支氣管擴(kuò)張藥、催產(chǎn)藥、抗利尿劑、抗血脂藥、免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、止吐劑、抗感染藥、抗腫瘤藥、抗真菌藥、抗病毒藥、抗糖尿病藥、抗過敏藥、退燒藥、抗腫瘤藥、抗痛風(fēng)藥、抗組胺藥、止癢藥、骨調(diào)節(jié)劑、心血管藥、血膽固醇過少藥、抗瘧疾藥、戒煙用藥物、鎮(zhèn)咳藥、祛痰劑、 溶粘蛋白藥、鼻減充血?jiǎng)?、多巴胺激?dòng)劑、消化道用藥物、肌肉松弛藥、神經(jīng)肌肉阻斷劑、抗副交感神經(jīng)藥、前列腺素、興奮藥、厭食藥、甲狀腺藥或抗甲狀腺藥、激素、抗偏頭痛藥、抗肥胖藥、抗炎藥等。藥物的具體實(shí)例包括但不限于胰島素、胰高血糖素、亮丙瑞林、生長(zhǎng)激素、甲狀旁腺激素、降血鈣素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、促紅細(xì)胞生成素、肝素、環(huán)孢菌素、催產(chǎn)素、酪氨酸、 腦啡肽、促甲狀腺素釋放激素(tyrotropin releasing hormone)、促卵泡激素、促黃體生成激素、后葉加壓素、后葉加壓素類似物、過氧化氫酶、超氧化物歧化酶、白細(xì)胞間介素II、干擾素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、促黑素細(xì)胞激素、胰高血糖素樣肽-1、胰高血糖素樣肽_2、鈣抑肽、縮膽囊肽(cholecystekinirO-l〗、縮膽囊肽-8、exendin、促性腺素釋放素相關(guān)肽、胰島素樣蛋白質(zhì)、亮氨酸腦啡肽、甲硫氨酸腦啡肽、leumorphine、后葉激素運(yùn)載蛋白、 和肽素(cop印tin)、神經(jīng)肽Y、神經(jīng)肽AF、PACAP相關(guān)肽、胰腺激素、肽YY、硬骨魚緊張肽、 腸肽、促腎上腺皮質(zhì)肽、表皮生長(zhǎng)因子、促乳激素、黃體化激素釋放激素(LHRH)、LHRH激動(dòng)劑、生長(zhǎng)激素釋放因子、抑生長(zhǎng)素、胃泌素、四肽胃泌素、五肽胃泌素、內(nèi)啡肽、血管緊張肽、 促甲狀腺素釋放激素、粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子、肝素酶、流感疫苗用抗原、破傷風(fēng)毒素、白喉毒素、癌抗原蛋白質(zhì)、癌抗原肽、淀粉狀朊、免疫球蛋白、 肝硬化治療用siRNA、癌癥治療用siRNA、低分子化合物如必消痰(bromhexine)、格拉司瓊 (granisetron)、佐米曲坦(zolmitriptan)、舒馬曲坦(sumatriptan)等，以及它們的藥物上可接受的鹽等。也可以適當(dāng)組合使用兩種以上藥物。上述"在室溫下為固體的藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物"的選擇無特別限制，只要其是在室溫下為固體且藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物即可。優(yōu)選熔點(diǎn)、分解溫度或升華溫度為40°C以上，更優(yōu)選100°C以上，并且還更優(yōu)選200°C以上的化合物。不優(yōu)選熔點(diǎn)、分解溫度或升華溫度小于40°C的化合物，因?yàn)槠洳荒茉谛×Ｗ又刑峁┓€(wěn)定的固體晶體，并且析出或形成水溶性藥物粒子的能力低。盡管化合物的熔點(diǎn)、分解溫度或升華溫度的上限無特別限制，但是所述熔點(diǎn)、分解溫度或升華溫度優(yōu)選為2000°C以下，更優(yōu)選1800°C 以下，還更優(yōu)選1500°C以下。如上所述，離子結(jié)晶性化合物在小粒子中結(jié)晶化。本文中的"結(jié)晶化"無特別限制，只要當(dāng)通過例如優(yōu)選裝置如透射電子顯微鏡等觀察小粒子時(shí)，該離子化的結(jié)晶性化合物的晶體分散在包含水溶性化合物和離子結(jié)晶性化合物的小粒子內(nèi)部中即可。如下述實(shí)施例中所示，可以通過例如XMA對(duì)晶體進(jìn)行元素分析來確認(rèn)晶體是否源自該化合物。人們認(rèn)為，通過使離子結(jié)晶性化合物在小粒子中結(jié)晶化而局部地以高濃度包含鹽，這使得可以在鹽周圍區(qū)域中有效地析出水溶性藥物并形成粒子，以及抑制藥物的聚集以防止小粒子具有較大尺寸?？捎糜诒景l(fā)明藥物組合物的離子結(jié)晶性化合物包括但不限于例如如下離子結(jié)晶性化合物，其包含選自鈉離子、鉀離子、鈣離子、鎂離子、鋅離子、鐵離子和銨離子的一種或多種陽(yáng)離子電解質(zhì)以及選自氯離子、硫酸離子、乳酸離子、乙酸離子、磷酸離子、葡萄糖酸離子、碳酸根離子和碳酸氫根離子的一種或多種陰離子電解質(zhì)作為構(gòu)成成分。其中，優(yōu)選的離子結(jié)晶性化合物的實(shí)施例包括氯化鈉、氯化鉀、硫酸銨和硫酸鈉，因?yàn)樗鼈儗?duì)身體高度安全并且由于鹽的晶形規(guī)則性高從而顯示良好的藥物析出的再現(xiàn)性。盡管在本發(fā)明藥物組合物中水溶性藥物對(duì)離子結(jié)晶性化合物的重量比無特別限制，只要可以獲得具有滿足期望目的的優(yōu)選特性的小粒子即可，但是所述重量比典型地為 0.001以上且100以下，優(yōu)選為0.005以上且50以下，更優(yōu)選為0.01以上且10以下。通過選擇這種重量比，可以實(shí)現(xiàn)有效的藥物析出和鹽晶體的形成。小粒子的水含量隨周圍區(qū)域的狀態(tài)而不同。例如，在干燥狀態(tài)下其可以忽略，但認(rèn)為在水中水稍微滲透到小粒子中。因?yàn)樗行×Ｗ拥乃炕旧吓c小粒子的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)無關(guān)，所以小粒子的水含量的范圍也無特別限制。例如，其為0. 01-99. 99重量％。此外，如上所述，從生理活性、免疫原性等方面來看，小粒子優(yōu)選不含不可逆交聯(lián)如共價(jià)鍵。本文中的不可逆交聯(lián)不包括通過添加水能夠可逆地離解的假交聯(lián)(例如靜電相互作用)。本發(fā)明藥物組合物中小粒子的尺寸優(yōu)選為10-5000nm、更優(yōu)選20-4000nm、還更優(yōu)選50-3000nm的平均粒徑。大于5000nm的小粒子尺寸是不優(yōu)選的，因?yàn)榧词巩?dāng)給藥相同量的藥物時(shí)，小粒子的數(shù)量也減少，小粒子的總表面積也減小并且藥物釋放速率也變低。其不優(yōu)選的原因還在于，當(dāng)用作用于疫苗的粒子時(shí)，免疫活性細(xì)胞的攝取效率下降。另外，小于 IOnm的小粒子尺寸是不優(yōu)選的，因?yàn)槊總€(gè)小粒子所含藥物的量變得太小，并且給藥后的藥理效果或疫苗效果變?nèi)?。其不?yōu)選的原因還在于，在制造或使用期間小粒子容易聚集并且操作變得困難。本文中的粒徑是指通過測(cè)定分散在水中的小粒子而獲得的值，其為假設(shè)所述小粒子具有球形而算出的直徑。具體地說，粒徑通過動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定裝置來測(cè)定，并且使用由散射強(qiáng)度分布確定的流體動(dòng)力直徑的平均值作為平均粒徑。本文中，例如，IOnm以上的小粒子的平均粒徑是指，在通過動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定裝置測(cè)定的上述散射強(qiáng)度分布中的各粒徑峰的比例(各粒徑峰的累積散射強(qiáng)度對(duì)所有峰的累積散射強(qiáng)度的比例)中，10%以上、優(yōu)選20%以上、更優(yōu)選30%以上、還更優(yōu)選40%以上、特別優(yōu)選50%以上的峰平均粒徑為IOnm以上。本發(fā)明的藥物組合物任選還包含藥物上可接受的聚合物。在這種情況下，可能的是，小粒子被構(gòu)成為在預(yù)定PH下具有正電荷或負(fù)電荷，并且將在所述pH下具有符號(hào)與所述小粒子相反的電荷的聚合物用作所述聚合物，由此使得它們彼此靜電相互作用而形成具有附著在所述小粒子的表面的所述聚合物的復(fù)合物。換句話說，本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其包含小粒子，所述小粒子包含(a)水溶性藥物和(b)藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物，所述藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物在室溫下為固體，其中所述離子結(jié)晶性化合物在所述小粒子中結(jié)晶化，所述藥物組合物進(jìn)一步包含(C)藥物上可接受的聚合物，并且所述小粒子在預(yù)定pH下具有正電荷或負(fù)電荷，并且所述聚合物在所述PH下具有符號(hào)與所述小粒子相反的電荷，由此所述小粒子和所述聚合物彼此靜電相互作用而在所述 PH下形成復(fù)合物，其中所述聚合物附著在所述小粒子的表面。只要小粒子在預(yù)定pH下具有正電荷或負(fù)電荷，就也可以將上述水溶性藥物、離子結(jié)晶性化合物和小粒子用于該實(shí)施方式中。在下文中，當(dāng)聚合物附著在小粒子的表面時(shí)，有時(shí)表示為小粒子被聚合物等"包覆"，并且其中聚合物附著在小粒子的表面的復(fù)合物有時(shí)稱為"表面包覆小粒子"。此外， 不被聚合物包覆的小粒子有時(shí)稱為"核心小粒子"或簡(jiǎn)稱為"核心粒子"，以便清楚地與表面包覆小粒子區(qū)別。利用聚合物包覆核心小粒子無特別限制，只要通過小粒子和聚合物之間的靜電相互作用將聚合物附著在核心小粒子的表面即可。組成表面包覆小粒子的藥物上可接受的聚合物(下文稱為"表面包覆聚合物") 優(yōu)選是生物相容的。本文中的術(shù)語(yǔ)"生物相容性"是指物質(zhì)和其分解產(chǎn)物對(duì)身體組織或身體系統(tǒng)(例如血液循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等)無毒性或有害效應(yīng)并且不引起過度免疫排斥。生物相容的聚合物適合于對(duì)人或其它動(dòng)物給藥。另外，聚合物更優(yōu)選是生物可降解的。本文中的術(shù)語(yǔ)"生物可降解性"是指在可接受的時(shí)段內(nèi)通過酶促的、化學(xué)的或物理的過程等在活體內(nèi)將物質(zhì)分解以形成較小的化學(xué)物種。用于檢驗(yàn)物質(zhì)的生物相容性和生物可降解性的方法在本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域中眾所周知。表面包覆聚合物可以是天然聚合物或合成聚合物。因?yàn)樵陬A(yù)定PH下表面包覆聚合物在小粒子的表面上與小粒子靜電相互作用，所以表面包覆聚合物需要為在所述PH下具有符號(hào)與所述小粒子相反的電荷的聚合物。如果必要，可以將2種以上聚合物組合用于表面包覆聚合物，只要它們能夠在所述PH下具有相同符號(hào)的電荷即可。包含表面包覆小粒子的本發(fā)明藥物組合物可以例如通過下述制造方法制造；當(dāng)通過所述制造方法制造組合物時(shí)，即使在預(yù)定PH下表面包覆聚合物單獨(dú)難溶于水，仍可以通過如下來制造組合物在表面包覆聚合物易溶于水的PH下混合表面包覆聚合物與小粒子， 然后將混合物的PH調(diào)節(jié)至預(yù)定pH。因此，作為表面包覆聚合物，不僅可以使用在預(yù)定PH下易溶于水的聚合物，還可以使用在預(yù)定PH下難溶于水的聚合物。作為可以用于表面包覆聚合物的聚合物，可以提及聚陰離子或聚陽(yáng)離子多糖、聚氨基酸和其它帶電聚合物而沒有限制?；谒盟幬锏姆N類、電荷等而適當(dāng)?shù)剡x擇聚合物?？梢杂糜诒景l(fā)明的聚陰離子多糖是指在構(gòu)成單元中具有一個(gè)或多個(gè)酸性極性基團(tuán)如羧基、硫酸基或磷酸基的多糖。這種聚陰離子多糖的實(shí)例包括但不限于硫酸軟骨素、硫酸葡聚糖、羧甲基纖維素、海藻酸、果膠、透明質(zhì)酸、它們的衍生物和鹽等?？梢杂糜诒景l(fā)明的聚陽(yáng)離子多糖是指在構(gòu)成單元中具有一個(gè)或多個(gè)堿性極性基團(tuán)如氨基的多糖。這種聚陽(yáng)離子多糖的實(shí)例包括但不限于甲殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、它們的衍生物和鹽等。脫乙酰殼多糖和脫乙酰殼多糖衍生物可以選自具有各種分子量和脫乙?；潭鹊哪切┪镔|(zhì)，并且脫乙酰殼多糖衍生物可以選自具有各種取代度的那些物質(zhì)。可以用于本發(fā)明的聚陰離子聚氨基酸是指等電點(diǎn)在生理pH的酸性一側(cè)的聚氨基酸；其實(shí)例包括但不限于聚谷氨酸、聚天冬氨酸、它們的衍生物和鹽等。
可以用于本發(fā)明的聚陽(yáng)離子聚氨基酸是指等電點(diǎn)在生理pH的堿性一側(cè)的聚氨基酸；其實(shí)例包括但不限于聚賴氨酸、聚精氨酸、它們的衍生物和鹽等。上述多糖和聚氨基酸以外的可以用于表面包覆聚合物的聚合物的實(shí)例包括聚乙烯亞胺、聚丙烯酸、它們的衍生物和鹽等。表面包覆聚合物可以是聚乙二醇化(PEG化)和/或糖基化的。表面包覆聚合物可以是粘膜粘著劑和/或充當(dāng)經(jīng)粘膜吸收促進(jìn)劑。粘膜粘著劑聚合物的實(shí)例包括脫乙酰殼多糖、聚丙烯酸、藻朊酸鈉、羧甲基纖維素等以及它們的PEG化聚合物等。充當(dāng)經(jīng)粘膜吸收促進(jìn)劑的聚合物的實(shí)例包括脫乙酰殼多糖、聚丙烯酸、聚精氨酸、 它們的鹽和衍生物等。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以考慮諸如降解速度、機(jī)械強(qiáng)度、溶解性、與表面包覆聚合物形成復(fù)合物的小粒子的種類等因素來確定表面包覆聚合物的分子量。典型地，通過凝膠滲透色譜法測(cè)定的表面包覆聚合物的重均分子量應(yīng)該優(yōu)選為1，OOODa以上，且更優(yōu)選 2, OOODa以上；優(yōu)選1，000，OOODa以下，且更優(yōu)選500，OOODa以下。因此，典型地，表面包覆聚合物的重均分子量?jī)?yōu)選為1，000-1, 000, OOODa,且更優(yōu)選2，000-500, OOODa0例如，甲殼質(zhì)或脫乙酰殼多糖的重均分子量可以為1，000-1, 000, OOODa,并且甲殼質(zhì)或脫乙酰殼多糖的脫乙?；潭瓤梢詾?0% -100%。表面包覆小粒子的尺寸例如為優(yōu)選15-6000nm、更優(yōu)選25-5000nm、還更優(yōu)選 55-4000nm的平均粒徑。如果表面包覆小粒子的尺寸大于6000nm，則當(dāng)用作疫苗用小粒子時(shí)，免疫活性細(xì)胞的攝取效率不優(yōu)選地降低。小于15nm的表面包覆小粒子的尺寸是不優(yōu)選的，因?yàn)樵谥圃旎蚴褂闷陂g小粒子容易聚集，并且操作變得困難。本文中的粒徑是指通過測(cè)定分散在水中的表面包覆小粒子而獲得的值，以及假設(shè)所述表面包覆小粒子具有球形而算出的直徑。具體來說，粒徑通過動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定裝置來測(cè)定，并且使用由散射強(qiáng)度分布確定的流體動(dòng)力直徑的平均值作為平均粒徑。本文中， 例如，15nm以上的表面包覆小粒子的平均粒徑是指，在通過動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定裝置測(cè)定的上述散射強(qiáng)度分布中的各粒徑峰的比例(各粒徑峰的累積散射強(qiáng)度對(duì)所有峰的累積散射強(qiáng)度的比例)中，10 %以上、優(yōu)選20 %以上、更優(yōu)選30 %以上、還更優(yōu)選40 %以上、特別優(yōu)選 50%以上的峰平均粒徑為15nm以上。作為表面包覆小粒子中的核心小粒子的粒徑，可以采用由顯微鏡如TEM、SEM、AFM 等觀察的粒徑。在包含表面包覆小粒子的本發(fā)明藥物組合物中，藥物、離子結(jié)晶性化合物和表面包覆聚合物的優(yōu)選相對(duì)比例隨所使用的藥物、離子結(jié)晶性化合物和表面包覆聚合物的種類、核心小粒子的尺寸等而變化，因此不可以一概而論。由藥物組合物中的重量比表示的相對(duì)比例可以為例如藥物離子結(jié)晶性化合物表面包覆聚合物= 1 0.01-1000 0.1-1000。期望將預(yù)定pH設(shè)定為給藥位點(diǎn)的適合生理pH以避免當(dāng)對(duì)身體給藥本發(fā)明的藥物組合物時(shí)發(fā)生的局部刺激。如上所述，可以將本發(fā)明的藥物組合物給藥至粘膜如在肺、口腔、眼、陰道、腸、鼻等中的粘膜或皮膚，其中生理PH在這些不同粘膜或皮膚中是不同的。例如，胃腸道的生理PH從胃中的約pHl到結(jié)腸中的pH8沿其長(zhǎng)度增加；口腔的pH為約6. 8 ； 鼻流體的PH在約pH5. 5至6. 5的范圍內(nèi)；陰道的pH為約4. 5。例如，當(dāng)將本發(fā)明的藥物組合物給藥至鼻粘膜時(shí)，組合物的優(yōu)選PH值為例如約6. 0。本發(fā)明的藥物組合物可以包括任何劑型，只要小粒子(即核心小粒子或表面包覆小粒子)可以直接到達(dá)靶位即可。其實(shí)例包括經(jīng)肺給藥劑、口服劑、口腔內(nèi)給藥劑、眼內(nèi)給藥劑、陰道內(nèi)給藥劑、鼻內(nèi)給藥劑、栓劑、經(jīng)皮吸收劑等。作為經(jīng)肺給藥劑，優(yōu)選通過一些肺用吸入器遞送至肺泡的吸入劑。作為口服劑，可以提及常用口服制劑如錠劑、粒劑、細(xì)粒劑、膠囊等。優(yōu)選被設(shè)計(jì)為在小腸中釋放藥物的劑型，例如腸溶性錠劑、腸溶性粒劑、腸溶性膠囊和腸溶性細(xì)粒劑。作為口腔內(nèi)給藥劑、眼內(nèi)給藥劑和鼻內(nèi)給藥劑，可以提及口腔錠劑、口腔噴霧劑、 滴眼劑、滴鼻劑、氣霧劑、軟膏劑、凝膠劑、霜?jiǎng)?、液劑、懸浮液、洗劑、干粉劑、片劑、貼劑等。作為陰道內(nèi)給藥劑和栓劑，可以提及軟膏劑、凝膠劑、霜?jiǎng)?、液劑、懸浮液、洗劑、干粉劑、片劑、膠囊等。經(jīng)皮吸收劑無特別限制并可以為任何劑型，只要藥物可以由皮膚吸收即可。例如， 可以提及軟膏劑、凝膠劑、霜?jiǎng)?、凝膠霜?jiǎng)?、液劑、洗劑、氣霧劑、擦劑、膏藥、粘附性皮膚貼劑、骨架型貼劑等。這些劑型可以單獨(dú)且非侵襲地使用，或者與侵襲性器件如顯微針、角質(zhì)層剝離帶、消融等組合使用。作為用于制備上述劑型的方法，可以應(yīng)用本領(lǐng)域中通常使用的已知制造方法。如果必要，則當(dāng)制備上述劑型時(shí)，可以以適當(dāng)量適當(dāng)?shù)靥砑油ǔＳ糜谥苽涮囟▌┬偷妮d體如賦形劑、粘合劑、崩解劑和潤(rùn)滑劑以及各種制劑添加劑如甜味劑、表面活性劑、懸浮液、乳化劑、著色劑、防腐劑和穩(wěn)定劑以制造所述劑型。另外，本發(fā)明藥物組合物可以以通過凍干懸浮液而制備的干粉等形式保存，并且通過在使用時(shí)向所述干粉中添加水而使其再懸浮。采用這種方法，可以避免水解而提高藥物組合物的保存穩(wěn)定性。本發(fā)明藥物組合物中小粒子(即核心小粒子或表面包覆小粒子)的比率優(yōu)選為 0. 01-100重量％，更優(yōu)選0. 1-100重量％。本發(fā)明的藥物組合物穩(wěn)定且毒性低，并可以安全使用。給藥頻率和單次劑量隨所用藥物、患者的狀態(tài)和體重、給藥途徑、治療方針等而變化，并因此不能一概而論。例如，當(dāng)
11將其中將胰島素用作藥物的本發(fā)明組合物經(jīng)鼻給藥至具有糖尿病等的患者時(shí)，作為一個(gè)治療方針，可以在每餐之前對(duì)成人(體重約60kg)給藥約2至約6mg的活性成分(胰島素)。本發(fā)明還提供上述藥物組合物的制造方法。應(yīng)注意，本發(fā)明的藥物組合物也可以通過以下說明的方法以外的制造方法來制造。通過包括在減壓下不加熱地干燥上述水溶性藥物和上述離子結(jié)晶性化合物的水溶液的方法，可以制備上述核心小粒子。藥物在含有藥物和離子結(jié)晶性化合物的水溶液中的濃度優(yōu)選為0. 01-30重量％， 更優(yōu)選0. 05-20重量％。當(dāng)藥物濃度低于0. 01重量％時(shí)，在所制造的藥物組合物中藥物的組成比變得不優(yōu)選地小，并且制造收率變得不優(yōu)選地低。高于30重量％的藥物濃度是不優(yōu)選的，因?yàn)檫@不能使通過干燥獲得的粒子的粒徑小。離子結(jié)晶性化合物在含有藥物和離子結(jié)晶性化合物的水溶液中的濃度優(yōu)選為 0. 1-50重量％，更優(yōu)選0. 5-30重量％。低于0. 1重量％的離子結(jié)晶性化合物的濃度是不優(yōu)選的，因?yàn)椴荒苡行У貙?shí)施藥物析出和粒子形成。高于50重量％的離子結(jié)晶性化合物的濃度是不優(yōu)選的，因?yàn)樵诟稍镏伴_始藥物析出并且不能制造具有小尺寸的核心小粒子。如上所述，在該方法中，在減壓下不加熱地實(shí)施干燥。本文中"干燥"是指從上述水溶液中基本上完全地或部分地除去水的操作。在優(yōu)選0-10000Pa、更優(yōu)選0_600Pa、還更優(yōu)選0-2001 的壓力下實(shí)施減壓干燥。高于IOOOOPa的壓力是不優(yōu)選的，因?yàn)椴荒苡行У爻ニＴ谠摲椒ㄖ?，在?yōu)選_200°C至40°C、更優(yōu)選-100°C至35°C的溫度條件下實(shí)施所述不加熱地干燥。在高于40°C的溫度下干燥是不優(yōu)選的，因?yàn)樗幬锶芙庑栽黾?，并且由干燥操作引起的藥物析出和粒子形成的速度變慢。結(jié)果，粒徑變大。對(duì)于上述干燥，可以使用冷凍干燥或離心濃縮干燥。該制造方法中的冷凍干燥包括使用冷凍機(jī)或液氮快速冷卻以冷凍藥物和離子結(jié)晶性化合物的上述水溶液，迅速將冷凍產(chǎn)物設(shè)置在冷凍干燥器上以及在減壓下不加熱地除去水。通過該操作，可以制備上述核心小粒子。作為冷凍干燥器，可以適當(dāng)?shù)厥褂帽绢I(lǐng)域中使用的任何類型的干燥器。例如，可以提及大和科學(xué)株式會(huì)社(Yamato Scientific Co., Ltd.)的冷凍干燥器DC400。在使用冷凍干燥器的制造方法中，通過使用冷凍機(jī)或液氮迅速冷卻而將上述水溶液冷凍，由此藥物可以迅速地不溶解化并析出。結(jié)果，可以優(yōu)選地制造粒徑較小的核心小粒子。其為優(yōu)選的原因還在于，可以通過利用冷凍干燥器而擴(kuò)大生產(chǎn)。在該制造方法中的離心濃縮干燥中，通過使用合適的離心濃縮干燥器對(duì)藥物和離子結(jié)晶性化合物的上述水溶液進(jìn)行離心處理，并在減壓下不加熱地干燥以除去水。通過該操作，可以制備上述核心小粒子。作為離心濃縮干燥器，可以適當(dāng)?shù)厥褂帽绢I(lǐng)域中使用的任何類型干燥器。例如，可以提及Jouan濃縮蒸發(fā)器系統(tǒng)(RC10. 22)和由艾本德(Eppendorf) 制造的濃縮器5301。因?yàn)槭褂秒x心濃縮干燥器的制造方法通過在常溫下除去水而使得藥物析出和粒子形成，所以當(dāng)藥物的穩(wěn)定性受冷凍干燥操作等影響時(shí)可以將其用作替代性手段以避免冷凍干燥。通過包括將如上所述獲得的核心小粒子與具有上述預(yù)定pH的表面包覆聚合物的溶液混合的方法，可以制備上述表面包覆小粒子。當(dāng)表面包覆聚合物在所述PH下難溶時(shí)， 可以通過包括以下的方法來制備表面包覆小粒子在表面包覆聚合物易溶的PH下將所述表面包覆聚合物溶解在溶液中，添加核心小粒子，以及將混合物的PH調(diào)整至預(yù)定pH。通過這些方法，可以獲得表面包覆小粒子的懸浮液。所得懸浮液可以被或不被滲析。通過本技術(shù)領(lǐng)域中通常使用的已知制造方法，將由上述方法獲得的核心小粒子或表面包覆小粒子的懸浮液配制成上述適當(dāng)劑型。如上所述，如果必要，則當(dāng)制備上述劑型時(shí)，可以以適當(dāng)量適當(dāng)?shù)靥砑油ǔＳ糜谥苽涮囟▌┬偷妮d體如賦形劑、粘合劑、崩解劑和潤(rùn)滑劑以及各種制備添加劑如甜味劑、表面活性劑、懸浮劑、乳化劑、著色劑、防腐劑和穩(wěn)定劑以制造所述劑型。另外，可以以通過凍干懸浮液而制備的干粉等的形式來制造本發(fā)明的藥物組合物。下文通過參考實(shí)施例、比較例和實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受以下實(shí)施例等的限制。實(shí)施例在以下實(shí)施例和比較例中，通過動(dòng)態(tài)光散射方法使用DLS802(VisCOtek)或 ELS_8000(大塚電子(Otsuka Electronics Co. , Ltd.))來測(cè)定懸浮液中粒子的粒徑。使
sizer nano(馬爾文(Malvern))測(cè)定各試樣的粒子的ζ電位。棚列1搬胃心《1〒'燥吿丨丨軸綱_夷綠·心·〒在本實(shí)施例中，將胰島素(等電點(diǎn)(pi) = 5. 3)用作蛋白質(zhì)藥物，并通過離心濃縮從含有離子結(jié)晶性化合物的胰島素溶液中除去水以使胰島素析出而制備胰島素核心粒子 (未包覆的)。該制備包括以下步驟。添加鹽酸(0. 02Μ) (3ml)以溶解牛胰島素(西格瑪(Sigma))，并添加2ml鹽溶液(檸檬酸三鈉二水合物58mg/ml，氯化鋅1. 4mg/ml，氯化鈉180mg/ml)。此后，添加 NaOH (0. 1M)以將pH調(diào)節(jié)為6. 25。將所得溶液(0.25ml)轉(zhuǎn)移至玻璃瓶，并通過離心濃縮器在減壓下不加熱地除去水以干燥溶液。向干燥產(chǎn)物中添加水Oml)以提供粒徑測(cè)定用懸浮液。測(cè)定所得懸浮液中粒子的尺寸。結(jié)果，主要生成物中粒子的直徑為730nm(圖1)。 因此，發(fā)現(xiàn)具有小粒徑的核心粒子可以通過上述制備方法獲得。另外，測(cè)定所得懸浮液中粒子的ζ電位。結(jié)果，在ρΗ6下ζ電位為-10mV。反映出在PH6下胰島素帶負(fù)電，核心粒子也帶負(fù)電。實(shí)施例2 通過冷凍干燥制備未包覆的胰島素核心粒子在本實(shí)施例中，將胰島素(pi = 5. 3)用作蛋白質(zhì)藥物，并通過冷凍干燥從含有離子結(jié)晶性化合物的胰島素溶液中除去水以使胰島素析出而制備胰島素核心粒子(未包覆的)。該制備包括以下步驟。添加鹽酸(0. 02M) (3ml)以溶解牛胰島素(西格瑪)，并添加2ml鹽溶液(檸檬酸三鈉二水合物58mg/ml，氯化鋅1. %ig/ml，氯化鈉180mg/ml)。此后，添加NaOH (0. 1M)以將 pH調(diào)節(jié)為6. 25。將所得溶液(0. 25ml)轉(zhuǎn)移至玻璃瓶，用液氮冷凍，并通過冷凍干燥器在減壓下不加熱地除去水以干燥溶液。向干燥產(chǎn)物中添加水Oml)以提供粒徑測(cè)定用懸浮液。測(cè)定所得懸浮液中粒子的尺寸。結(jié)果，主要生成物中粒子的直徑為180nm(圖2)。 因此，發(fā)現(xiàn)具有小粒徑的核心粒子也可以通過上述制備方法獲得。
IYMm 1 概口吿丨觸棚在本比較例中，將胰島素(pi = 5. 3)用作蛋白質(zhì)藥物，并通過冷卻含有離子結(jié)晶性化合物的胰島素溶液以使胰島素析出而試圖制備胰島素核心粒子(未包覆的)。該制備包括以下步驟。添加鹽酸(0. 02M) (3ml)以溶解牛胰島素(西格瑪)(30mg)，并添加2ml梓檬酸鈉(0. 2M) ,24μ 1氯化鋅溶液(0. 12g/ml)和0. 36g氯化鈉并使其混合。此后，添加少量 NaOH(0. 1M)以將pH調(diào)節(jié)為6. 25。將所得溶液(Iml)轉(zhuǎn)移至玻璃瓶并在4°C下冷卻過夜以使晶體析出，由此獲得胰島素粒子懸浮液。測(cè)定所得懸浮液中粒子的尺寸。結(jié)果，粒子直徑從認(rèn)為是幾個(gè)胰島素分子的聚集的6nm至大聚集物大大變化，從而表明對(duì)粒徑的控制不足(圖3)。實(shí)施例3通過離心濃縮干燥和冷卻來制備未包覆的胰島素核心粒子
在本實(shí)施例中，將胰島素(pi = 5. 3)用作蛋白質(zhì)藥物，并通過離心濃縮從含有離子結(jié)晶性化合物的胰島素溶液中除去一部分水以使胰島素析出并通過冷卻促進(jìn)析出而制備胰島素核心粒子(未包覆的)。該制備包括以下步驟。添加鹽酸(0. 02M) (3ml)以溶解牛胰島素(西格瑪)(30mg)，并添加2ml檸檬酸鈉(0. 2M) ,24μ 1氯化鋅溶液(0. 12g/ml)和0. 36g氯化鈉并使其混合。此后，添加少量 NaOH (0. 1M)以將pH調(diào)節(jié)為6. 25。將所得溶液(Iml)轉(zhuǎn)移至玻璃瓶，并通過離心濃縮器在減壓下不加熱地干燥15分鐘以除去一部分水。然后，在4°C下使溶液冷卻過夜以繼續(xù)晶體析出，由此獲得胰島素粒子懸浮液。測(cè)定所得懸浮液中粒子的尺寸。結(jié)果，主要生成物中粒子的直徑為390nm(圖4)。 因此，可確認(rèn)，通過離心濃縮器在減壓下不加熱地干燥，即使不完全地干燥也可以獲得具有良好且均勻粒徑的胰島素核心粒子。imm 2丄甬丄寸離心濃縮干'燥不含離子結(jié)晶+?；?勿的Β夷島素溶液而泡丨備Β夷島素核心粒子在本比較例中，將胰島素(pi = 5. 3)用作蛋白質(zhì)藥物，并通過離心濃縮干燥從不含離子結(jié)晶性化合物的胰島素溶液中除去水以使胰島素析出而制備胰島素核心粒子(未包覆的)。該制備包括以下步驟。添加鹽酸(0. 02M) (3ml)以溶解牛胰島素(西格瑪)(30mg)，并添加2ml添加劑溶液(檸檬酸三鈉二水合物58mg/ml，氯化鋅1. 4mg/ml)。此后，添加NaOH (0. 1M)以將pH調(diào)節(jié)為6. 25。將所得溶液(0. 25ml)轉(zhuǎn)移至玻璃瓶，并通過離心濃縮器在減壓下不加熱地干燥以除去水。向干燥產(chǎn)物中添加水Oml)以提供粒徑測(cè)定用懸浮液。測(cè)定所得懸浮液中粒子的尺寸。結(jié)果，主要生成物中粒子的直徑為3200nm(圖5)。 當(dāng)核心粒子的表面被包覆時(shí)，尺寸生長(zhǎng)得比此更大。因此，這種水平的粒徑不適于本發(fā)明中期望的用途，特別不適于用于疫苗，并且是不優(yōu)選的。根據(jù)實(shí)施例1-3和比較例1-2的結(jié)果，很明顯，向胰島素溶液中添加離子結(jié)晶性化合物并通過在減壓下不加熱地干燥使胰島素析出對(duì)于制備具有適當(dāng)粒徑的胰島素核心粒子(未包覆的)是有效的。據(jù)認(rèn)為，胰島素析出和離子結(jié)晶性化合物的制備通過在減壓下不加熱地干燥而同時(shí)進(jìn)行，從而防止析出的胰島素粒子的過度聚集和大尺寸化。棚列4細(xì)_遽絲_遍胃心《1〒'燥吿丨丨燒■綠·心·〒■吿丨丨備表面包覆小粒子在本實(shí)施例中，通過用脫乙酰殼多糖包覆由離心濃縮干燥制備的胰島素核心粒子而制備表面包覆小粒子。該制備包括以下步驟。添加鹽酸(0. 02M) (3ml)以溶解牛胰島素(西格瑪)(30mg)，并添加2ml鹽溶液(檸檬酸三鈉二水合物58mg/ml，氯化鋅1. %ig/ml，氯化鈉180mg/ml)。此后，添加NaOH (0. 1M) 以將PH調(diào)節(jié)為6. 25。將所得溶液(0.25ml)轉(zhuǎn)移至玻璃瓶，并通過離心濃縮器在減壓下不加熱地干燥以除去水。向干燥產(chǎn)物中添加制備為(w/v)的Iml脫乙酰殼多糖溶液(由大日精化工業(yè)株式會(huì)社(Dainichiseika Co. , Ltd.)制造，脫乙酰殼多糖水溶液)以提供再懸浮液，將該再懸浮液放入滲析管(截留分子量值10000)并對(duì)500ml的5mM MES緩沖液 (PH6.0)滲析60分鐘。獲得了滲析后的懸浮液以作為試樣。測(cè)定所得懸浮液中粒子的尺寸。結(jié)果，主要生成物中粒子的直徑為1800nm(圖6)。 與通過類似方法制備的實(shí)施例1的胰島素核心粒子相比，粒徑增加。另外，測(cè)定所得懸浮液中粒子的ζ電位。結(jié)果，在ρΗ6下ζ電位為+19mV。實(shí)施例1的胰島素核心粒子帶負(fù)電，反映出在PH6下胰島素帶負(fù)電。在本實(shí)施例中獲得的小粒子具有正電荷，其源自在PH6下脫乙酰殼多糖的正電荷。由此很明顯，胰島素核心粒子被脫乙酰殼多糖良好包覆。^MM 5 : 過用脫,乙酰殼令凍干'燥泡丨備的B夷島素核心I立子而泡丨備表面包覆小粒子在本實(shí)施例中，用脫乙酰殼多糖包覆由冷凍干燥制備的胰島素核心粒子，由此制備表面包覆小粒子。該制備包括以下步驟。添加鹽酸(0. 02M) (3ml)以溶解牛胰島素(西格瑪)(30mg)，并添加2ml鹽溶液(檸檬酸三鈉二水合物58mg/ml，氯化鋅1. %ig/ml，氯化鈉180mg/ml)。此后，添加NaOH (0. 1M) 以將PH調(diào)節(jié)為6. 25。將所得溶液(0. 25ml)轉(zhuǎn)移至玻璃瓶，用液氮冷凍，并通過冷凍干燥器在減壓下不加熱地干燥以除去水。向干燥產(chǎn)物中添加制備為(w/v)的Iml脫乙酰殼多糖溶液(由大日精化工業(yè)株式會(huì)社制造，脫乙酰殼多糖水溶液)以提供再懸浮液，將該再懸浮液放入滲析管(截留分子量值10000)并對(duì)500ml的5mM MES緩沖液(pH6. 0)滲析60分鐘。獲得了滲析后的懸浮液以作為試樣。測(cè)定所得懸浮液中粒子的尺寸。結(jié)果，主要生成物中粒子的直徑為1500nm(圖7)。 與通過類似方法制備的實(shí)施例2的胰島素核心粒子相比，粒徑增加。另外，測(cè)定所得懸浮液中粒子的ζ電位。結(jié)果，在ρΗ6下ζ電位為+17mV。由此很明顯，與實(shí)施例4同樣，具有小粒徑的表面包覆小粒子也可以通過使用冷凍干燥的方法獲得。實(shí)施例6 通過用DMAEMA-PEG包覆胰島素核心粒子而制備表面包覆小粒子(無滲析)在本實(shí)施例中，用DMAEMA-PEG包覆由離心濃縮干燥制備的胰島素核心粒子，由此制備表面包覆小粒子。對(duì)于制備，不實(shí)施滲析。該制備包括以下步驟。添加鹽酸(0. 02M) (3ml)以溶解牛胰島素(西格瑪)(30mg)，并添加2ml檸檬酸三鈉(0. 2M)、24μ 1氯化鋅溶液(0. 12g/ml)和0. 36g氯化鈉。此后，添加少量NaOH(0. 1M) 以將PH調(diào)節(jié)為6. 25。將所得溶液(Iml)轉(zhuǎn)移至玻璃瓶，并通過離心濃縮器在減壓下不加熱地干燥以完全除去水。向干燥產(chǎn)物中添加Iml的0. 1% w/v DMAEMA-stat-PEGMA水溶液 (PH6.0)以提供作為試樣的再懸浮液。DMAEMA-stat-PEGMA為具有以下化學(xué)式的化合物
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其包含小粒子，所述小粒子包含(a)水溶性藥物和(b)藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物，所述藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物在室溫下為固體，其中所述離子結(jié)晶性化合物在所述小粒子中結(jié)晶化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述小粒子不含不可逆交聯(lián)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中所述小粒子的平均粒徑為IOnm以上且 5000nm 以下。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述水溶性藥物選自肽、蛋白質(zhì)、DNA、RNA、siRNA、多糖、脂肽、脂蛋白、脂多糖、低分子量化合物、抗體、抗原、毒素和疫苗。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述離子結(jié)晶性化合物包含選自鈉離子、鉀離子、鈣離子、鎂離子、鋅離子、鐵離子和銨離子的一種或多種陽(yáng)離子電解質(zhì)以及選自氯離子、硫酸離子、乳酸離子、乙酸離子、磷酸離子、葡萄糖酸離子、碳酸根離子和碳酸氫根離子的一種或多種陰離子電解質(zhì)作為構(gòu)成成分。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中所述水溶性藥物相對(duì)于所述離子結(jié)晶性化合物的重量比為0. 001以上且100以下。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其進(jìn)一步包含(c)藥物上可接受的聚合物，其中所述小粒子在預(yù)定PH下具有正電荷或負(fù)電荷，并且所述聚合物在所述pH下具有符號(hào)與所述小粒子相反的電荷，由此所述小粒子和所述聚合物在所述PH下彼此靜電相互作用而形成復(fù)合物，其中所述聚合物附著在所述小粒子的表面。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中所述復(fù)合物的平均粒徑為15nm以上且 6000nm 以下。
9.一種權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的藥物組合物的制造方法，其包括在減壓下不加熱地干燥所述水溶性藥物和所述離子結(jié)晶性化合物的水溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述干燥是冷凍干燥或離心濃縮干燥。
11.一種制造權(quán)利要求7或8的藥物組合物的方法，其包括在減壓下不加熱地干燥所述水溶性藥物和所述離子結(jié)晶性化合物的水溶液以提供所述小粒子，以及將所述聚合物的具有所述PH的溶液與所述小粒子混合。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述干燥是冷凍干燥或離心濃縮干燥。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種藥物組合物及制造所述藥物組合物的方法，所述藥物組合物可以用于通過注射以外的方法有效地給藥水溶性聚合物藥物。上述目的通過一種包含小粒子的藥物組合物實(shí)現(xiàn)，所述小粒子包含(a)水溶性藥物和(b)藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物，所述藥物上可接受的離子結(jié)晶性化合物在室溫下為固體，其中所述離子結(jié)晶性化合物在所述小粒子中結(jié)晶化。
文檔編號(hào)A61K31/715GK102573799SQ201080045519
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年10月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月2日
發(fā)明者麗絲貝特·伊魯姆, 伊麗莎白·皮爾森, 克萊夫·J.·羅伯特斯, 岡崎俊彥, 北浦千枝子, 味吞憲二郎, 大久保勝之, 斯耶扎娜·斯托尼克-特倫基, 馬丁·C.·戴維斯 申請(qǐng)人:日東電工株式會(huì)社