專利名稱：具有保肝護(hù)肝作用的杭白菊提取物及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及一種杭白菊提取物及其提取方法，同時(shí)還涉及該提取物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肝損傷是由多種病因引起且有多種因素參與的復(fù)雜過程。肝損傷引發(fā)的肝臟疾病已成為常見病、多發(fā)病，更為嚴(yán)重的是其引發(fā)的肝功能衰竭和肝性腦病等，發(fā)病率和死亡率高，極大地威脅著人類健康。很多因素可引起肝損傷。體內(nèi)模型特別是化學(xué)性肝損傷模型在形態(tài)學(xué)、病理生理學(xué)的某些方面與人慢性肝病較為相似。CCl4引起肝損傷的機(jī)制是CCl4 在肝微粒體細(xì)胞色素P450激活下生成自由基CCI3·及Cl·，這些自由基可與肝細(xì)胞內(nèi)大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，也可攻擊膜下不飽和脂質(zhì)，引起脂質(zhì)過氧化，從而使肝細(xì)胞損傷，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)GPT、G0T滲入血液，表現(xiàn)為血清中GPT、G0T活性升高。SOD活性及MDA含量?？煞从丑w內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度，間接反映機(jī)體組織、細(xì)胞損傷的程度。通過檢測(cè)小鼠肝勻漿中的SOD 活性及MDA含量可反映出藥物對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用。因此，以血清GPT、G0T、肝組織SOD活性及MDA含量作為指標(biāo)來探討藥物對(duì)肝臟的保護(hù)作用是非常有意義的。目前，肝損傷的治療方法有很多，且均有一定療效，但也存在著明顯的不足。首先， 西藥具有較大的毒副作用，且療效并不確切。而另一方面，實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，中藥在抗菌抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫功能以及抗肝纖維化等方面顯示出良好的療效，安全、可靠、有效，進(jìn)一步顯示出中醫(yī)辨證論治的合理性，突顯了中藥在治療肝損傷，尤其是內(nèi)毒素性急性肝損傷方面的良好前景。杭白菊 \_Dendranthema morifolium (Ramat) Tzvel, DM]為菊科菊屬植物,產(chǎn)于浙江桐鄉(xiāng)，為浙八味之一，是馳名中外的藥材，也是菊花茶中最好的一個(gè)品種。杭白菊中含有菊甘、氨基酸、維生素等多種成分，具有解暑降溫、清肝明目、提神、利尿的作用，以菊湯沐浴，有去癢爽身、護(hù)膚美容的功能。關(guān)于杭白菊的藥理作用，國(guó)內(nèi)已有較多研究，已發(fā)現(xiàn)杭白菊具有抗菌、抗氧化、清除生物體內(nèi)自由基、降血脂、抗心血管疾病等功能，但尚不明確杭白菊提取物是否具有保肝護(hù)肝作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供一種杭白菊提取物，同時(shí)還提供了相應(yīng)的提取方法。進(jìn)一步的，本發(fā)明還提供了杭白菊提取物在保護(hù)肝臟方面的應(yīng)用。基于上述目的，本發(fā)明采取了如下技術(shù)方案
具有保肝護(hù)肝作用的杭白菊提取物，選自杭白菊水提醇沉后的液相產(chǎn)物或沉淀物。所述杭白菊提取物的提取方法，其步驟包括過濾杭白菊水煎液，對(duì)濾液進(jìn)行至少兩次醇沉首次醇沉?xí)r調(diào)整酒精度至60飛5%，靜置，固液分離后沉淀備用，液相調(diào)整酒精度至65 70%以進(jìn)行二次醇沉；靜置，固液分離后將液相濃縮干燥即得液相產(chǎn)物(乙醇提取物)。另外，合并兩次沉淀，干燥，得沉淀物(多糖)。所述杭白菊提取物的應(yīng)用在于將所述杭白菊提取物用于制備保肝護(hù)肝藥物。本發(fā)明提供的杭白菊提取物選自杭白菊水提醇沉后的液相產(chǎn)物(乙醇提取物)或沉淀物(多糖)。為證實(shí)上述提取的保肝護(hù)肝作用，本發(fā)明以聯(lián)苯雙酯為陽性對(duì)照，分別考察了杭白菊多糖及乙醇提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠的治療作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，杭白菊多糖能夠顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GOT含量，并能顯著提高肝組織 SOD。而杭白菊乙醇提取物不僅能夠顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝組織中的MDA含量，升高SOD的作用也非常明顯。這表明，本發(fā)明的杭白菊乙醇提取物對(duì)急性肝損傷具有很好的保護(hù)作用。從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果中還可以看出，多糖與乙醇提取物在保肝護(hù)肝方面的效能存在一定差異，其中以乙醇提取物較優(yōu)。多糖是廣泛存在于動(dòng)物和植物中的一類高分子，具有多種生理活性，如免疫、抗病毒和降血糖等，但多糖類成分存在吸水性強(qiáng)、生物利用度不高和對(duì)某些細(xì)胞穿透能力不強(qiáng)等缺陷，這些缺陷可能會(huì)對(duì)乙醇提取物的吸收產(chǎn)生一定的干擾。但在常規(guī)的煎服方式中，這種干擾則無法免除。除此之外，常規(guī)煎服中乙醇提取物和多糖的比例固定，即使聯(lián)用，也無法根據(jù)其效能差異而調(diào)整用量比例。相反，分別提取則具有可以靈活調(diào)整的優(yōu)勢(shì)。在本發(fā)明所提供的提取方法中，杭白菊水煎液可通過以下方法獲得杭白菊加水煎煮2-3次，每次0. 5-1.證，合并煎液；而在醇沉?xí)r，每次可靜置4-他。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
具有保肝護(hù)肝作用的杭白菊提取物，選自杭白菊水提醇沉后的液相產(chǎn)物(乙醇提取物) 或沉淀物(多糖)，由以下方法提取獲得取干燥的杭白菊，用水煎煮2次，每次lh，濾過，濾液調(diào)整酒精度65%，靜置6 h，離心分離后所得沉淀備用，上清液(即離心所得液相)調(diào)整酒精度至70%進(jìn)行二次醇沉；靜置4h后再次離心，分離出的液相濃縮后用微波真空干燥，得到乙醇提取物；合并兩次離心所得沉淀并用微波真空干燥，得到杭白菊多糖。不同提取物的得率為A 多糖22. 4% ；B 乙醇提取物1. 04%。將上述杭白菊提取物用于制備保肝護(hù)肝藥物
1)菊花泡騰片(杭白菊多糖)片重設(shè)定為0. 4g，杭白菊多糖0. 14g ；檸檬酸0. 11 g ； 碳酸氫鈉0. 09 g ；PEG6000 0. 01 g;90%食用乙醇適量。制備方法將杭白菊多糖分為兩份，一份與檸檬酸混合均勻，一份與碳酸氫鈉混合均勻，然后分別加90%的食用乙醇制成酸粒和堿粒，分別用14-16目尼龍篩整粒后于50士3°C下鼓風(fēng)干燥至含水量<3%。取上述干燥的酸粒和堿粒與PEG混合均勻，壓片即得菊花泡騰片。2)乙醇提取物膠囊取杭白菊乙醇提取物436.84g，分鋪烘盤上，放入烘箱中于 40-50°C下干燥至含水量在3%以下，然后將烘干所得塊狀物研成粉末并過8目篩，按照0. 4g 粉末/粒的規(guī)格直接裝入膠囊，制成1000粒膠囊劑，包裝。實(shí)施例2:效果試驗(yàn)
(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年昆明小鼠，雄性，體重20 士 2 g。
(二)主要試劑與儀器谷草轉(zhuǎn)氨酶(G0P)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)，超氧化物歧化酶 (S0D)，丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)；四氯化碳(分析純，天津市紅巖化學(xué)試劑廠，批號(hào)20091208)；精制大豆油(市售金龍魚大豆油)；聯(lián)苯雙酯(浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號(hào):100311).0. 3 %四氯化碳油溶液取四氯化碳分散到精制大豆油中，用磁力攪拌器強(qiáng)力攪拌 2 h ；現(xiàn)用現(xiàn)配。UV 2000型紫外可見分光光度計(jì)(尤尼可上海儀器有限公司)；Multiskan MK3酶標(biāo)儀(Thermo Electron) ；LRH-150恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)。(三)實(shí)驗(yàn)方法將90只健康昆明小鼠隨機(jī)分為9組，分別為空白組、模型組、陽性對(duì)照組、杭白菊多糖高中低三個(gè)劑量組(A3、A2、Al)、乙醇提取物高中低三個(gè)劑量組(B3、 B2、B1)。正常對(duì)照組和模型組每天灌胃等劑量的CMC-Na (300 mg/kg )，其余各組每天灌胃如表1所列相應(yīng)藥物，連續(xù)8 d，最后一次給藥后2 h開始造模(按照0.1 mL/10 g體重腹腔注射(ip) 0.3 %四氯化碳油溶液)；禁食不禁水16 h后，摘眼球取血，分離血清，0-3°C保存，測(cè)GPT和GOT，結(jié)果列于表1?？焖俜蛛x肝臟，制備10%和1%的勻漿液，離心取上清液， 0-3°C保存，測(cè)MDA和SOD (結(jié)果見表2)，并用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定10%和1%組織勻漿液的蛋白含量。(四)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表1杭白菊提取物對(duì)急性肝損傷小鼠GPT和GOT的影響
權(quán)利要求
1.具有保肝護(hù)肝作用的杭白菊提取物，選自杭白菊水提醇沉后的液相產(chǎn)物或沉淀物。
2.權(quán)利要求1所述杭白菊提取物的提取方法，其特征在于，步驟包括過濾杭白菊水煎液，對(duì)濾液進(jìn)行至少兩次醇沉首次醇沉?xí)r調(diào)整酒精度至60飛5%，靜置，固液分離后沉淀備用，液相調(diào)整酒精度至65 70%以進(jìn)行二次醇沉；靜置，固液分離后將液相濃縮干燥即得液相產(chǎn)物。
3.如權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于，合并兩次沉淀，干燥，得沉淀物。
4.權(quán)利要求1所述杭白菊提取物的應(yīng)用，其特征在于，將所述杭白菊提取物用于制備保肝護(hù)肝藥物。
全文摘要
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及具有保肝護(hù)肝作用的杭白菊提取物，該提取物選自杭白菊水提醇沉后的液相產(chǎn)物或沉淀物。以上提取物可通過下述方法獲得過濾杭白菊水煎液，對(duì)濾液進(jìn)行至少兩次醇沉首次醇沉?xí)r調(diào)整酒精度至60~65%，靜置，固液分離后沉淀備用，液相調(diào)整酒精度至65~70%以進(jìn)行二次醇沉；靜置，固液分離后將液相濃縮干燥即得液相產(chǎn)物。另外合并兩次沉淀，干燥，得沉淀物。同時(shí)，本發(fā)明還涉及杭白菊提取物的應(yīng)用，即，將所述杭白菊提取物用于制備保肝護(hù)肝藥物。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，杭白菊的乙醇提取物能夠顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝組織中的MDA含量，升高SOD；杭白菊多糖能夠顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GOT含量，提高肝組織SOD。
文檔編號(hào)A61P1/16GK102188469SQ20111013962
公開日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2011年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月27日
發(fā)明者康文藝, 廉婷婷, 王金梅, 魏金鳳, 黃嬛 申請(qǐng)人:河南大學(xué)