專利名稱：一種防治脂肪肝的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，具體涉及一種防治脂肪肝的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
脂肪肝，是指由于各種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積過(guò)多的病變。脂肪性肝病正嚴(yán)重威脅國(guó)人的健康，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公認(rèn)為隱蔽性肝硬化的常見(jiàn)原因。脂肪肝是一種常見(jiàn)的臨床現(xiàn)象，而非一種獨(dú)立的疾病。其臨床表現(xiàn)輕者無(wú)癥狀， 重者病情兇猛。一般而言，脂肪肝屬可逆性疾病，早期診斷并及時(shí)治療常可恢復(fù)正常。脂肪肝的發(fā)病率近幾年在歐美和我國(guó)迅速上升，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。在某些職業(yè)人群中(白領(lǐng)人士、出租車司機(jī)、職業(yè)經(jīng)理人、個(gè)體業(yè)主、政府官員、高級(jí)知識(shí)分子等)脂肪肝的平均發(fā)病率為25% ；肥胖人群與II型糖尿病患者中脂肪肝的發(fā)病率為50%;嗜酒和酗酒者脂肪肝的發(fā)病率為58%;在經(jīng)常失眠、疲勞、不思茶飯、胃腸功能失調(diào)的亞健康人群中脂肪肝的發(fā)病率約為60%。近年來(lái)脂肪肝人群的年齡也不斷下降，平均年齡只有40歲，30歲左右的病人也越來(lái)越多。45歲以下男性脂肪肝明顯多于女性。脂肪肝的臨床表現(xiàn)多樣，輕度脂肪肝的癥狀有的僅有疲乏感，而多數(shù)脂肪肝患者較胖，故更難發(fā)現(xiàn)輕微的自覺(jué)癥狀。中重度脂肪肝有類似慢性肝炎的表現(xiàn)，可有食欲不振、 疲倦乏力、惡心、嘔吐、體重減輕、肝區(qū)或右上腹隱痛等。脂肪肝的病人多無(wú)自覺(jué)癥狀，或僅有輕度的疲乏、食欲不振、腹脹、噯氣、肝區(qū)脹滿等感覺(jué)。由于患者轉(zhuǎn)氨酶常有持續(xù)或反復(fù)升高，又有肝臟腫大，易誤診為肝炎，應(yīng)特別注意鑒別。B超CT均有較高的診斷符合率，但確診仍有賴于肝穿活檢。臨床檢查，75%的患者肝臟輕度腫大，少數(shù)病人可出現(xiàn)脾腫大、蜘蛛痣和肝掌。脂肪肝臨床上分為肥胖性脂肪肝、酒精性脂肪肝、營(yíng)養(yǎng)不良性脂肪肝、糖尿病脂肪肝，和其他疾病引起的脂肪肝。對(duì)長(zhǎng)期飲酒者肝穿刺活檢，75-95%會(huì)有脂肪浸潤(rùn)。每天飲酒超過(guò)80-160克，則酒精性脂肪肝的發(fā)病率會(huì)增加5-25倍。治療也要從限制酒精攝入開(kāi)始。輕度患者只要戒煙酒4-6周，轉(zhuǎn)氨酶就有可能降低到正常水平。脂肪肝能引發(fā)五種常見(jiàn)病1、肝硬化和肝癌脂肪肝長(zhǎng)期得不到治療會(huì)引起肝細(xì)胞缺血壞死，從而誘發(fā)肝纖維化和肝硬化等多種惡性肝病。脂肪肝患者并發(fā)肝硬化、肝癌的概率是正常人的150倍；2、消化系統(tǒng)疾??；3、動(dòng)脈粥樣硬化和心腦血管疾病；4、影響性功能；5、影響視力。到目前為止，西藥尚無(wú)防治脂肪肝的有效藥物，以中藥長(zhǎng)期調(diào)理性的治療最好。用一些含有姜黃等中藥成分的專業(yè)藥物，如甘貝爾等，都是不錯(cuò)的。中藥中以制何首烏和山楂最好，這兩種藥能降低血脂，防止膽固醇在肝內(nèi)沉積。西藥常選用保護(hù)肝細(xì)胞、去脂藥物及抗氧化劑等，如維生素B、C、E、卵磷脂、熊去氧膽酸、水飛薊素、肌苷、輔酶A、還原型谷胱甘肽、?；撬帷⑷舛緣A乳清酸鹽、肝泰樂(lè)，以及某些降脂藥物(例如肝旨清)等等。上述藥物雖然很多，但大多仍需要進(jìn)一步驗(yàn)證其療效以及安全性，因此，應(yīng)在醫(yī)生指導(dǎo)下正確選用， 切不可濫用?，F(xiàn)有文獻(xiàn)記載余甘子提取物方中余甘子提取物系藏族習(xí)用藥材余甘子經(jīng)提取的干燥提取物， 余甘子為大戟科植物余甘子Wiyllanthus emblica L.的干燥成熟果實(shí)。性味甘、酸、澀、涼， 歸肺、胃經(jīng)，具有清熱涼血，生津止渴，消食健胃、化痰止咳、保肝解毒等功效，可用于發(fā)熱咳嗽，煩熱口干，消化不良，慢性肝炎，肥胖，高脂血癥，腹痛等。人參提取物，為人參經(jīng)加工制成的干燥提取物。人參為五加科植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根，是中國(guó)常用的名貴藥材，已有數(shù)千年的藥用歷史，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。性溫，味甘、微苦。有大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津，安神之功效。人參提取物中，主要含人參皂苷，主要有保護(hù)肝損傷、抗炎、抗腫瘤、抗血小板釋放等作用。五味子提取物，是由五味子經(jīng)加工提取所得干燥提取物，本品為木蘭科植物五味 ^Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.的干燥成熟果實(shí)。酸、甘，溫。歸肺，心、腎經(jīng)。具益氣生津，滋腎寧心、收斂固澀之功。本原料五味子提取物主含五味子素(五味子醇甲)、去氧五味子素(五味子甲素)、r-五味子素(五味子乙素)及五味子醇。其中五味子素為主要成分之一。實(shí)驗(yàn)證明，五味子對(duì)四氯化碳等引起的動(dòng)物血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(CPT)升高有抑制作用，種仁的醇提取物能明顯降低實(shí)驗(yàn)性肝損害所致的高血清轉(zhuǎn)氨酶。部分實(shí)驗(yàn)證明，用已分離出的單體、r-五味子素對(duì)肝細(xì)胞有一定保肝作用，并能加速肝組織再生。以四氯化碳造成肝損傷，經(jīng)五味子制劑治療后肝小葉壞死區(qū)縮小，含有脂肪油的肝細(xì)胞明顯減少，水解酶類、氧化酶、脫氫酶明顯恢復(fù)，與對(duì)照組比較，治療組動(dòng)物中央壞死區(qū)肝細(xì)胞內(nèi)有較多的線粒體，進(jìn)一步觀察到應(yīng)用五味子治療的動(dòng)物肝細(xì)胞中核酸、一般蛋白質(zhì)、堿性蛋白質(zhì)及結(jié)合的硫氨基的二硫基含量均較對(duì)照組高。所以認(rèn)為五味子有助于肝細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，
從而使線粒體恢復(fù)和增加，相應(yīng)的酶活性增高，肝細(xì)胞得以恢復(fù)和再生，發(fā)揮降酶保肝作用維生素C，維生素C屬水溶性維生素，是脯氨酸羥化酶等八種酶的輔助因子或組成成分，分子最顯著的特征是其強(qiáng)烈的還原性，直接參與體內(nèi)的氧化-還原及羥化反應(yīng)，各種肝損傷與體內(nèi)氧自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化密切相關(guān)，維生素C作為一種強(qiáng)力自由基清除劑， 可保護(hù)細(xì)胞膜免于遭受氧化性損傷；并與維生素E有協(xié)同作用，減輕脂類過(guò)氧化反應(yīng)減少脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生，保護(hù)超氧化物歧化酶等含基酶的活性，清除氧自由基，提高機(jī)體免疫力。維生素E，維生素E廣泛存在于天然動(dòng)植物中，是人體所必需的主要脂溶性維生素，具有許多重要的生物學(xué)活性，除了促進(jìn)生殖，維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等功能外， 還具有強(qiáng)抗氧化和自由基清除作用。它是 血漿脂蛋白、細(xì)胞膜和細(xì)胞器的抗氧化劑，可保護(hù)細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸、細(xì)胞骨架和其它蛋白質(zhì)巰基及細(xì)胞內(nèi)的核酸免受自由基的攻擊。維生素E能與不飽和脂肪酸競(jìng)爭(zhēng)脂質(zhì)過(guò)氧基，有效阻斷自由基連鎖反應(yīng)，終止脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程。目前尚未見(jiàn)到上述藥物中的兩種或兩種以上的組合用于防治脂肪肝的用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種有效防治脂肪肝的藥物組合物及其制備方法。本發(fā)明提供的一種防治脂肪肝的藥物組合物，主要由以下重量份的原料藥制成 余甘子31-73份，人參40-160份，五味子9_60份，維生素C 0. 2-1. 8份，維生素E 0. 2-1. 8 份。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的防治脂肪肝的藥物組合物，主要由以下重量份的原料藥制成余甘子47-69份，人參52-143份，五味子15-60份，維生素C 0. 6-1. 8份，維生素E 0. 5-1. 8 份。進(jìn)一步優(yōu)選，本發(fā)明提供的防治脂肪肝的藥物組合物，主要由以下重量份的原料藥制成余甘子65份，人參63. 5份，五味子29. 2份，維生素C 1. 4份，維生素E 1. 5份。本發(fā)明所述的重量份可以是yg、mg、g、kg等醫(yī)藥領(lǐng)域公知的重量單位。本發(fā)明所述的防治脂肪肝的藥物組合物，還含有藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。所述制劑為固體制劑或液體制劑，固體制劑選自片、膠囊、顆?；蚍稚⑵灰后w制劑選自注射液或口服液。所述藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑選自乳糖、蔗糖、淀粉、糊精、微晶纖維素、聚乙二醇、低取代羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基纖維素中的一種或幾種。本發(fā)明還提供了制備防治脂肪肝的藥物組合物的方法，包括以下步驟1)取上述各種藥物，篩選、挑揀、整理、炮制，分別稱取藥物和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑；2)將藥物分別粉碎，過(guò)40-80目篩，按照等量遞加法將藥物、藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑混合均勻，制成劑型。本發(fā)明還提供了制備防治脂肪肝的藥物組合物的方法，包括以下步驟1)將上述重量配比的各種藥物分別篩選、挑揀、整理；幻提取余甘子、人參、五味子，其中余甘子的提取方法為余甘子打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取2次，濾液合并，濃縮、干燥，即得余甘子提取物；人參的提取方法為人參粉碎，用8倍量70%乙醇回流提取兩次，每次回流提取2 小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至50°C時(shí)相對(duì)密度為1. 10-1. 15， 干燥，即得人參提取物；五味子的提取方法為取五味子打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取2次，濾液合并，濃縮至60°C時(shí)相對(duì)密度為1. 10-1. 14，干燥，即得五味子提取物；3)然后將步驟幻得到的藥物提取物分別粉碎過(guò)40-80目篩，與維生素C、E混合均勻，加入藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，按照等量遞加法混合均勻，制備成各種劑型。本發(fā)明提供的藥物組合物是依據(jù)中醫(yī)理論參考有關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究資料，結(jié)合實(shí)際應(yīng)用體會(huì)組方的。中醫(yī)認(rèn)為肝主疏泄，主藏血，其“體陰而用陽(yáng)”任何因素傷肝都可能傷及其 “體”和“用”，且肝與脾腎關(guān)系密切，肝失疏泄可影響脾的運(yùn)化而出現(xiàn)脾罰癥狀，中醫(yī)有肝與腎“乙癸同源”肝腎同治之說(shuō)，益腎亦可調(diào)肝。因此，任何因素傷肝都可能傷及其“體”和 “用”而殃及脾腎，故益肝護(hù)肝關(guān)鍵在于護(hù)其“體”和“用”，并注意調(diào)理脾腎。方中人參，味甘、微苦，性溫，有大補(bǔ)元?dú)夤堂撋虬采裰π?，為治療勞傷虛損、 久虛不復(fù)，一切氣血津液不足之證的要藥?！端幮哉摗分赋銎洹爸魑迮K氣不足，五勞必傷，虛
損瘦弱......補(bǔ)五臟六腑”?！度杖A子本草》言其“調(diào)中活氣，消食開(kāi)胃”，《本經(jīng)》尚言其“除
邪氣”，《別錄》又言其“調(diào)中......通血脈”。本藥在方中主在益肝之“用”而兼調(diào)脾胃。五味子，味酸，性溫，有斂肺滋腎生津澀精之功效。《本經(jīng)》言其“主益氣......勞
傷贏瘦，補(bǔ)不足......”，《別錄》言其“養(yǎng)五臟”，《日華子本草》明言其“解酒毒化筋骨”。本
藥在方中重在益肝之“體”，且調(diào)腎?！侗静萸笳妗吩浴胺螝怆S陰的下降，則氣化精而精盈， 腎水從陽(yáng)以上布，則精化氣而氣盛，陰陽(yáng)二氣實(shí)一氣之變動(dòng)，以肝為關(guān)捩子，五味專精于肝而交合肺腎......有不同于他味之酸斂者。”且人參五味子均具“適應(yīng)原”樣作用，即增強(qiáng)機(jī)體對(duì)各種有害刺激的防御能力。余甘子，性味甘、酸、澀、涼，歸肺、胃經(jīng)，具有清熱涼血，生津止渴，消食健胃、化痰止咳、保肝解毒等功效，可用于發(fā)熱咳嗽，煩熱口干，消化不良，慢性肝炎，肥胖，高脂血癥，
腹痛等。本發(fā)明運(yùn)用傳統(tǒng)中醫(yī)、藏醫(yī)學(xué)的藥理、醫(yī)理，為補(bǔ)宜人體的七精華，按三因五元學(xué)說(shuō)，經(jīng)過(guò)大量的臨床實(shí)驗(yàn)，科學(xué)選取余甘子、人參、五味子、維生素C、維生素E五味藥物制備而成。諸藥合用，共奏強(qiáng)肝益肝、疏肝解毒和免疫調(diào)節(jié)之功。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)證明本發(fā)明提供的藥物組合物可以防治脂肪肝。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1 參甘片1、組成余甘子31g，人參40g，五味子9g，維生素C 0. 2g，維生素E 0. 2g。2、制備方法1)將上述重量配比的各種藥物分別篩選、挑揀、整理、炮制；2)然后將藥物粉碎至40目，按比例置入自動(dòng)旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)壓片，包衣，即可。3、用法用量每日2次，每次2片。實(shí)施例2 參甘片1、組成余甘子52g，人參100g，五味子18g，維生素C lg，維生素E Igo2、制備方法1)將上述重量配比的各種藥物分別篩選、挑揀、整理、炮制；2)提取余甘子的提取方法為取余甘子，挑去雜質(zhì)，打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取 2次，濾過(guò)合并，得煎煮液，煎煮液濃縮，噴霧干燥，得干浸膏粉，過(guò)篩；人參的提取方法為人參粉碎，過(guò)8目篩，得人參粗粉。將人參粗粉用8倍量70%乙醇回流提取兩次，每次回流提取2小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次提取液，提取液減壓回收乙醇(真空度0. 07MPa，溫度50°C )至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度為1. 10-1. 15(50°C測(cè)定)得濃縮液， 噴霧干燥，得干浸膏粉，過(guò)篩；五味子的提取方法為取五味子，挑去雜質(zhì)，打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取2 次，第一次煎煮2小時(shí)，第二次煎煮1. 5小時(shí)，濾過(guò)合并，得煎煮液，濾渣棄去。煎煮液減壓濃縮(真空度0. 09MPa，溫度60°C )至相對(duì)密度為1. 10-1. 14 (約60°C測(cè)定)得濃縮液，噴
霧干燥，得干浸膏；3)然后上述提取物粉碎過(guò)40目篩，然后加入維生素C、E粉末，按比例置入自動(dòng)旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)壓片，包衣即可；3、用法用量每日2次，每次2片。實(shí)施例3 參甘片1、組成余甘子73g，人參160g,五味子27g，維生素C 1. 8g，維生素E 1. 8g。2、制備方法1)將上述重量配比的各種藥物分別篩選、挑揀、整理、炮制；2)提取余甘子的提取方法為取余甘子，挑去雜質(zhì)，打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取 2次，濾過(guò)合并，得煎煮液，煎煮液濃縮，噴霧干燥，得干浸膏粉，過(guò)篩；人參的提取方法為人參粉碎，過(guò)8目篩，得人參粗粉。將人參粗粉用8倍量70%乙醇回流提取兩次，每次回流提取2小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次提取液，提取液減壓回收乙醇(真空度0. 09MPa，溫度53°C )至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度為1. 10-1. 15(50°C測(cè)定)得濃縮液， 噴霧干燥，得干浸膏粉，過(guò)篩；五味子的提取方法為取五味子，挑去雜質(zhì)，打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取 2次，第一次煎煮2小時(shí)，第二次煎煮1. 5小時(shí)，濾過(guò)合并，得煎煮液，濾渣棄去。煎煮液減壓濃縮(真空度0. 07MPa，溫度60°C )至相對(duì)密度為1. 10 1. 14 (約60°C測(cè)定)得濃縮液。
噴霧干燥，得干浸膏；3)然后上述提取物粉碎過(guò)40目篩，然后加入維生素C、E粉末，按比例置入自動(dòng)旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)壓片，包衣，即可。3、用法用量每日2次，每次2片。實(shí)施例4 參甘片1、組成余甘子65g，人參63. 5g，五味子四.2g，維生素C 1.4g，維生素E 1. 5g。2、制備方法1)將上述重量配比的各種藥物分別篩選、挑揀、整理、炮制；2)提取余甘子的提取方法為取余甘子，挑去雜質(zhì)，打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取 2次，濾過(guò)合并，得煎煮液，煎煮液濃縮，噴霧干燥，得干浸膏粉，過(guò)篩；人參的提取方法為人參粉碎，過(guò)8目篩，得人參粗粉。將人參粗粉用8倍量70%乙醇回流提取兩次，每次回流提取2小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次提取液，提取液減壓回收乙醇(真空度0. 08MPa，溫度55°C )至無(wú)醇味，并濃縮至相對(duì)密度為1. 10-1. 15(50°C測(cè)定)得濃縮液， 噴霧干燥，得干浸膏粉，過(guò)篩；五味子的提取方法為將五味子打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取2次，第一次煎煮2小時(shí)，第二次煎煮1.5小時(shí)，濾過(guò)合并，得煎煮液，濾渣棄去。煎煮液減壓濃縮(真空度0. 07MPa，溫度65°C )至相對(duì)密度為1. 10-1. 14 (約60°C測(cè)定)得濃縮液。噴霧干燥，得
干浸膏；3)然后上述提取物粉碎過(guò)80目篩，然后加入維生素C、E粉末，按比例置入自動(dòng)旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)壓片，包薄膜衣，即得；3、用法用量每日2次，每次2片。實(shí)施例5 急性毒性試驗(yàn)、三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)和30天喂養(yǎng)試驗(yàn)1、材料1. 1樣品實(shí)驗(yàn)藥物具體組成及其制備方法見(jiàn)實(shí)施例4，由石家莊藏諾生物科技有限公司提供，人體推薦量為2.0g/60kg BW/d，每日4片，每片0. 5g，室溫保存，供試驗(yàn)用。1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的健康清潔級(jí)Wistar大鼠100只，雌雄各半，許可證號(hào)SCXK-(軍)2002-001 ；選用中國(guó)藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的健康清潔級(jí)昆明種小鼠100 只，雄性75只，雌性25只，許可證號(hào)=SCXK (京)2005-0004 ；使用中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所清潔級(jí)動(dòng)物房，許可證號(hào) SYXK (京)2003-0002 ；購(gòu)買北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供的鼠料，許可證號(hào)SCXK京2005-0007。2、實(shí)驗(yàn)方法2. 1急性毒性試驗(yàn)采用最大耐受量法進(jìn)行試驗(yàn)。選用健康Wistar大鼠20只，雌雄各10只，進(jìn)行試驗(yàn)。大鼠體重為180-220克。稱取受試物104. Og溶至200mL蒸餾水中， 受試物濃度為52. 0g/100mL(最大灌胃濃度，配制后受試物呈糊狀)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前隔夜空腹(禁食16h，不限制飲水)，一日內(nèi)灌胃三次，每次灌胃量按 10. OmL/kg BW計(jì)算，累計(jì)劑量為15.6g/kg BW，連續(xù)觀察14天。記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況。2. 2遺傳毒性試驗(yàn)2. 2. IAmes試驗(yàn)采用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷性TA97、 TA98、TA100、TA102四株試驗(yàn)菌株進(jìn)行試驗(yàn)。采用多氯聯(lián)苯(PCB)誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿S-9 作為體外代謝活化系統(tǒng)。受試物用無(wú)菌蒸餾水溶解，0. 103MPa、30min后供試驗(yàn)用。根據(jù)毒性測(cè)定結(jié)果，試驗(yàn)設(shè)0. 008,0. 040,0. 200、1. 000,5. OOOmg/ M 5個(gè)劑量，配制相當(dāng)于5. 0mg/0. ImL固形物的混懸液，充分混勻，即5. Omg/皿，其余劑量以無(wú)菌蒸餾水稀釋。同時(shí)設(shè)未處理對(duì)照、溶劑對(duì)照(選用無(wú)菌蒸餾水作為溶劑)和陽(yáng)性對(duì)照。在頂層瓊脂中加入0. ImL試驗(yàn)菌株增菌液、0. ImL受試物溶液和0. 5mL S-9混合液(當(dāng)需要代謝活化時(shí))，混勻后倒入底層培養(yǎng)基平板上。在37°C培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)。如果受試物的回變菌落數(shù)是溶劑對(duì)照菌落數(shù)2倍以上，并具有劑量反應(yīng)關(guān)系者則定為陽(yáng)性。整個(gè)試驗(yàn)在相同條件下重復(fù)做一次。2. 2. 2骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)采用間隔24h兩次經(jīng)口灌胃法進(jìn)行試驗(yàn)。選用體重25-30克小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。以40mg/kgBW劑量的環(huán)磷酰胺為陽(yáng)性對(duì)照，蒸餾水為陰性對(duì)照，參甘片劑量為2. 5,5. OUO. Og/kg BW，稱取受試物用蒸餾水配制所需濃度(濃度分別為12. 5g/100mL、25. 0g/100mL、50. 0g/100mL)，灌胃量按 20. OmL/kg BW計(jì)算。末次給參甘片后他，頸椎脫白處死動(dòng)物，取胸骨骨髓用小牛血清稀釋涂片，甲 醇固定，Giemsa染色。在生物學(xué)顯微鏡下，每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，其微核發(fā)生率以含微核的PCE千分率計(jì)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。2. 2. 3小鼠精子畸形試驗(yàn)選用體重30_35g性成熟雄性小鼠50只，隨機(jī)分為5 組。分別為陽(yáng)性對(duì)照40mg/kg BW劑量的環(huán)磷酰胺；陰性對(duì)照為蒸餾水組；參甘片劑量為2. 5,5. OUO. 0g/kg BW，稱取受試物用蒸餾水配至所需濃度(濃度分別為12. 5g/100mL、 25. 0g/100mL、50. 0g/100mL)，灌胃量按 20. 0mL/kg BW 計(jì)算。每日灌胃一次，連續(xù)5天，末次灌胃后30天處死動(dòng)物，去兩側(cè)附睪，去脂肪，生理鹽水中剪碎，1000轉(zhuǎn)/分離心7分鐘、去上清、留少許混勻滴于玻片上涂片、甲醇固定、1.5%伊紅染色并鏡檢。每組計(jì)數(shù)5只動(dòng)物，每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)結(jié)構(gòu)完整的精子，計(jì)算畸變精子發(fā)生率(以百分率計(jì))，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。2. 330天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2. 3. 1方法選用斷乳Wistar大鼠80只，雌雄各半，適應(yīng)3天，隨機(jī)分為4組，即對(duì)照組和3個(gè)劑量組，分別為0.83、1.67、3. 33g/kg BW(相當(dāng)于人體推薦量的25、50、100倍)，
每組20只，雌雄各半。按大鼠每日IOOg體重進(jìn)食IOg飼料計(jì)算，將受試物摻入基礎(chǔ)飼料(采用逐漸擴(kuò)大、充分混勻、反復(fù)過(guò)篩的方法，由高劑量逐漸稀釋至中、低劑量)，3個(gè)劑量摻入量分別為 0. 83、1. 67,3. 33%的受試物，連續(xù)喂飼大鼠30天，對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料。試驗(yàn)期間，動(dòng)物單籠喂養(yǎng)，自由飲食，觀察動(dòng)物生長(zhǎng)狀況，每周記錄大鼠體重及進(jìn)食量，試驗(yàn)結(jié)束，取尾血測(cè)血常規(guī)，動(dòng)物空腹過(guò)夜，稱宰殺前體重，斷頭取血測(cè)各項(xiàng)血生化指標(biāo)，同時(shí)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。2. 3. 2觀察指標(biāo)2. 3. 2. 1動(dòng)物的一般表現(xiàn)、體重、進(jìn)食量、食物利用率2. 3. 2. 2血常規(guī)及生化指標(biāo)白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三酯、血糖、總蛋白、白蛋白。2. 3. 2. 3臟器重量及臟體比肝、腎、脾和睪丸稱重，計(jì)算相應(yīng)的臟體比(以百克體重計(jì)算)。2. 3. 2. 4大體觀察及病理組織檢查各劑量組動(dòng)物大體檢查肝、脾、腎、胃及十二指腸，睪丸或卵巢等臟器，未發(fā)現(xiàn)明顯病變時(shí)，只進(jìn)行高劑量組及對(duì)照組動(dòng)物主要臟器的病理組織檢查，若發(fā)現(xiàn)有病理學(xué)改變，再對(duì)中、低劑量組相應(yīng)器官進(jìn)行組織學(xué)檢查。3、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)以EXCEL軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，采用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析若各組方差齊，采用單因素方差分析法(oneway-ANOVA)，以α = 0. 05作為顯著性水平，采用Dunnett法進(jìn)行各劑量組與對(duì)照組之間的均數(shù)比較；若方差齊性不能滿足，采用其他的統(tǒng)計(jì)方法如 Brown-Forsythe檢驗(yàn)或Welch檢驗(yàn)等。計(jì)算資料采用X2、泊松分布或秩和檢驗(yàn)。4、結(jié)果
4. 1急性毒性實(shí)驗(yàn)(結(jié)果見(jiàn)表1)由表1可見(jiàn)實(shí)施例4制備的參甘片以15.6g/kg BW的劑量灌胃Wistar大鼠，觀察14天，未見(jiàn)明顯的中毒癥狀，也未死亡；大鼠經(jīng)口急性毒性MTD大于15. 6g/kg BW，根據(jù)急性毒性分級(jí)，參甘片屬無(wú)毒物。表1 大鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種防治脂肪肝的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物主要由以下重量份的原料藥制成余甘子31-73份，人參40-160份，五味子9_60份，維生素C 0. 2-1. 8份，維生素 E 0. 2-1. 8 份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物主要由以下重量份的原料藥制成余甘子47-69份，人參52-143份，五味子15-60份，維生素C 0. 6-1. 8份，維生素E 0.5-1. 8份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物主要由以下重量份的原料藥制成余甘子65份，人參63. 5份，五味子29. 2份，維生素C 1. 4份，維生素E 1.5 份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物還含有藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為液體制劑或固體制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制劑，其特征在于，所述固體制劑為膠囊、顆粒、片或分散片； 所述液體制劑為口服液或注射液。
7.一種制備權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟1)取上述各種藥物，篩選、挑揀、整理、炮制，分別稱取藥物和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑；2)將藥物和輔料分別粉碎過(guò)篩，按照等量遞加法將藥物、藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑混合均勻，制成劑型。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟1)將上述重量配比的各種藥物分別篩選、挑揀、整理；2)余甘子、人參、五味子的提取方法，其中余甘子的提取方法為余甘子打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取2次，濾液合并，濃縮、干燥，即得余甘子提取物；人參的提取方法為人參粉碎，用8倍量70%乙醇回流提取兩次，每次回流提取2小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮至50°C時(shí)相對(duì)密度為1. 10-1. 15，干燥，即得人參提取物；五味子的提取方法為取五味子打碎成粗粒，加10倍量的水煎煮提取2次，濾液合并， 濃縮至60°C時(shí)相對(duì)密度為1. 10-1. 14，干燥，即得五味子提取物；3)然后將步驟幻得到的藥物提取物分別粉碎過(guò)40-80目篩，與維生素C、E混合均勻， 加入藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，按照等量遞加法混合均勻，制備成各種劑型。
9.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備防治脂肪肝的藥物中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，該脂肪肝為酒精性脂肪肝。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種防治脂肪肝的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物主要由以下重量份的原料藥制成余甘子31-73份，人參40-160份，五味子9-60份，維生素C 0.2-1.8份，維生素E 0.2-1.8份。諸藥合用，共奏強(qiáng)肝益肝、疏肝解毒和免疫調(diào)節(jié)之功。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)證明本發(fā)明提供的藥物組合物可以防治脂肪肝。
文檔編號(hào)A61K31/355GK102188486SQ20111012032
公開(kāi)日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2011年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月10日
發(fā)明者王智森, 高飛 申請(qǐng)人:王智森