綴合物、粒子、組合物以及相關(guān)方法

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導(dǎo)航： X技術(shù)> 最新專利>醫(yī)藥醫(yī)療技術(shù)的改進(jìn);醫(yī)療器械制造及應(yīng)用技術(shù)

專利名稱：綴合物、粒子、組合物以及相關(guān)方法
綴合物、粒子、組合物以及相關(guān)方法優(yōu)先權(quán)要求本申請(qǐng)要求于2010年8月20日提交的U.S.S.N.61/375，783、于2010年9月29曰提交的 U.S.S.N.61/387，882、于 2011 年 2 月 17 曰提交的 U.S.S.N.61/443, 972 以及于2011年4月15日提交的U.S.S.N.61/475，923的優(yōu)先權(quán)，其中所述各案的內(nèi)容以引用的方式并入本文。
背景技術(shù)：
為了提供核酸試劑的最佳使用和有效性，需要將所述核酸試劑有效遞送至治療靶點(diǎn)。粒子遞送系統(tǒng)可以增加核酸試劑的功效或耐受性。發(fā)明概述本文描述可以用于例如遞送核酸試劑的粒子。通常，粒子包括核酸試劑和陽離子部分、疏水部分(如聚合物)或親水-疏水聚合物中的至少一種。在一些實(shí)施方案中，粒子包括核酸試劑和陽離子部分，以及疏水部分(如聚合物)或親水-疏水聚合物中的至少一種。在一些實(shí)施方案中，粒子包括核酸試劑、陽離子部分以及疏水部分(如聚合物)和親水-疏水聚合物兩者。在其它實(shí)施方案中，粒子包括核酸試劑、陽離子部分以及存在i)疏水部分(如聚合物)或ii)親水-疏水聚合物中的任一者，并且當(dāng)一者存在時(shí)，另一者大致上不存在，或兩者中的一者以少于另一者的5重量％、2重量％或I重量％存在,例如,如由粒子中的量所確定或如由用于制備粒子的材料的量所確定。在一個(gè)實(shí)施方案中，疏水部分(例如，疏水聚合物)、親水-疏水聚合物、陽離子部分或核酸試劑中的一個(gè)或多個(gè)可以連接至另一個(gè)部分，例如，本文上文或別處所述的另一個(gè)部分。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，陽離子部分和/或核酸試劑可以連接至疏水部分(例如，疏水聚合物)和/或親水-疏水聚合物。粒子還可以包括其它組分如表面活性劑或親水聚合物(例如，親水聚合物如PEG，所述親水聚合物可以進(jìn)一步連接至脂質(zhì))。本文還描述綴合物(如核酸試劑-聚合物綴合物)、混合物、組合物以及含有粒子或綴合物的劑型、使用粒子的方法(例如，用于治療病癥)、包括核酸試劑-聚合物綴合物和粒子的試劑盒、制備核酸試劑-聚合物綴合物和粒子的方法、儲(chǔ)存粒子的方法以及分析粒子的方法。本文公開的粒子提供核酸試劑(例如，siRNA)或促進(jìn)RNAi的試劑的遞送。因此，一方面，本公開的特點(diǎn)在于一種粒子，其包含:a)多個(gè)疏水部分，例如，疏水聚合物；b)多個(gè)親水-疏水聚合物；c)任選地，多個(gè)陽離子部分；以及d)多個(gè)核酸試劑，其中多個(gè)核酸試劑中的至少一部分是(i)共價(jià)連接至以下中的任一者:a)的疏水部分，例如，疏水聚合物或b)的親水-疏水聚合物，或(ii)與共價(jià)連接至a)的疏水部分(例如，疏水聚合物)或b)的親水-疏水聚合物中任一者的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)。
在一些實(shí)施方案中，粒子包含陽離子部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子是納米粒子。在一些實(shí)施方案中，疏水部分是疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，疏水部分不是聚合物。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分未共價(jià)連接至核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分未共價(jià)連接至陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，大致上c)的所有陽離子部分都未共價(jià)連接至疏水部分(例如，疏水聚合物)并且沒有共價(jià)連接至b)的聚合物。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分沒有共價(jià)連接至c)的陽離子部分或d)的核酸試劑中的一者或兩者。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分各自共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分各自共價(jià)連接至d)的單一核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至d)的多個(gè)核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分各自直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至d)的核酸試劑(例如，在疏水聚合物的羧基端或羥基端)。在一些實(shí)施方案中，d)的核酸試劑中的至少一部分經(jīng)由連接基共價(jià)連接至疏水聚合物。示例性連接基包括以下連接基:包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵的連接基和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、硅烷基醚或三唑的連接基(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯或三唑)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包括多個(gè)官能團(tuán)，如在生理?xiàng)l件下可裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包括并非在連接基的末端直接連接至通過連接基連接的第一或第二部分，而是在連接基的內(nèi)部的官能團(tuán)，如本文描述的鍵或官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接基可在生理?xiàng)l件下水解、連接基可在生理?xiàng)l件下酶促裂解或連接基包含可在生理?xiàng)l件下還原的二硫化物。在一些實(shí)施方案中，連接基在生理?xiàng)l件下不裂解，例如，連接基具有使得核酸試劑不需要裂解即具有活性的足夠長度，例如，連接基的長度是至少約20埃(例如，至少約24埃)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑與連接至疏水聚合物的核酸形成雙鏈體。例如，核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)可以與連接至疏水聚合物的DNA形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分通過核酸試劑的3’和/或5’位置各自共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分通過核酸試劑的2’位置各自共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至d)的核酸試劑(例如，在疏水聚合物的羧基端或羥基端或在親水聚合物的末端)。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至d)的單一核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至d)的多個(gè)核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分各自直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至d)的核酸試劑(例如，在疏水聚合物的羧基端或羥基端或在親水聚合物的末端)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑中的至少一部分經(jīng)由連接基各自共價(jià)連接至親水-疏水聚合物。示例性連接基包括以下連接基:包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵的連接基和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、硅烷基醚或三唑的連接基(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯或三唑)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含多個(gè)官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含并非在連接基的末端直接連接至通過連接基連接的第一或第二部分，而是在連接基的內(nèi)部的官能團(tuán)，如本文描述的鍵或官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接基可在生理?xiàng)l件下水解、連接基可在生理?xiàng)l件下酶促裂解或連接基包含可在生理?xiàng)l件下還原的二硫化物。在一些實(shí)施方案中，連接基在生理?xiàng)l件下不裂解，例如，連接基具有使得核酸試劑不需要裂解即具有活性的足夠長度，例如，連接基的長度是至少約20埃(例如，至少約24埃)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑與連接至疏水聚合物的核酸形成雙鏈體。例如，核酸試劑(例如，RNAi)可以與連接至疏水部分(例如，疏水聚合物)的DNA形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑與連接至親水-疏水聚合物的核酸形成雙鏈體。例如，核酸試劑(例如，RNAi)可以與連接至疏水部分(例如，疏水聚合物)的DNA形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)。在一些實(shí)施方案中，b)的多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分通過核酸試劑的3’和/或5’位置各自共價(jià)連接至核酸試劑。在`一些實(shí)施方案中，b)的多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分通過核酸試劑的2’位置各自共價(jià)連接至核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分，例如，a)的多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分各自直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分通過酰胺、酯、硫醚或醚(例如，在疏水聚合物的羧基端)各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分在疏水聚合物的末端各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，c)的單一陽離子部分共價(jià)連接至a)的單一疏水聚合物(例如，在疏水聚合物的末端)。在一些實(shí)施方案中，a)的單一疏水聚合物共價(jià)連接至c)的多個(gè)陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分各自連接至a)的疏水聚合物的主鏈。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分，并且a)的多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分各自連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，粒子包含c)的陽離子部分，并且進(jìn)一步包含多個(gè)額外陽離子部分，其中額外陽離子部分與C)的陽離子部分不同。額外陽離子部分可以是例如陽離子聚合物(例如，PE1、陽離子PVA、聚(組氨酸)、聚(賴氨酸)或聚(甲基丙烯酸(2-二甲氨基)乙酯)。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外陽離子部分中的至少一部分各自連接至a)的多個(gè)疏水部分(例如疏水聚合物)和/或b)的多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外陽離子部分中的至少一部分連接至a)的多個(gè)疏水部分(例如疏水聚合物)中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，粒子進(jìn)一步包含多個(gè)額外核酸試劑，其中額外核酸試劑例如在核酸試劑的結(jié)構(gòu)(例如，序列、長度、懸突的長度)或衍生化(例如，糖或堿基的修飾)上與d)的多個(gè)核酸試劑不同。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外核酸試劑中的至少一部分連接至a)的多個(gè)疏水部分(例如疏水聚合物)和/或b)的多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外核酸試劑中的至少一部分連接至a)的多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)中的至少一部分。本文公開的粒子提供核酸試劑(例如，促進(jìn)RNAi的試劑如siRNA)的遞送，其中核酸試劑連接至疏水聚合物，或與連接至疏水聚合物的核酸形成雙鏈體。因此，另一方面，本公開的特點(diǎn)在于一種粒子，其包含:a)多個(gè)核酸試劑-聚合物綴合物，每個(gè)所述綴合物包含核酸試劑，所述核酸試劑(i)連接至疏水聚合物或(ii)與共價(jià)連接至疏水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)；b)多個(gè)親水-疏水聚合物；以及c)任選地，多個(gè)陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，粒子包含陽離子部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子是納米粒子。在一些實(shí)施方案中，粒子進(jìn)一步包含疏水聚合物，例如，其中疏水聚合物未連接至核酸如核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，粒子包含c)的多個(gè)陽離子部分，所述陽離子部分中的至少一部分各自共價(jià)連接至疏水聚合物(例如，未連接至核酸(如核酸試劑)的疏水聚合物)。示例性陽離子部分-疏水聚合物綴合物包括N1-PLGA-N5，N10，N14-四甲基化精胺。在一些實(shí)施方案中，粒子包含c)的多個(gè)陽離子部分，并且b)的多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分各自共價(jià)連接至b)的親水-疏水聚合物的疏水部分(例如，通過本文描述的連接基，如酰胺、酯或醚)。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分各自共價(jià)連接至b)的親水-疏水聚合物的親水部分。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑經(jīng)由連接基共價(jià)連接至疏水聚合物。示例性連接基包括以下連接基:包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵的連接基和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、硅烷基醚或三唑的連接基(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯或三唑)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含多個(gè)官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含并非在連接基的末端直接連接至通過連接基連接的第一或第二部分，而是在連接基的內(nèi)部的官能團(tuán)，如本文所述的鍵或官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接基可在生理?xiàng)l件下水解、連接基可在生理?xiàng)l件下酶促裂解或連接基包含可在生理?xiàng)l件下還原的二硫化物。在一些實(shí)施方案中，連接基在生理?xiàng)l件下不裂解，例如，連接基具有使得核酸試劑不需要裂解即具有活性的足夠長度，例如，連接基的長度是至少約20埃(例如，至少約24埃)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑與連接至疏水聚合物的核酸形成雙鏈體。例如，核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)可以與連接至疏水聚合物的核酸(例如和RNA或DNA)形成雙鏈體(例如，同源或異源雙鏈體)。在一些實(shí)施方案中，粒子包含c)的陽離子部分，并且進(jìn)一步包含多個(gè)額外陽離子部分，其中額外陽離子部分例如在分子量、粘度、電荷或結(jié)構(gòu)上與c)的多個(gè)陽離子部分不同。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外陽離子部分中的至少一部分連接至疏水聚合物和/或b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外陽離子部分中的至少一部分連接至疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，粒子進(jìn)一步包含多個(gè)額外核酸試劑，其中額外核酸試劑例如在核酸試劑的結(jié)構(gòu)(例如，序列、長度、懸突的長度)或衍生化(例如，糖或堿基的修飾)上與a)的多個(gè)核酸試劑不同。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外核酸試劑中的至少一部分連接至疏水聚合物和/或b)的多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外核酸試劑中的至少一部分連接至疏水聚合物。本發(fā)明的粒子提供核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)與親水-疏水聚合物的連接。還包括疏水部分和陽離子部分，例如，如以下所描述。因此，另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種粒子，其包含:a)多個(gè)疏水部分，例如，疏水聚合物；b)多個(gè)核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物，其中所述多個(gè)的每個(gè)核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物的核酸試劑(i)共價(jià)連接至親水-疏水聚合物或(ii)與共價(jià)連接至親水-疏水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)；以及c)任選地，多個(gè)陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，粒子包含多個(gè)陽離子部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子是納米粒子。在一些實(shí)施方案中，粒子還包括多個(gè)親水-疏水聚合物，其中親水-疏水聚合物未共價(jià)連接至核酸如核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，粒子包含c)的多個(gè)陽離子部分，并且c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分共價(jià)連接至親水-疏水聚合物，例如，c)的陽離子部分共價(jià)連接至未連接至核酸試劑的親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，粒子包含c)的多個(gè)陽離子部分，并且多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分通過親水-疏水聚合物的疏水部分(例如，通過酰胺、酯或醚)共價(jià)連接至
c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分共價(jià)連接至c)的陽離子部分(例如，通過酰胺、酯或醚)。在一些實(shí)施方案中，b)的綴合物的疏水-親水聚合物經(jīng)由連接基共價(jià)連接至核酸試劑。示例性連接基包括以下連接基:包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵的連接基和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、硅烷基醚或三唑的連接基(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯或三唑)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含多個(gè)官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含并非在連接基的末端直接連接至通過連接基連接的第一或第二部分，而是在連接基的內(nèi)部的官能團(tuán)，如本文所述的鍵或官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接基可在生理?xiàng)l件下水解、連接基可在生理?xiàng)l件下酶促裂解或連接基包含可在生理?xiàng)l件下還原的二硫化物。在一些實(shí)施方案中，連接基在生理?xiàng)l件下不裂解，例如，連接基具有使得核酸試劑不需要裂解即具有活性的足夠長度，例如，連接基的長度是至少約20埃(例如,至少約24埃)。在一些實(shí)施方案中，粒子包含c)的陽離子部分，并且進(jìn)一步包含多個(gè)額外陽離子部分，其中額外陽尚子部分例如在分子量、粘度、電荷或結(jié)構(gòu)上與c)的陽尚子部分不同。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外陽離子部分中的至少一部分各自連接至a)的多個(gè)疏水聚合物和/或多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外陽離子部分中的至少一部分連接至a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，粒子進(jìn)一步包含多個(gè)額外核酸試劑，其中額外核酸試劑例如在核酸試劑的結(jié)構(gòu)(例如，序列、長度、懸突的長度)或衍生化(例如，糖或堿基的修飾)上與b)的多個(gè)核酸試劑不同。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外核酸試劑中的至少一部分連接至a)的多個(gè)疏水聚合物和/或多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外核酸試劑中的至少一部分連接至a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑與連接至a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分的核酸形成雙鏈體。例如，核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)可以與連接至疏水聚合物的核酸(例如，RNA或DNA)形成雙鏈體(例如，同源或異源雙鏈體)。如本文所描述，本發(fā)明的粒子提供核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)在包含連接至聚合物的陽離子部分的粒子中的遞送。

因此，另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種粒子，其包含:a)多個(gè)疏水部分，例如，疏水聚合物；b)多個(gè)親水-疏水聚合物；c)多個(gè)陽離子部分，其中多個(gè)陽離子部分中的至少一部分連接至a)的疏水聚合物或b)的親水-疏水聚合物；以及d)多個(gè)核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水部分(例如，聚合物)中的至少一部分未共價(jià)連接至c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分未共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子是納米粒子。在一些實(shí)施方案中，大致上d)的所有多個(gè)核酸試劑未共價(jià)連接至聚合物(例如，a)或b)的聚合物)。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分未共價(jià)連接至c)的陽離子部分或d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑共價(jià)連接至親水聚合物，如PEG聚合物。在一些實(shí)施方案中，PEG連接至脂質(zhì)和或在末端被甲基修飾。
在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分，例如，多個(gè)疏水聚合物共價(jià)連接至四甲基化精胺(例如，N1-PLGA-N5, N10, N14四甲基化精胺)。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分通過酰胺、酯或醚(例如，在疏水聚合物的羧基端)各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分在疏水聚合物的末端各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至a)的疏水聚合物(例如，在疏水聚合物的羧基端或羥基端)。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分經(jīng)由連接基共價(jià)連接至a)的疏水聚合物(例如，在疏水聚合物的羧基端或羥基端)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物(即，硫醚鍵)、縮酮、琥珀酸酯、肟、碳酸酯、氨基甲酸酯、硅燒基醚或三唑。在一些實(shí)施方案中，c)的單一陽離子部分共價(jià)連接至a)的單一疏水聚合物(例如，在疏水聚合物的末端)。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分經(jīng)由酰胺、酯、硫醚或醚鍵通過疏水部分共價(jià)連接至b)的親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，a)的單一疏水聚合物共價(jià)連接至c)的多個(gè)陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分連接至a)的疏水聚合物中的至少一部分的主鏈。在一些實(shí)施方案中，b)的多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分共價(jià)連接至c)的陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至b)的親水-疏水聚合物(例如，在疏水聚合物的羧基端或羥基端)。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分經(jīng)由連接基共價(jià)連接至a)的親水-疏水聚合物(例如，在疏水聚合物的羧基端或羥基端)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、碳酸酯、氨基甲酸酯、硅烷基醚或三唑。在一些實(shí)施方案中，c)的單一陽離子部分共價(jià)連接至b)的單一親水-疏水聚合物(例如，在親水-疏水聚合物的末端)。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分通過疏水部分共價(jià)連接至b)的親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分通過疏水部分共價(jià)連接至b)的親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，c)的`多個(gè)陽離子部分中的至少一部分經(jīng)由酰胺、酯或醚鍵通過疏水部分共價(jià)連接至b)的親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，b)的單一親水-疏水聚合物共價(jià)連接至c)的多個(gè)陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分中的至少一部分連接至b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的主鏈。在一些實(shí)施方案中，a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分共價(jià)連接至d)的單一核酸試齊U。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分共價(jià)連接至d)的多個(gè)核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，d)的核酸試劑直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至a)的疏水聚合物(例如，在親水-疏水聚合物的羥基端)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑經(jīng)由連接基共價(jià)連接至a)的疏水聚合物(例如，在親水-疏水聚合物的羥基端)。示例性連接基包括以下連接基:包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵的連接基和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、硅烷基醚或三唑的連接基(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯或三唑)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含多個(gè)官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含并非在連接基的末端直接連接至通過連接基連接的第一或第二部分，而是在連接基的內(nèi)部的官能團(tuán)，如本文所述的鍵或官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接基可在生理?xiàng)l件下水解、連接基可在生理?xiàng)l件下酶促裂解或連接基包含可在生理?xiàng)l件下還原的二硫化物。在一些實(shí)施方案中，連接基在生理?xiàng)l件下不裂解，例如，連接基具有使得核酸試劑不需要裂解即具有活性的足夠長度，例如，連接基的長度是至少約20埃(例如，至少約24埃)。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分通過核酸試劑的3’和/或5’位置共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分通過核酸試劑的2’位置共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑與連接至a)的多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分的核酸形成雙鏈體。例如，核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)可以與連接至疏水聚合物的核酸(例如，RNA或DNA)形成雙鏈體(例如，同源或異源雙鏈體)。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至d)的單一核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至
d)的多個(gè)核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，d)的核酸試劑中的至少一部分直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至b)的親水-疏水聚合物(例如，在親水-疏水聚合物的羥基端)。在一些實(shí)施方案中，d)的核酸試劑中的至少一部分經(jīng)由連接基各自共價(jià)連接至b)的親水-疏水聚合物(例如，在親水-疏水聚合物的羥基端)。示例性連接基包括以下連接基:包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵的連接基和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、硅烷基醚或三唑的連接基(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯或三唑)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含官能團(tuán) ，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含多個(gè)官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含并非在連接基的末端直接連接至通過連接基連接的第一或第二部分，而是在連接基的內(nèi)部的官能團(tuán)，如本文所述的鍵或官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接基可在生理?xiàng)l件下水解、連接基可在生理?xiàng)l件下酶促裂解或連接基包含可在生理?xiàng)l件下還原的二硫化物。在一些實(shí)施方案中，連接基在生理?xiàng)l件下不裂解，例如，連接基具有使得核酸試劑不需要裂解即具有活性的足夠長度，例如，連接基的長度是至少約20埃(例如，至少約24埃)。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分通過核酸試劑的3’和/或5’位置各自共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分通過核酸試劑的2’位置共價(jià)連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分共價(jià)連接至c)的陽離子部分，并且a)的疏水聚合物中的至少一部分連接至d)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，粒子進(jìn)一步包含多個(gè)額外陽離子部分，其中額外陽離子部分例如在分子量、粘度、電荷或結(jié)構(gòu)上與c)的陽離子部分不同。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外陽離子部分中的至少一部分連接至a)的疏水聚合物和/或b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外陽離子部分中的至少一部分連接至a)的疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，粒子進(jìn)一步包含多個(gè)額外核酸試劑，其中額外核酸試劑例如在核酸試劑的結(jié)構(gòu)(例如，序列、長度、懸突的長度)或衍生化(例如，糖或堿基的修飾)上與d)的核酸試劑不同。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外核酸試劑中的至少一部分連接至a)的疏水聚合物和/或b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)額外核酸試劑中的至少一部分連接至a)的疏水聚合物中的至少一部分。本發(fā)明的粒子提供核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)的遞送，其中核酸試劑共價(jià)連接至親水聚合物，或與共價(jià)連接至親水聚合物的核酸形成雙鏈體。因此，另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種粒子，其包含:a)多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)；b)任選地多個(gè)親水-疏水聚合物；c)多個(gè)陽離子部分；以及d)多個(gè)核酸試劑,其中多個(gè)核酸試劑中的至少一部分共價(jià)連接至疏水聚合物或與共價(jià)連接至親水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子是納米粒子。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑共價(jià)連接至親水聚合物(例如，包含PEG)。在一些實(shí)施方案中，PEG具有約2kDa的分子量。在一些實(shí)施方案中，聚合物(例如，親水聚合物)共價(jià)連接至脂質(zhì)(例如，1,2- 二硬脂?；?sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺-Ν-[Η)Ρ(聚乙二醇)-2k])。示例性脂質(zhì)在本文描述，如DSPE。在一些實(shí)施方案中，聚合物是共價(jià)連接至脂質(zhì)的PEG，例如，共價(jià)連接至I，2- 二硬脂?；?sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺_N_ [PDP (聚乙二醇)-2kDa]的 PEG。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子大致上不含疏水-親水聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，疏水-親水聚合物(如果存在)的量小于粒子中或用作制備粒子的起始材料的組分(例如，聚合物)的5重量％、2重量％或I重量％。在一些實(shí)施方案中，疏水部分是疏水聚合物，如PLGA。在一些實(shí)施方案中，親水-疏水聚合物是PEG-PLGA聚合物。本發(fā)明的粒子提供核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)的遞送，其中核酸試劑未連接(例如，共價(jià)連接)至疏水部分(如聚合物)或親水-疏水聚合物并且不與連接(例如，共價(jià)連接)至疏水部分(如聚合物)或親水-疏水聚合物的核酸形成雙鏈體。在替代方案中，在一些粒子中，粒子中或用作制備粒子的起始材料的核酸試劑的小于5重量％、2重量％或I重量％連接至此類聚合物。因此，另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種粒子，其包含:a)多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)；b)多個(gè)親水-疏水聚合物；以及c)多個(gè)核酸試劑-陽離子聚合物綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子是納米粒子。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑未連接(例如，共價(jià)連接)至疏水聚合物或親水-疏水聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子中或用作制備粒子的起始材料的核酸試劑的小于5重量％、2重量％或I重量％連接至疏水聚合物或親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，陽離子聚合物是PVA，例如，核酸試劑-陽離子聚合物綴合物是siRNA-陽離子PVA綴合物。在一些實(shí)施方案中，疏水部分是疏水聚合物如PLGA。在一些實(shí)施方案中，親水-疏水聚合物是PEG-PLGA聚合物。本發(fā)明的粒子提供核酸試劑(例如，siRNA或促進(jìn)RNAi的試劑)的遞送，其中核酸試劑和陽離子聚合物兩者都未連接(例如，共價(jià)連接)至疏水聚合物或親水-疏水聚合物或其中，獨(dú)立地，粒子中或用作制備粒子的起始材料的核酸試劑和陽離子部分的小于5重量％、2重量％或I重量％連接至此類聚合物。因此粒子的核酸試劑和陽離子部分(例如，大致上粒子的所有核酸試劑和陽離子部分)包埋于粒子中，而不是共價(jià)連接至聚合物組分。因此，另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種粒子，其包含:a)多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物)；

b)多個(gè)親水-疏水聚合物；c)任選地，多個(gè)陽離子部分；以及d)多個(gè)核酸試劑；其中c)的陽離子部分的大部分和d)的核酸試劑的大部分未共價(jià)連接至疏水聚合物或親水-疏水聚合物。例如，核酸試劑或陽離子部分包埋于粒子中。在一些實(shí)施方案中，粒子包含多個(gè)陽離子部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子是納米粒子。在一個(gè)實(shí)施方案中，獨(dú)立地，粒子中或用作制備粒子的起始材料的核酸試劑的小于5重量％、2重量％或I重量％連接至此類聚合物并且，粒子中或用作制備粒子的起始材料的陽離子部分的小于5重量％、2重量％或I重量％連接至此類聚合物。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分是陽離子聚合物。示例性陽離子聚合物包括陽離子PVA(如本文描述的陽離子PVA)或精胺，包括修飾的精胺(例如，四甲基化精胺)。核酸試劑可以與陽離子部分(如本文所描述的陽離子聚合物)形成復(fù)合物。與陽離子部分復(fù)合的核酸試劑可以包埋于粒子中。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分的電荷與核酸試劑的主鏈的電荷的比率是約2: I至約1:1 (例如，約1.5: I至約1:1)。在一些實(shí)施方案中，疏水部分是疏水聚合物如PLGA。在一些實(shí)施方案中，親水-疏水聚合物是PEG-PLGA聚合物。本文描述的粒子可以具有一種或多種以下性質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分具有羧基末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，末端如羧基末端被修飾(例如，用反應(yīng)性基團(tuán)，包括本文描述的反應(yīng)性基團(tuán))。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分具有輕基末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，輕基末端被修飾(例如，用反應(yīng)性基團(tuán))。在一個(gè)實(shí)施方案中，具有輕基末端的a)的疏水聚合物中的至少一部分的輕基末端被封端(例如，用?；糠址舛?。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分具有羧基末端和羥基末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分包含乳酸和/或乙醇酸的單體。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分包含PLA或PGA。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分包含乳酸和乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。在一個(gè)實(shí)施方案中，聚合物多分散性指數(shù)小于約2.5 (例如，小于約1.5)。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物的一部分包含乳酸與乙醇酸的比率是約25: 75至約75: 25的PLGA。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物的一部分包含乳酸與乙醇酸的比率是約50: 50的PLGA。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物具有約4kDa至約66kDa的Mw，例如約4kDa至約12kDa，約8kDa至約12kDa。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物具有約4kDa至約12kDa(例如，約4kDa至約8kDa)的重量平均分子量。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物包含粒子的或用作制備粒子的起始材料的約35重量％至約90重量％ (例如，約35重量％至約80重量％)。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至單一陽離子部分并且a)的疏水聚合物的一部分連接至多個(gè)陽離子部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，a)的疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至單一核酸試劑并且a)的疏水聚合物的一部分連接至多個(gè)核酸試劑。本文描述的粒子的其它性質(zhì)包括以下。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物是嵌段共聚物。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物是二嵌段共聚物。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的疏水部分具有羥基末端。在一些實(shí)施方案中，具有羥基末端的b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的疏水部分的羥基末端被封端(例如，用?；糠址舛?。在一些實(shí)施方案中，具有羥基末端的b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的疏水部分的輕基末端被酰基部分封端。本文描述的粒子的其它性質(zhì)包括以下。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的疏水部分包含乳酸和乙醇酸的共聚物(即，PLGA)。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的疏水部分包含乳酸與乙醇酸的比率是約25: 75至約75: 25的PLGA。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的疏水部分包含酸與乙醇酸的比率是約50: 50的PLGA。本文描述的粒子的其它性質(zhì)包括以下。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的疏水部分具有約4kDa至約20kDa(例如，約4kDa至約12kDa、約6kDa至約20kDa或約8kDa至約15kDa)的重量平均分子量。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分的親水部分具有約IkDa至約8kDa(例如,約2kDa至約6kDa)的重量平均分子量。在一些實(shí)施方案中，b)的多個(gè)親水-疏水聚合物中的至少一部分是粒子的或用作制備粒子的起始材料的約2重量％至約30重量％ (例如，約4重量％至約25重量％)。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物的親水部分中的至少一部分包含PEG、聚噁唑啉、聚乙烯吡咯烷、聚羥丙基甲基丙烯酰胺或聚唾液酸(例如，PEG)。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物的親水部分中的至少一部分終止于甲氧基。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至單一陽離子部分并且b)的親水-疏水聚合物的一部分連接至多個(gè)陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至單一核酸試劑并且b)的親水-疏水聚合物的一部分連接至多個(gè)核酸試劑。本文描述的粒子的其它性質(zhì)包括以下。在一些實(shí)施方案中，c)的陽離子部分中的至少一部分包含至少一個(gè)胺(例如，伯胺、仲胺、叔胺或季胺)。在一些實(shí)施方案中，c)的陽離子部分中的至少一部分包含多個(gè)胺(例如，伯胺、仲胺、叔胺或季胺)。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分中的至少一個(gè)胺是仲胺或叔胺。在一些實(shí)施方案中，C)的陽離子部分中的至少一部分包含聚合物，例如，聚乙烯亞胺或聚賴氨酸。聚合陽離子部分具有多個(gè)分子量(例如，范圍為約500Da至約5000Da，例如，約IkDa至約2kDa或約2.5kDa)。在一些實(shí)施方案中，C)的陽離子部分中的至少一部分包含陽離子PVA(例如，如由Kuraray所提供，如CM-318或C-506)。其它示例性陽離子部分包括聚氨基酸、聚(組氨酸)以及聚甲基丙烯酸(2-二甲氨基)乙酯。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分具有5或更大的pKa。在一些實(shí)施方案中，胺在酸性PH下帶正電荷。在一些實(shí)施方案中，胺在生理pH下帶正電荷。在一些實(shí)施方案中，c)的陽離子部分中的至少一部分選自由硫酸魚精蛋白、海美溴銨(hexademethrinetoomide)、十六烷基三甲基溴化銨、精胺(例如，四甲基化精胺)以及亞精胺。在一些實(shí)施方案中，c)的陽離子部分中的至少一部分選自由四烷基銨部分、三烷基銨部分、咪唑鎗部分、芳基銨部分、亞胺陽離子部分、脒陽離子部分、胍陽離子部分、噻唑鎗部分、吡唑鎗部分、吡嗪陽離子部分、吡啶陽離子部分以及鱗部分組成的組。在一些實(shí)施方案中，c)的陽離子部分中的至少一部分是陽離子脂質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，c)的陽離子部分中的至少一部分綴合至非聚合物疏水部分(例如，膽固醇或維生素E TPGS)。在一些實(shí)施方案中，c)的多個(gè)陽離子部分是粒子的或用作制備粒子的起始材料的約0.1重量％至約60重量％，例如，粒子的約I重量％至約60重量％。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)陽離子部分的電荷與來自多個(gè)核酸試劑的電荷的比率是約1:1至約50: I (例如，1:1至約10:1或1:1至5:1、約1.5:1或約1:1)。在陽離子部分是含氮部分的實(shí)施方案中，這一比率可以被稱為N/P比。本文描述的粒子的其它性質(zhì)包括以下。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑中的至少一部分是DNA試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑中的至少一部分是RNA試劑(例如，siRNA或微RNA或促進(jìn)RNAi的試劑)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑中的至少一部分選自由siRNA、反義寡核苷酸、微 RNA(miRNA)、shRNA、miRNA拮抗劑(antagomirs)、適體、基因組DNA、cDNA、mRNA以及質(zhì)粒組成的組。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑中的至少一部分經(jīng)過化學(xué)修飾(例如，包括一個(gè)或多個(gè)主鏈修飾、堿基修飾和或?qū)τ谔堑男揎?以便增加核酸試劑的穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑是粒子的或用作制備粒子的起始材料的約I重量％至約50重量％ (例如，約I %至約20%、約2%至約15%、約3%至約12% )。本文描述的粒子的其它性質(zhì)包括以下。在一些實(shí)施方案中，粒子還包括表面活性齊U。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑是聚合物如PVA。在一些實(shí)施方案中，PVA具有約2cP至約27cP的粘度。在一些實(shí)施方案`中，表面活性劑是粒子的或用作制備粒子的起始材料的約O重量％至約40重量％ (例如，約15重量％至約35重量％ )。在一些實(shí)施方案中，粒子的直徑小于約200nm (例如，約200nm至約20nm、約150nm至約50nm、或小于約150nm)。在一些實(shí)施方案中，粒子的表面大致上涂有PEG、PVA、聚噁唑啉、聚乙烯吡咯烷、聚羥丙基甲基丙烯酰胺或聚唾液酸(例如，PEG)。在一些實(shí)施方案中，粒子包含靶向劑。在一些實(shí)施方案中，粒子的表面大致上不含核酸試劑。本文描述的粒子的其它性質(zhì)包括以下。在一些實(shí)施方案中，d)的多個(gè)核酸試劑是大致上完整的。在一些實(shí)施方案中，粒子的ζ電位是約_20mV至約50mV(例如，約-20mV至約20mV、約-1OmV至約IOmV或中性)。在一些實(shí)施方案中，粒子在以下條件下是化學(xué)上穩(wěn)定的，所述條件包括23攝氏度的溫度和60%百分比濕度持續(xù)至少一天(例如，至少7天、至少14天、至少21天、至少30天)。在一些實(shí)施方案中，粒子是凍干粒子。在一些實(shí)施方案中，粒子被配制成藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，粒子的表面大致上不含靶向劑。在一些實(shí)施方案中，本文描述的粒子可以遞送有效量的核酸試劑以使得受試者體內(nèi)的靶基因的表達(dá)在將粒子施用至受試者之后大約72小時(shí)、96小時(shí)、120小時(shí)、144小時(shí)、168小時(shí)、192小時(shí)、216小時(shí)、240小時(shí)、264小時(shí)減少至少20 % ,25 % ,30 % ,35 % ,40 %,45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或更多。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的粒子可以遞送有效量的核酸試劑以使得受試者體內(nèi)的靶基因的表達(dá)在將粒子施用至受試者之后大約120小時(shí)減少至少50 %、55 %、60 %、65 %、70 %、75 %或80 %。在一些實(shí)施方案中，將施用了本文描述的粒子或組合物的受試者體內(nèi)的靶基因表達(dá)的水平與當(dāng)核酸試劑以不同于粒子或綴合物(即，不以粒子的形式，例如，未包埋于粒子中或綴合至聚合物，例如，本文描述的粒子)的制劑施用時(shí)觀察到的靶基因的表達(dá)的水平或與在不存在施用核酸試劑或其它治療劑的情況下觀察到的靶基因的表達(dá)的水平進(jìn)行比較。在一些實(shí)施方案中，粒子包括疏水聚合物，例如，其中核酸試劑連接至a)的疏水聚合物并且其中疏水聚合物或核酸試劑-疏水聚合物綴合物具有一種或多種以下性質(zhì):i)連接至核酸試劑的疏水聚合物可以是由多于一種單體亞單位構(gòu)成的均聚物或聚合物；ii)連接至核酸試劑的疏水聚合物具有約4kDa至約20kDa的重量平均分子量；iii)疏水聚合物是由第一類型和第二類型的單體亞單位構(gòu)成，并且連接至試劑的疏水聚合物中的第一類型單體亞單位與第二類型單體亞單位的比率是約25: 75至約75: 25，例如，約 50: 50;iv)疏水聚合物是PLGA ；V)核酸試劑是粒子的約I重量％至約20重量％；vi)多個(gè)核酸試劑-疏水聚合物綴合物是粒子的約10重量％。在一些實(shí)施方案中，連接至核酸試劑的疏水聚合物具有約4kDa至約12kDa的重量平均分子量，例如，約6kDa至約12kDa或約8kDa至約12kDa。在一些實(shí)施方案中，b)的親水-疏水聚合物具有一種或多種以下性質(zhì):i)疏水部分具有約IkDa至約6kDa的重量平均分子量(例如，約2kDa至約6kDa)，ii)疏水聚合物具有約4kDa至約15kDa的重量平均分子量；iii)多個(gè)親水-疏水聚合物是粒子的約25重量％ ;iv)親水聚合物是PEG ；V)疏水聚合物是由第一類型和第二類型的單體亞單位構(gòu)成，并且連接至試劑的疏水聚合物中的第一類型單體亞單位與第二類型單體亞單位的比率是約25: 75至約75: 25，例如，約50: 50;以及vi)疏水聚合物是PLGA。在一些實(shí)施方案中，如果親水部分的重量平均分子量是約IkDa至約3kDa(例如，約2kDa)，則親水部分的重量平均分子量與疏水部分的重量平均分子量的比率是在1: 3至
1: 7之間，并且如果親水部分的重量平均分子量是約4kDa至約6kDa(例如，約5kDa)，則親水部分的重量平均分子量與疏水部分的重量平均分子量的比率是在1:1至1:4之間。在一些實(shí)施方案中，親水部分具有約2kDa至約6kDa的重量平均分子量并且疏水部分具有約8kDa至約13kDa的重量平均分子量。在一些實(shí)施方案中，親水_疏水聚合物的親水部分終止于甲氧基。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑連接至疏水聚合物并且其中核酸試劑-疏水聚合物綴合物具有一種或多種以下性質(zhì):i)連接至核酸試劑的疏水聚合物可以是由多于一種單體單位構(gòu)成的均聚物或聚合物；ii)連接至核酸試劑的疏水聚合物具有約4kDa至約15kDa的重量平均分子量；iii)疏水聚合物是由第一類型和第二類型的單體亞單位構(gòu)成，并且連接至試劑的疏水聚合物中的第一類型單體亞單位與第二類型單體亞單位的比率是約25: 75至約75: 25，例如，約 50: 50;iv)疏水聚合物是PLGA ；V)陽離子部分與核酸試劑的電荷比率是約1:1至約4: I ；vi)多個(gè)核酸試劑-疏水聚合物綴合物是粒子的約10重量％。在一些實(shí)施方案中，粒子還包括表面活性劑(例如PVA)。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種組合物，其包含本文描述的多個(gè)粒子。在一些實(shí)施方案中，組合物是藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，組合物中的粒子的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或全部具有小于約200nm的直徑。在一些實(shí)施方案中，粒子具有小于200nm的0#0 (例如，約200nm至約20nm、約150nm至約50nm、或小于約150nm)。在一些實(shí)施方案中，組合物大致上不含分子量小于約IkDa(例如，小于約500Da)的聚合物。在一些實(shí)施方案中，組合物大致上不含游離核酸試劑(即，未包埋于粒子中或連接至粒子的核酸試劑)。在一些實(shí)施方案中，粒子進(jìn)一步包含祀向劑。在一些實(shí)施方案中，組合物大致上不含陽離子部分(即，未包埋于粒子中或連接至粒子中的組分的陽離子部分)。在一些實(shí)施方案中，組合物在以下條件下是化學(xué)上穩(wěn)定的，所述條件包括23攝氏度的溫度和60%百分比濕度持續(xù)至少一天(例如，至少7天、至少14天、至少21天、至少30天)。在一些實(shí)施方案中，組合物是凍干組合物。在一些實(shí)施方案中，粒子被配制成藥物組合物。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種試劑盒，其包含本文描述的多個(gè)粒子或本文描述的組合物。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種單一劑量單位，其包含本文描述的多個(gè)粒子或本文描述的組合物。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種治療患有病癥的受試者的方法，其包括將有效量的本文描述的粒子或本文描述的組合物施用至受試者，由此治療受試者。在一個(gè)實(shí)施方案中，病癥是增生性病癥，例如，緩慢生長的增生性病癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，增生性病癥是癌癥，例如，本文描述的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥是緩慢生長的癌癥，例如，實(shí)體腫瘤或白血病。例如，緩慢生長的癌癥可以是I期或II期實(shí)體腫瘤。示例性癌癥包括但不限于膀胱癌(包括加速和轉(zhuǎn)移性膀胱癌)、乳腺癌(例如，雌激素受體陽性乳腺癌；雌激素受體陰性乳腺癌；HER-2陽性乳腺癌；HER-2陰性乳腺癌；孕酮受體陽性乳腺癌；孕酮受體陰性乳腺癌；雌激素受體陰性、HER-2陰性以及孕酮受體陰性乳腺癌(即，三陰性乳腺癌)；炎癥性乳腺癌)、結(jié)腸癌(包括結(jié)腸直腸癌)、腎癌、肝癌、肺癌(包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌以及鱗狀細(xì)胞癌)、泌尿生殖道(例如卵巢)癌(包括輸卵管和腹膜癌)、宮頸癌、前列腺和睪丸癌、淋巴系統(tǒng)癌、直腸癌、喉癌、胰腺癌(包括外分泌性胰腺癌)、食道癌、胃癌、膽囊癌、甲狀腺癌、皮膚癌(包括鱗狀細(xì)胞癌)、腦癌(包括多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤)以及頭頸部癌。優(yōu)選的癌癥包括乳腺癌(例如，轉(zhuǎn)移性或局部晚期乳腺癌)、前列腺癌(例如，激素難治性前列腺癌)、腎細(xì)胞癌、肺癌(例如，非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌、肺腺癌以及鱗狀細(xì)胞癌，例如，晚期非小細(xì)胞肺癌、晚期小細(xì)胞肺癌、晚期肺腺癌以及晚期鱗狀細(xì)胞癌)、胰腺癌、胃癌(例如，轉(zhuǎn)移性胃腺癌)、結(jié)腸直腸癌、直腸癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、淋巴瘤(何杰金氏淋巴瘤或非何杰金氏淋巴瘤)、腎細(xì)胞癌、尿道上皮癌、軟組織肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤(例如，晚期或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤)、生殖細(xì)胞腫瘤、卵巢癌(例如，晚期卵巢癌(例如，晚期輸卵管或腹膜癌))以及胃腸癌。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種減少受試者(例如，患有可以通過減少靶基因的表達(dá)來治療的病癥的受試者)體內(nèi)的靶基因表達(dá)的方法。所述方法包括施用有效量的本文描述的粒子或本文描述的組合物，其中通過粒子遞送的核酸試劑在施用粒子之后大約72小時(shí)、96小時(shí)、120小時(shí)、144小時(shí)、168小時(shí)、192小時(shí)、216小時(shí)、240小時(shí)、264小時(shí)使受試者體內(nèi)的靶基因的表達(dá)減少至少 20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更多。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過粒子遞送的核酸試劑在施用粒子之后大約120小時(shí)使受試者體內(nèi)的靶基因的表達(dá)減少至少50%、55%、60%、65 %、70 %、75 %或80 %。在一些實(shí)施方案中，將施用了本文描述的粒子或組合物的受試者體內(nèi)的靶基因表達(dá)的水平與當(dāng)核酸試劑以不同于粒子或綴合物(即，不以粒子的形式，例如，未包埋于粒子中或綴合至聚合物，例如，本文描述的粒子)的制劑施用時(shí)觀察到的靶基因的表達(dá)的水平或與在不存在施用核酸試劑或其它治療劑的情況下觀察到的靶基因的表達(dá)的水平進(jìn)行比較。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種核酸試劑-疏水聚合物綴合物，其包含共價(jià)連接至疏水聚合物的核酸試劑或與共價(jià)連接至疏水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑經(jīng)由核酸試劑的2’、3’和/或5’末端共價(jià)連接至疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在聚合物的末端共價(jià)連接至疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在疏水聚合物的主鏈上共價(jià)連接至聚合物。在一些實(shí)施方案中，單一核酸試劑共價(jià)連接至單一疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑各自共價(jià)連接至單一疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至疏水疏水聚合物(例如，經(jīng)由酯)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑經(jīng)由連接基共價(jià)連接至疏水聚合物。示例性連接基包括以下連接基:包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵的連接基和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、硅烷基醚或三唑的連接基(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯或三唑)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含多個(gè)官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含并非在連接基的末端直接連接至通過連接基連接的第一或第二部分，而是在連接基的內(nèi)部的官能團(tuán)，如本文所述的鍵或官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接基可在生理?xiàng)l件下水解、連接基可在生理?xiàng)l件下酶促裂解或連接基包含可在生理?xiàng)l件下還原的二硫化物。在一些實(shí)施方案中，連接基在生理?xiàng)l件下不裂解，例如，連接基具有使得核酸試劑不需要裂解即具有活性的足夠長度，例如，連接基的長度是至少約20埃(例如，至少約24埃)。在一些實(shí)施方案中，疏水聚合物具有末端羥基部分。在一些實(shí)施方案中，疏水聚合物的末端羥基部分被封端(例如，用?；糠?。在一些實(shí)施方案中，疏水聚合物具有一種或多種以下性質(zhì):i)連接至核酸試劑的疏水聚合物是由多于一種單體亞單位構(gòu)成的均聚物或聚合物；ii)連接至核酸試劑的疏水聚合物具有約4kDa至約15kDa的重量平均分子量(例如，約4kDa至約12kDa、約6kDa至約12kDa或約8kDa至約12kDa)；iii)疏水聚合物是由第一類型和第二類型的單體亞單位構(gòu)成，并且連接至試劑的疏水聚合物中的第一類型單體亞單位與第二類型單體亞單位的比率是約25: 75至約75: 25，例如，約50: 50;以及iv)疏水聚合物是PLGA。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是RNA、DNA或RNA與DNA的混合聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，RNA是mRNA或siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，DNA是cDNA或基因組DNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是單鏈并且在另一個(gè)實(shí)施方案中它包含兩條鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑可以具有由一個(gè)或兩個(gè)分子的鏈構(gòu)成的雙鏈區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是抑制基因表達(dá)的試劑，例如，促進(jìn)RNAi的試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑選自由siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或微RNA (miRNA)組成的組。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是miRNA拮抗劑或適體。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種組合物，其包含本文描述的多個(gè)核酸試劑-疏水聚合物綴合物。在一些實(shí)施方案中，組合物是藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，組合物是反應(yīng)混合物。在一些實(shí)施方案中，組合物大致上不含未綴合的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑-聚合物綴合物上的核酸試劑的至少約50%是完整的。在一些實(shí)施方案中，組合物大致上不含分子量小于約IkDa(例如，小于約500Da)的疏水聚合物。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種制備核酸試劑-疏水聚合物綴合物的方法，所述方法包括:提供核酸試劑和聚合物；以及使核酸試劑和聚合物經(jīng)受實(shí)現(xiàn)核酸試劑共價(jià)連接至聚合物的條件。在一些實(shí)施方案中，方法是在反應(yīng)混合物中進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物包含單一溶劑。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物包含溶劑體系，所述溶劑體系包含多種溶齊U。在一些實(shí)施方案中，多種溶劑是可混溶的。在一些實(shí)施方案中，溶劑體系包含水和極性溶劑如本文描述的溶劑(例如，DMF、DMS0、丙酮、芐醇、二噁烷、四氫呋喃或乙腈)。在一些實(shí)施方案中，溶劑體系包含水性緩沖液(例如，磷酸鹽緩沖溶液(PBS)、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)、TE緩沖液或2-(N-嗎啉基)乙烷磺酸緩沖液(MES))。在一些實(shí)施方案中，溶劑體系是雙相的(例如，包含有機(jī)相和水相)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑或聚合物中的至少一種連接至不溶性基質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，聚合物連接至不溶性基質(zhì)。
在一些實(shí)施方案中，方法的結(jié)果是形成使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵。方法的結(jié)果是形成酰胺、二硫化物、硫化物、酯、縮酮、琥珀酸酯、肟、碳
酸酯、氨基甲酸酯、硅烷基醚和/或三唑。在一些實(shí)施方案中，疏水聚合物具有小于約lmg/ml的水溶解度。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑經(jīng)由核酸試劑的2’、3’和/或5’末端共價(jià)連接至疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在疏水聚合物的末端共價(jià)連接至聚合物。在一些實(shí)施方案中，疏水聚合物具有羥基和/或羧酸末端。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在疏水聚合物的主鏈上共價(jià)連接至聚合物。在一些實(shí)施方案中，單一核酸試劑共價(jià)連接至單一疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑各自共價(jià)連接至單一疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，方法產(chǎn)生具有至少約80% (例如，至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約99% )純度的核酸試劑-疏水聚合物綴合物。在一些實(shí)施方案中，方法產(chǎn)生至少約IOOmg的核酸試劑-疏水聚合物綴合物(例如，至少約Ig)。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種通過本文描述的方法制成的核酸試劑-疏水聚合物綴合物。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物，其包含共價(jià)連接至親水-疏水聚合物的核酸試劑或與共價(jià)連接至親水-疏水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)的核酸試劑，其中親水-疏水聚合物包含連接至疏水部分的親水部分。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑連接至親水-疏水聚合物的親水部分。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑連接至親水-疏水聚合物的疏水部分。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑經(jīng)由核酸試劑的2’、3’和/或5’末端共價(jià)連接至親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在聚合物的末端共價(jià)連接至親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在親水-疏水聚合物的主鏈上共價(jià)連接至聚合物。在一些實(shí)施方案中，單一核酸試劑共價(jià)連接至單一親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑各自共價(jià)連接至單一親水-疏水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至疏水-疏水聚合物的疏水部分(例如，經(jīng)由酯)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑直接共價(jià)連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至親水-疏水聚合物的親水部分(例如，經(jīng)由酯)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑經(jīng)由連接基連接至親水-疏水聚合物(例如，聚合物的親水部分或聚合物的疏水部分)。示例性連接基包括以下連接基:包含使用點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成的鍵的連接基和包含酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、硅烷基醚或三唑的連接基(例如，酰胺、酯、二硫化物、硫化物、縮酮、琥珀酸酯或三唑)。在一些實(shí)施方案中，連接基包含官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含多個(gè)官能團(tuán)，如可在生理?xiàng)l件下裂解的鍵。在一些實(shí)施方案中，連接基包含并非在連接基的末端直接連接至通過連接基連接的第一或第二部分，而是在連接基的內(nèi)部的官能團(tuán)，如本文描述的鍵或官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，連接基可在生理?xiàng)l件下水解、連接基可在生理?xiàng)l件下酶促裂解或連接基包含可在生理?xiàng)l件下還原的二硫化物。在一些實(shí)施方案中，連接基在生理?xiàng)l件下不裂解，例如，連接基具有使得核酸試劑不需要裂解即具有活性的足夠長度，例如，連接基的長度是至少約20埃(例如，至少約24埃)。在一些實(shí)施方案中，親水-疏水聚合物具有一種或多種以下性質(zhì):i)疏水部分具有約IkDa至約6kDa的重量平均分子量(例如，約2kDa至約6kDa)，ii)疏水聚合物具有約4kDa至約15kDa的重量平均分子量(例如，約4kDa至約12kDa、約 6kDa 至約 12kDa 或約 8kDa 至約 12kDa)；iii)親水聚合物是PEG ；iv)疏水聚合物是由第一類型和第二類型的單體亞單位構(gòu)成，并且連接至核酸試劑的疏水聚合物中的第一類型單體亞單位與第二類型單體亞單位的比率是約25: 75至約75: 25，例如，約50: 50;以及V)疏水聚合物是PLGA。在一些實(shí)施方案中，如果親水-疏水聚合物的親水部分的重量平均分子量是約IkDa至約3kDa(例如，約2kDa)，則親水部分的重量平均分子量與疏水部分的重量平均分子量的比率是在1: 3至1: 7之間，并且如果親水部分的重量平均分子量是約4kDa至約6kDa(例如，約5kDa)，則未水部分的重量平均分子量與疏水部分的重量平均分子量的比率是在1:1至1: 4之間。在一些實(shí)施方案中，親水部分具有約2kDa至約6kDa的重量平均分子量并且疏水部分具有約SkDa至約13kDa的重量平均分子量。

在一些實(shí)施方案中，親水-疏水聚合物的親水部分終止于甲氧基。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑是RNA、DNA或RNA與DNA的混合聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，RNA是mRNA或siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，DNA是cDNA或基因組DNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是單鏈的并且在另一個(gè)實(shí)施方案中它包含兩條鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑可以具有由一個(gè)或兩個(gè)分子的鏈構(gòu)成的雙鏈區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是抑制基因表達(dá)的試劑，例如，促進(jìn)RNAi的試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑選自由siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或微RNA (miRNA)組成的組。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是miRNA拮抗劑或適體。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種組合物，其包含本文描述的多個(gè)核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物。在一些實(shí)施方案中，組合物是反應(yīng)混合物。在一些實(shí)施方案中，組合物是藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，組合物大致上不含未綴合的核酸試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑-聚合物綴合物上的核酸試劑的至少約50%是完整的。在一些實(shí)施方案中，組合物大致上不含分子量小于約IkDa的親水-疏水聚合物。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種制備本文描述的核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物的方法，所述方法包括: 提供核酸試劑和聚合物；以及使核酸試劑和聚合物經(jīng)受實(shí)現(xiàn)核酸試劑共價(jià)連接至聚合物的條件。在一些實(shí)施方案中，方法是在反應(yīng)混合物中進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物包含單一溶劑。在一些實(shí)施方案中，反應(yīng)混合物包含溶劑體系，所述溶劑體系包含多種溶劑。在一些實(shí)施方案中，多種溶劑是可混溶的。在一些實(shí)施方案中，溶劑體系包含水和極性溶劑(例如，DMF、DMS0、丙酮、芐醇、二噁烷、四氫呋喃或乙腈)。在一些實(shí)施方案中，溶劑體系包含水性緩沖液(例如，磷酸鹽緩沖溶液(PBS) ,4-(2-羥乙基)-1_哌嗪乙烷磺酸(HEPES)、TE緩沖液或2- (N-嗎啉基)乙烷磺酸緩沖液(MES))。在一些實(shí)施方案中，溶劑體系是雙相的(例如，包含有機(jī)相和水相)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑或聚合物中的至少一個(gè)連接至不溶性基質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，聚合物連接至不溶性基質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，方法包括通過點(diǎn)擊化學(xué)(例如，如W02006/115547中所描述)形成鍵。在一些實(shí)施方案中，方法的結(jié)果是形成酰胺、二硫化物、硫化物、酯、肟、碳酸酯、氨基甲酸酯、硅烷基醚和/或三唑。在一些實(shí)施方案中，親水-疏水聚合物具有小于約50mg/ml的水溶解度。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑經(jīng)由核酸試劑的2’、3’和/或5’末端共價(jià)連接至疏水-親水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在聚合物的末端共價(jià)連接至疏水-親水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在聚合物的親水部分上共價(jià)連接至疏水-親水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在聚合物的疏水部分上共價(jià)連接至疏水-親水聚合物。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在聚合物的主鏈上共價(jià)連接至疏水-親水聚合物。在一些實(shí)施方案中，單一核酸試劑共價(jià)連接至單一疏水-親水聚合物(例如，至親水部分或疏水部分)。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑各自共價(jià)連接至單一疏水-親水聚合物。在一些實(shí)施方案中，方法產(chǎn)生具有至少約80% (例如，至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約99% )純度的核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物。在一些實(shí)施方案中，方法產(chǎn)生至少約IOOmg的核酸試劑-疏水聚合物綴合物(例如，至少約Ig)。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種通過本文描述的方法制成的核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種粒子，所述粒子包括
多個(gè)核酸試劑-聚合物綴合物；多個(gè)陽離子聚合物或脂質(zhì)；以及多個(gè)聚合物或脂質(zhì)，其中聚合物或脂質(zhì)大致上圍繞多個(gè)核酸試劑-聚合物綴合物。在一些實(shí)施方案中，粒子是自組裝的。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種制備粒子的方法，所述方法包括:a)形成包含多個(gè)核酸試劑-聚合物綴合物的粒子；b)使粒子與多個(gè)陽離子多價(jià)聚合物或脂質(zhì)接觸；c)使b)的產(chǎn)物與多個(gè)聚合物或脂質(zhì)接觸，其中多個(gè)聚合物或脂質(zhì)大致上圍繞b)的產(chǎn)物形成粒子。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種制備粒子(例如，納米粒子)的方法，所述方法包括在極性溶劑(例如，DMF、DMS0、丙酮、芐醇、二噁烷、四氫呋喃或乙腈)中在允許形成粒子的條件(例如，通過沉淀)下組合核酸試劑(例如，siRNA部分)，(a)核酸試劑-疏水聚合物綴合物，各核酸試劑-疏水聚合物綴合物包含共價(jià)連接至疏水聚合物的核酸試劑(例如，siRNA部分)，其中核酸試劑-疏水聚合物綴合物與陽離子部分締合，b)多個(gè)親水-疏水聚合物，例如，PEG-PLGA,以及c)多個(gè)疏水聚合物(未共價(jià)連接至核酸試劑)由此形成粒子。
在一些實(shí)施方案中，組合是在包含丙酮的溶劑體系中進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，溶劑是混合溶劑體系(例如，組合水性/有機(jī)溶劑體系如乙腈和水性緩沖液體系)。在一些實(shí)施方案中，方法包括:組合，(i)乙腈/TE緩沖液(例如，約90/10wt%至約50/50wt%,例如，約90/10wt%至約70/30wt%，例如，約80/20wt% )中的多個(gè)核酸試劑，各核酸試劑(例如，siRNA或其它核酸試劑)偶合至疏水聚合物并且與陽離子部分締合；與(ii)乙腈/TE緩沖液(例如，約90/10wt%至約50/50wt%,例如，約90/10wt%至約70/30wt%，例如，約80/20wt% )中的多個(gè)親水-疏水聚合物(例如，PEG-PLGA)和多個(gè)疏水聚合物(未偶合至核酸試劑)。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種步驟a)的反應(yīng)混合物，或其組合物或藥物制劑。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種步驟(i)的反應(yīng)混合物，或其組合物或藥物制劑。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種步驟(ii)的反應(yīng)混合物，或其組合物或藥物制劑。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種通過上述方法制成的粒子。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種包含通過上述方法制成的粒子的組合物(例如,藥物組合物)。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種制備粒子(例如，納米粒子)的方法，所述粒子包含水溶性核酸試劑(例如，siRNA部分)、疏水-親水聚合物以及疏水聚合物，所述方法包括a)例如，在水溶劑中使以下接觸i)第一多個(gè)親水-疏水聚合物，例如，PEG-PLGA,與ii)第一多個(gè)疏水聚合物(例如，PLGA)，所述多個(gè)疏水聚合物各自具有第一反應(yīng)性部分(例如，硫氫基部分)；以形成水溶性中間體粒子；b)使中間體粒子與多個(gè)水溶性核酸試劑(例如，SiRNA部分)(各自具有第二反應(yīng)性部分(例如，SH部分))在允許形成中間體復(fù)合物(例如，具有約小于IOOnm的直徑)(例如，包含偶合至核酸試劑的親水-疏水聚合物和疏水聚合物的中間體結(jié)構(gòu))的條件下接觸(例如，在水性溶劑中)，以及，c)使中間體復(fù)合物與第二多個(gè)親水-疏水聚合物(例如，PEG-PLGA)和第二多個(gè)疏水聚合物(例如，PLGA)在允許形成粒子的條件下接觸(例如，在非水性溶劑(例如，DMF、DMS0、丙酮、芐醇、二噁烷、四氫呋喃或乙腈)中)，由此形成粒子。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種形成粒子(例如，納米粒子)的方法，所述方法包括:a)例如，在乙腈/TE緩沖液(例如，約90/10wt %至約50/50wt %，例如，約90/1(^七％至約70/30wt%，例如，約80/20wt% ))中使以下接觸
i)第一多個(gè)親水-疏水聚合物，例如，PEG-PLGA,與ii)第一多個(gè)疏水聚合物(例如，PLGA)，所述多個(gè)疏水聚合物各自具有第一反應(yīng)性部分，例如，硫氫基部分；以形成中間體粒子(例如，具有小于約IOOnm的直徑)，其中，在一些實(shí)施方案中，中間體粒子在官能上可溶于水溶液中，例如，憑借具有足夠的親水部分以使得它在水溶液中是可溶的；b)使中間體粒子與多個(gè)藥物部分(例如，SiRNA或其它核酸藥物部分部分)(各自具有第二反應(yīng)性部分(例如，SH部分))在允許形成中間體復(fù)合物(例如，包含偶合至藥物部分的親水-疏水聚合物和疏水聚合物的中間體結(jié)構(gòu))的條件下接觸(例如，在乙腈/TE緩沖液(例如，約90/10wt%至約50/5(^%,例如，約90/10wt%至約70/30wt%,例如，約80/20wt% )中)，以及，c)使中間體復(fù)合物與第二多個(gè)親水-疏水聚合物(例如，PEG-PLGA)和第二多個(gè)疏水聚合物(例如，PLGA)在允許形成粒子的條件下接觸(例如，在乙腈/TE緩沖液(例如，約至約 50/50wt%,例如，約至約 70/30wt%,例如，約 80/20wt% )中)，由此形成粒子。在一些實(shí)施方案中，中間體粒子a)的直徑小于lOOnm。在一些實(shí)施方案中，粒子的直徑小于150nm。在一些實(shí)施方案中，在步驟b)中添加共價(jià)連接至疏水聚合物的多個(gè)陽離子部分。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種步驟a)的反應(yīng)混合物，或其組合物或藥物制劑。
`
另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種步驟b)的反應(yīng)混合物，或其組合物或藥物制劑。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種通過上述方法制成的粒子。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種包含通過上述方法制成的粒子的組合物(例如,藥物組合物)。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種本文描述的組合物(例如，藥物組合物)，所述組合物當(dāng)被施用至受試者使時(shí)使得靶基因的表達(dá)的減少程度與用以不同于粒子或綴合物(即，不以粒子的形式，例如，未包埋于粒子中或綴合至聚合物，例如，本文描述的粒子中)的制劑施用至受試者的核酸試劑觀察到的靶基因的表達(dá)的減少程度或在不存在施用核酸試劑或其它治療劑的情況下觀察到的靶基因的表達(dá)的減少程度相比高至少10%、20%、50%,75%,80%,90%,100%,200%^； 500%。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是RNA、DNA或RNA與DNA的混合聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，RNA是mRNA或siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，DNA是cDNA或基因組DNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是單鏈的并且在另一個(gè)實(shí)施方案中它包含兩條鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑可以具有由一個(gè)或兩個(gè)分子的鏈構(gòu)成的雙鏈區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是抑制基因表達(dá)的試劑，例如，促進(jìn)RNAi的試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑選自由siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或微RNA (miRNA)組成的組。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是miRNA拮抗劑或適體。
在一些實(shí)施方案中，減少是與未經(jīng)組合物或游離核酸試劑治療的對(duì)照樣品相比的減少。在一些實(shí)施方案中，游離地施用的組合物和核酸試劑是在類似條件下施用。在一些實(shí)施方案中，施用至受試者的粒子組合物中的核酸試劑的量例如就重量或分子數(shù)而言與游離地施用的核酸試劑的量相同。在一些實(shí)施方案中，靶基因是熒光蛋白，例如，GFP或RFP。在一些實(shí)施方案中，靶基因是編碼包含標(biāo)記(例如，熒光部分，例如，GFP或RFP)的融合蛋白的融合基因。在一些實(shí)施方案中，在施用一定劑量的組合物或游離核酸試劑之后I分鐘、10分鐘、60分鐘、2小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、2天或7天時(shí)測(cè)量減少。在一些實(shí)施方案中，受試者是小鼠、大鼠、狗或人中的任何一種。在一些實(shí)施方案中，受試者是小鼠，靶基因是GFP，并且GFP是在植入小鼠體內(nèi)的海拉細(xì)胞中表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，靶基因是在植入小鼠體內(nèi)的MDA-MB-231GFP或MDA-MB-468GFP細(xì)胞中表達(dá)。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種本文描述的組合物(例如，藥物組合物)，所述組合物當(dāng)與培養(yǎng)細(xì)胞接觸時(shí)，使得:靶基因的表達(dá)的減少程度與游離地施用至受試者的核酸試劑(其可以是DNA試劑、RNA試劑，例如，促進(jìn)RNAi的試劑或微RNA、siRNA、shRNA、反義寡核苷酸、miRNA拮抗劑、適體、基因組DNA、cDNA、mRNA或質(zhì)粒)所觀察到的減少程度相比高至少 10%,20%,25%,30%,40%,50%,60%,60%,80%,90% ,100%,200%,300%,400%或 500%。在一些實(shí)施方案中，減少是與未經(jīng)組合物或游離核酸試劑治療的對(duì)照樣品相比的減少。在一些實(shí)施方案中，游離地施用的組合物和核酸試劑是在類似條件下與細(xì)胞接觸。在一些實(shí)施方案中，與培養(yǎng)細(xì)胞接觸的粒子組合物中的核酸試劑的量例如就重量或分子數(shù)而言與游離地接觸的量相同。在一些實(shí)施方案中，靶基因是熒光蛋白，例如，GFP或RFP。在一些實(shí)施方案中，靶基因是編碼包含標(biāo)記(例如，熒光部分，例如，GFP或RFP)的融合蛋白的融合基因。在一些實(shí)施方案中，在與培養(yǎng)細(xì)胞接觸之后10分鐘、60分鐘、2小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、2天或7天時(shí)測(cè)量減少。在一些實(shí)施方案中，培養(yǎng)細(xì)胞是海拉細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，培養(yǎng)細(xì)胞是MDA-MB-23IGFP細(xì)胞或MDA-MB-468GFP細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，靶基因是GFP并且通過使組合物的等分部分與用GFP轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)海拉細(xì)胞接觸、使游離核酸試劑的等分部分與用GFP轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)海拉細(xì)胞接觸并且評(píng)價(jià)每個(gè)中GFP活性的水平來測(cè)定靶基因表達(dá)的減少。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種本文描述的組合物(例如，藥物組合物)，所述組合物當(dāng)在血清或細(xì)胞裂解液中孵育并且然后與培養(yǎng)細(xì)胞接觸時(shí)保留至少
25 %、30 %、40 %、50 %、60 %、60 %、80 %、90 %或100 %的粒子的對(duì)照組合物(例如，未用血清或細(xì)胞裂解液孵育過的組合物，例如，在生理PH緩沖液中在其它方面類似的條件下孵育過的組合物)當(dāng)與培養(yǎng)細(xì)胞接觸時(shí)減少靶基因表達(dá)的能力。在一些實(shí)施方案中，減少是與未經(jīng)組合物或游離核酸試劑治療的對(duì)照樣品相比的減少。在一些實(shí)施方案中，在血清或細(xì)胞裂解液中孵育10分鐘、20分鐘、30分鐘、I小時(shí)、2小時(shí)、5小時(shí)、24小時(shí)、2天、3天、5天或10天。在一些實(shí)施方案中，靶基因是熒光蛋白，例如，GFP或RFP。在一些實(shí)施方案中，靶基因是編碼包含標(biāo)記(例如，熒光部分，例如，GFP或RFP)的融合蛋白的融合基因。在一些實(shí)施方案中，靶基因是GFP并且通過使組合物的等分部分與用GFP轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)海拉細(xì) 胞接觸、使游離核酸試劑的等分部分與用GFP轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)海拉細(xì)胞接觸并且評(píng)價(jià)每個(gè)中GFP活性的水平來測(cè)定靶基因表達(dá)的減少。在一些實(shí)施方案中，使組合物和游離地施用的核酸試劑(其可以是DNA試劑、RNA試劑，例如，促進(jìn)RNAi的試齊[J，微RNA、siRNA, shRNA、反義寡核苷酸、miRNA拮抗劑、適體、基因組DNA、cDNA、mRNA或質(zhì)粒)在類似條件下與細(xì)胞接觸。在一些實(shí)施方案中，與培養(yǎng)細(xì)胞接觸的粒子組合物中的核酸試劑的量例如就重量或分子數(shù)而言與游離地接觸的量相同。在一些實(shí)施方案中，培養(yǎng)細(xì)胞是海拉細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，培養(yǎng)細(xì)胞是MDA-MB-231GFP細(xì)胞或MDA-MB-468GFP細(xì)胞。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種本文描述的組合物(例如，藥物組合物)，所述組合物當(dāng)在血清中孵育并且然后與培養(yǎng)細(xì)胞接觸時(shí)，具有至少一種以下性質(zhì):a)保留至少 10%,20%,25%,30%,40%,50%,60%,60%,80%,90%^； 100%的粒子的對(duì)照組合物(例如，未用血清孵育過的組合物，例如，在生理pH緩沖液中在其它方面類似條件下孵育過的組合物)當(dāng)與培養(yǎng)細(xì)胞接觸時(shí)減少靶基因表達(dá)的能力。b)保留至少 10%,20%,25%,30%,40%,50%,60%,60%,80%,90%^； 100%的粒子的對(duì)照組合物(例如，未用血清孵育過的組合物，例如，在生理pH緩沖液中在其它方面類似條件下孵育過的組合物)釋放完整核酸試劑的能力。在一些實(shí)施方案中，在血清中孵育10分鐘、20分鐘、30分鐘、I小時(shí)、2小時(shí)、5小時(shí)、24小時(shí)、2天、3天、5天或10天。在一些實(shí)施方案中，以不同于粒子或綴合物(即，不以粒子，例如，未包埋于粒子中或綴合至本文描述的粒子中的聚合物)的制劑施用的組合物和核酸試劑是在類似條件下與細(xì)胞接觸。在一些實(shí)施方案中，與培養(yǎng)細(xì)胞接觸的粒子組合物中的核酸試劑的量例如就重量或分子數(shù)而言與游離地接觸的量相同。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑是RNA、DNA或RNA與DNA的混合聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，RNA是mRNA或siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，DNA是cDNA或基因組DNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是單鏈的并且在另一個(gè)實(shí)施方案中它包含兩條鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑可以具有由一個(gè)或兩個(gè)分子的鏈構(gòu)成的雙鏈區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是抑制基因表達(dá)的試劑，例如，促進(jìn)RNAi的試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑選自由siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或微RNA (miRNA)組成的組。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是miRNA拮抗劑或適體。另一方面，本發(fā)明的特點(diǎn)在于一種儲(chǔ)存綴合物、粒子或組合物的方法，所述方法包括:提供安置于容器(例如，氣密或液密性容器，例如，本文描述的容器，例如，具有惰性氣體的容器，例如，頂部空間填充氬氣或氮?dú)?中的所述綴合物、粒子或組合物；儲(chǔ)存所述綴合物、粒子或組合物，例如，在預(yù)先選擇的條件下，例如，溫度，例如，本文描述的溫度；以及，將所述容器移至第二位置或從所述容器移除所述綴合物、粒子或組合物的全部或等分部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，評(píng)價(jià)綴合物、粒子或組合物，例如，核酸試劑的穩(wěn)定性或活性、物理性質(zhì)(例如，顏色、凝結(jié)、流動(dòng)或傾倒能力、或粒徑或電荷)。可以將評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，并且任選地，與所述標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)應(yīng)，將綴合物、粒子或組合物進(jìn)行分類。在一個(gè)實(shí)施方案中，綴合物、粒子或組合物以復(fù)原制劑形式儲(chǔ)存(例如，在液體中作為溶液或懸浮液)。附圖簡述

圖1A至IC描述可以用于連接本文描述的部分的示例性連接基。圖2是示出消化測(cè)定的結(jié)果的凝膠，其中用核糖核酸酶處理含有包埋(未綴合)于其中的siRNA的粒子。圖3是示出消化測(cè)定的結(jié)果的凝膠，其中用核糖核酸酶處理含有綴合至聚合物的siRNA的粒子。圖4是凝膠，其示出當(dāng)用SiEGFP粒子活體內(nèi)處理異種移植小鼠時(shí)，在異種移植小鼠中經(jīng)過工程改造以便表達(dá)EGFP的人乳腺腫瘤細(xì)胞中靶(EGFP)mRNA的特異性裂解。凝膠示出經(jīng)過處理的異種移植小鼠的腫瘤的RNA提取物中由5’ RLM RACE-PCR產(chǎn)生的裂解特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的水平。圖5示出接觸根據(jù)實(shí)施例61a和實(shí)施例32a制備的粒子的人全血樣品中的C3a和Bb濃度。詳細(xì)描述本發(fā)明的應(yīng)用不限于以下描述中所示的或附圖中示出的組分的構(gòu)造和配置的細(xì)節(jié)。本發(fā)明有其它實(shí)施方案的可能性并且能夠以不同方式實(shí)施或進(jìn)行。而且，本文使用的措辭和術(shù)語是出于描述的目的并且不應(yīng)視為具有限制性。本文中“包括(including) ”、“包含(comprising) ” 或“具有(having) ”、“含有(containing) ”、“涉及(involving) ” 以及其變化形式的使用是意指包括在其之后列舉的項(xiàng)及其等同物以及其它項(xiàng)。本文描述粒子、綴合物(例如，核酸試劑-聚合物綴合物)以及組合物。還公開含有綴合物、粒子以及組合物的劑型；使用綴合物、粒子以及組合物的方法(例如，用于治療病癥)；包括綴合物、粒子以及組合物的試劑盒；制備綴合物、粒子以及組合物的方法；儲(chǔ)存綴合物、粒子以及組合物的方法；以及分析粒子和包含粒子的組合物的方法。呈現(xiàn)標(biāo)題和其它標(biāo)識(shí)符(例如，(a)、(b)、(i)等)僅是為了便于閱讀本說明書和權(quán)利要求書。本說明書和權(quán)利要求書中標(biāo)題和其它標(biāo)識(shí)符的使用并不要求步驟或要素是以字母或數(shù)字順序或以他們出現(xiàn)的順序進(jìn)行。除非如另外指明，否則本文使用的術(shù)語“環(huán)境條件”是指在約一個(gè)大氣壓、50%相對(duì)濕度和約25°C下的環(huán)境條件。本文所用的關(guān)于第一部分與第二部分的關(guān)系的術(shù)語“連接”(例如，試劑連接至聚合物)是指第一部分與第二部分之間形成共價(jià)鍵。在相同上下文中，名詞“連接(attachment) ”是指第一與第二部分之間的共價(jià)鍵。例如，連接至聚合物的核酸試劑是治療齊IJ，在這種情況下核酸試劑共價(jià)鍵合至聚合物(例如，本文描述的疏水聚合物)。連接可以是直接連接，例如，通過第一部分與第二部分的直接鍵，或可以是通過連接基(例如，通過安置于第一和第二部分之間的一個(gè)或多個(gè)原子的共價(jià)連接鏈)。例如，當(dāng)連接是通過連接基時(shí)，第一部分(例如，藥物)共價(jià)鍵合至連接基，所述連接基進(jìn)而共價(jià)鍵合至第二部分(例如，本文描述的疏水聚合物)。術(shù)語“生物可降解的”包括意欲在使用期間降解的聚合物、組合物以及制劑，如本文所描述者。生物可降解聚合物通常不同于非生物可降解聚合物，在于前者可以在使用期間降解。在某些實(shí)施方案中，此類使用涉及活體內(nèi)使用，如活體內(nèi)療法，并且在其它某些實(shí)施方案中，此類使用涉及活體外使用。一般而言，可歸因于生物可降解性的降解涉及生物可降解聚合物降解成它的組分亞單位，或聚合物消化(例如，通過生化過程)成更小的非聚合物亞單位。在某些實(shí)施方案中，通常可以鑒定兩種不同類型的生物降解。例如，一種類型的生物降解可能涉及聚合物主鏈中的鍵(無論是共價(jià)或其它形式)的裂解。在這類生物降解中，通常產(chǎn)生單體和寡聚物，并且甚至更通常，這類生物降解通過連接聚合物的一個(gè)或多個(gè)亞單位的鍵的裂解而發(fā)生。相比之下，另一類型的生物降解可能涉及側(cè)鏈的內(nèi)部或?qū)?cè)鏈連接至聚合物主鏈的鍵(無論是共價(jià)或其它形式)的裂解。在某些實(shí)施方案中，一種或另一種或兩種一般類型的生物降解可以在聚合物使用期間發(fā)生。本文所用的術(shù)語“生物降解”包括以上描述的生物降解的兩種一般類型?？缮锝到獾木酆衔锏慕到馑俾式?jīng)常部分地取決于多種因素，包括造成任何降解的鍵的化學(xué)特性、分子量、結(jié)晶性、生物穩(wěn)定性以及此類聚合物的交聯(lián)度、聚合物的物理特性(例如，形狀和大小)、聚合物或粒子的組裝以及施用的方式和位置。例如，更大的分子量、更高的結(jié)晶度、和/或更高的生物穩(wěn)定性通常導(dǎo)致更慢的生物降解。術(shù)語“陽離子部分”是指在至少一種以下條件下具有pKa5或更大(例如，具有pKa5或更大的路易斯堿)和/或正電荷的部分:在制備本文描述的粒子期間，當(dāng)被配制成本文描述的粒子時(shí)，或在將本文描述的粒子施用至受試者之后，例如，當(dāng)在受試者體內(nèi)循環(huán)和/或在內(nèi)體中時(shí)。示例性陽離子部分包括含胺部分(例如，帶電荷的胺部分如季胺)、含胍部分(例如，帶電荷的胍如胍陽離子(quanadinium)部分)以及雜環(huán)和/或雜芳香族部分(例如，帶電荷的部分如吡啶鎗或組氨酸部分)。陽離子部分包括聚合物質(zhì)，如具有多于一個(gè)電荷的部分，例如，由部分的重復(fù)存在所促成，(例如，陽離子PVA和/或聚胺)。陽離子部分還包括兩性離子，意指同時(shí)具有正電荷和負(fù)電荷的化合物(例如，氨基酸如精氨酸、賴氨酸或組氨酸)。術(shù)語“陽離子聚合物”(例如，聚胺)是指當(dāng)配制成本文描述的粒子時(shí)具有多個(gè)正電荷(即，至少2個(gè))的聚合物(術(shù)語聚合物在下文描述)。在一些實(shí)施方案中，陽離子聚合物(例如，聚胺)具有至少3、4、5、10、15或20個(gè)正電荷。措辭“可在生理?xiàng)l件下裂解”是指當(dāng)經(jīng)受生理?xiàng)l件時(shí)具有小于約50或100小時(shí)的半衰期的鍵。例如，酶促降解可以在暴露于生理?xiàng)l件(例如，pH為約4至8的水溶液和約25°C至約37°C的溫度)后短于約五年、一年、六個(gè)月、三個(gè)月、一個(gè)月、十五天、五天、三天或一天的一段時(shí)間內(nèi)發(fā)生?！坝行Я俊被颉坝行У?.....的量”是指在向受試者施用單一劑量或多次劑量有效
治療細(xì)胞或治愈、減輕、緩解或改善病癥癥狀的聚合物-試劑綴合物、粒子或組合物的量。組合物的有效量可以根據(jù)多種因素而不同，如個(gè)體的疾病病況、年齡、性別以及體重和化合物在個(gè)體體內(nèi)引發(fā)所希望的反應(yīng)的能力。有效量還是其中治療有益作用超過組合物的任何毒性或有害作用的量。本文所用的術(shù)語“包埋”是指通過在第一部分與第二部分(例如，核酸試劑或陽離子部分與聚合物)之間形成非共價(jià)相互作用來安置第一部分和第二部分或?qū)⒌谝徊糠职仓糜诘诙糠謨?nèi)。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)提及包埋于粒子中的部分時(shí)，所述部分(例如，核酸試劑或陽離子部分)通過一種或多種非共價(jià)相互作用(如，范德華相互作用、疏水相互作用、氫鍵合、偶極-偶極相互作用、離子相互作用以及η-堆積)與粒子的聚合物或其它組分締合并且部分與粒子的聚合物或其它組分之間不存在共價(jià)鍵。包埋的部分可以完全或部分地被將它包埋于其中的聚合物或粒子圍繞。本文所用的術(shù)語“疏水”描述可以在生理離子強(qiáng)度下僅以小于約0.05mg/mL(如，約0.01mg/mL或更小)的程度溶解于水溶液中的部分。本文所用的術(shù)語“親水”描述在生理離子強(qiáng)度下在水溶液中具有至少約0.05mg/mL或更大的溶解度的部分。本文所用的術(shù)語“親水-疏水聚合物”描述包含連接至疏水部分的親水部分的聚合物。示例性親水-疏水聚合物包括嵌段共聚物(例如，親水和疏水聚合物的嵌段共聚物)。本文所用的“輕基保護(hù)基”是本領(lǐng)域中熟知的并且包括在Protecting Groups inOrganic Synthesis, T.ff.Greene 和 P.G.M.Wuts,第三版,John ffiley&Sons, 1999 中詳細(xì)描述的那些保護(hù)基，所述文獻(xiàn)的全部以引用的方式并入本文。適合的羥基保護(hù)基包括例如?；?例如，乙酰基)、三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、2，2，2-三氯乙氧基羰基(Troc)以及Cbz (Cbz)。本文用于描述核酸試劑的術(shù)語“完整的”意指核酸試劑保留使它的靶基因有效沉默所要求的足夠量的結(jié)構(gòu)。當(dāng)靶基因與完整核酸試劑接觸時(shí)，如果它的表達(dá)減少至少90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或至少10 %，則靶基因被“有效沉默”。通常，在核酸試劑(例如，siRNA)的完整制劑中，核酸試劑分子的至少60 %、70 %、80 %、90 %或全部具有與完整核酸試劑分子相同的分子量或長度。本文所用的“惰性氛圍”是指主要由惰性氣體構(gòu)成的氛圍，所述惰性氣體不與本文描述的聚合物-試劑綴合物、粒子、組合物或混合物化學(xué)反應(yīng)。惰性氣體的實(shí)例是氮?dú)?N2)、氦氣以及氬氣。本文所用的“連接基”是`將兩個(gè)或更多個(gè)部分連接在一起的部分(例如，核酸試劑或陽離子部分和聚合物如疏水聚合物、或親水-疏水聚合物或親水聚合物)。連接基具有至少兩個(gè)官能團(tuán)。例如，具有兩個(gè)官能團(tuán)的連接基可以具有能夠與部分(如核酸試劑、陽離子部分、疏水部分(如本文描述的聚合物或親水-疏水聚合物))上的官能團(tuán)反應(yīng)的第一官能團(tuán)，和能夠與第二部分(如本文描述的核酸試劑)上的官能團(tuán)反應(yīng)的第二官能團(tuán)。連接基可以具有多于兩個(gè)官能團(tuán)(例如，3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)官能團(tuán))，所述官能團(tuán)可以用于例如將多個(gè)試劑連接至一個(gè)聚合物或用于在連接基內(nèi)提供生物可裂解部分。在一些實(shí)施方案中，例如，當(dāng)連接基具有多于兩個(gè)官能團(tuán)，例如，并且連接基除將第一部分連接至第二部分的兩個(gè)官能團(tuán)之外還包括官能團(tuán)時(shí)，所述額外官能團(tuán)(例如，第三官能團(tuán))可以被安置于第一與第二基團(tuán)之間，并且在一些實(shí)施方案中，例如在生理?xiàng)l件下可以裂解。例如，連接基可以具有以下形式
0/vw0Ai^-其中是第一官能團(tuán)，例如，能夠與部分(如本文描述的核酸試劑、陽離子部分、疏水部分(如聚合物)或親水-疏水聚合物)上的官能團(tuán)反應(yīng)的官能團(tuán)；f2是第二官能團(tuán)，例如，能夠與第二部分(如本文描述的核酸試劑)上的官能團(tuán)反應(yīng)的官能團(tuán)；f3是生物可裂解官能團(tuán)，例如，本文描述的生物可裂解的鍵；并且表示連接官能團(tuán)的間隔基，例如，亞烷基(二價(jià)烷基)基團(tuán)，其中任選地，亞烷基連接基的一個(gè)或多個(gè)碳原子置換為一個(gè)或多個(gè)雜原子(例如，產(chǎn)生以下基團(tuán)中的一個(gè):硫醚、氨基、酯、醚、酮基、酰胺、硅烷基醚、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、二硫化物、雜環(huán)或雜芳香族)。取決于上下文，連接基可以指在連接至第一或第二部分(例如，核酸試劑或聚合物)中的任一者之前的連接基部分、在連接至一個(gè)部分之后但在連接至第二部分之前的連接基部分或在連接至第一部分和第二部分兩者之后存在的連接基的殘基。本文所用的術(shù)語“凍干保護(hù)劑”是指存在于凍干制劑中的物質(zhì)。通常它存在于凍干過程之前并且持續(xù)存在于所得到的凍干制劑中。通常在粒子形成之后添加凍干保護(hù)劑。如果存在濃縮步驟，例如，在粒子形成與凍干之間，則可以在濃縮步驟之前或之后添加凍干保護(hù)劑。凍干保護(hù)劑可以用于在凍干期間保護(hù)粒子，例如用于減少或防止聚集、粒子破裂和/或其它類型的損害。在一個(gè)實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是冷凍保護(hù)劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是碳水化合物。本文所用的術(shù)語“碳水化合物”是指并且包括單糖、二糖、寡糖以及多糖。在一個(gè)實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是單糖。本文所用的術(shù)語“單糖”是指不能被水解成更簡單的碳水化合物單位的單一碳水化合物單位(例如，簡單糖)。示例性單糖凍干保護(hù)劑包括葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖、核糖等。在一個(gè)實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是二糖。本文所用的術(shù)語“二糖”是指由通過糖苷鍵(例如通過1-4鍵或1-6鍵)鍵合在一起的2個(gè)單糖單位形成的化合物或化學(xué)部分。二糖可以被水解成兩個(gè)單糖。示例性二糖凍干保護(hù)劑包括蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖等。在一個(gè)實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是寡糖。本文所用的術(shù)語“寡糖”是指由通過糖苷鍵(例如通過1-4鍵或1-6鍵)鍵合在一起形成線性、支鏈或環(huán)狀結(jié)構(gòu)的3至約15個(gè)，優(yōu)選地3至約10個(gè)單糖單位形成的化合物或化學(xué)部分。示例性寡糖凍干保護(hù)劑包括環(huán)糊精、棉籽糖、松三糖、麥芽三糖、水蘇糖、阿卡波糖等。寡糖可以被氧化或還原。在一個(gè)實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是環(huán)狀寡糖。本文所用的術(shù)語“環(huán)狀寡糖”是指由通過糖苷鍵(例如通過1-4鍵或1-6鍵)鍵合在一起形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的3至約15個(gè)，優(yōu)選地6、7、8、9或10個(gè)單糖單位形成的化合物或化學(xué)部分。示例性環(huán)狀寡糖凍干保護(hù)劑包括作為離散化合物的環(huán)狀寡糖，如α環(huán)糊精、β環(huán)糊精或Y環(huán)糊精。其它示例性環(huán)狀寡糖凍干保護(hù)劑包括在更大的分子結(jié)構(gòu)中包括環(huán)糊精部分的化合物，如包含環(huán)狀寡糖部分的聚合物。環(huán)狀寡糖可以被氧化或還原，例如，被氧化成二羰基形式。本文所用的術(shù)語“環(huán)糊精部分”是指并入更大的分子結(jié)構(gòu)(如聚合物)中或是更大的分子結(jié)構(gòu)(如聚合物)的一部分的環(huán)糊精(例如，α、β或Υ環(huán)糊精)基團(tuán)。環(huán)糊精部分可以直接地或通過任選的連接基鍵合至一個(gè)或多個(gè)其它部分。環(huán)糊精部分可以被氧化或還原，例如，氧化成二羰基形式。碳水化合物凍干保護(hù)劑(例如，環(huán)狀寡糖凍干保護(hù)劑)可以是衍生的碳水化合物。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是衍生的環(huán)狀寡糖，例如，衍生的環(huán)糊精，例如，2羥丙基-β環(huán)糊精，例如，美國專利號(hào)6，407，079中公開的部分醚化的環(huán)糊精(例如，部分醚化的β環(huán)糊精)，所述專利的內(nèi)容以引用的方式并入本文。衍生的環(huán)糊精的另一個(gè)實(shí)例是β-環(huán)糊精磺丁基醚鈉。示例性凍干保護(hù)劑是多糖。本文所用的術(shù)語“多糖”是指由通過糖苷鍵(例如通過1-4鍵或1-6鍵)鍵合在一起形成線性、支鏈或環(huán)狀結(jié)構(gòu)的至少16個(gè)單糖單位形成的化合物或化學(xué)部分，并且包括包含多糖作為它們的主鏈結(jié)構(gòu)的聚合物。在主鏈中，多糖可以是線性的或環(huán)狀的。示例性多糖凍干保護(hù)劑包括糖原、淀粉酶、纖維素、葡聚糖、麥芽糊精等。術(shù)語“衍生的碳水化合物”是指至少一個(gè)原子與主題非衍生碳水化合物不同的實(shí)體。例如，代替非衍生碳水化合物上存在的-0H，衍生的碳水化合物可以具有-0X，其中X不為H?？梢酝ㄟ^化學(xué)官能化和/或取代或通過從頭合成得到衍生物-術(shù)語“衍生物”暗示著不存在基于方法的限制。術(shù)語“納米粒子”在本文用于指在至少任何一個(gè)維度(例如，x、y以及z笛卡爾維度)中的大小小于約I微米(微米(micron))(例如，小于約500nm或小于約200nm或小于約IOOnm)并且大于約5nm的材料結(jié)構(gòu)。在實(shí)施方案中，大小是小于約70nm但大于約20nm。納米粒子可以具有多種幾何形狀，例如，球形、橢圓體等。術(shù)語“納米粒子(nanoparticles) ”是用作術(shù)語“納米粒子(nanoparticle) ”的復(fù)數(shù)。術(shù)語“核酸試劑”是指任何合成的或天然存在的包括兩個(gè)或更多個(gè)核苷酸殘基的治療劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑是RNA、DNA或RNA與DNA的混合聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，RNA是mRNA或siRNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，DNA是cDNA或基因組DNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是單鏈的并且在另一個(gè)實(shí)施方案中它包含兩條鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑可以具有由一個(gè)或兩個(gè)分子的鏈構(gòu)成的雙鏈區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是抑制基因表達(dá)的試劑，例如，促進(jìn)RNAi的試劑。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑是siRNA、shRNA、反義寡核苷酸或微RNA(miRNA)。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑是miRNA拮抗劑或適體。如本文所用，“粒子多分散性指數(shù)(roi) ”或“粒子多分散性”是指粒子粒徑分布的寬度?？梢詮牡仁絇DI = 2 / 2計(jì)算粒子roi，其中ai是用于計(jì)算強(qiáng)度加權(quán)Z平均均值粒徑的第一累積量或矩并且a2是用于計(jì)算定義為多分散性指數(shù)(PdI)的參數(shù)的第二矩。I的粒子PDI是理論最大值并且將是完全平坦的粒徑分布曲線圖。本文描述的粒子的組合物可以具有小于0.5、小于0.4、小于0.3、小于0.2或小于0.1的粒子HH。本文所用的“藥學(xué)上可接受的載體或佐劑”是指可以與本文描述的聚合物-試劑綴合物、粒子或組合物一起施用至患者，并且當(dāng)以足夠用于遞送治療量的粒子的劑量施用時(shí)不會(huì)破壞其藥理學(xué)活性并且是無毒的載體或佐劑?？梢杂米魉帉W(xué)上可接受的載體的材料的一些實(shí)例包括:(I)糖，如乳糖、葡萄糖、甘露醇以及蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素和它的衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素以及乙酸纖維素；(4)黃芪膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，如可可脂和栓劑蠟；(9)油，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油以及大豆油；(10) 二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇以及聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)褐藻酸；(16)無熱原質(zhì)水；(17)等滲鹽水；(18)林格式溶液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；以及(21)藥物組合物中采用的其它無毒相容性物質(zhì)。本文所用的術(shù)語“聚合物”是給予它的如本領(lǐng)域中所用的普通含義，即，以由共價(jià)鍵連接的一個(gè)或多個(gè)重復(fù)單位(單體)為特征的分子結(jié)構(gòu)。重復(fù)單位可以全部是相同的，或在一些情況下，可以有多于一種類型的重復(fù)單元存在于聚合物內(nèi)。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是含有兩個(gè)或更多個(gè)單體的均聚物或共聚物。聚合物可以是線性的或支鏈的。
如果聚合物內(nèi)存在多于一種類型的重復(fù)單元，則聚合物是“共聚物”。應(yīng)理解，在采用聚合物的任何實(shí)施方案中，被采用的聚合物可以是共聚物。形成共聚物的重復(fù)單位可以以任何方式排列。例如，重復(fù)單位可以以隨機(jī)順序、交替順序排列或排列為“嵌段”共聚物，即，含有一個(gè)或多個(gè)各自含有第一重復(fù)單位(例如，第一嵌段)的區(qū)域，和一個(gè)或多個(gè)各自含有第二重復(fù)單位(例如，第二嵌段)的區(qū)域等。嵌段共聚物可以具有兩個(gè)(二嵌段共聚物)、三個(gè)(三嵌段共聚物)或更多數(shù)量的相異嵌段。就序列而言，共聚物可以是隨機(jī)、嵌段或含有隨機(jī)和嵌段序列的組合。在一些情況下，聚合物是從生物得到的，即，生物聚合物。生物聚合物的非限制性實(shí)例包括多肽或蛋白質(zhì)(即，不同氨基酸的聚合物)或核酸如DNA或RNA。如本文所用，“聚合物多分散性指數(shù)(roi) ”或“聚合物多分散性”是指指定聚合物樣品中分子質(zhì)量的分布。計(jì)算的聚合物PDI是重量平均分子量除以數(shù)量平均分子量。它指示一批聚合物中個(gè)體分子質(zhì)量的分布。聚合物PDI具有通常大于I的值，但隨著聚合物鏈接近均勻鏈長度，PDI接近一(I)。如本文所用，如在將試劑施用至受試者的上下文中使用的術(shù)語“預(yù)防(prevent) ”或“預(yù)防(preventing)”是指使受試者經(jīng)受方案(例如，施用聚合物-試劑綴合物、粒子或組合物)以使得與沒有方案存在的情況下所觀察到的相比，病癥的至少一種癥狀的發(fā)作延遲。

如本文所用，術(shù)語“受試者”意欲包括人和非人動(dòng)物。示例性人受試者包括患有病癥(例如，本文描述的病癥)的人患者或正常受試者。術(shù)語“非人動(dòng)物”包括所有脊椎動(dòng)物，例如，非哺乳動(dòng)物(如雞、兩棲動(dòng)物、爬行動(dòng)物)和哺乳動(dòng)物，如非人靈長類動(dòng)物、馴養(yǎng)和/或農(nóng)業(yè)上有用的動(dòng)物(例如，羊、狗、貓、牛、豬等)。如本文所用，術(shù)語“治療(treat)”或“治療(treating) ”患有病癥的受試者是指使受試者經(jīng)受方案(例如，施用聚合物-試劑綴合物、粒子或組合物)以使得病癥的至少一種癥狀被治愈、痊愈、減輕、緩解、改變、醫(yī)治、改善或改進(jìn)。治療包括施用有效地減輕、緩解、改變、醫(yī)治、改善、改進(jìn)或影響病癥或病癥的癥狀的量。治療可以抑制病癥的癥狀的劣化或惡化。術(shù)語“酸基”是指燒基擬基、環(huán)燒基擬基、芳基擬基、雜環(huán)基擬基或雜芳基擬基取代基，所述取代基中的任一者可以被進(jìn)一步取代(例如，由一個(gè)或多個(gè)取代基)。示例性?；ㄒ阴；?CH3C(O)-)、苯甲酰基(C6H5C(O)-)以及乙酰氨基酸(例如，乙酰甘氨酸，CH3C (O) NHCH2C (O)-)。術(shù)語“烷氧基”是指連接有氧基的如以下所定義的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、叔丁氧基等。術(shù)語“羧基”是指-C (O) OH或其鹽。術(shù)語“羥基(hydroxy) ”和“羥基(hydiOxyl) ”可以互換使用并且是指-0H。術(shù)語“取代基”是指在燒基、環(huán)燒基、稀基、塊基、雜環(huán)基、雜環(huán)稀基、環(huán)稀基、芳基或雜芳基的任何原子上“取代”的基團(tuán)。任何原子都可以被取代。適合的取代基包括但不限于烷基(例如，Cl、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9、CIO、C1UC12直鏈或支鏈烷基)、環(huán)烷基、
鹵烷基(例如，全氟烷基如CF3)、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基、烯基、炔基、環(huán)烯基、雜環(huán)稀基、燒氧基、齒燒氧基(例如，全氣燒氧基如OCF3)、齒代、輕基、竣基、竣酸酷基、氛基、硝基、氨基、烷基氨基、SO3H、硫酸酯基、磷酸酯基、亞甲二氧基(-O-CH2-O-其中氧連接至鄰位原子)、亞乙二氧基、氧代、硫代(例如，C = S)、亞氨基(烷基、芳基、芳烷基)、S(0)ng基(其中η是0-2)、S (O)n芳基(其中η是0-2)、S (O)n雜芳基(其中η是0_2)、S (O)n雜環(huán)基(其中η是0-2)、胺(單、二、烷基、環(huán)烷基、芳烷基、雜芳烷基、芳基、雜芳基及其組合)、酯(烷基、芳烷基、雜芳烷基、芳基、雜芳基)、酰胺(單、二、烷基、芳烷基、雜芳烷基、芳基、雜芳基及其組合)、磺酰胺(單、二、烷基、芳烷基、雜芳烷基及其組合)。一方面，基團(tuán)上的取代基獨(dú)立的是上述取代基中的任何一個(gè)單一的基團(tuán)或任何子集。另一方面，取代基本身可以被上述取代基中的任何一個(gè)取代。粒子一般而言，粒子包括核酸試劑和陽離子部分、疏水部分(如聚合物)或親水-疏水聚合物中的至少一種。在一些實(shí)施方案中，粒子包括核酸試劑和陽離子部分以及疏水部分(如聚合物)或親水-疏水聚合物中的至少一種。在一些實(shí)施方案中，本文描述的粒子包括疏水部分如疏水聚合物或脂質(zhì)(例如，疏水聚合物)、含有親水部分和疏水部分的聚合物、核酸試劑以及陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑和/或陽離子部分連接至部分。例如，核酸試劑和/或陽離子部分可以連接至聚合物(例如，疏水聚合物或含有親水部分和疏水部分的聚合物)或核酸試劑與連接至聚合物的核酸形成雙鏈體。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑連接至聚合物(例如，疏水聚合物或含有親水部分和疏水部分的聚合物)，并且陽離子部分未連接至聚合物(例如，陽離子部分包埋于粒子中)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑和陽離子部分都連接至聚合物(例如，疏水聚合物或含有親水部分和疏水部分的聚合物)或核酸試劑與連接至聚合物的核酸形成雙鏈體并且陽離子部分連接至聚合物。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分連接至聚合物(例如，疏水聚合物或含有親水部分和疏水部分的聚合物)，并且核酸試劑未連接至聚合物(例如，核酸試劑包埋于粒子中)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑和陽離子部分都未連接至聚合物。核酸試劑和/或陽離子部分還可以連接至其它部分。例如，核酸試劑可以連接至陽離子部分或連接至親水聚合物如PEG。除疏水部分如疏水聚合物或脂質(zhì)(例如，疏水聚合物)、含有親水部分和疏水部分的聚合物、核酸試劑以及陽離子部分之外，本文描述的粒子還可以包括一種或多種其它組分如其它核酸試劑或其它陽離子部分。本文描述的粒子還可以包括具有至少一個(gè)酸性部分(如羧酸基團(tuán))的化合物?；衔锟梢允蔷哂兄辽僖粋€(gè)酸性部分的小分子或聚合物。在一些實(shí)施方案中，化合物是聚合物如PLGA。在一些實(shí)施方案中，粒子配置成使得當(dāng)施用至受試者時(shí)在預(yù)先選擇的區(qū)室中存在核酸試劑(例如，siRNA)的優(yōu)先釋放。預(yù)先選擇的區(qū)室可以是靶標(biāo)部位、位置、組織類型、細(xì)胞類型(例如，疾病特異性細(xì)胞類型(例如，癌細(xì)胞))或亞細(xì)胞區(qū)室(例如，細(xì)胞溶質(zhì))。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子提供腫瘤中的優(yōu)先釋放，而不是其它區(qū)室，例如，非腫瘤區(qū)室(例如，周邊血)。在核酸試劑(例如，siRNA)連接至聚合物或陽離子部分的實(shí)施方案中，核酸試劑在受試者的腫瘤中比在受試者的非腫瘤區(qū)室(例如，周邊血)中以更大的程度釋放(例如，通過連接基的還原裂解)。在一些實(shí)施方案中，粒子配置成使得當(dāng)施用至受試者時(shí)，它比游離地施用核酸試劑時(shí)遞送更多的核酸試劑(例如，siRNA)至受試者的區(qū)室(例如，腫瘤)。在一些實(shí)施方案中，粒子與賦形劑，例如，碳水化合物組分或穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑締合，例如，本文描述的碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑。雖然不希望受理論束縛，但碳水化合物組分可以充當(dāng)穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑。在一些實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包含一種或多種碳水化合物(例如，一種或多種本文描述的碳水化合物，如，蔗糖、環(huán)糊精或環(huán)糊精的衍生物(例如2-羥丙基-β -環(huán)糊精，本文有時(shí)稱為ΗΡ-β -⑶)、鹽、PEG、PVP或冠醚。在一些實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包含兩種或更多種碳水化合物，例如，兩種或更多種本文描述的碳水化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包括環(huán)狀碳水化合物(例如，環(huán)糊精或環(huán)糊精的衍生物，例如，α環(huán)糊精、β環(huán)糊精、或Y環(huán)糊精(例如2-羥丙基-β-環(huán)糊精))和非環(huán)狀碳水化合物。示例性非環(huán)狀寡糖包括少于10、8、6或4個(gè)單糖亞單位的那些寡糖(例如，單糖或二糖(例如，蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖)或其組合)。在一個(gè)實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包含第一和第二組分，例如環(huán)狀碳水化合物和非環(huán)狀碳水化合物(例如，單糖、二糖或四糖)。在一個(gè)實(shí)施方案中，環(huán)狀碳水化合物與與粒子締合的非環(huán)狀碳水化合物的重量比是本文描述的重量比，例如，0.5:1.5至1.5: 0.5。在一個(gè)實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包含如下第一和第二組分(此處指定為A和B):(A)包含環(huán)狀碳水化合物并且(B)包含二糖；(A)包含多于一種環(huán)狀碳水化合物，例如，β -環(huán)糊精(本文有時(shí)稱為β -CD)或β -⑶衍生物(例如，HP- β -CD)，并且⑶包
含二糖；(A)包含環(huán)狀碳水化合物，例如，β -⑶或β -⑶衍生物(例如，HP- β -⑶)，并且(B)包含多于一種二糖；(A)包含多于一種環(huán)狀碳水化合物，并且(B)包含多于一種二糖；(A)包含環(huán)糊精，例如，β -⑶或β -⑶衍生物(例如，HP- β -CD)，并且⑶包含二糖；(A)包含β -環(huán)糊精，例如，β -CD衍生物(例如，HP- β -CD)，并且(B)包含二糖；(A)包含β -環(huán)糊精，例如，β -⑶衍生物(例如，HP- β -CD)，并且⑶包含蔗糖；(A)包含β -⑶衍生物，例如，HP- β -CD，并且⑶包含蔗糖；(A)包含β -環(huán)糊精，例如，β -CD衍生物(例如，HP- β -CD)，并且(B)包含海藻糖；(A)包含β -環(huán)糊精，例如，β -⑶衍生物(例如，HP- β -CD)，并且⑶包含蔗糖和
海藻糖；(A)包含HP- β -⑶，并且(B)包含蔗糖和海藻糖。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A和B以以下比率存在:0.5:1.5至1.5: 0.5。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A和B以以下比率存在:3-1: 0.4-2 ；3-1: 0.4-2.5 ;3_1: 0.4-2;3-1: 0.5-1.5 ；3-1: 0.5-1 ；3-1: I ;3_1: 0.6-0.9 ;以及 3: I: 0.7。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A和B以以下比率存在:2-1: 0.4-2 ；3-1: 0.4-2.5 ;2_1: 0.4-2;2-1: 0.5-1.5 ；2-1: 0.5-1;2-1: I ；2~1: 0.6-0.9;以及 2:1: 0.7。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分 A 和 B 以以下比率存在:2-1.5: 0.4-2;2-1.5: 0.4-2.5 ;2_1.5: 0.4-2;2-1.5: 0.5-1.5 ；2-1.5: 0.5-1 ;2_1.5: I ;2_1.5: 0.6-0.9 ；2:1.5: 0.7。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A和B以以下比率存在:2.5-1.5: 0.5-1.5 ;2.2-1.6: 0.7-1.3 ；2.0-1.7: 0.8-1.2 ；1.8: I ；1.85: I 以及1.9: I。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A包含環(huán)糊精，例如，β-環(huán)糊精，例如，β_⑶衍生物(例如，ΗΡ-β-⑶)，并且(B)包含蔗糖，并且它們以以下比率存在:2.5-1.5: 0.5-1.5 ；2.2-1.6: 0.7-1.3 ;2.0-1.7: 0.8-1.2 ；1.8: I ；1.85: I 以及1.9: I。在一些實(shí)施方案中，粒子是納米粒子。在一些實(shí)施方案中，納米粒子具有小于或等于 220nm(例如，小于或等于約 215nm、210nm、205nm、200nm、195nm、190nm、185nm、180nm、175nm、170nm、165nm、160nm、155nm、150nm、145nm、140nm、135nm、130nm、125nm、120nm、I15nm、llOnm、105nm、100nm、95nm、90nm、85nm、80nm、75nm、70nm、65nm、60nm、55nm 或 50nm)的直徑。在一個(gè)實(shí)施方案中，納米粒子具有至少IOnm(例如，至少約20nm)的直徑。本文描述的粒子還可以包括靶向劑或脂質(zhì)(例如，在粒子的表面上)。本文描述的多個(gè)粒子的組合物可以具有約50nm至約500nm的平均直徑(例如，約50nm至約`200nm)。多個(gè)粒子粒子的組合物可以具有約50nm至約220nm(例如，約75nm至約200nm)的中值粒徑(約50nm至約500nm (例如，約75nm至約220nm)的Dv50 (存在50%的粒子體積低于該粒徑))。多個(gè)粒子的組合物可以具有約50nm至約500nm(例如,約75nm至約220nm)的Dv90 (存在90%的粒子體積低于該粒徑)。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)粒子的組合物具有小于約150nm的Dv90。多個(gè)粒子的組合物可以具有小于0.5、小于0.4、小于0.3、小于0.2或小于0.1的粒子roi。當(dāng)在水中測(cè)量時(shí)，本文描述的粒子可以具有約-20mV至約50mV范圍內(nèi)的表面ζ電位。電位是粒子的表面電位的測(cè)量值。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)在水中測(cè)量時(shí)，粒子可以具有約-20mV至約20mV、約-1OmV至約IOmV之間的范圍內(nèi)或中性的表面ζ電位。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物具有足以在施用時(shí)例如在活體內(nèi)模型系統(tǒng)(例如，小鼠模型如本文描述的任何模型)中觀察到作用(例如，敲低)的量的核酸試劑(例如，siRNA)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物是按數(shù)量或重量計(jì)它的核酸試劑(例如，siRNA)的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%是完整的(例如，如通過物理特性的功能性所測(cè)量，例如，分子量)的粒子或組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物是按數(shù)量或重量計(jì)它的核酸試劑(例如，siRNA)的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%是在粒子的內(nèi)部，而不是暴露在粒子的表面的粒子或組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在50/50小鼠/人血清中孵育時(shí)，本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物顯示出很少或沒有聚集。例如，當(dāng)孵育時(shí)，按數(shù)量或重量計(jì)少于30%、20%或10%的粒子將會(huì)聚集。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在25°C ±2°C /60%相對(duì)濕度±5%相對(duì)濕度下在敞開或密閉容器中儲(chǔ)存20、30、40、50或60天時(shí)，本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物可以保留它的活性的至少30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或95 %，例如，如在活體內(nèi)模型系統(tǒng)中所測(cè)定，(例如，小鼠模型如本文描述的任何模型)。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在活體內(nèi)模型系統(tǒng)(例如，小鼠模型如本文描述的任何模型)中作為lmg/kg或3mg/kg的單一劑量施用時(shí),本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物可以導(dǎo)致蛋白質(zhì)減少至少20 %、30 %、40 %、50 %或60 %和/或mRNA敲低。
在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在活體內(nèi)模型系統(tǒng)(例如，小鼠模型如本文描述的任何模型)中(例如，作為lmg/kg或3mg/kg的單一劑量)施用時(shí),如通過蛋白質(zhì)或mRNA所測(cè)量，本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物導(dǎo)致針對(duì)脫靶基因少于的敲低或沒有敲低。在一些實(shí)施方案中，本文描述的粒子可以遞送有效量的核酸試劑以使得在將粒子施用至受試者之后大約72小時(shí)、96小時(shí)、120小時(shí)、144小時(shí)、168小時(shí)、192小時(shí)、216小時(shí)、240小時(shí)、264小時(shí)受試者體內(nèi)的靶基因的表達(dá)減少至少20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或更多。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的粒子可以遞送有效量的核酸試劑以使得在將粒子施用至受試者之后大約120小時(shí)受試者體內(nèi)的靶基因的表達(dá)減少至少50 %、55 %、60 %、65 %、70 %、75 %或80 %。在一些實(shí)施方案中，將施用了本文描述的粒子或組合物的受試者體內(nèi)的靶基因表達(dá)的水平與當(dāng)核酸試劑以不同于粒子或綴合物(即，不以粒子的形式，例如，未包埋于粒子中或綴合至聚合物，例如，本文描述的粒子)的制劑施用時(shí)觀察到的靶基因的表達(dá)的水平或與在不存在施用核酸試劑或其它治療劑的情況下觀察到的靶基因的表達(dá)的水平進(jìn)行比較。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)與靶基因mRNA接觸時(shí)，本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物導(dǎo)致mRNA裂解。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在活體內(nèi)模型系統(tǒng)(例如，小鼠模型如本文描述的任何模型)中(例如，作為lmg/kg或3mg/kg的單一劑量)施用時(shí),本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物造成小于2、5或10倍的細(xì)胞因子誘導(dǎo)。例如，施用造成以下各項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)(例如二、三、四、五、六或七個(gè)或全部)小于2、5或10倍的因子誘導(dǎo):腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素-1 α、白細(xì)胞介素-1 β、白細(xì)胞介素_6、白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-12、角質(zhì)化細(xì)胞衍生的細(xì)胞因子以及干擾素Y。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)在活體內(nèi)模型系統(tǒng)(例如，小鼠模型如本文描述的任何模型)中(例如，作為lmg/kg或3mg/kg的單一劑量)施用時(shí),本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物造成丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)小于2、5或10倍的增加。在一個(gè)實(shí)施方案中，在活體內(nèi)模型系統(tǒng)(例如，小鼠模型如本文描述的模型)中2次劑量的3mg/kg之后48小時(shí)，本文描述的粒子或包含多個(gè)粒子的組合物沒有造成血細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著變化。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子在非極性有機(jī)溶劑(例如，己烷、氯仿或二氯甲烷中的任何一種)中是穩(wěn)定的。舉例而言，粒子大致上不會(huì)轉(zhuǎn)化，例如，如果存在，外層不會(huì)內(nèi)化，或大量的表面組分相對(duì)于它們?cè)谒匀軇┲械臉?gòu)型會(huì)內(nèi)化。在實(shí)施方案中，組分的分布在非極性有機(jī)溶劑和在水性溶劑中是大致上相同的。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子缺乏膠束的至少一種組分，例如，它缺乏大致上不含親水組分的核心。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子的核心包含大量親水組分。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子的核心包含大量(例如，(按重量或數(shù)量計(jì))至少10%、20%、30%、40%、50%、60%或70%)粒子的核酸試劑(例如，siRNA)。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子的核心包含大量(例如，(按重量或數(shù)量計(jì))至少10%、20%、30%、40%、50%、60%或70% )粒子的陽離子(例如，聚陽離子)部分。本文描述的粒子可以包括少量殘留溶劑，例如，在制備粒子中使用的溶劑如丙酮、叔丁基甲基醚、芐醇、二噁烷、庚烷、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙酸乙酯、乙腈、四氫呋喃、乙醇、甲醇、異丙醇、甲基乙基酮、乙酸丁酯或乙酸丙酯(例如，乙酰乙酸異丙酯)。在一些實(shí)施方案中，粒子可以包括小于5000ppm的溶劑(例如，小于4500ppm、小于 4000ppm、小于 3500ppm、小于 3000ppm、小于 2500ppm、小于 2000ppm、小于 1500ppm、小于lOOOppm、小于 500ppm、小于 250ppm、小于 lOOppm、小于 50ppm、小于 25ppm、小于 lOppm、小于5ppm、小于2ppm或小于Ippm)。在一些實(shí)施方案中，粒子大致上不含如由美國衛(wèi)生及公共服務(wù)部食品與藥品管理局“Q3c-表和列表”定義的II類或III類溶劑。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的丙酮。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的叔丁基甲基醚。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的庚烷。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于600ppm的二氯甲烷。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于880ppm的二甲基甲酰胺。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的乙酸乙酯。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于410ppm的乙腈。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于720ppm的四氫呋喃。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的乙醇。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于3000ppm的甲醇。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的異丙醇。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的甲基乙基酮。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的乙酸丁酯。在一些實(shí)施方案中，粒子包含小于5000ppm的乙酸丙酯。本文描述的粒子可以包括不同量的疏水部分(如疏水聚合物)，例如，粒子的或用作制備粒子的起始材料的約20重量％至約90重量％ (例如，約20重量％至約80重量％、約25重量％至約75重量％或約30重量％至約70重量％ )。本文描述的粒子可以包括不同量的含有親水部分和疏水部分的聚合物，例如，高達(dá)粒子的或用作制備粒子的起始材料的約50重量％ (例如，約4重量％至約50重量％、約5重量％、約8重量％、約10重量％、約15重量％、約20重量％、約23重量％、約25重量％、約30重量％、約35重量％、約40重量％、約45重量％或約50重量％中的任何一個(gè))。例如，粒子的疏水-親水聚合物的重量百分比是約3%至約30%、約5%至約25%或約8%至約 23%。在本文描述的粒子中，疏水聚合物與疏水-親水聚合物的比率使得粒子包含具有疏水部分和親水部分的粒子的或用作制備所述粒子的起始材料的聚合物的至少5重量％、8重量％、10重量％、12重量％、15重量％、18重量％、20重量％、23重量％、25重量％或30
重量％。本文描述的粒子可以包括不同量的陽離子部分，例如，粒子的或用作制備粒子的起始材料的約0.1重量％至約60重量％ (例如，約I重量％至約60重量％、約2重量％至約20重量％、約3重量％至約30重量％、約5重量％至約40重量％或約10重量％至約30重量％)。當(dāng)陽離子部分是含氮部分時(shí)，粒子中氮部分與粒子中核酸試劑主鏈的磷酸酯的比率(即，N/P比率)可以是約1:1至約50:1 (例如，約1:1至約25:1、約1:1至約10:1、約1:1至約5: I或約1:1至約1.5至1:1)。本文描述的粒子可以包括不同量的核酸試劑，例如，粒子的或用作制備粒子的起始材料的約0.1重量％至約50重量％ (例如，約I重量％至約50重量％、約0.5重量％至約20重量％、約2重量％至約20重量％、約或約5重量％至約15重量％ )。當(dāng)粒子包括表面活性劑時(shí)，粒子可以包括不同量的表面活性劑，例如，高達(dá)粒子的或用作制備粒子的起始材料的約40重量％ ,或約15重量％至約35重量％或約3重量％至約10重量％。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑是PVA并且陽離子部分是陽離子PVA。在一些實(shí)施方案中，粒子可以包括約2 %至約5 %的PVA (例如，約4 % )和約0.1 %至約3 %的陽離子PVA (例如，約1% )。本文描述的粒子可以大致上不含靶向劑(例如，共價(jià)連接至粒子中的組分的靶向齊U，例如，能夠結(jié)合靶生物實(shí)體或以其它方式與靶生物實(shí)體締合的靶向劑，所述靶生物實(shí)體為例如膜組分、細(xì)胞表面受體、前列腺特異性膜抗原等)。本文描述的粒子可以大致上不含選自以下的靶向劑:核酸適體、生長因子、激素、細(xì)胞因子、白細(xì)胞介素、抗體、整聯(lián)蛋白、纖連蛋白受體、P-糖蛋白受體、肽以及細(xì)胞結(jié)合序列。在一些實(shí)施方案中，粒子內(nèi)無聚合物綴合至靶向部分。本文描述的粒子可以不含出于使粒子選擇性地靶向至受試者體內(nèi)的部位的目的而添加的部分，例如，通過使用對(duì)于受試者體內(nèi)的靶標(biāo)具有高度特異性親和力的粒子上的部分。在一些實(shí)施方案中，粒子不含脂質(zhì)，例如，不含磷脂。本文描述的粒子可以大致上不含能減少水滲透至納米粒子中的兩親性層。本文描述的粒子可以包含小于5%或10%(例如，如根據(jù)《/V、v/v所確定)的脂質(zhì)，例如，磷脂。本文描述的粒子可以大致上不含脂質(zhì)層，例如，磷脂層，例如，能減少水滲透至納米粒子中的脂質(zhì)層。本文描述的粒子可以大致上不含脂質(zhì)，例如，大致上不含磷脂。本文描述的粒子可以大致上不含放射性藥劑，例如，放射性治療劑、放射性診斷齊U、預(yù)防劑或其它放射性同位素。本文描述的粒子可以大致上不含免疫調(diào)節(jié)劑，例如，免疫刺激劑或免疫抑制劑。本文描述的粒子可以大致上不含疫苗或免疫原，例如，肽、糖、基于脂質(zhì)的免疫原、B細(xì)胞抗原或T細(xì)胞抗原。本文描述的粒子可以大致上不含水溶性疏水聚合物，如PLGA，例如，分子量小于約IkDa (例如，小于約500Da)的PLGA0示例性粒子一種示例性粒子包括包含以下的粒子:a)多個(gè)疏水部分，例如，疏水聚合物；b)多個(gè)親水-疏水聚合物；c)任選地，多個(gè)陽離子部分；以及d)多個(gè)核酸試劑，其中多個(gè)核酸試劑中的至少一部分(i)共價(jià)連接至以下中的任一者:疏水部分，例如，a)的疏水聚合物)或b)的親水-疏水聚合物，或(ii)與共價(jià)連接至疏水部分(例如，a)的疏水聚合物)或b)的親水-疏水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)。另一種示例性粒子包括包含以下的粒子:a)多個(gè)核酸試劑-聚合物綴合物，每個(gè)所述綴合物包含核酸試劑，所述核酸試劑
(i)連接至疏水聚合物或(ii)與共價(jià)連接至疏水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)；b)多個(gè)親水-疏水聚合物；以及c)任選地，多個(gè)陽離子部分。另一種示例性粒子包括包含以下的粒子:a)多個(gè)疏水部分，例如，疏水聚合物；b)多個(gè)核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物，其中所述多個(gè)的各核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物的核酸試劑(i)共價(jià)連接至親水-疏水聚合物或(ii)與共價(jià)連接至親水-疏水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)；以及c)任選地，多個(gè)陽離子部分。

另一種示例性粒子包括包含以下的粒子:a)多個(gè)疏水部分，例如，疏水聚合物；b)多個(gè)親水-疏水聚合物；c)多個(gè)陽離子部分，其中多個(gè)陽離子部分中的至少一部分連接至a)的疏水聚合物或b)的親水-疏水聚合物；以及d)多個(gè)核酸試劑。另一種示例性粒子包括包含以下的粒子:a)多個(gè)疏水部分(例如，疏水聚合物);b)多個(gè)親水-疏水聚合物；c)任選地，多個(gè)陽離子部分；以及d)多個(gè)核酸試劑；其中c)的陽離子部分的大部分和d)的核酸試劑的大部分未共價(jià)連接至疏水聚合物或親水-疏水聚合物。例如，核酸試劑或陽離子部分包埋于粒子中。另一種示例性粒子包括包含以下的粒子:a)多個(gè)疏水部分，例如，疏水聚合物；b)任選地多個(gè)親水-疏水聚合物；c)多個(gè)陽離子部分；以及d)多個(gè)核酸試劑,其中多個(gè)核酸試劑中的至少一部分共價(jià)連接至疏水聚合物或與共價(jià)連接至親水聚合物的核酸形成雙鏈體(例如，異源雙鏈體)。另一種示例性粒子包括包含以下的粒子:a)多個(gè)疏水部分，例如，疏水聚合物；b)多個(gè)親水-疏水聚合物；以及c)多個(gè)核酸試劑-陽離子聚合物綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑未連接(例如，共價(jià)連接)至疏水聚合物或親水-疏水聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，粒子中或用作制備粒子的起始材料的核酸試劑的小于5重量％、2重量％或I重量％連接至疏水聚合物或親水-疏水聚合物。另一種示例性粒子包括多個(gè)核酸試劑聚合物綴合物；多個(gè)陽離子聚合物或脂質(zhì)；以及多個(gè)聚合物或脂質(zhì)，其中聚合物或脂質(zhì)大致上圍繞多個(gè)核酸試劑-聚合物綴合物，例如，所述核酸試劑大致上在粒子的內(nèi)部，而不在粒子的表面。疏水部分疏水聚合物本文描述的粒子可以包括疏水聚合物。疏水聚合物可以連接至核酸試劑和/或陽離子部分以形成綴合物(例如，核酸試劑-疏水聚合物綴合物或陽離子部分-疏水聚合物綴合物)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑與連接至疏水化合物的核酸形成雙鏈體。在一些實(shí)施方案中，疏水聚合物未連接至另一部分。粒子可以包括多個(gè)疏水聚合物，例如其中一些連接至另一部分如核酸試劑和/或陽離子部分并且一些是游離的。示例性疏水聚合物包括以下:丙烯酸酯，包括丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸正丁酯(BA)、丙烯酸異丁酯、丙烯酸2-乙酯以及丙烯酸叔丁酯；甲基丙烯酸酯，包括甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸正丁酯以及甲基丙烯酸異丁酯；丙烯腈；甲基丙烯腈；乙烯基化合物，包括乙酸乙烯酯、叔碳酸乙烯酯、丙酸乙烯酯、乙烯基甲酰胺、乙烯基乙酰胺、乙稀基卩比唳以及乙稀基咪唑；氣基燒基化合物，包括丙稀酸氣基燒基酷、甲基丙稀酸氣基燒基酯以及氨基烷基(甲基)丙烯酰胺；苯乙烯；乙酸鄰苯二甲酸纖維素；乙酸琥珀酸纖維素；鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素；聚(D，L-丙交酯)；聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)；聚(乙交酯)；聚(羥基丁酸酯)；聚(烷基碳酸酯)；聚(原酸酯)；聚酯；聚(羥基戊酸)；聚二噁烷酮；聚(對(duì)苯二甲酸乙二酯)；聚(蘋果酸)；聚(丙醇二酸)；聚酐；聚磷腈；聚(氨基酸)以及它們的共聚物(大體上參見，Svenson, S (編著)., Polymeric DrugDelivery:第 I 卷:Particulate Drug Carriers.2006 ；ACS 研討會(huì)叢書；Ami ji, M.M(編著).，Nanotechnology for Cancer Therapy.2007 ；Taylor&Francis Group, LLP ;Nair 等Prog.Polym.Sc1.(2007)32 =762-798);基于疏水性肽的聚合物和基于聚(L-氨基酸)的共聚物(Lavasanifar,A.,等，Advanced Drug Delivery Reviews (2002) 54: 169-190);聚(乙烯-乙酸乙烯酯)(“EVA”)共聚物；硅橡膠；聚乙烯；聚丙烯；聚二烯(聚丁二烯、聚異戊二烯以及這些聚合物的氫化形式)；乙烯甲基醚和其它乙烯基醚的馬來酸酐共聚物；聚酰胺(尼龍6，6);聚氨酯；聚(酯聚氨酯)；聚(醚聚氨酯)；以及聚(酯-脲)?？捎糜谥苽浔疚?描述的聚合物-試劑綴合物或粒子的疏水聚合物還包括可生物降解的聚合物。可生物降解的聚合物的實(shí)例包括聚丙交酯、聚乙交酯、基于己內(nèi)酯的聚合物、聚(己內(nèi)酯)、聚二噁烷酮、聚酐、聚胺、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚二噁烷酮、聚縮醛、聚縮酮、聚碳酸酯、聚磷酸酯、聚酯、聚對(duì)苯二甲酸丁二酯、聚原碳酸酯、聚磷腈、琥珀酸酯、聚(蘋果酸)、聚(氨基酸)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚乙二醇、聚羥基纖維素、多糖、幾丁質(zhì)、殼聚糖和透明質(zhì)酸及其共聚物、三聚物以及混合物?？缮锝到獾木酆衔镞€包括共聚物(包括基于已內(nèi)酯的聚合物、聚己內(nèi)酯)和包括聚對(duì)苯二甲酸丁二酯的共聚物。在一些實(shí)施方案中，聚合物是從選自由以下組成的組的單體合成的聚酯:D，L-丙交酯、D-丙交酯、L-丙交酯、D，L_乳酸、D-乳酸、L-乳酸、乙交酯、乙醇酸、ε-己內(nèi)酯、ε-羥基己酸、Y-丁內(nèi)酯、Y-羥基丁酸、δ-戊內(nèi)酯、δ-羥基戊酸、羥基丁酸以及蘋果酸。還可以在本文描述的聚合物-試劑綴合物或粒子中使用共聚物。在一些實(shí)施方案中，聚合物可以是PLGA，其是乳酸和乙醇酸的可生物降解的無規(guī)共聚物。PLGA聚合物可以具有不同比率的乳酸:乙醇酸，例如，范圍為約0.1: 99.9至約99.9: 0.1(例如，約75: 25至約25: 75、約60: 40至40: 60或約55: 45至45: 55)。在一些實(shí)施方案中，例如，在PLGA中，乳酸單體與乙醇酸單體的比率是50: 50,60: 40或75: 25。在具體實(shí)施方案中，通過優(yōu)化聚合物-試劑綴合物或粒子中的PLGA聚合物中乳酸單體與乙醇酸單體的比率，可以優(yōu)化參數(shù)如吸水率、試劑釋放(例如，“控釋”)以及聚合物降解動(dòng)力學(xué)。此外，調(diào)整比率還將影響共聚物的疏水性，這將進(jìn)而影響藥物負(fù)載。在可生物降解的聚合物還具有核酸試劑或其它材料(如連接至它的陽離子部分或與連接至它的核酸形成雙鏈體的核酸試劑)的某些實(shí)施方案中，此類聚合物的生物降解速率可以由此類材料的釋放速率表征。在此類情況下，生物降解速率不僅可以取決于聚合物的化學(xué)特性和物理特征，而且還可以取決于連接至其上的材料的特性。主題組合物的降解不僅包括分子內(nèi)鍵的裂解(例如，通過氧化和/或水解)，而且還包括分子間鍵的破壞(如，通過與外來包含主體形成競(jìng)爭性復(fù)合物而使主體/客體復(fù)合物解離)。在一些實(shí)施方案中，可以通過粒子中的額外組分(例如，具有至少一個(gè)酸性部分的化合物(例如，游離酸PLGA))影響釋放。在某些實(shí)施方案中，包含一種或多種聚合物(如疏水聚合物)的粒子在所希望的應(yīng)用中可接受的一段時(shí)期內(nèi)生物降解。在某些實(shí)施方案中，如活體內(nèi)療法中，在暴露至PH在4與8之間且溫度在25°C與37°C之間的生理溶液時(shí)在通常短于約五年、一年、六個(gè)月、三個(gè)月、一個(gè)月、十五天、五天、三天或甚至一天的一段時(shí)期內(nèi)發(fā)生這種降解。在其它實(shí)施方案中，取決于所希望的應(yīng)用，聚合物在約一小時(shí)與若干周之間的一段時(shí)期內(nèi)降解。當(dāng)聚合物用于活體內(nèi)遞送核酸試劑時(shí)，重要的是聚合物本身是無毒性的并且隨著聚合物被體液侵蝕，它們降解成無毒的降解產(chǎn)物。然而，許多合成的可生物降解的聚合物在活體內(nèi)侵蝕時(shí)產(chǎn)生與周圍組織不利地相互作用的寡聚物和單體Φ.F.Williams, J.Mater.Sc1.1233(1982))。為了使完整聚合物載體和它的降解產(chǎn)物的毒性降至最低，已經(jīng)基于天然存在的代謝物設(shè)計(jì)聚合物。示例性聚合物包括衍生自乳酸和/或乙醇酸的聚酯和衍生自氨基酸的聚酰胺。多種可生物降解的聚合物是已知的并且用于藥劑的控釋。此類聚合物描述于例如美國專利號(hào) 4，291，013 ;4，347，234 ;4，525，495 ;4，570，629 ;4，572，832 ;4，587，268 ；4，638，045 ;4，675，381 ;4，745，160 ;以及 5，219，980 ;和 PCT 公布 W02006/014626 中，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式整體并入本文。本文描述的疏水聚合物可以具有多個(gè)端基。在一些實(shí)施方案中，聚合物的端基未進(jìn)一步修飾，例如，當(dāng)端基是羧酸、羥基或氨基時(shí)。在一些實(shí)施方案中，端基可以被進(jìn)一步修飾。例如，具有羥基端基的聚合物可以用酰基衍生化來產(chǎn)生?；舛说木酆衔?例如，乙?；舛说木酆衔锘虮郊柞；舛说木酆衔?或用烷基衍生化來產(chǎn)生烷氧基封端的聚合物(例如，甲氧基封端的聚合物)或用芐基衍生化來產(chǎn)生芐基封端的聚合物。端基還可以進(jìn)一步與官能團(tuán)反應(yīng)例如以提供與另一部分(如核酸試劑、陽離子部分或不溶性基質(zhì))的鍵。在一些實(shí)施方案中，粒子包含用未與另一部分(例如，核酸試劑)反應(yīng)的部分(例如，N-(2_氨乙基)馬來酰亞胺、2-(2-(卩比唳-2-基)二硫基)乙氨基或琥拍酰亞胺基-N-甲酯)進(jìn)行官能化的官能化疏水聚合物(例如，疏水聚合物，如PLGA (例如，50: 50PLGA))。疏水聚合物可以具有約IkDa至約70kDa范圍內(nèi)的重量平均分子量(例如，約4kDa至約 66kDa、約 2kDa 至約 12kDa、約 6kDa 至約 20kDa、約 5kDa 至約 15kDa、約 6kDa 至約 13kDa、約7kDa至約llkDa、約5kDa至約lOkDa、約7kDa至約lOkDa、約5kDa至約7kDa、約6kDa至約8kDa、約 6kDa、約 7kDa、約 8kDa、約 9kDa、約 lOkDa、約 I IkDa、約 12kDa、約 13kDa、約 14kDa、約 15kDa、約 16kDa 或約 17kDa)。本文描述的疏水聚合物可以具有小于或等于約2.5 (例如，小于或等于約2.2、小于或等于約2.0、或小于或等于約1.5)的聚合物多分散性指數(shù)(roi)。在一些實(shí)施方案中，本文描述的疏水聚合物可以具有約1.0至約2.5、約1.0至約2.0、約1.0至約1.7或約1.0至約1.6的聚合物roi。本文描述的粒子可以包括不同量的疏水聚合物，例如，粒子的約10重量％至約90重量％ (例如，約20重量％至約80重量％、約25重量％至約75重量％、或約30重量％至約70重量％ )。本文描述的疏水聚合物可以是可商購獲得的，例如，從商用供應(yīng)商如BASF、Boehringer Ingelheim、 Durcet Corporation、 Purac America 以及 SurModicsPharmaceuticals獲得。本文描述的聚合物還可以是合成的。合成聚合物的方法是本領(lǐng)域已知的(參見，例如，Polymer Synthesis:Theory and Practice Fundamentals, Methods,Experiments.D.Braun 等.，第四版，Springer, Berlin, 2005)。此類方法包括,例如，縮聚、自由基聚合、離子聚合(例如，陽離子或陰離子聚合)或開環(huán)易位聚合?？缮藤彨@得的或合成的聚合物樣品可以在形成聚合物-試劑綴合物或并入本文描述的粒子或聚合物之前被進(jìn)一步純化。在一些實(shí)施方案中，純化可以降低聚合物樣品的多分散性。可以通過從溶液中沉淀或沉淀至固體(如硅藻土)上來純化聚合物。還可以通過尺寸排阻色譜法(SEC)進(jìn)一步純化聚合物。其它疏水部分對(duì)于本文描述的粒子的其它適合的疏水部分包括脂質(zhì)，例如，磷脂。示例性脂質(zhì)包括卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、卵鞘磷脂(ESM)、腦磷脂、心磷脂、磷脂酸、腦苷脂、磷酸二鯨蠟酯、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕櫚油?；?磷脂酰膽堿(POPC)、棕櫚油酰基-磷脂酰乙醇胺(POPE)、棕櫚油?；?磷脂酰甘油(POPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺4-(N-馬來酰亞胺基甲基)-環(huán)己烷-1-甲酸酯(DOPE-mal)、二棕櫚酰基-磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蘧?；?磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二硬脂?；?磷脂酰乙醇胺(DSPE)、單甲基-磷脂酰乙醇胺、二甲基-磷脂酰乙醇胺、二油?；?磷脂酰乙醇胺(DEPE)、硬脂酰油?；?磷脂酰乙醇胺(SOPE)、溶血磷脂酰膽堿以及二亞油酰基-磷脂酰膽堿。其它示例性疏水部分包括膽固醇和維生素E TPGS0在一個(gè)實(shí)施方案中，疏水部分不是脂質(zhì)(例如，不是磷脂)或不包含脂質(zhì)。疏水-親水聚合物本文描述的粒子可以包括含有親水部分和疏水部分的聚合物，例如，疏水-親水聚合物。疏水-親水聚合物可以連接至另一部分如核酸試劑(例如，通過親水部分或疏水部分)和/或陽離子部分或核酸試劑可以與連接至疏水-親水聚合物的核酸形成雙鏈體。在一些實(shí)施方案中，疏水-親水聚合物是游離的(即，未連接至另一部分)。粒子可以包括多個(gè)疏水-親水聚合物，例如其中一些連接至另一部分如核酸試劑和/或陽離子部分并且一些是游離的。含有親水部分和疏水部分的聚合物可以是親水嵌段與疏水嵌段偶合的共聚物。這些共聚物可以具有約5kDa與約30kDa之間的重量平均分子量(例如，約5kDa至約25kDa、約IOkDa 至約 22kDa、約 IOkDa 至約 15kDa、約 12kDa 至約 22kDa、約 7kDa 至約 15kDa、約 15kDa至約 19kDa 或約 IlkDa 至約 13kDa，例如，約 9kDa、約 lOkDa、約 llkDa、約 12kDa、約 13kDa、約14kDa、約15kDa、約16kDa、約17kDa、約18kDa或約19kDa)。含有親水部分和疏水部分的聚合物可以連接至試劑。聚合物的適合的疏水部分的實(shí)例包括以上描述的那些部分。共聚物的疏水部分可以具有約IkDa至約20kDa的重量平均分子量(例如，約8kDa至約15kDa、約IkDa至約18kDa、17kDa、16kDa、15kDa、14kDa 或 13kDa、約 2kDa 至約 12kDa、約 6kDa 至約 20kDa、約 5kDa至約18kDa、約7kDa至約17kDa、約8kDa至約13kDa、約9kDa至約llkDa、約IOkDa至約14kDa、約 6kDa 至約 8kDa、約 6kDa、約 7kDa、約 8kDa、約 9kDa、約 lOkDa、約 llkDa、約 12kDa、約 13kDa、約 14kDa、約 15kDa、約 16kDa 或約 17kDa)。聚合物的適合的親水部分的實(shí)例包括以下:羧酸，包括丙烯酸、甲基丙烯酸、衣康酸、以及馬來酸；聚氧乙烯或聚環(huán)氧乙烷(PEG);聚丙烯酰胺(例如，聚羥丙基甲基丙烯酰胺)及其與甲基丙烯酸二甲氨基乙酯、二烯丙基二甲基氯化銨、乙烯基芐基三甲基氯化銨、丙烯酸、甲基丙烯酸、2-丙烯酰胺基-2-甲基丙烷磺酸和苯乙烯磺酸酯、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚噁唑啉、聚唾液酸、淀粉和淀粉衍生物、葡聚糖和葡聚糖衍生物的共聚物；多肽，如聚賴氨酸、聚精氨酸、聚谷氨酸；聚透明質(zhì)酸、褐藻酸、聚乳酸、聚乙烯亞胺、聚紫羅烯、聚丙烯酸以及聚亞氨基羧酸酯、明膠以及不飽和乙烯一元羧酸或二羧酸?？梢栽贖andbook ofWater-Soluble Gums and Resins, R.Davidson, McGraw-Hill (1980)中找到適合的親水聚合物的列表。共聚物的親水部分可以具有約IkDa至約21kDa的重量平均分子量(例如，約IkDa至約8kDa、約IkDa至約3kDa (例如，約2kDa)或約2kDa至約6kDa (例如，約3.5kDa)或約4kDa至約6kDa (例如，約5kDa))。在一個(gè)實(shí)施方案中，親水部分是PEG，并且重量平均分子量是約IkDa至約2IkDa (例如，約IkDa至約8kDa、約IkDa至約3kDa(例如，約2kDa)或約2kDa至約6kDa (例如，約3.5kDa)或約4kDa至約6kDa (例如，約5kDa))。在一個(gè)實(shí)施方案中，親水部分是PVA，并且重量平均分子量是約IkDa至約21kDa (例如，約IkDa至約8kDa、約IkDa至約3kDa (例如，約2kDa)或約2kDa至約6kDa (例如，約3.5kDa)或約4kDa至約6kDa (例如，約5kDa))。在一個(gè)實(shí)施方案中，親水部分是聚噁唑啉，并且重量平均分子量是約IkDa至約2IkDa (例如，約IkDa至約8kDa、約IkDa至約3kDa(例如，約2kDa)或約2kDa至約6kDa (例如，約3.5kDa)或約4kDa至約6kDa (例如，約5kDa))。在一個(gè)實(shí)施方案中，親水部分是聚乙烯吡咯烷，并且重量平均分子量是約IkDa至約21kDa(例如，約IkDa至約8kDa、約IkDa至約3kDa (例如，約2kDa)或約2kDa至約6kDa (例如，約3.5kDa)或約4kDa至約6kDa (例如，約5kDa))。在一個(gè)實(shí)施方案中，親水部分是聚羥丙基甲基丙烯酰胺，并且重量平均分子量是約IkDa至約21kDa (例如，約IkDa至約8kDa、約IkDa至約3kDa (例如，約2kDa)或約2kDa至約6kDa (例如，約3.5kDa)或約4kDa至約6kDa (例如，約5kDa))。在一個(gè)實(shí)施方案中，親水部分是聚唾液酸，并且重量平均分子量是約IkDa至約21kDa(例如，約IkDa至約8kDa、約IkDa至約3kDa (例如，約2kDa)或約2kDa至約6kDa (例如，約3.5kDa)或約4kDa至約6kDa (例如，約5kDa))。
含有親水部分和疏水部分的聚合物可以是嵌段共聚物，例如，二嵌段或三嵌段共聚物。在一些實(shí)施方案中，聚合物可以是含有親水嵌段和疏水嵌段的二嵌段共聚物。在一些實(shí)施方案中，聚合物可以是含有疏水嵌段、親水嵌段和另一疏水嵌段的三嵌段共聚物。兩個(gè)疏水嵌段可以是相同疏水聚合物或不同疏水聚合物。本文使用的嵌段共聚物可以具有不同的親水部分與疏水部分的比率，例如，范圍為按重量計(jì)1:1至1: 40(例如，按重量計(jì)約1:1至約1: 10、按重量計(jì)約1:1至約1: 2、或按重量計(jì)約1: 3至約1: 6)。含有親水部分和疏水部分的聚合物可以具有多個(gè)端基。在一些實(shí)施方案中，端基可以是羥基或烷氧基(例如，甲氧基)。在一些實(shí)施方案中，聚合物的端基未進(jìn)一步修飾。在一些實(shí)施方案中，端基可以被進(jìn)一步修飾。例如，端基可以被烷基封端以產(chǎn)生烷氧基封端的聚合物(例如，甲氧基封端的聚合物)、可以用靶向劑(例如，葉酸)或染料(例如，若丹明)衍生化或可以與官能團(tuán)反應(yīng)。含有親水部分和疏水部分的聚合物可以在共聚物的兩個(gè)嵌段之間包括連接基。例如，這種連接基可以是酰胺、酯、醚、氨基、氨基甲酸酯或碳酸酯鍵。本文描述的含有親水部分和疏水部分的聚合物可以具有小于或等于約2.5(例如，小于或等于約2.2、小于或等于約2.0、或小于或等于約1.5)的聚合物多分散性指數(shù)(PDI)。在一些實(shí)施方案中，聚合物 PDI是約1.0至約2.5，例如，約1.0至約2.0、約1.0至約1.8、約1.0至約1.7或約1.0至約1.6。本文描述的粒子可以包括不同量的含有親水部分和疏水部分的聚合物，例如，高達(dá)粒子的約50重量％ (例如，約4重量％至約50重量％、約5重量％、約10重量％、約15重量％、約20重量％、約25重量％、約30重量％、約35重量％、約40重量％、約45重量％或約50重量％ )。例如，粒子內(nèi)的第二聚合物的重量百分比是約3 %至30 %、約5 %至25 %或約8%至23%。本文描述的含有親水部分和疏水部分的聚合物可以是可商購獲得的或可以是合成的。合成聚合物的方法是本領(lǐng)域已知的(參見，例如，Polymer Synthesis:Theory andPractice Fundamentals, Methods, Experiments.D.Braun 等.，第四版，Springer, Berlin,2005)。此類方法包括，例如，縮聚、自由基聚合、離子聚合(例如，陽離子或陰離子聚合)或開環(huán)易位聚合?？梢酝ㄟ^分別合成兩種聚合物單位并且然后使用既定方法綴合兩個(gè)部分來制備嵌段共聚物。例如，可以使用偶合劑如EDC(1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽)來連接嵌段。綴合之后，兩個(gè)嵌段可以經(jīng)由酰胺、酯、醚、氨基、氨基甲酸酯或碳酸酯鍵連接。在形成聚合物-試劑綴合物或并入本文描述的粒子或聚合物之前可以進(jìn)一步純化可商購獲得的或合成的聚合物樣品。在一些實(shí)施方案中，純化可以去除可能導(dǎo)致不可過濾的聚合物樣品的較低分子量聚合物。可以通過從溶液中沉淀或沉淀至固體(如硅藻土)上來純化聚合物。還可以通過尺寸排阻色譜法(SEC)進(jìn)一步純化聚合物。陽離子部分供本文描述的粒子或綴合物中使用的示例性陽離子部分包括胺(包括例如，伯胺、仲胺、叔胺以及季胺)和聚胺(例如，支鏈和線性聚乙烯亞胺(PEI)或其衍生物如聚乙烯亞胺-PLGA、聚乙烯亞胺-聚乙二醇-N-乙酰半乳糖胺(PE1-PEG-GAL)或聚乙烯亞胺-聚乙二醇-三-N-乙酰半乳糖胺(PE1-PEG-triGAL)衍生物)。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分包含陽離子脂質(zhì)(例如，1-[2-(油酰基氧基)乙基]-2-油基-3-(2-羥乙基)氯化咪唑啉鎗(DOTIM)、二甲基雙十八烷基溴化銨、1，2 二油基氧基丙基-3-三甲基溴化銨、D0TAP、1，
2-_■肉蓮基氧基丙基-3- _■甲基_輕乙基漠化按、I，2- _■肉蓮酸基-sn-甘油-3-乙基磷酸膽堿(EDMPC)、乙基-PC、1，2-二油酰基-3-二甲基銨-丙烷(DODAP)、DC-膽固醇、以及MBOP, CLinDMAU, 2- 二亞油基氧基 _3_ 二甲基氨基丙烷(DLinDMA)、pCLinDMA、eCLinDMA、DMOBA以及DMLBA)。在一些實(shí)施方案中，例如，其中陽離子部分是聚胺，所述聚胺包括聚氨基酸(例如，聚(賴氨酸)、聚(組氨酸)以及聚(精氨酸))和衍生物(例如，聚(賴氨酸)-PLGA、咪唑改性的聚(賴氨酸))或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。在一些實(shí)施方案中，例如，其中陽離子部分是包含多個(gè)胺的陽離子聚合物，所述胺可以沿聚合物安置以使得胺隔開約4至約10埃(例如，約5至約8或約6至約7)。在一些實(shí)施方案中，胺可以沿聚合物安置以便與核酸試劑上的磷酸酯基對(duì)齊。陽離子部分可以具有5或更大的pKa和/或可以在生理pH下帶正電荷。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分包括至少一種胺(例如，伯胺、仲胺、叔胺或季胺)或多種胺，各自獨(dú)立地為伯胺、仲胺、叔胺或季胺。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分是例如具有一個(gè)或多個(gè)仲胺或叔胺的聚合物，例如陽離子聚乙烯醇(PVA)(例如，如由Kuraray所提供，如CM-318或C-506)、殼聚糖、聚胺支鏈和星形PEG以及聚乙烯亞胺的聚合物。陽離子PVA可以是例如通過聚合乙酸乙烯酯/ N-乙烯基甲酰胺共聚物來制備，例如，如美國US2002/0189774中所描述，所述專利的內(nèi)容以引用的方式并入本文。陽離子PVA的其它實(shí)例包括美國 6，368，456 和 Fatehi (Carbohydrate Polymers79 (2010) 423-428)中描述者，所述文獻(xiàn)的內(nèi)容以引用的方式并入本文。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分包括含氮雜環(huán)或雜芳香族部分(例如，吡啶鎗基、咪唑鐵基、嗎琳鐵基、喊嚷鐵基等)O在一些實(shí)施方案中，陽尚子部分包含含氣雜環(huán)或雜芳香族部分，如聚乙烯吡咯烷或聚乙烯吡咯烷酮。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分包括胍陽離子部分(例如，精氨酸部分)。在一些實(shí)施方案中，陽離子部分是表面活性劑，例如，陽離子PVA如本文描述的陽離子PVA。其它示例性陽離子部分包括胍基丁胺、硫酸魚精蛋白、海美溴銨、十六烷基三甲基溴化銨、1_己基二乙基_磷酸銨、1_十二燒基二乙基_磷酸銨、精胺(例如，精胺四鹽酸鹽)、亞精胺及其衍生物(例如，Nl-PLGA-精胺、N1-PLGA-N5, N10, N14-三甲基化精胺、(N1-PLGA-N5，N10，N14，N14-四甲基化精胺)、PLGA_ 谷氨酸-二-三 Cbz-精胺、三 Cbz-精胺、amiphipole、PMAL-C8 以及乙?；?PLGA5050-谷氨酸-二(N1-氨基-N5，N10, N14-精胺)、聚甲基丙烯酸(2-二甲基氨基)乙酯)、己基癸基三甲基氯化銨、海美溴銨和去端肽膠原以及例如W02005007854、US7, 641, 915以及W02009055445中描述者，各案的內(nèi)容以引用的方式并入本文。在一個(gè)實(shí)施方案中，陽離子部分是在本文描述的粒子中的存在伴隨粒子的外部存在少于50%、40%、30%、20%或10% (按重量計(jì)或數(shù)量計(jì))的核酸試劑(例如，siRNA)的陽離子部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，陽離子部分不是脂質(zhì)(例如，不是磷脂)或不包含脂質(zhì)。核酸試劑
可以使用本文所述的粒子、綴合物或組合物遞送核酸試劑。合適的核酸試劑的實(shí)例包括但不限于:多核苷酸(如siRNA)、反義寡核苷酸、微RNA(miRNA)、miRNA拮抗劑、適體、基因組DNA、cDNA、mRNA以及質(zhì)粒。核酸試劑可以靶向多個(gè)相關(guān)基因，如其過量表達(dá)與疾病或病癥相關(guān)聯(lián)的基因。使用本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物遞送的核酸試劑可以單獨(dú)或結(jié)合施用(例如，在同一或單獨(dú)的制劑中施用)。在一個(gè)實(shí)施方案中，施用多種試劑如siRNA來靶向相同基因的不同位點(diǎn)，用于治療疾病或病癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，施用多種試劑例如siRNA來靶向兩種或更多種不同的基因，用于治療疾病或病癥。siRNA適合于通過本文所述的聚合物核酸試劑綴合物、粒子或組合物遞送的治療性核酸可以是“短干擾RNA”或“siRNA”。本文使用的siRNA是指能夠通過以序列特異性方式介導(dǎo)RNA干擾“RNAi”或基因沉默來抑制或下調(diào)基因表達(dá)或病毒復(fù)制的任何核酸分子。例如，siRNA可以是包含自身互補(bǔ)的有義和反義區(qū)的雙鏈核酸分子，其中反義區(qū)包含與靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列，并且有義區(qū)具有與靶核酸序列或其一部分對(duì)應(yīng)的核苷酸序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，適合于使用本文所述的綴合物、粒子或組合物遞送的治療性siRNA分子以引起對(duì)靶基因表達(dá)的抑制的方式與靶基因的核苷酸序列相互作用。siRNA包括一個(gè)雙鏈結(jié)構(gòu)，所述雙鏈結(jié)構(gòu)通常含有15_50個(gè)堿基對(duì)，例如19_25、19-23、21-25、21-23或24-29個(gè)堿基對(duì)，并且具有與細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)的靶基因或RNA —致或幾乎一致的核苷酸序列。siRNA可以由兩個(gè)退火的多核苷酸或形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的單一多核苷酸構(gòu)成。在一個(gè)實(shí)施方案中，治療性siRNA以表達(dá)載體的形式提供，所述表達(dá)載體被封裝在本文所述的綴合物、粒子或組合物中，其中所述載體具有在施用至受試者之后轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)產(chǎn)生siRNA的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的編碼序列。

SiRNA可以由兩個(gè)單獨(dú)的寡核苷酸組裝，其中一條鏈?zhǔn)怯辛x鏈并且另一條鏈?zhǔn)欠戳x鏈，其中反義鏈和有義鏈?zhǔn)亲陨砘パa(bǔ)的(即，每條鏈包含與另一條鏈中的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列)；如其中反義鏈和有義鏈形成雙鏈體或雙鏈結(jié)構(gòu)，例如其中雙鏈區(qū)為約15 至約 30 個(gè)堿基對(duì)，例如約 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 個(gè)堿基對(duì)；反義鏈包括與靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列，并且有義鏈包含與靶核酸序列或其一部分對(duì)應(yīng)的核苷酸序列(例如，siRNA分子的約15至約25個(gè)或更多個(gè)核苷酸與靶核酸或其一部分互補(bǔ))?；蛘撸瑂iRNA由單一寡核苷酸組裝，其中siRNA的自身互補(bǔ)的有義和反義區(qū)借助于基于核酸或不基于核酸的連接基連接。在某些實(shí)施方案中，siRNA分子的至少一條鏈具有長度為約I至約6個(gè)核苷酸(不過可以是2至4個(gè)核苷酸)的3'懸突。通常，3'懸突長度為1-3個(gè)核苷酸。在一些實(shí)施方案中，一條鏈具有3'懸突并且另一條鏈?zhǔn)瞧蕉说幕蛘咭簿哂袘彝?。?duì)于每條鏈，懸突的長度可以相同或不同。為了進(jìn)一步增強(qiáng)siRNA的穩(wěn)定性，可以穩(wěn)定3'懸突以免降解。siRNA具有與靶RNA顯著的序列相似性，這樣使得siRNA可以與靶RNA配對(duì)并且通過RNA干擾機(jī)制使靶RNA發(fā)生序列特異性降解。任選地，siRNA分子包括3'羥基。在一個(gè)實(shí)施方案中，RNA通過包括嘌呤核苷酸，如腺苷或鳥苷核苷酸而穩(wěn)定。或者，通過修飾的類似物取代嘧啶核苷酸，例如用2'-脫氧胸苷取代尿苷核苷酸3'懸突是可以容忍的并且不影響RNAi的功效。不存在2'-羥基顯著增強(qiáng)了組織培養(yǎng)基中懸突的核酸酶耐受性并且在活體內(nèi)可能是有益的。SiRNA可以是具有雙鏈體、不對(duì)稱雙鏈體、發(fā)夾或不對(duì)稱發(fā)夾二級(jí)結(jié)構(gòu)的多核苷酸，其具有自身互補(bǔ)的有義和反義區(qū)，其中反義區(qū)包含與單獨(dú)的靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列，并且有義區(qū)具有與靶核酸序列或其一部分對(duì)應(yīng)的核苷酸序列。siRNA可以是具有兩個(gè)或更多個(gè)環(huán)結(jié)構(gòu)以及一個(gè)主干的環(huán)形單鏈多核苷酸，所述主干包含自身互補(bǔ)的有義和反義區(qū)，其中反義區(qū)包括與靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列，并且有義區(qū)具有與靶核酸序列或其一部分對(duì)應(yīng)的核苷酸序列，并且其中環(huán)形多核苷酸可以在活體內(nèi)或活體外處理產(chǎn)生能夠介導(dǎo)RNAi的活性siRNA分子。siRNA還可以包括一個(gè)單鏈多核苷酸，所述單鏈多核苷酸具有與靶核酸分子或其一部分中的核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列(例如，其中所述siRNA分子不需要在siRNA分子內(nèi)存在與靶核酸序列或其一部分對(duì)應(yīng)的核苷酸序列)，其中單鏈多核苷酸可以進(jìn)一步包括末端磷酸基，如5'-磷酸(參見，例如Martinez等，2002，Cell.，110，563-574以及Schwarz 等，2002，Molecular Cell，10,537-568)或 5'，3' _ 二磷酸。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的siRNA分子包含分開的有義和反義序列或區(qū)，其中有義和反義區(qū)通過如本領(lǐng)域已知的核苷酸或非核苷酸連接基共價(jià)連接，或者可替代地通過離子相互作用、氫鍵合、范德華相互作用、疏水性相互作用和/或堆積相互作用非共價(jià)連接。siRNA僅需要與具有介導(dǎo)RNAi的能力的天然RNA足夠相似。因此，siRNA可以容忍預(yù)期可能由于基因突變、應(yīng)變多態(tài)性和進(jìn)化趨異性導(dǎo)致的序列變異。靶序列與RNAi構(gòu)建體序列之間可以容忍的核苷酸錯(cuò)配的數(shù)量不多于5個(gè)堿基對(duì)中錯(cuò)配I個(gè)，或10個(gè)堿基對(duì)中錯(cuò)配I個(gè)，或20個(gè)堿基對(duì)中錯(cuò)配I個(gè)，或50個(gè)堿基對(duì)中錯(cuò)配I個(gè)。在一些實(shí)施方案中，試劑包含在評(píng)估窗口上與長度在15-29個(gè)核苷酸之間的靶轉(zhuǎn)錄物，如長度為至少約15個(gè)核苷酸、至少約17個(gè)核苷酸或至少約18或19個(gè)至約21-23或24-29個(gè)核苷酸的序列具有至少約 70%，例如至少約 80%,84% ,89%,90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99%或100%精確序列互補(bǔ)性的鏈。換句話說，在長度約為19-25個(gè)核苷酸的siRNA中，具有不多于約4個(gè)錯(cuò)配的siRNA通常是可以容忍的，如具有不多于3個(gè)錯(cuò)配、2個(gè)錯(cuò)配、和或I個(gè)錯(cuò)配的siRNA。在siRNA雙鏈體中心的錯(cuò)配是較不能容忍的，并且可能基本上消除對(duì)靶RNA的裂解。相比之下，siRNA的3'核苷酸(例如，siRNA反義鏈的3'核苷酸)通常對(duì)靶標(biāo)識(shí)別的特異性不起顯著作用。具體而言，與靶RNA互補(bǔ)的siRNA序列(例如引導(dǎo)序列)的3'殘基通常對(duì)靶RNA裂解不那么關(guān)鍵。適合于通過本文所述的綴合物、粒子或組合物遞送的SiRNA可以在功能上界定為包括能夠與靶基因轉(zhuǎn)錄物的一部分雜交(例如，400mM NaCl、40mM PIPES pH6.4、lmM EDTA,50°C或70°C雜交12-16小時(shí)；隨后洗滌)的核苷酸序列(或寡核苷酸序列)。另外優(yōu)選的雜交條件包括:在70°C下于IxSSC中或在50°C下于lxSSC、50%甲酰胺中雜交，隨后在70°C下于0.3xSSC中洗滌；或在70°C下于4xSSC中或在50°C下于4xSSC、50%甲酰胺中雜交，隨后在67°C下于IxSSC中洗滌。預(yù)計(jì)長度小于50個(gè)堿基對(duì)的雜交體的雜交溫度應(yīng)比雜交體的解鏈溫度(Tm)低5°C -10°C，其中Tm根據(jù)以下等式進(jìn)行確定。對(duì)于長度小于18個(gè)堿基對(duì)的雜交體，Tm(°C ) = 2(A+T堿基的數(shù)量)+4(G+C堿基的數(shù)量)。對(duì)于長度在18與 49 個(gè)堿基對(duì)之間的雜交體，Tm(°C ) = 81.5+16.6 (1glO [Na+])+0.41 (% G+C) (600/N)，其中N是雜交體中的堿基數(shù)量，并且[Na+]是雜交緩沖劑中的鈉離子濃度(IxSSC中[Na+]=0.165M)。用于多核苷酸雜交的嚴(yán)謹(jǐn)性條件的另外的實(shí)例提供在Sambrook，J.等，1989，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,N.Y.,第9和 11 章，以及Current Protocols in Molecular Biology, 1995,F.M.Ausubel 等，編著，John ffiley&Sons, Inc.,第 2.10 以及 6.3-6.4 節(jié)中，其內(nèi)容以引用的方式并入本文。一致的核苷酸序列的長度可為至少約10、12、15、17、20、22、25、27、30、32、35、37、40、42、45、47 或 50 個(gè)堿基。本文使用的siRNA分子不必局限于僅含有RNA的那些分子，而是可以進(jìn)一步涵蓋化學(xué)修飾的核苷酸和非核苷酸。在某些實(shí)施方案中，治療性siRNA缺乏含有2,-羥基(2' -0H)的核苷酸。在某些實(shí)施方案中，治療性siRNA不要求存在具有用于介導(dǎo)RNAi的2’ -羥基的核苷酸，并且同樣地，siRNA將不包括任何核糖核苷酸(例如，具有2' -OH基團(tuán)的核苷酸)。然而，不要求存在核糖核苷酸來支持RNAi的這類siRNA分子可以具有連接的一個(gè)或多個(gè)連接基或其它連接或締合的基團(tuán)、部分或含有一個(gè)或多個(gè)具有2, -OH基團(tuán)的部分的鏈。任選地，siRNA分子可以在約5%、10%、20%、30%、40%或50%的核苷酸位置上包括核糖核苷酸。其它有用的治療性SiRNA寡核苷酸可以具有硫代磷酸酯主鏈以及具有雜原子的寡核苷，并且具體而言是如美國專利號(hào)5，489，677中教導(dǎo)的CH2NH0CH2、CH2N(CH3) OCH2、CH2ON(CH3)CH2、CH2N(CH3)N(CH3)CH2 以及 ON(CH3)CH2CH2(其中天然磷酸二酯主鏈表示為OPOCH2)，以及在美國專利號(hào)5，602，240中公開的酰胺主鏈。取代的糖部分也可以包括在修飾的寡核苷酸中。用于通過本文所述的綴合物、粒子或組合物遞送的治療性反義寡核苷酸可以在2'位置包括以下中的一個(gè)或多個(gè):0H ；F ；0-、S-或N-燒基；0-、S-或N-稀基；0-、S-或N-塊基；或O-燒基-O-燒基，其中燒基、稀基以及炔基可以是取代的或未取代的C1至Cltl烷基或C2至Cltl烯基和炔基。有用的修飾還可以包括 0[(CH2)n0 ]m CH3、0(CH2)n0CH3> O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3^ O(CH2)nONH2 以及 O(CH2)n0N[ (C2)nCHJ2，其中η和m是I至約10。此外，寡核苷酸可以在2'位置包括以下中的一個(gè)=C1至Cltl低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、0CN、Cl、Br、CN、CF3> OCF3> SOCH3> S02CH3、ONO2, NO2, N3> NH2、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷芳基、氨基烷基氨基、多烷基氨基、取代的甲硅烷基、RNA裂解基團(tuán)、報(bào)道基團(tuán)、嵌插劑、用于改善寡核苷酸的藥代動(dòng)力學(xué)或藥效學(xué)特性的基團(tuán)，以及具有類似特性的其它取代基。其它有用的修飾包括烷氧基烷氧基，例如Y -甲氧基乙氧基(2' -OCH2CH2OCH3)、二甲基氨氧基乙氧基(2 ' -O (CH2) 20N (CH3) 2)或二甲基氨基-乙氧基乙氧基(2' -OCH2OCH2N (CH2) 2)。其它修飾可以包括2'-甲氧基(2' -OCH3) >2' _氛基丙氧基(2' -OCH2CH2CH2NH2)或2'-氣(2' -F)。類似的修飾還可以在寡核苷酸內(nèi)的其它位置，如3'末端核苷酸上的或2' -5'連接寡核苷酸中的糖的3'位置，以及5'末端核苷酸的5'位置處進(jìn)行。寡核苷酸還可以具有如環(huán)丁基部分等糖模擬物來替換戊呋喃糖基。教導(dǎo)了這類取代的糖部分的制備的參考文獻(xiàn)包括美國專利號(hào)4，981，957和5，359，044。用本文所述的綴合物、粒子或組合物配制的siRNA可以包括天然存在的核苷(例如，腺苷、胸苷、鳥苷、胞苷、尿苷、脫氧腺苷、脫氧胸苷、脫氧鳥苷以及脫氧胞苷)、核苷類似物(例如，2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、C5-丙炔基胞苷、C5-丙炔基尿苷、C5-溴尿苷、C5-氟尿苷、C5-碘尿苷、C5-甲基胞苷、7-脫氮腺苷、7-脫氮鳥苷、8-氧代腺苷、8-氧代腺苷、(K6)-甲基鳥苷以及2-硫代胞苷)、化學(xué)修飾的堿基、生物修飾的堿基(例如甲基化堿基)、嵌插的堿基、修飾的糖(例如，2^ -氟核糖、核糖、2,-脫氧核糖、阿拉伯糖以及己糖)。合適的修飾的核苷堿基包括其它合成的或天然的核苷堿基，如5-甲基胞嘧啶(5-甲基-C)、5_羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、
2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-鹵代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4_硫代尿嘧啶、8-鹵代、8-氨基、8-氫硫基、8-硫烷基、8-羥基和其它8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤、5-鹵代，特別是5-溴、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤和7-脫氮腺嘌呤以及3-脫氮鳥嘌呤和
3-脫氮腺嘌呤。其它有用的核苷堿基包括例如在美國專利號(hào)3，687，808中公開者。用于并入本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物中的治療性siRNA可以化學(xué)合成或從較長的雙鏈RNA或發(fā)夾RNA得到?？梢悦复俜绞交蛲ㄟ^部分/完全有機(jī)合成來產(chǎn)生siRNA，并且可以通過活體外酶促或有機(jī)合成來引入任何修飾的核糖核苷酸。至少部分由RNA構(gòu)成的單鏈物質(zhì)可以充當(dāng)siRNA反義鏈或可以從質(zhì)粒載體表達(dá)?！癛NA干擾”或“RNAi”意思是通常如本領(lǐng)域已知的并且由短干擾核酸分子介導(dǎo)的抑制或下調(diào)細(xì)胞中的基因表達(dá)的過程。此外，本文使用的術(shù)語RNAi意思等同于用來描述序列特異性RNA干擾，如轉(zhuǎn)錄后基因沉默、翻譯抑制、轉(zhuǎn)錄抑制或表觀遺傳的其它術(shù)語。例如，適合于通過本文所述的綴合物、粒子或組合物遞送的治療性siRNA分子可以在轉(zhuǎn)錄后水平或轉(zhuǎn)錄前水平下表觀遺傳地使基因沉默。在一個(gè)非限制性實(shí)例中，本發(fā)明的siRNA分子對(duì)基因表達(dá)的表觀遺傳調(diào)控可以由對(duì)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)或甲基化型態(tài)的siRNA介導(dǎo)的修飾，從而改變基因表達(dá)而引起。在另一個(gè)非限制性實(shí)例中，如本領(lǐng)域所已知，siRNA分子對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控可以由經(jīng)由RISC對(duì)RNA (編碼的或非編碼的RNA)的siRNA介導(dǎo)的裂解，或者可替代地翻譯抑制引起。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的siRNA分子對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控可以由轉(zhuǎn)錄抑制引起。RNAi還包括由微RNA或充當(dāng)微RNA的siRNA引起的翻譯阻抑。RNA干擾可以通過引入小干擾RNA(siRNA)或在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生siRNA(例如，從質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)基因)而啟動(dòng)，以使一個(gè)或多個(gè)靶基因的表達(dá)沉默。或者，RNAi在細(xì)胞中天然存在以除去外來RNA(例如，病毒RNA)。天然RNAi經(jīng)由前體dsRNA的切片機(jī)引導(dǎo)的斷裂而進(jìn)行，所述斷裂引導(dǎo)得到其它同源RNA序列的降解機(jī)制。本文使用的術(shù)語siRNA意思等同于用來描述能夠介導(dǎo)序列特異性RNAi的核酸分子的其它術(shù)語，并且包括例如，短干擾RNA(siRNA)、雙鏈RNA (dsRNA)、短發(fā)夾RNA (shRNA)、短干擾寡核苷酸、短干擾核酸、短干擾修飾寡核苷酸、化學(xué)修飾的siRNA、轉(zhuǎn)錄后基因沉默RNA(ptgsRNA)以及其它。miRNA在一個(gè)實(shí)施方案中，適合于通過本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物遞送的治療性核酸可以是微R NA (miRNA)。“微RNA”或“miRNA”是指通過mRNA裂解、翻譯阻抑/抑制或異染色質(zhì)沉默調(diào)節(jié)靶信使RNA的表達(dá)的小雙鏈RNA (參見例如Ambros，2004，Nature, 431, 350-355 ；Bartel,2004, Cell, 116, 281-297 ；Cullen,2004, Virus Research.,102，3-9 ；He 等，2004，Nat.Rev.Genet.，5，522-531 ；以及 Ying 等，2004，Gene, 342，25-28)。微RNA (miRNA)是小的非編碼多核苷酸，長約22個(gè)核苷酸，所述多核苷酸引導(dǎo)其mRNA靶標(biāo)的破壞或翻譯阻抑。在一個(gè)實(shí)施方案中，治療性微RNA在miRNA分子的有義鏈或有義區(qū)與反義鏈或反義區(qū)之間，或在miRNA的反義鏈或反義區(qū)與對(duì)應(yīng)的靶核酸分子之間具有部分互補(bǔ)性(即，小于100%的互補(bǔ)性)。例如，部分互補(bǔ)性可以包括在雙鏈核酸分子內(nèi)的各種錯(cuò)配或非堿基配對(duì)核苷酸(例如，1、2、3、4、5個(gè)或更多個(gè)錯(cuò)配或非堿基配對(duì)核苷酸，如核苷酸凸起)，這是可以導(dǎo)致在miRNA的有義鏈或有義區(qū)與反義鏈或反義區(qū)之間，或在miRNA的反義鏈或反義區(qū)與對(duì)應(yīng)的靶核酸分子之間產(chǎn)生凸起、環(huán)或懸突的結(jié)構(gòu)。經(jīng)由微RNA翻譯阻抑路徑起作用的試劑在與靶標(biāo)形成的雙鏈體中含有至少一個(gè)凸起和/或錯(cuò)配。在某些實(shí)施方案中，出于確定RNAi試劑是否靶向轉(zhuǎn)錄物的目的，不認(rèn)為由引導(dǎo)鏈和靶轉(zhuǎn)錄物形成的雙鏈體中的GU或UG喊基對(duì)是錯(cuò)配。在一個(gè)實(shí)施方案中，適合于通過本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物遞送的治療性核酸是miRNA拮抗劑，所述miRNA拮抗劑是能夠例如通過促進(jìn)互補(bǔ)miRNA的降解而抑制互補(bǔ)miRNA的經(jīng)過化學(xué) 修飾的寡核苷酸(參見,例如Krutzfeldt等,Nature,438:685-689,2005)。反義寡核苷酸治療性“反義寡核苷酸”適合于經(jīng)由本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物來遞送。術(shù)語“寡核苷酸”是指核糖核酸(RNA)或脫氧核糖核酸(DNA)或其類似物的寡聚物或聚合物。此術(shù)語包括由天然存在的核苷堿基、糖和共價(jià)核苷間(主鏈)鍵構(gòu)成的寡核苷酸，以及具有起相似作用的非天然存在的部分的寡核苷酸。由于所希望的特性，例如增強(qiáng)的細(xì)胞攝入、增強(qiáng)的對(duì)核酸靶標(biāo)的親和力以及在核酸酶的存在下增加的穩(wěn)定性，這類修飾的或置換的寡核苷酸通常比天然形式優(yōu)選。治療性反義寡核苷酸的長度通常為約10至約50個(gè)核苷酸(例如，長度為12至40、14至30或15至25個(gè)核苷酸)。特別有用的是長度為15至23個(gè)核苷酸的反義寡核苷酸。然而，應(yīng)理解，含有甚至少于10個(gè)核苷酸的反義核苷酸(例如，優(yōu)選的反義核苷酸之一的一部分)包括在本發(fā)明之內(nèi)，只要它展示出所希望的抑制靶基因的表達(dá)的活性即可。反義寡核苷酸可以基本上由與靶核酸中的可接近區(qū)特異性雜交的核苷酸序列組成。然而，這類反義寡核苷酸可以在任一端含有5至10個(gè)核苷酸的另外的側(cè)接序列。側(cè)接序列可以包括，例如靶核酸的其它序列、與擴(kuò)增引物互補(bǔ)的序列，或與限制性酶位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的序列。為獲得最大有效性，可以將另外的準(zhǔn)則應(yīng)用于反義寡核苷酸的設(shè)計(jì)。這類準(zhǔn)則是本領(lǐng)域所熟知的，并且在例如寡核苷酸引物的設(shè)計(jì)中廣泛使用。這些準(zhǔn)則包括缺乏潛在反義寡核苷酸的預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)、適當(dāng)?shù)腉和C核苷酸含量(例如約50% )，以及不存在序列基元如單核苷酸重復(fù)(例如GGGG序列)。雖然反義寡核苷酸是反義化合物的一種優(yōu)選形式，但是本發(fā)明包括其它寡聚物反義化合物，包括但不限于如以下描述的那些寡核苷酸類似物。如本領(lǐng)域所已知，核苷是堿基-糖組合，其中堿基部分通常是雜環(huán)堿基。這類雜環(huán)堿基的兩種最常見的類別是嘌呤和喃唳。核苷酸是進(jìn)一步包括共價(jià)連接至核苷的糖部分的磷酸基的核苷。對(duì)于包括戍呋喃糖基糖的那些核苷，磷酸基可以連接至糖的2'、3'或5'羥基部分。在形成寡核苷酸時(shí)，磷酸基彼此共價(jià)連接相鄰的核苷以形成線性聚合物分子。此線性聚合物分子的各別末端可以進(jìn)一步接合形成環(huán)形分子，不過線性分子一般是優(yōu)選的。在寡核苷酸分子之內(nèi)，磷酸基通常被稱為形成寡核苷酸的核苷間主鏈。RNA和DNA的正常的鍵或主鏈?zhǔn)?'至5'磷酸二酯鍵。適合于通過本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物遞送的治療性反義寡核苷酸包括含有修飾的主鏈或非天然核苷間鍵的寡核苷酸。如本文所定義，具有修飾的主鏈的寡核苷酸包括在主鏈中具有磷原子的那些寡核苷酸和在主鏈中不具有磷原子的那些寡核苷酸。出于本說明書的目的，以及如有時(shí)本領(lǐng)域所提及，在它們的核苷間主鏈中不具有磷原子的修飾的寡核苷酸也可以認(rèn)為是寡核苷酸。修飾的寡核苷酸主鏈可以包括，例如硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其它烷基膦酸酯(例如，3'-亞烷基膦酸酯和手性膦酸酯)、亞膦酸酯、磷酰胺酯(例如，3'-氨基磷酰胺酯和氨基烷基磷酰胺酯)、硫羰基磷酰胺酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯，以及具有正常3' -5'鍵以及其2' -5'連接類似物的硼烷磷酸酯，以及具有其中相鄰成對(duì)的核苷單元是3' -5'至5' -3'或2' -5'至5' -21連接的反轉(zhuǎn)極性的那些主鏈。還可以包括各種鹽、混合鹽以及游離酸形式。教導(dǎo)了這類修飾的主鏈寡核苷酸的制備的參考文獻(xiàn)提供在例如美國專利號(hào)4，469，863 和 5，750，666 中。具有其中不包括磷原子的修飾的寡核苷酸主鏈的治療性反義分子可以具有由短鏈烷基或環(huán)烷基核苷間鍵、混合的雜原子和烷基或環(huán)烷基核苷間鍵，或一個(gè)或多個(gè)短鏈雜原子或雜環(huán)核苷間鍵形成的主鏈。它們包括具有嗎啉基鍵的主鏈(部分由核苷的糖部分形成)；硅氧烷主鏈；硫化物、亞砜和砜主鏈；甲酰乙酰和硫代甲酰乙酰；亞甲基甲酰乙酰和硫代甲酰乙酰主鏈；含亞烷基主鏈；氨基磺酸酯主鏈；亞甲基亞氨基和亞甲基肼基主鏈；磺酸酯和磺酰胺主鏈；酰胺主鏈；以及具有混合的N、0、S和CH2組成部分的其它主鏈。教導(dǎo)了這類修飾的主鏈寡核苷酸的制備的參考文獻(xiàn)提供在例如美國專利號(hào)5，235，033和5，596，086中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療性反義化合物是寡核苷酸類似物，其中核苷酸單元的糖和核苷間鍵(即主鏈)均置換為新型基團(tuán)，而保持堿基單元與適當(dāng)?shù)暮怂岚袠?biāo)的雜交。已經(jīng)顯示出具有優(yōu)良雜交特性的這樣一種寡核苷酸類似物被稱為肽核酸(PNA)。在PNA化合物中，寡核苷酸的糖主鏈置換為含酰胺的主鏈(例如，氨基乙基甘氨酸主鏈)。核苷堿基被保留并且直接或間接結(jié)合至主鏈的酰胺部分的氮雜氮原子。教導(dǎo)了這類修飾的主鏈寡核苷酸的制備的參考文獻(xiàn)提供在例如Nielsen等，Science254 =1497-1500 (1991)以及美國專利號(hào) 5，539，082 中。其它有用的治療性反義寡核苷酸可以具有硫代磷酸酯主鏈以及具有雜原子的寡核苷酸主鏈，并且具體是如美國專利號(hào)5，489，677中所教導(dǎo)的CH2NH0CH2、CH2N(CH3)OCH2、CH2ON(CH3)CH2、CH2N(CH3)N(CH3)CH2 以及 ON(CH3)CH2CH2(其中天然磷酸二酯主鏈表示為OPOCH2)，以及在美國專利號(hào)5，602，240中公開的酰胺主鏈。取代的糖部分還可以包括在修飾的寡核苷酸中。用于通過本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物遞送的治療性反義寡核苷酸可以在2'位置包括以下中的一個(gè)或多個(gè):0H ；F ;0_、S-或N-烷基；0_、S-或N-烯基；0_、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中燒基、稀基以及塊基可以是取代的或未取代的C1至Cltl燒基或C2至Cltl稀基和塊基。有用的修飾還可以包括 0[(CH2)nO]mCH3、0(CH2)n0CH3、O(CH2)nNH2、0(CH2)nCH3、O(CH2)nONH2 以及0(01上0叫((:2)11013]2，其中11和111是1至約10。此外，寡核苷酸可以在2'位置包括以下中的一個(gè)=C1至Cltl低級(jí)烷基、取代的低級(jí)烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3> 0CN、Cl、Br、CN、CF3> OCF3> SOCH3> S02CH3> ONO2, NO2, N3> NH2、雜環(huán)烷基、雜環(huán)烷芳基、氨基烷基氨基、多烷基氨基、取代的甲硅烷基、RNA裂解基團(tuán)、報(bào)道基團(tuán)、嵌插劑、用于改善寡核苷酸的藥代動(dòng)力學(xué)或藥效學(xué)特性的基團(tuán)，以及具有類似特性的其它取代基。其它有用的修飾包括烷氧基烷氧基，例如2'-甲氧基乙氧基(2' -OCH2CH2OCH3)、二甲基氨氧基乙氧基(2' -O(CH2)2ON(CH3)2),或二甲基氨基-乙氧基乙氧基(2' -OCH2OCH2N(CH2)2)。其它修飾可以包括2'-甲氧基(2' -OCH3) >2' _氛基丙氧基(2' -OCH2CH2CH2NH2)或2'-氣(2' -F)。類似的修飾還可以在寡核苷酸內(nèi)的其它位置，如3'末端核苷酸上的或2' -5'連接寡核苷酸中的糖的3'位置，以及5'末端核苷酸的5'位置上進(jìn)行。寡核苷酸還可以具有如環(huán)丁基部分等糖模擬物來替換戊呋喃糖基。教導(dǎo)了這類取代的糖部分的制備的參考文獻(xiàn)包括美國專利號(hào)4，981，957和5，359，044。治療性反義寡核苷酸還可以包括核苷堿基修飾或取代。本文使用的“未修飾的”或“天然的”核苷堿基包括嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)，以及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)以及尿嘧啶(U)。修飾的核苷堿基可以包括其它合成的或天然的核苷堿基，如5-甲基胞嘧啶(5-甲基-C)、5_羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鳥嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鳥嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-鹵代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4_硫代尿嘧啶、8-鹵代、8-氨基、8-氫硫基、8-硫烷基、8-羥基和其它8-取代的腺嘌呤和鳥嘌呤、5-鹵代，特別是5-溴、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧唆、7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤和7-脫氮腺嘌呤以及3-脫氮鳥嘌呤和3-脫氮腺嘌呤。其它有用的核苷堿基包括例如在美國專利號(hào)3，687，808中公開者。

某些核苷堿基取代可對(duì)增加本發(fā)明的反義寡核苷酸的結(jié)合親和力特別有用。例如，已經(jīng)顯示5-甲基胞嘧啶取代使核酸雙鏈體穩(wěn)定性增加0.6°C至1.2°C。(Sanghvi等，編著，Antisense Research and Applications,第 276-278 頁，CRC Press, Boca Raton, Fla.(1993))。其它有用的核苷堿基取代包括5-取代的嘧啶、6-氮雜嘧啶以及N-2、N-6和0_6取代的嘌呤，如2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。沒有必要將指定的反義寡核苷酸中的所有核苷堿基位置統(tǒng)一修飾。可以將以上提及的修飾中的多于一種并入單一寡核苷酸中或甚至并入在寡核苷酸內(nèi)的單一核苷處。適合于通過本文所述的綴合物、粒子或組合物遞送的治療性核酸還包括作為嵌合寡核苷酸的反義寡核苷酸?！扒逗稀狈戳x寡核苷酸可以含有兩個(gè)或更多個(gè)化學(xué)上相異的區(qū)，所述區(qū)各自由至少一個(gè)單體單元(例如，在寡核苷酸的情況下為核苷酸)構(gòu)成。嵌合寡核苷酸通常含有至少一個(gè)這樣的區(qū):其中寡核苷酸被修飾以便賦予例如增加的對(duì)核酸酶降解的抗性、增加的細(xì)胞攝入，和/或增加的對(duì)靶核酸的親和力。例如，嵌合寡核苷酸的區(qū)可以充當(dāng)如RNA酶H等酶的底物，所述RNA酶H能夠裂解如在靶mRNA與反義寡核苷酸之間形成的RNA: DNA雙鏈體的RNA鏈。因此，通過RNA酶H裂解這樣的雙鏈體可以大大增強(qiáng)反義寡核苷酸的有效性。治療性反義寡核苷酸可以在活體外合成。根據(jù)本發(fā)明使用的反義寡核苷酸可以通過已知的方法，例如通過固相合成來方便地合成。還可以使用相似的技術(shù)來制備修飾的寡核苷酸，如硫代磷酸酯或烷基化衍生物。反義多核苷酸包括與基因或mRNA互補(bǔ)的序列。反義多核苷酸包括但不限于:嗎啉基、2' -O-甲基多核苷酸、DNA、RNA等等?；诙嗪塑账岬谋磉_(dá)抑制劑可以在活體外聚合、是重組體、含有嵌合序列或這些組的衍生物?；诙嗪塑账岬谋磉_(dá)抑制劑可以含有核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、合成核苷酸，或任何合適的組合，以使得靶RNA和/或基因被抑制。本文使用的術(shù)語“雜交”意思是互補(bǔ)核苷或核苷酸堿基之間的氫鍵合，所述氫鍵合可以是Watson-Crick、Hoogsteen或反轉(zhuǎn)的Hoogsteen氫鍵合。例如，腺嘌呤和胸腺卩密唳，以及鳥嘌呤和胞嘧啶分別是通過形成氫鍵而配對(duì)的互補(bǔ)核苷堿基(通常在本領(lǐng)域中簡稱為“堿基”)。本文使用的“互補(bǔ)”是指在兩個(gè)核苷酸之間精確配對(duì)的能力。例如，如果寡核苷酸的某一位置處的核苷酸能夠與祀核酸分子中的核苷酸氫鍵合，則認(rèn)為寡核苷酸與革巴核酸在那一位置彼此互補(bǔ)。當(dāng)每個(gè)分子中足夠數(shù)量的對(duì)應(yīng)位置被可以與彼此氫鍵合的核苷酸占據(jù)時(shí)，寡核苷酸與靶核酸彼此互補(bǔ)。因此，“可特異性雜交”用來表示足夠程度的互補(bǔ)性或精確配對(duì)，以使得在寡核苷酸與靶核酸之間發(fā)生穩(wěn)定且特異性的結(jié)合。在本領(lǐng)域中應(yīng)理解，反義寡核苷酸的序列不需要與它的可特異性雜交的靶核酸的序列100%互補(bǔ)。當(dāng)(a)寡核苷酸與靶核酸的結(jié)合干擾了靶核酸的正常功能，并且(b)在其中希望特異性結(jié)合的條件下，即，在其中進(jìn)行活體外測(cè)定的條件下或在用于活體外測(cè)定或治療用途的生理?xiàng)l件下存在足夠的互補(bǔ)性以避免反義寡核苷酸與非靶序列的非特異性結(jié)合時(shí)，反義寡核苷酸是可特異性雜交的?；铙w外嚴(yán)謹(jǐn)性條件取決于溫度、時(shí)間以及鹽濃度(參見，例如Sambrook等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual， Cold Spring Harbor Laboratory Press，NY(1989))0通常來說，高至中等嚴(yán)謹(jǐn)性條件用于活體外特異性雜交中，以使得雜交發(fā)生在大致上相似的核酸之間，而不發(fā)生在不相似的核酸之間。特異性雜交條件是在40°C下于5xSSC (0.75M氯化鈉/0.075M檸檬酸鈉)中雜交I小時(shí)，隨后在40°C下于IxSSC中洗滌10次以及在室溫下于IxSSC中洗滌5次?；铙w內(nèi)雜交條件由支配反義寡核苷酸與靶序列的雜交的細(xì)胞內(nèi)條件(例如，生理PH和細(xì)胞內(nèi)離子條件)組成。通過相對(duì)低的嚴(yán)謹(jǐn)性條件可以在活體外模仿活體內(nèi)條件。例如，可以在活體外在37°C下于2xSSC(0.3M氯化鈉/0.03M檸檬酸鈉)、0.1% SDS中實(shí)施雜交?？梢栽?7°C下使用含有4xSSC、0.1% SDS的洗滌溶液，最后在45°C下于IxSSC中洗滌。反義分子與其靶核酸的特異性雜交可以干擾靶核酸的正常功能。對(duì)于靶DNA核酸，反義技術(shù)可以破壞復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。對(duì)于靶RNA核酸，反義技術(shù)可以破壞例如RNA至蛋白質(zhì)翻譯位點(diǎn)的移位、蛋白質(zhì)自RNA的翻譯、用于產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)mRNA物質(zhì)的RNA的拼接，以及RNA的催化活性。在編碼靶基因的核酸的情況中，這種對(duì)靶核酸功能的干擾的整體效果是抑制靶基因的表達(dá)。在本發(fā)明的背景下，“抑制靶基因的表達(dá)”意思是破壞靶核酸序列的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯，從而導(dǎo)致靶多肽的水平降低或使靶多肽完全不存在。
反義寡核苷酸，例如siRNA的反義鏈可被優(yōu)選地引導(dǎo)至靶核酸分子內(nèi)的特定靶標(biāo)。靶向方法包括鑒別靶核酸分子內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)，在所述位點(diǎn)可以發(fā)生反義相互作用，以使得將產(chǎn)生所希望的效果，例如抑制靶基因表達(dá)。傳統(tǒng)上，用于反義寡核苷酸的優(yōu)選靶位點(diǎn)包括涵蓋基因的開放閱讀框(ORF)的翻譯起始或終止密碼子的區(qū)。此外，ORF已經(jīng)在反義技術(shù)中有效靶向，5'和3'非翻譯區(qū)同樣如此。另外，反義寡核苷酸已被成功地引導(dǎo)至內(nèi)含子區(qū)和內(nèi)含子-外顯子接合區(qū)。然而，對(duì)靶核酸的序列和結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)(例如，翻譯起始密碼子、外顯子或內(nèi)含子的位置)的簡單認(rèn)識(shí)通常不足以確保引導(dǎo)至特定區(qū)的反義寡核苷酸將有效地結(jié)合靶核酸并且抑制靶核酸的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。在其天然狀態(tài)下，mRNA分子被折疊成復(fù)雜的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)，并且在這類結(jié)構(gòu)的內(nèi)部的序列難以接近反義寡核苷酸。為獲得最大有效性，可將反義寡核苷酸引導(dǎo)至最可接近的靶mRNA的區(qū)，即在或靠近折疊的mRNA分子的表面的區(qū)。mRNA分子的可接近區(qū)可以通過本領(lǐng)域已知的方法，包括使用RiboTAG 或mRNA可接近位點(diǎn)標(biāo)記(MAST)技術(shù)來鑒別。RiboTAG 技術(shù)公開于PCT申請(qǐng)?zhí)朣E01/02054中。一旦鑒別出一個(gè)或多個(gè)靶位點(diǎn)，就可以合成與靶標(biāo)足夠互補(bǔ)的反義寡核苷酸(即以足夠的強(qiáng)度和特異性雜交以得到所希望的效果)。通過使用例如RNA印跡法、RT-PCR、蛋白質(zhì)印跡法、ELISA或免疫組織化學(xué)染色法測(cè)量靶mRNA或蛋白質(zhì)的水平可以評(píng)估反義寡核苷酸抑制靶核酸的表達(dá)的有效性。

在一些實(shí)施方案中，可能有用的是靶向一個(gè)靶核酸的多個(gè)可接近區(qū)。在這類實(shí)施方案中，可以使用各自特異性雜交不同的可接近區(qū)的多個(gè)反義寡核苷酸。多個(gè)反義寡核苷酸可以一起或循序使用。在一些實(shí)施方案中，可能有用的是靶向多個(gè)靶核酸的多個(gè)可接近區(qū)。適^適合于通過本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物遞送的治療性核酸可以是適體(還叫做核酸配體或核酸適體)，所述適體是特異性結(jié)合靶分子的多肽，其中核酸分子具有與由靶分子在其天然環(huán)境中識(shí)別的序列不同的序列?；蛘?，適體可以是結(jié)合靶分子的核酸分子，其中靶分子不天然結(jié)合核酸。靶分子可以是任何相關(guān)分子。靶分子可以是例如多肽、碳水化合物、核酸分子或細(xì)胞。適體的靶標(biāo)是結(jié)合所述適體的三維化學(xué)結(jié)構(gòu)。例如,靶向核酸(例如RNA或DNA)的適體可以包括經(jīng)由互補(bǔ)性Watson-Crick堿基配對(duì)結(jié)合被如發(fā)夾環(huán)等其它結(jié)構(gòu)中斷的核酸靶標(biāo)的區(qū)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，適體結(jié)合靶蛋白的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，從而阻止天然存在的配體與靶蛋白的相互作用。在一個(gè)實(shí)施方案中，適體結(jié)合處于特定的發(fā)育階段或特定的疾病病況的細(xì)胞或組織。靶標(biāo)是細(xì)胞表面上的抗原，如細(xì)胞表面受體、整合素、跨膜蛋白、離子通道或膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，靶標(biāo)是腫瘤標(biāo)志物。腫瘤標(biāo)記物可以是存在于腫瘤中、在正常組織中不存在的抗原，或是在腫瘤中比在正常組織中更普遍的抗原。形成核酸配體的核酸可以由以下構(gòu)成:天然存在的核苷、修飾的核苷、具有在一個(gè)或多個(gè)核苷之間插入的烴連接基(例如亞烷基)或聚醚連接基(例如PEG連接基)的天然存在的核苷、具有在一個(gè)或多個(gè)核苷之間插入的烴或PEG連接基的修飾的核苷或其組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸配體的核苷酸或修飾的核苷酸可以置換為烴連接基或聚醚連接基，其條件是取代大致上不降低核酸配體的結(jié)合親和力和選擇性(例如，適體對(duì)靶標(biāo)的解離常數(shù)通常不大于約Ixl(T6M)?？梢酝ㄟ^任何方法，如通過指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化(SELEX)來制備適體。用于獲得核酸配體的SELEX方法描述于美國專利號(hào)5，567，588中，其整個(gè)教義以引用的方式并入本文。在本文所述的粒子內(nèi)，核酸試劑可以連接至另一部分，如上文描述的聚合物、本文所述的陽離子部分或親水聚合物如PEG。核酸試劑還可以是“游離”的，這意味著不連接至另一部分。在粒子包括多個(gè)核酸試劑的情況下，核酸試劑中的一些可以連接至另一部分而一些可以是游離的。例如，在某些實(shí)施方案中，粒子中的核酸試劑連接至粒子的聚合物。核酸試劑可以連接至粒子中的任何聚合物，例如疏水聚合物或含有親水和疏水部分的聚合物。在某些實(shí)施方案中，核酸在粒子中是“游離”的。核酸試劑可以通過一種或多種非共價(jià)相互作用，如范德華相互作用、疏水相互作用、氫鍵合、偶極-偶極相互作用、離子相互作用以及η堆積來與粒子的聚合物或其它組分締合。核酸試劑可以按照本文所述的聚合物-核酸試劑綴合物、粒子或組合物的不同量存在。當(dāng)存在于粒子中時(shí)，核酸試劑可以按照粒子的約0.1重量％至50重量％的量存在(例如,粒子的約I重量％至約50重量％、約I重量％至約30重量％、粒子的約I重量％至約20重量％、粒子的約4重量％至約25重量％，或粒子的約5重量％至約13重量％、14重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％或20重量％ )。另外的組分在一些實(shí)施方案中，粒子進(jìn)一步包含一種表面活性劑或多種表面活性劑的混合物。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑是PEG、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、泊洛沙姆、己基癸基三甲基氯化銨、聚山梨醇酯、聚氧乙烯酯、PEG-脂質(zhì)(例如，PEG-腦酰胺、d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、1，2_ 二硬脂?；?sn_甘油基_3_[磷酸基-raC-(l-甘油)]、卵磷脂或其混合物。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑是PVA并且PVA為約3kDa至約50kDa(例如，約5kDa至約45kDa、約7kDa至約42kDa、約9kDa至約30kDa,或約IlkDa至約28kDa)，并且多達(dá)約98%是水解了的(例如，約75% -95%、約80% -90%是水解了的，或約85%是水解了的)。在一些實(shí)施方案中，PVA的粘度為約2至約27cP。在一些實(shí)施方案中，PVA是陽離子PVA，例如如上文所述，例如像陽離子PVA的陽離子部分也可以充當(dāng)表面活性劑。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑是聚山梨醇酯80。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑是Sol咖廣HS15。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑不是脂質(zhì)(例如磷脂)或不包含脂質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑以粒子的多達(dá)約35重量％的量存在(例如，多達(dá)20重量％或多達(dá)25重量％、約15重量％至約35重量％、約20重量％至約30重量％，或約23重量％至約26重量％ )。在一些實(shí)施方案中，粒子與賦形劑(例如，碳水化合物組分)或穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑(例如本文所述的碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑)締合。然而不希望受理論的束縛，碳水化合物組分可以充當(dāng)穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑。在一些實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包括一種或多種糖、糖醇、碳水化合物(例如，蔗糖、甘露糖醇、環(huán)糊精或環(huán)糊精的衍生物(例如2-羥丙基-β-環(huán)糊精，在本文中有時(shí)也稱為ΗΡ-β-CD、或磺丁基-⑶，在本文中有時(shí)稱為CYTOSOL))、鹽、PEG、PVP或冠醚。在一些實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包括兩種或更多種碳水化合物，例如本文所述的兩種或更多種碳水化合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包括環(huán)狀碳水化合物(例如，環(huán)糊精或環(huán)糊精的衍生物，例如，α-、β-或Y-環(huán)糊精(例如，2-羥丙基-β-環(huán)糊精))和非環(huán)狀碳水化合物。示例性的非環(huán)狀寡糖包括具有少于10、8、6或4個(gè)單糖亞基的那些寡糖(例如，單糖或二糖(例如蔗糖、海藻糖、乳糖、麥芽糖)或其組合)。在一些實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是單糖，如糖醇(例如甘露糖醇)。在一個(gè)實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包含第一和第二組分，例如環(huán)狀碳水化合物和非環(huán)狀碳水化合物，例如單、二或四糖。在一個(gè)實(shí)施方案中，同粒子締合的環(huán)狀碳水化合物與非環(huán)狀碳水化合物的重量比是本文所述的重量比，例如0.5:1.5至1.5: 0.5。在一個(gè)實(shí)施方案中，碳水化合物組分、穩(wěn)定劑或凍干保護(hù)劑包含第一和第二組分(此處特指為A和B)，如下:(A)包含環(huán)狀碳水化合物并且(B)包含二糖；(A)包含多于一種環(huán)狀碳水化合物，例如β -環(huán)糊精(在本文中有時(shí)稱為β -⑶)或β -CD衍生物，例如HP- β -CD,并且(B)包含二糖；(A)包含環(huán)狀碳水化合物，例如β -⑶或β -⑶衍生物，例如HP- β -⑶，并且(B)
包含多于一種二糖；(A)包含多于一種環(huán)狀碳水化合物，并且⑶包含多于一種二糖；(A)包含環(huán)糊精，例如β -⑶或β -⑶衍生物，例如HP- β -⑶，并且(B)包含二糖；(A)包含β -環(huán)糊精，例如β -⑶衍生物，例如HP- β -CD,并且⑶包含二糖；
(A)包含β -環(huán)糊精，例如β -⑶衍生物，例如HP- β -CD，并且⑶包含蔗糖；(A)包含β -⑶衍生物，例如HP- β -CD，并且⑶包含蔗糖；(A)包含β -環(huán)糊精，例如β -⑶衍生物，例如HP- β -CD，并且⑶包含海藻糖；(A)包含β -環(huán)糊精，例如β -⑶衍生物，例如HP- β -CD,并且⑶包含蔗糖和海藻糖；(A)包含HP- β -⑶，并且(B)包含蔗糖和海藻糖。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A和B以以下比率存在:0.5:1.5至1.5: 0.5。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A和B以以下比率存在:3-1: 0.4-2 ；3-1: 0.4-2.5 ;3_1: 0.4-2;
3-1: 0.5-1.5 ；3-1: 0.5-1 ；3-1: I ;3_1: 0.6-0.9 ;以及 3: I: 0.7。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A和B以以下比率存在:2-1: 0.4-2 ；3-1: 0.4-2.5 ;2_1: 0.4-2;2-1: 0.5-1.5 ；2-1: 0.5-1;2-1: I ；2~1: 0.6-0.9;以及 2:1: 0.7。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分 A和 B 以以下比率存在:2-1.5: 0.4-2;2-1.5: 0.4-2.5 ;2_1.5: 0.4-2;2-1.5: 0.5-1.5 ；2-1.5: 0.5-1 ;2_1.5: I ;2_1.5: 0.6-0.9 ；2:1.5: 0.7。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A和B以以下比率存在:2.5-1.5: 0.5-1.5 ;2.2-1.6: 0.7-1.3 ；2.0-1.7: 0.8-1.2 ；1.8: I ；1.85: I 以及1.9: I。在一個(gè)實(shí)施方案中，組分A包含環(huán)糊精，例如環(huán)糊精，例如β_⑶衍生物，例如ΗΡ-β-⑶，并且⑶包含蔗糖，并且它們以以下比率存在:2.5-1.5: 0.5-1.5 ；2.2-1.6: 0.7-1.3 ;2.0-1.7: 0.8-1.2 ；1.8: I ；1.85: I 以及1.9: I。在一些實(shí)施方案中，粒子的表面可以大致上被表面活性劑或聚合物涂布，例如PVA、聚噁唑啉、聚乙烯吡咯烷、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚唾液酸或PEG。
綴合物粒子的一種或多種組分可以是綴合物的形式，即連接至另一部分。示例性綴合物包括核酸試劑-聚合物綴合物(例如，核酸試劑-疏水聚合物綴合物、核酸試劑-疏水-親水聚合物綴合物，或核酸試劑-親水聚合物綴合物)、陽離子部分-聚合物綴合物(例如，陽離子部分-疏水聚合物綴合物或陽離子部分-疏水-親水聚合物綴合物)、核酸試劑-陽離子聚合物綴合物，以及核酸試劑-疏水部分綴合物。本文所述的核酸試劑-聚合物綴合物包括聚合物(例如，疏水聚合物、親水聚合物或親水-疏水聚合物)和核酸試劑。本文所述的核酸試劑可以例如直接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)或通過連接基連接至本文所述的聚合物。核酸試劑可以連接至疏水聚合物(例如PLGA)、親水聚合物(例如PEG)或親水-疏水聚合物(例如PEG-PLGA)。核酸試劑可以連接至聚合物的一個(gè)末端，連接至聚合物的兩個(gè)末端，或連接至沿著聚合物鏈的一個(gè)點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑可以連接至沿著聚合物鏈的點(diǎn)，或多個(gè)核酸試劑可以經(jīng)由多官能的連接基連接至聚合物的末端。核酸試劑可以通過核酸試劑的2’、3’或5’位置連接至本文所述的聚合物。在核酸試劑是雙鏈(例如，siRNA)的實(shí)施方案中，核酸試劑可以通過有義或反義鏈連接。本文所述的陽離子部分-聚合物綴合物包括聚合物(例如，疏水聚合物或含有親水部分和疏水部分的聚合物)以及陽離子部分。本文所述的陽離子部分可以例如直接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)或通過連接基連接至本文所述的聚合物。陽離子部分可以連接至疏水聚合物HfUnPLGA)或具有疏水和親水部分的聚合物(例如PEG-PLGA)。陽離子部分可以連接至聚合物的一個(gè)末端，連接至聚合物的兩個(gè)末端，或連接至沿著聚合物鏈的一個(gè)點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)陽離子部分可以連接至沿著聚合物鏈的點(diǎn)，或多個(gè)陽離子部分可以經(jīng)由多官能的連接基連接至聚合物的末端。本文所述的核酸試劑-陽離子聚合物綴合物包括陽離子聚合物(例如，PE1、陽離子PVA、聚(組氨酸)、聚(賴氨酸)、或聚甲基丙烯酸(2-二甲氨基)乙酯)和核酸試劑。本文所述的核酸試劑可以例如直接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)或通過連接基連接至本文所述的聚合物。核酸試劑可以連接至疏水聚合物(例如PLGA)、親水聚合物(例如PEG)或具有疏水部分和親水部分的聚合物(例如PEG-PLGA)。核酸試劑可以連接至聚合物的一個(gè)末端，連接至聚合物的兩個(gè)末端，或連接至沿著聚合物鏈的一個(gè)點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑可以連接沿著至聚合物鏈的點(diǎn)，或多個(gè)核酸試劑可以經(jīng)由多官能的連接基連接至聚合物的末端。在一些實(shí)施方案中，綴合物可以包括與連接至本文所述的聚合物的核酸試劑形成雙鏈體的核酸。例如，本文所述的聚合物可以連接至核酸寡聚物(例如，單鏈DNA)，所述核酸寡聚物與核酸試劑雜交形成雙鏈體。例如可以使用細(xì)胞核酸酶裂解雙鏈體，從而在活體內(nèi)釋放核酸試劑。連接模式本文所述的核酸試劑或陽離子部分可以直接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)連接至本文所述的聚合物或疏水部分(例如聚合物)。連接可以在聚合物的末端或沿著聚合物的主鏈。例如，當(dāng)核酸試劑是雙鏈時(shí)，核酸試劑可以通過有義鏈或反義鏈連接至聚合物或陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑在聚合物的連接點(diǎn)被修飾；例如，核酸試劑的末端羥基部分(例如5’或3’末端羥基部分)轉(zhuǎn)化成與聚合物反應(yīng)的官能團(tuán)(例如，羥基部分轉(zhuǎn)化成氫硫基部分)。核酸試劑或陽離子部分的反應(yīng)性官能團(tuán)可以直接連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至聚合物上的官能團(tuán)。核酸試劑或陽離子部分可以經(jīng)由多種鍵，例如酰胺、酯、硫化物(例如，硫化馬來酰亞胺)、二硫化物、琥珀酰亞胺、肟、硅烷基醚、碳酸酯或氨基甲酸酯鍵連接至聚合物。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑或陽離子部分的羥基可以與聚合物的羧酸基反應(yīng)，從而在核酸試劑或陽離子部分與聚合物之間形成直接酯鍵。在另一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑或陽離子部分的氨基可以連接至聚合物的羧酸基，形成酰胺鍵。在一個(gè)實(shí)施方案中，氫硫基修飾的核酸試劑可以與聚合物(例如，丙烯酸酯PLGA，或吡啶基-SS-活化的PLGA或馬來酰亞胺活化的PLGA)的末端上的反應(yīng)性部分反應(yīng)，以形成硫化物或二硫化物或硫醚鍵(例如硫化物鍵)。示例性連接模式包括由點(diǎn)擊化學(xué)產(chǎn)生者(例如，酰胺鍵、酯鍵、縮酮、琥珀酸酯或三唑以及W02006/115547中描述者)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑或陽離子部分可以直接連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)至聚合物的末端。例如，在末端具有羧酸基團(tuán)的聚合物可共價(jià)連接至核酸試劑或陽離子部分的羥基、氫硫基或氨基部分，從而形成酯、硫酯或酰胺鍵。在另一個(gè)實(shí)施方案中，核酸試劑或陽離子部分可以沿著聚合物的主鏈直接連接(例如，不存在來自插入間隔基部分的原子)。例如，當(dāng)核酸試劑是雙鏈時(shí)，核酸試劑可以通過有義鏈或反義鏈連接至聚合物或陽離子部分。在某些實(shí)施方案中，在其它聚合物末端或試劑的其它反應(yīng)性取代基上可能需要合適的保護(hù)基以促進(jìn)形成特定希望的綴合物。例如，可以使用例如甲硅烷基(例如三甲基甲硅烷基)或酰基(例如乙?；?來保護(hù)具有羥基末端的聚合物。例如，可以使用乙?；蚱渌Ｗo(hù)基來保護(hù)核酸試劑或陽離子部分。在一些實(shí)施方案中，將核酸試劑或陽離子部分連接至聚合物的方法可以產(chǎn)生包含具有相同的聚合物和相同的核酸試劑或陽離子部分，但是核酸試劑或陽離子部分與聚合物之間的鍵在性質(zhì)上不同的綴合物的混合物的組合物。例如，當(dāng)核酸試劑或陽離子部分具有多個(gè)可與聚合物反應(yīng)的反應(yīng)性部分時(shí)，核酸試劑或陽離子部分與聚合物的反應(yīng)產(chǎn)物可以包括其中核酸試劑或陽離子部分經(jīng)由一個(gè)反應(yīng)性部分連接至聚合物的綴合物，以及其中核酸試劑或陽離子部分經(jīng)由另一個(gè)反應(yīng)性部分連接至聚合物的綴合物。例如，當(dāng)核酸試劑連接至聚合物時(shí)，反應(yīng)產(chǎn)物可以包括這樣的綴合物:其中核酸試劑中的一些通過核酸試劑的3’端連接至聚合物，并且核酸試劑中的一些通過核酸試劑的5’端連接至聚合物。例如，當(dāng)具有雙鏈區(qū)的核酸試劑連接至聚合物時(shí)，反應(yīng)產(chǎn)物可以包括這樣的綴合物:其中具有雙鏈區(qū)的核酸試劑中的一些通過有義端連接至聚合物，并且具有雙鏈區(qū)的核酸試劑中的一些連接至反義端。同樣，在陽離子部分具有多個(gè)反應(yīng)性基團(tuán)如多個(gè)胺的情況下，反應(yīng)產(chǎn)物可以包括這樣的綴合物:其中陽離子部分中的一些通過第一反應(yīng)性基團(tuán)連接至聚合物，并且陽離子部分中的一些通過第二反應(yīng)性基團(tuán)連接至聚合物。在一些實(shí)施方案中，將核酸試劑或陽離子部分連接至聚合物的方法可以涉及使用保護(hù)基。例如，當(dāng)核酸試劑或陽離子部分具有多個(gè)可與聚合物反應(yīng)的反應(yīng)性部分時(shí)，核酸試劑或陽離子部分可以在某些反應(yīng)性位置加以保護(hù)，以使得聚合物將經(jīng)由指定位置連接。在一個(gè)實(shí)施方案中，在連接至聚合物時(shí)，核酸或核酸試劑可以在核酸試劑的3’或5’端加以保護(hù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在連接至聚合物時(shí)，具有雙鏈區(qū)的核酸試劑可以在有義或反義端加以保護(hù)。在一些實(shí)施方案中，選擇性偶合的產(chǎn)物(如上文描述者)可以組合以形成聚合物-試劑綴合物的混合物。例如,通過核酸試劑的3’端連接至核酸試劑的PLGA和通過核酸試劑的5’端連接至核酸試劑的PLGA可以組合形成這兩種綴合物的混合物，并且混合物可以用于制備粒子。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過有義鏈(例如有義鏈的5’端)連接至siRNA的PLGA和通過反義鏈連接至siRNA的PLGA可以組合形成這兩種綴合物的混合物，并且混合物可以用于制備粒子。聚合物-試劑綴合物可以包含單個(gè)連接至聚合物的核酸試劑或陽離子部分。核酸試劑或陽離子部分可以連接至聚合物的末端，或連接至沿著聚合物鏈的點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，綴合物可以包含多個(gè)連接至聚合物的核酸試劑或陽離子部分(例如，2、3、4、5、6個(gè)或更多個(gè)試劑可以連接至聚合物)。核酸試劑或陽離子部分可以相同或不同。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑或陽離子部分可以連接至多官能的連接基(例如聚谷氨酸連接基)。在一些實(shí)施方案中，多個(gè)核酸試劑或陽離子部分可以連接至沿著聚合物鏈的點(diǎn)。連接基核酸試劑或陽離子部分可以經(jīng)由連接基，如本文所述的連接基連接至如聚合物或疏水部分(如脂質(zhì))等部分，或彼此連接。例如:疏水聚合物可以連接至陽離子部分；疏水聚合物可以連接至核酸試劑；親水-疏水聚合物可以連接至核酸試劑；親水聚合物可以連接至核酸試劑；親水聚合物可以連接至陽離子部分；或疏水部分可以連接至陽離子部分，或核酸試劑可以連接至陽離子部分。核酸試劑可以通過核酸試劑的2’、3’或5’位置，如核酸試劑的末端2’、3’或5’位置(例如通過本文所述的連接基)連接至如本文所述的聚合物等部分。在核酸試劑是雙鏈(例如，siRNA)的實(shí)施方案中，核酸試劑可以通過有義或反義鏈連接。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑通過聚合物(例如，PLGA聚合物，其中連接是在羥基末端或羧基末端)的末端連接。在某些實(shí)施方案中，多個(gè)連接基部分連接至聚合物，從而允許例如在連接基在聚合物的多個(gè)地方(如沿著聚合物主鏈)連接的情況下，多個(gè)核酸試劑或陽離子部分通過連接基連接至聚合物。在一些實(shí)施方案中，連接基被配置成允許多個(gè)第一部分通過連接基連接至第二部分，例如多個(gè)核酸試劑可以經(jīng)由分支的連接基連接至單個(gè)聚合物，如PLGA聚合物，其中分支的連接基包含多個(gè)核酸可以通過其連接的官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑或陽離子部分在生物條件下從連接基釋放(即在生理?xiàng)l件下可裂解)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，單個(gè)連接基例如在聚合物的末端連接至聚合物。連接基可以包含例如亞烷基(二價(jià)烷基)。在一些實(shí)施方案中，亞烷基連接基的一個(gè)或多個(gè)碳原子可以置換為一個(gè)或多個(gè)雜原子或官能團(tuán)(例如，硫醚、氨基、醚、酮、酰胺、硅烷基醚、肟、氨基甲酸酯、碳酸酯、二硫化物或雜環(huán)或雜芳香族部分)。例如，丙烯酸酯聚合物(例如，丙烯酸酯PLGA)可以與氫硫基修飾的核酸試劑(例如，氫硫基修飾的siRNA)反應(yīng)形成通過硫化物鍵(例如，硫代丙酸酯鍵)連接的核酸試劑-聚合物綴合物。通過使丙烯酰氯與聚合物的羥基末端反應(yīng)，丙烯酸酯可以連接至聚合物的末端(例如，PLGA聚合物的羥基末端，如50: 50PLGA聚合物)。在一些實(shí)施方案中，除了允許第一部分連接至第二部分的官能團(tuán)之外，連接基還具有另外的官能團(tuán)。在一些實(shí)施方案中，另外的官能團(tuán)可以在生理?xiàng)l件下裂解。這樣的連接基可以例如通過使第一活化部分如核酸試劑或陽離子部分(例如本文所述的核酸試劑或陽離子部分)與第二活化部分如聚合物(例如，本文所述的聚合物)反應(yīng)而形成，從而產(chǎn)生包括通過將核酸試劑或陽離子部分接合至聚合物而形成的官能團(tuán)的連接基。任選地，另外的官能團(tuán)可以提供用于另外的連接的位點(diǎn)或者允許在生理?xiàng)l件下裂解。例如，另外的官能團(tuán)可以包括在生理?xiàng)l件下可裂解的二硫化物、酯、肟、碳酸酯、氨基甲酸酯或酰胺鍵。在一些實(shí)施方案中，將連接基連接至第一或第二部分的官能團(tuán)中的一者或兩者可以在生理?xiàng)l件下裂解，如酯、酰胺或二硫化物。在一些實(shí)施方案中，另外的官能團(tuán)是雜環(huán)的或雜芳香族部分。核酸試劑可以通過核酸試劑的2’、3’或5’位置，如核酸試劑的末端2’、3’或5’位置通過連接基(例如，包含兩個(gè)或三個(gè)官能團(tuán)的連接基，如本文所述的連接基)連接至如本文所述的聚合物等部分。在核酸試劑是雙鏈(例如，siRNA)的實(shí)施方案中，核酸試劑可以通過有義或反義鏈連接。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑通過聚合物(例如，PLGA聚合物，其中連接是在羥基末端或羧基末端)的末端連接。在一些實(shí)施方案中，連接基包括可以調(diào)節(jié)連接基中的官能團(tuán)的反應(yīng)性的部分(例如，可以例如在生理?xiàng)l件下增加或降低官能團(tuán)的反應(yīng)性的另一個(gè)官能團(tuán)或原子)。例如，如圖1A-C所示，具有第一反應(yīng)性基團(tuán)的核酸試劑(NA)，例如RNA可與具有第二反應(yīng)性基團(tuán)的聚合物反應(yīng)以將核酸試劑連接至聚合物，同時(shí)提供生物可裂解的官能團(tuán)。所生成的連接基包括將核酸試劑連接至由于連接而產(chǎn)生的官能團(tuán)(即通過形成共價(jià)鍵)的第一間隔基如亞烷基間隔基，以及將聚合物連接至由于連接而產(chǎn)生的官能團(tuán)的第二間隔基如亞烷基間隔基(例如，約C1至約C6)。如圖1A-C所示，核酸試劑(NA)可以經(jīng)由部分Y連接至第一間隔基，所述Y也是生物可裂解的。Y可以是例如-0-、-S-或-NH-。在一些實(shí)施方案中，第二間隔基可以連接至離去基團(tuán)X-，例如鹵代(例如氯代)或N-羥基琥珀酰亞胺基(NHS)。第二間隔基可以經(jīng)由與聚合物末端，例如聚合物的末端-0H、-C02H、-NH2或-SH，例如PLGA的末端-OH或-CO2H連接的另外的官能團(tuán)⑵連接至聚合物。另外的官能團(tuán)(Z)可以是例如-o-、-oc( = o)-、-oc(=0)0-、-OC ( = O) NR-、-NR-、-NRC ( = 0)-、-NRC ( = 0)0-、-NRC ( = 0)NR ' -、-NRS (=0)2-、-S-、-S( = 0)-、-S( = 0)2-、-C( = 0)0-或-C ( = 0)NR-，并且提供另外的用于反應(yīng)，例如連接或裂解的位點(diǎn)。核酸試劑可以通過核酸試劑的2’、3’或5’位置，如核酸試劑的末端2’、3’或5’
位置連接。在核酸試劑是雙鏈(例如，siRNA)的實(shí)施方案中，核酸試劑可以通過有義或反義鏈連接。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑通過間隔基連接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中連接是在羥基末端或羧基末端)的末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，例如如圖1A所示，氫硫基修飾的核酸試劑(例如，氫硫基修飾的siRNA)可以與吡啶基-SS-活化的聚合物(例如，吡啶基-SS-活化的PLGA，例如吡啶基-SS-活化的5050PLGA)反應(yīng)以形成通過二硫化物鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，氫硫基修飾的核酸試劑(例如，氫硫基修飾的siRNA)可以與馬來酰亞胺活化的聚合物(例如，馬來酰亞胺活化的PLGA，例如馬來酰亞胺活化的5050PLGA)反應(yīng)以形成通過馬來酰亞胺硫化物鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，氫硫基修飾的核酸試劑(例如，氫硫基修飾的siRNA)可以與丙烯酸酯活化的聚合物(例如，丙烯酸酯活化的PLGA，例如丙烯酸酯活化的5050PLGA)反應(yīng)以形成通過巰基丙酸酯鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。核酸試劑可以通過核酸試劑的2’、3’或5’位置，如核酸試劑的末端2’、3’或5’連接。在核酸試劑是雙鏈(例如，siRNA)的實(shí)施方案中，核酸試劑可以通過有義或反義鏈連接。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑通過間隔基連接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中連接是在羥基末端或羧基末端)的末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，例如如圖1B所示，胺修飾的核酸試劑(例如，胺修飾的siRNA)可以與具有活化的羧酸或酯的聚合物(例如，活化的羧酸PLGA，例如活化的羧酸5050PLGA，例如SPA活化的羧酸5050PLGA，例如SPA活化的羧酸5050PLGA)反應(yīng)以形成通過酰胺鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，胺修飾的核酸試劑(例如，胺修飾的siRNA)可以與活化的聚合物(例如，活化的PLGA，例如活化的5050PLGA)反應(yīng)以形成通過氨基甲酸酯鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，胺修飾的核酸試劑(例如，胺修飾的siRNA)可以與活化的聚合物(例如，活化的PLGA，例如活化的5050PLGA)反應(yīng)以形成通過碳酰胺鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，胺修飾的核酸試劑(例如，胺修飾的siRNA)可以與活化的聚合物(例如，活化的PLGA，例如活化的5050PLGA)反應(yīng)以形成通過氨基烷基磺酰胺鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。核酸試劑可以通過核酸試劑的2’、3’或5’位置，如核酸試劑的末端2’、3’或5’連接。在核酸試劑是雙鏈(例如，siRNA)的實(shí)施方案中，核酸試劑可以通過有義或反義鏈連接。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑通過間隔基連接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中連接是在羥基末端或羧基末端)的末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，例如如圖1C所示，羥胺修飾的核酸試劑(例如，羥胺修飾的siRNA)可以與醛活化的聚合物(例如，醛活化的PLGA，例如醛活化的5050PLGA，例如甲醛活化的5050PLGA，例如甲醛活化的5050PLGA)反應(yīng)以形成通過醛肟鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。核酸試劑可以通過核酸試劑的2’、3’或5’位置，如核酸試劑的末端2’、3’或5’連接。在核酸試劑是雙鏈(例如，siRNA)的實(shí)施方案中，核酸試劑可以通過有義或反義鏈連接。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑通過間隔基連接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中連接是在羥基末端或羧基末端)的末端。在一個(gè)實(shí)施方案中，例如如圖1C所示，炔修飾的核酸試劑(例如，炔修飾的siRNA，例如乙炔修飾的siRNA)可以與疊氮化物活化的聚合物(例如，疊氮化物活化的PLGA，例如疊氮化物活化的5050PLGA)反應(yīng)以形成通過三唑鍵連接的核酸試劑-聚合物綴合物。核酸試劑可以通過核酸試劑的2’、3’或5’位置，如核酸試劑的末端2’、3’或5’連接。在核酸試劑是雙鏈(例如，siRNA)的實(shí)施方案中，核酸試劑可以通過有義或反義鏈連接。在一些實(shí)施方案中，核酸試劑通過間隔基連接至聚合物(例如，PLGA聚合物，其中連接是在羥基末端或羧基末端)的末端。在一些實(shí)施方案中，連接基在連接至試劑和聚合物之前可以具有以下官能團(tuán)中的一個(gè)或多個(gè):胺、酰胺、羥基、羧酸、酯、鹵素、氫硫基、馬來酰亞胺、碳酸酯或氨基甲酸酯。在一些實(shí)施方案中，官能團(tuán)在通過連接基連接第一和第二部分之后仍然保留在連接基中。在一些實(shí)施方案中，連接基包括調(diào)節(jié)官能團(tuán)的反應(yīng)性的一個(gè)或多個(gè)原子或基團(tuán)(例如，以使得官能團(tuán)如通過在生理?xiàng)l件下水解或還原而裂解)。在一些實(shí)施方案中，連接基可以在連接基內(nèi)包含氨基酸或肽。經(jīng)常地，在這類實(shí)施方案中，肽連接基可以在還原條件下通過水解，或由特定的酶(例如在生理?xiàng)l件下)裂解。當(dāng)連接基是二價(jià)有機(jī)分子的殘基時(shí)，連接基的裂解可以在連接基自身內(nèi)部，或它可以在將連接基偶合至綴合物的剩余部分，例如偶合至核酸試劑或聚合物的一個(gè)鍵處。在一些實(shí)施方案中，連接基可以選自以下之一或連接基可以包含以下之一:
權(quán)利要求
1.一種粒子，其包含: a)多個(gè)疏水部分； b)多個(gè)親水-疏水聚合物； c)任選地，多個(gè)陽離子部分；以及 d)多個(gè)核酸試劑，其中所述多個(gè)核酸試劑中的至少一部分是 (i)共價(jià)連接至以下中的任一者: a)的疏水部分，例如，疏水聚合物或 b)的親水-疏水聚合物，或 ( )與共價(jià)連接至a)的疏水部分或b)的親水-疏水聚合物中任一者的核酸形成雙鏈體。
2.如權(quán)利要求1所述的粒子，其中所述粒子包含多個(gè)陽離子部分。
3.如權(quán)利要求1所述的粒子，其中所述疏水部分是疏水聚合物。
4.如權(quán)利要求1所述的粒子，其中所述疏水部分是疏水聚合物，并且a)的所述疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至d)的核酸試劑。
5.如權(quán)利要求4所述的粒子，其中d)的所述核酸試劑中的至少一部分經(jīng)由連接基共價(jià)連接至所述疏水聚合物。
6.如權(quán)利要求4所述的粒子，其中a)的所述疏水聚合物中的至少一部分各自通過所述核酸試劑的5’位置共價(jià)連接至d)的核酸試劑。
7.一種粒子，其包含: a)多個(gè)核酸試劑-聚合物綴合物，每個(gè)所述綴合物包含核酸試劑，所述核酸試劑 (i)連接至疏水聚合物或 ( )與共價(jià)連接至疏水聚合物的核酸形成雙鏈體； b)多個(gè)親水-疏水聚合物；以及 c)任選地，多個(gè)陽離子部分。
8.如權(quán)利要求7所述的粒子，其中所述粒子包含多個(gè)陽離子部分。
9.如權(quán)利要求7所述的粒子，其中所述粒子進(jìn)一步包含疏水聚合物，其中所述疏水聚合物未連接至核酸試劑。
10.如權(quán)利要求7所述的粒子，其中所述核酸試劑經(jīng)由連接基共價(jià)連接至疏水聚合物。
11.一種粒子，其包含: a)多個(gè)疏水部分； b)多個(gè)核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物，其中所述多個(gè)的每個(gè)核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物的核酸試劑 (i)共價(jià)連接至所述親水-疏水聚合物或 ( )與共價(jià)連接至所述親水-疏水聚合物的核酸形成雙鏈體；以及 c)任選地，多個(gè)陽離子部分。
12.如權(quán)利要求11所述的粒子，其中所述粒子包含多個(gè)陽離子部分。
13.—種粒子，其包含: a)多個(gè)疏水聚合物； b)多個(gè)親水-疏水聚合物；c)多個(gè)陽離子部分，其中所述多個(gè)陽離子部分中的至少一部分連接至a)的疏水聚合物或b)的親水-疏水聚合物；以及 d)多個(gè)核酸試劑。
14.如權(quán)利要求13所述的粒子，其中a)的所述多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分未共價(jià)連接至c)的陽離子部分或d)的核酸試劑。
15.如權(quán)利要求13所述的粒子，其中a)的所述多個(gè)疏水聚合物中的至少一部分各自共價(jià)連接至c)的陽離子部分。
16.如權(quán)利要求13所述的粒子，其中所述陽離子部分是精胺或四甲基化精胺。
17.—種粒子，其包含: a)多個(gè)疏水聚合物；· b)任選地，多個(gè)親水-疏水聚合物； c)多個(gè)陽離子部分；以及 d)多個(gè)核酸試劑，其中所述多個(gè)核酸試劑中的至少一部分共價(jià)連接至疏水聚合物或與共價(jià)連接至親水聚合物的核酸形成雙鏈體。
18.如權(quán)利要求17所述的粒子，其中所述核酸試劑共價(jià)連接至親水聚合物。
19.如權(quán)利要求17所述的粒子，其中所述親水聚合物是聚乙二醇(PEG)。
20.如權(quán)利要求17所述的粒子，其中所述親水聚合物共價(jià)連接至脂質(zhì)。
21.如權(quán)利要求17所述的粒子，其中所述粒子大致上不含疏水-親水聚合物。
22.—種粒子，其包含: a)多個(gè)疏水聚合物； b)多個(gè)親水-疏水聚合物；以及 c)多個(gè)核酸試劑-陽離子聚合物綴合物。
23.如權(quán)利要求22所述的粒子，其中所述陽離子聚合物是PVA。
24.如權(quán)利要求22所述的粒子，其中所述核酸試劑-陽離子聚合物綴合物是SiRNA-陽離子PVA綴合物。
25.—種粒子，其包含: a)多個(gè)疏水聚合物； b)多個(gè)親水-疏水聚合物； c)任選地，多個(gè)陽離子部分；以及 d)多個(gè)核酸試劑；其中c)的所述陽離子部分的大部分和d)的所述核酸試劑的大部分未共價(jià)連接至疏水聚合物或親水-疏水聚合物。
26.如權(quán)利要求25所述的離子，其中所述核酸試劑或陽離子部分包埋于所述粒子中。
27.如權(quán)利要求25所述的粒子，其中所述粒子包含多個(gè)陽離子部分。
28.如權(quán)利要求27所述的粒子，其中所述陽離子部分是陽離子聚合物。
29.如權(quán)利要求1至28中任一項(xiàng)所述的粒子，其中所述疏水部分或疏水聚合物是PLGA0
30.如權(quán)利要求29所述的粒子，其中所述PLGA在末端上被反應(yīng)性基團(tuán)修飾。
31.如權(quán)利要求1至20和22至29中任一項(xiàng)所述的粒子，其中所述親水-疏水聚合物是PEG-PLGA。
32.如權(quán)利要求1至31中任一項(xiàng)所述的粒子，其中所述陽離子部分包括至少一個(gè)伯胺、仲胺、叔胺或季胺。
33.如權(quán)利要求1至32中任一項(xiàng)所述的粒子，其中所述核酸試劑是siRNA。
34.如權(quán)利要求1至33中任一項(xiàng)所述的粒子，其中所述粒子進(jìn)一步包含表面活性劑。
35.如權(quán)利要求1至34中任一項(xiàng)所述的粒子，其中所述粒子的ζ電位是約_20mV至約+20mV
36.一種組合物，其包含如權(quán)利要求1至35中任一項(xiàng)所述的多個(gè)粒子。
37.如權(quán)利要求36所述的組合物，其中所述組合物是藥物組合物。
38.如權(quán)利要求36所述的組合物，其中所述粒子具有小于200nm的Dv90。
39.一種試劑盒，其包含如權(quán)利要求1至35中任一項(xiàng)所述的多個(gè)粒子或權(quán)利要求36至39中任一項(xiàng)所述的組合物。
40.一種單一劑量單位，其包含如權(quán)利要求1至35中任一項(xiàng)所述的多個(gè)粒子或權(quán)利要求36至39中任一項(xiàng)所述的組合物。
41.一種治療患有病癥的受試者的方法，其包括將有效量的如權(quán)利要求1至35中任一項(xiàng)所述的粒子或權(quán)利要求36至39中任一項(xiàng)所述的組合物施用至所述受試者，由此治療受試者。
42.一種核酸試劑- 疏水聚合物綴合物，其包含共價(jià)連接至疏水聚合物的核酸試劑，其中所述核酸試劑是經(jīng)由有義鏈的5’末端連接至所述聚合物的siRNA。
43.如權(quán)利要求42所述的綴合物，其中所述核酸試劑經(jīng)由連接基共價(jià)連接至所述疏水聚合物。
44.一種核酸試劑-親水-疏水聚合物綴合物，其包含共價(jià)連接至親水-疏水聚合物的核酸試劑。
45.如權(quán)利要求44所述的綴合物，其中所述核酸試劑連接至所述親水-疏水聚合物的未水部分。
46.如權(quán)利要求44所述的綴合物，其中所述核酸試劑連接至所述親水-疏水聚合物的疏水部分。
47.一種制備包含核酸試劑的粒子的方法，所述方法包括在極性溶劑中在允許形成粒子的條件下組合(a)核酸試劑-疏水聚合物綴合物，各核酸試劑-疏水聚合物綴合物包含共價(jià)連接至疏水聚合物的核酸試劑，其中所述核酸試劑-疏水聚合物綴合物與陽離子部分締合， b)多個(gè)親水-疏水聚合物；以及 (C)多個(gè)疏水聚合物由此形成粒子。
48.一種如權(quán)利要求36至39中任一項(xiàng)所述的組合物,所述組合物當(dāng)施用至受試者時(shí)使得靶基因的表達(dá)的減少程度與(a)用以不同于粒子或綴合物的制劑施用至受試者的核酸試劑觀察到的靶基因的表達(dá)的減少程度或(b)在不存在施用核酸試劑或其它治療劑的情況下觀察到的靶基因的表達(dá)的減少程度相比高至少10 %、20 %、50 %、75 %、80 %、90 %、100%、200%或 500%。
49.一種儲(chǔ)存如權(quán)利要求42至46中任一項(xiàng)所述的綴合物、如權(quán)利要求1至29中任一項(xiàng)所述的粒子、或如權(quán)利要求36至39中任一項(xiàng)所述的組合物的方法，所述方法包括: (a)提供安置于容器中的所述綴合物、粒子或組合物； (b)儲(chǔ)存所述綴合物、粒子或組合物；以及 (c)將所述容器移至第二位置或從所述容器移除所述綴合物、粒子或組合物的全部或等分部分。
50.如權(quán)利要求 49所述的方法，其中儲(chǔ)存的所述綴合物、粒子或組合物是復(fù)原制劑。
全文摘要
用于遞送核酸試劑的粒子和綴合物。含有所述粒子、所述綴合物或兩者的組合物。使用所述粒子、所述綴合物以及所述組合物的方法。
文檔編號(hào)A61K9/50GK103080313SQ201180040385
公開日2013年5月1日申請(qǐng)日期2011年8月18日優(yōu)先權(quán)日2010年8月20日
發(fā)明者S·伊萊亞索夫, O·S·費(fèi)策, J·黃, P·利姆索, P-S·額, S·斯文松, D·E·貝爾格斯特倫申請(qǐng)人:天藍(lán)制藥公司

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該技術(shù)已申請(qǐng)專利。僅供學(xué)習(xí)研究，如用于商業(yè)用途，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)所有人。
技術(shù)研發(fā)人員：S·伊萊亞索夫;O·S·費(fèi)策;J·黃;P·利姆索;P-S·額;S·斯文松;D·E·貝爾格斯特倫
技術(shù)所有人：天藍(lán)制藥公司
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