專(zhuān)利名稱(chēng)：一種肝靶向藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，特別是一種可將藥物輸送到肝組織的病灶區(qū)從而實(shí)現(xiàn)定向給藥的肝靶向藥物組合物。本發(fā)明還涉及前述藥物組合物的制備方法。
背景技術(shù)：
肝細(xì)胞癌(h印atocellular carcinoma,HCC)是一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，在惡性腫瘤死亡率中居第三位。目前，手術(shù)切除是肝癌治療的首選方案，常用于早期肝癌的治療。但是肝癌手術(shù)往往存在切除不徹底、癌細(xì)胞易擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移等問(wèn)題。此時(shí)，手術(shù)切除已無(wú)法適用， 只能采用化療等姑息性治療的方法?；熕幬锏闹委熓菬o(wú)選擇性的，其在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)正常細(xì)胞也存在很大毒性。因此，如何提高藥物在肝臟腫瘤組織中的藥物濃度，提高化療藥物對(duì)肝癌的治療效果，同時(shí)降低藥物對(duì)其他正常組織的毒副作用，是目前肝癌治療中急需解決的重要問(wèn)題。聚乙二醇(PEG)修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(PEGylated liposome)作為一種新型的給藥系統(tǒng)，已獲得了美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)的認(rèn)證，并被廣泛地應(yīng)用于腫瘤治療中。 這種給藥系統(tǒng)與普通脂質(zhì)體一樣，采用安全、無(wú)毒、可生物降解的磷脂為主要材料而制得， 具有良好的生物相容性。PEG的修飾使藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間延長(zhǎng)，有效地避免了內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)的吞噬，同時(shí)，增加滯留和滲透作用，即Era效應(yīng)，可使藥物在腫瘤部位的蓄積量增大。目前，已上市的產(chǎn)品有阿霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(Doxil , Ortho Biotech, andCaelyx , Schering Plough)和柔紅霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(DaunoXomeDiatos)。但是，長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體也存在一個(gè)重大的缺陷，即該給藥系統(tǒng)只能通過(guò)Era效應(yīng)被動(dòng)靶向于腫瘤組織，卻無(wú)法與腫瘤細(xì)胞發(fā)生特異性的結(jié)果。這使得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的抗腫瘤效果并不理想。而在長(zhǎng)循環(huán)的基礎(chǔ)上，將特定的抗體或配體連接到脂質(zhì)體的表面，得到空間穩(wěn)定主動(dòng)靶向脂質(zhì)體，即能識(shí)別相應(yīng)的抗原或受體，提高脂質(zhì)體對(duì)腫瘤部位的選擇性，進(jìn)一步提高藥物對(duì)肝部腫瘤的治療效果。因此，采用配體修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體已成為提高抗癌藥物靶向性的重要手段。乳鐵蛋白(lactoferrin，Lf)是一種存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)的陽(yáng)離子糖蛋白，屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白家族。研究表明Lf是一種多功能蛋白，其可通過(guò)體內(nèi)乳鐵蛋白受體(LfR)的識(shí)別來(lái)參與各種生理功能的調(diào)節(jié)。由于血腦屏障中存在大量LfR，Lf已被成功的作為配體通過(guò)配體受體的結(jié)合運(yùn)用到腦靶向給藥系統(tǒng)中，以提高藥物的腦靶向作用。但是，Lf作為肝臟的靶向配體作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本申請(qǐng)的發(fā)明人通過(guò)細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了 Lf作為肝靶向作用，是一種有效的肝靶向配體，可將其肝靶向性和長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體載體的給藥特點(diǎn)相結(jié)合，設(shè)計(jì)一種新的具肝靶向性的藥物組合物，提高對(duì)肝癌的治療效果。基于上述背景，發(fā)明人設(shè)計(jì)了一種全新的藥物組合物，采用具有肝靶向功能的蛋白和PEG同時(shí)修飾的脂質(zhì)體裝載化療藥物，以達(dá)到增加藥物在肝臟腫瘤部位的濃度，提高肝腫瘤的治療效果。一方面，PEG的修飾可增加藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，通過(guò)EI3R效應(yīng)的被動(dòng)靶向作用，增加藥物在腫瘤部位的蓄積；另一方面，具有肝靶向功能的蛋白的修飾，可通
3過(guò)配體-受體介導(dǎo)的主動(dòng)靶向作用，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的攝取。綜上所述，本發(fā)明通過(guò)被動(dòng)靶向和主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)現(xiàn)對(duì)肝臟腫瘤組織的雙靶向給藥， 以增加肝臟腫瘤組織的藥物濃度，提高肝部腫瘤的治療效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種肝靶向長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體藥物組合物，其組成為具有肝靶向功能的蛋白、聚乙二醇、脂質(zhì)體以及至少一種抗腫瘤藥物，各組分在組合物中所占比重為具有肝靶向功能的蛋白0.01% -10%，聚乙二醇0.01% -30%，脂質(zhì)體40% -99. 88%，藥物 0. 05-40% ο本發(fā)明將抗腫瘤化療藥物裝載在脂質(zhì)體中，同時(shí)采用聚乙二醇和有肝靶向功能的蛋白對(duì)脂質(zhì)體表面進(jìn)行修飾。所述抗腫瘤藥物選自多柔吡星、阿柔比星、表柔比星、吡柔比星、絲裂霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、順鉬、卡鉬、喜樹(shù)堿、羥基喜樹(shù)堿、氟尿嘧啶、長(zhǎng)春新堿、 長(zhǎng)春堿、卡莫司汀。所述具有肝靶向功能蛋白為乳鐵蛋白(Lf)及其類(lèi)似物，乳鐵蛋白的類(lèi)似物是指乳鐵蛋白肽。其中乳鐵蛋白(Lf)包括牛乳鐵蛋白、鼠乳鐵蛋白、山羊乳鐵蛋白、豬乳鐵蛋白和人乳鐵蛋白；乳鐵蛋白的類(lèi)似物包括牛乳鐵蛋白肽、鼠乳鐵蛋白肽、山羊乳鐵蛋白肽、豬乳鐵蛋白肽和人乳鐵蛋白肽。其中優(yōu)選為牛乳鐵蛋白和人乳鐵蛋白。本發(fā)明使用的聚乙二醇的分子量為200-5000，優(yōu)選為2000-3000。本發(fā)明的藥物組合物中蛋白的連接方法，包括將蛋白末端的氨基、羧基通過(guò)化學(xué)鍵合反應(yīng)連接到PEG的末端，或?qū)⒌鞍讕€基化后通過(guò)化學(xué)鍵合反應(yīng)連接到PEG的末端。本發(fā)明的藥物組合物中所述的脂質(zhì)體是指，以磷脂(PC)和膽固醇(CHOL)為材料所制成的脂質(zhì)雙分子層囊泡。磷脂包括氫化磷脂(HSPC)、大豆磷脂(SPC)、蛋黃卵磷脂 (EPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、磷脂酰絲胺酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)之一種或一種以上。其中優(yōu)選為SPC，EPC, DSPC，HSPC0本發(fā)明的藥物組合物中所述的脂質(zhì)體主要有磷脂和膽固醇組成，其中磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為1-1000 1，優(yōu)選質(zhì)量比為1-20 1。本發(fā)明的藥物組合物可采用如下方法制備首先將磷脂(如DSPE)與PEG相連，形成PEG修飾的磷脂(DSPE-PEG)，再將 PEG末端活化為活性基團(tuán)如二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-N-羥基琥珀酰亞胺 (DSPE-PEG-NHS)或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇_馬來(lái)酰亞胺(DSPE-PEG-MAL)。再將磷脂、膽固醇作為制備脂質(zhì)體的材料，置圓底燒瓶中，加入有機(jī)溶劑溶解，按脂質(zhì)體的制備方法，制備普通脂質(zhì)體。然后將PEG修飾的磷脂插入到制備好的脂質(zhì)體中，形成長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。最后將Lf或巰基化的Lf (即Lf-SH)與DSPE-PEG-NHS (或DSPE-PEG-MAL)反應(yīng)，連接到脂質(zhì)體的表面。用擠壓過(guò)聚碳酸酯膜或超聲的方法將脂質(zhì)體的粒徑控制在200nm或以下?？拱┧幬锟稍谥苽淝爸苯蛹尤牖蛘咄ㄟ^(guò)其他方法裝載到已制備好的脂質(zhì)體中。本發(fā)明的藥物組合物最優(yōu)選的制備方法在實(shí)施例中。本發(fā)明的組合物優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明的組合物用Lf與PEG同時(shí)修飾的脂質(zhì)體作為載體，包載抗腫瘤藥物，以進(jìn)一步增加藥物在肝臟，尤其是肝腫瘤部位的藥物濃度，提高藥物的治療效果。本發(fā)明的組合物含PEG修飾的磷脂，PEG長(zhǎng)循環(huán)的作用已被證明切實(shí)有效。本發(fā)明的組合物含乳鐵蛋白，研究表明經(jīng)尾靜脈注射后，乳鐵蛋白可被肝細(xì)胞表面大量的乳鐵蛋白受體識(shí)別而富集于肝臟，當(dāng)肝臟發(fā)生癌變時(shí)，乳鐵蛋白受體顯著性增加。 因此，乳鐵蛋白的肝靶向作用已得到證實(shí)。本發(fā)明利用上述長(zhǎng)循環(huán)靶向脂質(zhì)體裝載腫瘤藥物，其中，PEG修飾可增加藥物載體的體循環(huán)時(shí)間，通過(guò)EPR效應(yīng)使藥物被動(dòng)靶向于肝部腫瘤部位。另外，乳鐵蛋白的修飾可通過(guò)配體與靶細(xì)胞表面受體的識(shí)別功能，使藥物載體主動(dòng)靶向于肝臟。本發(fā)明的藥物組合物制備方法工業(yè)生產(chǎn)可重現(xiàn)。首先，可按常規(guī)方法制備普通脂質(zhì)體，抗腫瘤藥物可按其性質(zhì)不同采用不同的加入方法。隨后，加入PEG修飾的磷脂，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。再采用化學(xué)鍵合的方法，使乳鐵蛋白修飾在脂質(zhì)體的表面，即得。通過(guò)研究已證實(shí)，本發(fā)明的藥物組合物在體外可使靶細(xì)胞的攝取增加，在體內(nèi)可使靶器官肝臟的藥物蓄積量增加。而且靶向配體乳鐵蛋白的修飾不影響長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的在體循環(huán)作用。


圖1、包載香豆素-6的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(PEG-liposome)或Lf修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體 (Lf-PEG-Iiposome)對(duì)人肝細(xì)胞癌H印G2細(xì)胞攝取作用的比較。圖 2、PEG-Iiposome 和 Lf-PEG-liposome 的藥時(shí)曲線。圖3、靜脈注射PEG-Iiposome和Lf-PEG-liposome后，香豆素_6在昆明小鼠組織中的分布情況。
具體實(shí)施例方式通過(guò)以下實(shí)施圖例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不作為本發(fā)明的限制。實(shí)施例1 包載香豆素-6(CoUmarin-6)的牛乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體 Lf-PEG-Iiposomes ο脂質(zhì)體的處方分別為SPC CHOL DSPE-PEG 二硬脂酸_N_[羧基丙?；?(聚乙烯乙二醇)-琥珀酰]磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG-C00H) Coumarin-6 (40 13 11 1 O .3)(單位mg)。精密稱(chēng)取處方量的SPC、CHOL和Coumarin-6，加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解，置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)，除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES緩沖液(20mM HEPES, 144mM NaCl，pH 7. 4)，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20次。將制得脂質(zhì)體過(guò)葡聚糖凝膠柱(Sephadex LH 20)，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分， 得普通香豆素-6脂質(zhì)體。將DSPE-PEG和DSPE-PEG-C00H加入已制備的普通脂質(zhì)體中，60°C 水浴加熱lh，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入E⑶和NHS攪拌lOmin，加入牛乳鐵蛋白，37°C水浴加熱12h。將脂質(zhì)體過(guò)瓊脂糖凝膠色譜柱(kpharose CL-4B)，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。
實(shí)施例2 包載香豆素-6(CoUmarin-6)的牛乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體 Lf-PEG-Iiposomes ο脂質(zhì)體的處方分別為SPC CHOL DSPE-PEG 二硬脂酸_N_[氨基丙酰基-(聚乙烯乙二醇)-琥珀酰]磷脂酰乙醇胺 DSPE-PEG-Nh2 Coumarin-6 (40 13 11 1 0. 3 )(單位mg)。精密稱(chēng)取處方量的SPC、CH0L和Coumarin-6，加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解， 置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)，除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入HEPES緩沖液QOmM HEPES, 144mM NaCl,pH 7. 4)，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20次。將制得脂質(zhì)體過(guò)kphadex LH 20柱， 用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得普通香豆素-6脂質(zhì)體。將DSPE-PEG 和DSPE-PEG-NH3W入已制備的普通脂質(zhì)體中，60°C水浴加熱lh，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入戊二醛攪拌5min，加入牛乳鐵蛋白，37°C水浴加熱12h。將脂質(zhì)體過(guò)kpharose CL-4B柱，用 HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。實(shí)施例3 包載香豆素-6 (Coumarin-6)的乳鐵蛋白類(lèi)似物修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體 Lf-PEG-Iiposomes ο脂質(zhì)體的處方分別為SPC CHOL DSPE-PEG DSPE-PEG-C00H Coumari n-6 (40 13 11 1 0. 3)。精密稱(chēng)取處方量的SPC、CH0L和Coumarin-6，加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解，置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)，除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入HEPES緩沖液(20mM HEPES and 144mM NaCl，pH 7.4)， 置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20次。將制得脂質(zhì)體過(guò) Sephadex LH 20柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得普通香豆素_6脂質(zhì)體。將DSPE-PEG和DSPE-PEG-C00H加入已制備的普通脂質(zhì)體中，60°C水浴加熱lh，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入E⑶和NHS攪拌lOmin，加牛乳鐵蛋白肽，37°C水浴加熱12h。將脂質(zhì)體過(guò)kpharose CL-4B柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。實(shí)施例4 包載香豆素-6的乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Lf-PEG-liposomes的基本理化性質(zhì)本發(fā)明制備的香豆素-6的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體PEG-Iiposomes和Lf-PEG-liposomes的基本理化性質(zhì)的比較見(jiàn)表1
處方粒徑(nm)Zeta 電位(mV)包封率(％)
PEG- liposome138-41.587.33Lf-PEG-Iiposome159-31.485.17實(shí)施例5 包載香豆素-6的乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Lf-PEG-liposomes的藥動(dòng)學(xué)和組織分布動(dòng)物昆明小鼠，雄性，體重18_20g。
給藥方案將昆明小鼠分組標(biāo)號(hào)(n = 27mice/group)，分別單次尾靜脈注射 PEG-Iiposomes 和 Lf-PEG-Iiposomes,香豆素-6 的劑量為 lmg/Kg。分別于 0. 083,0. 25、 0.5、l、2、4、8、12、24h眼眶取血后，立即斷頸處死小鼠，取其心、肝、脾、肺、腎、腦等組織。采用高效液相色譜法，測(cè)定各組織中香豆素-6的含量。結(jié)果見(jiàn)圖2和圖3。實(shí)施例6 包載吡柔比星(THP)的乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Lf-PEG-liposomes。脂質(zhì)體的處方分另U為 SPC CHOL DSPE-PEG DSPE-PEG-NH3 TH P(40 13 11 1 1)。精密稱(chēng)取處方量的SPC、CH0L和吡柔比星，加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解，置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)，除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入HEPES緩沖液(20mMHEPE&ind 144mM NaCl，pH 7. 4)，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20次。將制得脂質(zhì)體過(guò)kphadex LH 20柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得普通吡柔比星脂質(zhì)體。將 DSPE-PEG和DSPE-PEG-NH3加入已制備的普通脂質(zhì)體中，60°C水浴加熱lh，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入ECD和NHS攪拌IOmin,加Lf, 37°C水浴加熱12h。將脂質(zhì)體過(guò)Sepharose CL-4B 柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。實(shí)施例7 包載多柔比星(DOX)的乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Lf-PEG-liposomes。脂質(zhì)體的處方分另U為 SPC CHOL DSPE-PEG DSPE-PEG-NH3 DO X(40 13 11 1 1)。精密稱(chēng)取處方量的SPC、CH0L、D0X，加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解， 置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)，除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入150mM的硫酸銨溶液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20次。將制得的脂質(zhì)體置37°C水浴中加熱，加入多柔比星粉末孵育20min， 即得多柔比星脂質(zhì)體。將DSPE-PEG和DSPE-PEG-NH3加入已制備的普通脂質(zhì)體中，60°C水浴加熱Ih,得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入ECD和NHS攪拌IOmin,加Lf, 37°C水浴加熱12h。將脂質(zhì)體過(guò)kpharose CL-4B柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。實(shí)施例8 包載順鉬(DDP)的乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Lf-PEG-liposomes。脂質(zhì)體的處方分另U為 SPC CHOL DSPE-PEG DSPE-PEG-NH3 DD P(40 13 11 1 1)。精密稱(chēng)取處方量的SPC、CH0L和順鉬，加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解，置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)，除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入HEPES緩沖液(20mM HEPESand 144mM NaCl，pH 7. 4)，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20次。將制得脂質(zhì)體過(guò)kphadex LH 20柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得普通順鉬脂質(zhì)體。將DSPE-PEG 和DSPE-PEG-NHJn入已制備的普通脂質(zhì)體中，60°C水浴加熱lh，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入E⑶ 和NHS攪拌lOmin，加Lf，37°C水浴加熱12h。將脂質(zhì)體過(guò)kpharose CL-4B柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。實(shí)施例9 包載喜樹(shù)堿(CPT)的乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Lf-PEG-liposomes。脂質(zhì)體的處方分別為SPC CHOL DSPE-PEG DSPE-PEG-NH3 CP
7T(40 13 11 1 1)。精密稱(chēng)取處方量的SPC、CH0L和喜樹(shù)堿，加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解，置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)，除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入HEPES緩沖液(20mMHEPE&ind 144mM NaCl，pH 7. 4)，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20次。將制得脂質(zhì)體過(guò)kphadex LH 20柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得普通喜樹(shù)堿脂質(zhì)體。將 DSPE-PEG和DSPE-PEG-NH3加入已制備的普通脂質(zhì)體中，60°C水浴加熱lh，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入ECD和NHS攪拌IOmin,加Lf, 37°C水浴加熱12h。將脂質(zhì)體過(guò)Sepharose CL-4B 柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。實(shí)施例10 包載羥基喜樹(shù)堿(HCPT)的乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Lf-PEG-liposomes。月旨質(zhì)體的處方分另Ij 為SPC CHOL DSPE-PEG DSPE-PEG-NH3 HCPT (40 13 11 1 1)。精密稱(chēng)取處方量的 SPC、CH0L 和羥基喜樹(shù)堿，加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解，置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)， 除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入HEPES緩沖液QOmMHEPES and 144mM NaCl, pH 7. 4)，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20 次。將制得脂質(zhì)體過(guò)kphadex LH 20柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得普通羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體。將DSPE-PEG和DSPE-PEG-NH3加入已制備的普通脂質(zhì)體中， 60°C水浴加熱lh，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入ECD和NHS攪拌lOmin，加Lf，37°C水浴加熱12h。 將脂質(zhì)體過(guò)kpharose CL-4B柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。實(shí)施例11 包載羥基喜樹(shù)堿(HCPT)的牛乳鐵蛋白修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Lf-PEG-liposomes。藥物組合物中各組分所占比重為具有肝靶向功能的蛋白0.01%，聚乙二醇 0.01%，脂質(zhì)體 99. 88%，藥物 0. 1%ο按各組分的比重精密稱(chēng)取。將SPC、CHOL和HCPT加適量無(wú)水乙醇，使其完全溶解，置圓底燒瓶中，將燒瓶置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50°C減壓蒸發(fā)，除盡有機(jī)溶劑，使脂質(zhì)在燒瓶?jī)?nèi)壁形成均勻的薄膜。加入HEPES緩沖液QOmM HEPES andl44mM NaCl, pH 7. 4)，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢旋轉(zhuǎn)水化30min后，高壓均質(zhì)lOOObar，循環(huán)20次。將制得脂質(zhì)體過(guò)kphadex G 75柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，得普通羥基喜樹(shù)堿脂質(zhì)體。將 DSPE-PEG和DSPE-PEG-C00H加入已制備的普通脂質(zhì)體中，60°C水浴加熱lh，得長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體。加入ECD和NHS攪拌IOmin,加Lf, 37°C水浴加熱12h。將脂質(zhì)體過(guò)Sepharose CL-4B 柱，用HEPES緩沖液作為流動(dòng)相洗脫，收集脂質(zhì)體部分，即得本品。實(shí)施例12 藥物組合物中各組分所占比重為具有肝靶向功能的蛋白5%，聚乙二醇15%，脂質(zhì)體40%，藥物40%。其余同實(shí)施例11。實(shí)施例13 藥物組合物中各組分所占比重為具有肝靶向功能的蛋白10%，聚乙二醇10%， 脂質(zhì)體70%，藥物10%。
其余同實(shí)施例11。實(shí)施例14 藥物組合物中各組分所占比重為具有肝靶向功能的蛋白2%，聚乙二醇30%，脂質(zhì)體 67. 95%，藥物 0. 05%。其余同實(shí)施例11。實(shí)施例15 藥物組合物中各組分所占比重為具有肝靶向功能的蛋白7.5%，聚乙二醇25%， 脂質(zhì)體42. 5%，藥物25%。其余同實(shí)施例11。
權(quán)利要求
1.一種肝靶向藥物組合物，其特征在于它由具有肝靶向功能的蛋白、聚乙二醇、脂質(zhì)體以及至少一種抗腫瘤藥物組成，各組分在組合物中所占比重為具有肝靶向功能的蛋白 0. 01% -10%，聚乙二醇 0. 01% -30%，脂質(zhì)體 40% -99. 88%，藥物 0. 05-40%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于具有肝靶向功能的蛋白為乳鐵蛋白或其類(lèi)似物；聚乙二醇的分子量為2000-3000 ；脂質(zhì)體是以磷脂和膽固醇為材料制成的脂質(zhì)雙分子層囊泡，磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為1-1000 1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于乳鐵蛋白選自牛乳鐵蛋白、鼠乳鐵蛋白、山羊乳鐵蛋白、豬乳鐵蛋白、人乳鐵蛋白；乳鐵蛋白的類(lèi)似物選自牛乳鐵蛋白肽、鼠乳鐵蛋白肽、山羊乳鐵蛋白肽、豬乳鐵蛋白肽、人乳鐵蛋白肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于聚乙二醇的分子量為200-5000。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為1-20 1。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的組合物，其特征在于所述磷脂選自氫化磷脂、大豆磷脂、蛋黃卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲胺酸、磷脂酰肌醇之一種或一種以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于所述抗腫瘤藥物選自多柔吡星、阿柔比星、表柔比星、批柔比星、絲裂霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、順鉬、卡鉬、喜樹(shù)堿、羥基喜樹(shù)堿、氟尿嘧啶、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、卡莫司汀。
8.權(quán)利要求1所述組合物的制備方法，其特征在于首先將磷脂與PEG相連，形成PEG 修飾的磷脂，并將PEG末端活化為活性基團(tuán)如DSPE-PEG-NHS或DSPE-PEG-MAL ；再將磷脂、 膽固醇作為制備脂質(zhì)體的材料置于燒瓶中，加入有機(jī)溶劑溶解，按脂質(zhì)體的制備方法，制備普通脂質(zhì)體；然后將聚乙二醇修飾的磷脂插入到制備好的脂質(zhì)體中，形成長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體； 最后將乳鐵蛋白Lf或Lf-SH與DSPE-PEG-NHS或DSPE-PEG-MAL反應(yīng)，接連到脂質(zhì)體的表面； 抗癌藥物可在制備前直接加入或者通過(guò)其他方法裝載到已制備好的脂質(zhì)體中。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述組合物的制備方法，其特征在于脂質(zhì)體的粒徑控制在200nm或以下。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種肝靶向藥物組合物，其特征在于采用具有肝靶向功能的蛋白和聚乙二醇同時(shí)修飾的脂質(zhì)體裝載抗腫瘤藥物，將藥物輸送到肝組織的病灶區(qū)，以增加肝腫瘤部位的藥物濃度，提高肝腫瘤的治療效果。
文檔編號(hào)A61K9/127GK102188713SQ20111011766
公開(kāi)日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2011年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月9日
發(fā)明者吳傳斌, 徐月紅, 鄒奇, 韋敏燕 申請(qǐng)人:中山大學(xué)