專利名稱：包含烏梅提取物的用于預(yù)防或治療癡呆的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療癡呆的包含烏梅(Fructus Mume)提取物的組合物。2.
背景技術(shù)：
當(dāng)記憶障礙嚴(yán)重到給日常生活(包括工作、社會生活和人際關(guān)系)帶來困難，并且伴隨以下4種癥狀(語言障礙、定向障礙、計算能力下降以及性格和情緒改變)中的至少一種時，則診斷為癡呆。癡呆是應(yīng)與正常衰老相區(qū)分的病理學(xué)癥狀。癡呆根據(jù)起因被分為阿爾茨海默病(Alzheimer, s disease)、血管性癡呆(vascular dementia)和由酒精中毒、創(chuàng)傷和帕金森病后遺癥引起的其他癡呆。血管性癡呆一般由腦梗塞或中風(fēng)引起，其由于發(fā)病區(qū)域周圍的腦細(xì)胞損傷而引起記憶喪失。同時，阿爾茨海默病是一種由腦細(xì)胞破壞引起的退行性腦疾病。在阿爾茨海默病的早期，顯示出這樣的癥狀，例如記憶減退、性格改變和思維能力減退，并且進展緩慢。但是，大多數(shù)阿爾茨海默病患者在疾病發(fā)病8 10年中死于肺炎。根據(jù)最近的流行病學(xué)研究，腦血管疾病的風(fēng)險因素(包括高血壓、糖尿病、高血脂和心臟病)不僅可增加血管性癡呆的發(fā)生率，還可增加阿爾茨海默病的發(fā)生率。但是，目前仍然沒有得到癡呆的確切 原因或治療方法。用于癡呆的治療劑根據(jù)疾病的病變和起因分類，其實例為乙酰膽堿酯酶抑制劑、抗氧化劑、抗炎劑、激素制劑、降膽固醇劑和β_淀粉樣蛋白阻斷劑(UflB}-外望呈O〗三外赴習(xí) , β -amyloid blocker)等。所述乙酰膽堿酯酶使仍未破壞的膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的活性增加，從而恢復(fù)受損傷的認(rèn)知功能，即使是部分地恢復(fù)。在2008年癡呆患者估計有約400，000名。由于迅速衰老，所以似乎癡呆患者的數(shù)目在2010年將增加至461，000，在2020年將增加至693，000。隨著癡呆患者人口增長，癡呆藥物的國內(nèi)市場具有迅速的增長曲線，并且量已經(jīng)高至超過1300億韓元。烏梅是通過以下方法制備的藥物成分:將梅(Prunusmume)的未成熟果實放入鍋中，然后蓋上蓋子；用泥( 備，mud)將鍋完全密封，加熱直至果實變?yōu)楹谏趺吩谙夏曷钥人约盎?、止渴、減輕胸部壓力感以及助消化方面是有效的。此外，已知烏梅具有免疫增強活性、抗菌活性和降血糖作用。有一些研究公開了烏梅的作用:來自烏梅的藥物提取物有效用于抑制胃上皮細(xì)胞幽門螺桿菌( 司.五啤司瑝呈司 ，HelicobacterPylori)的脲酶(早司,urease)活性(韓國專利公開N0.2006-0040254)、分離自烏梅提取物的谷留醇-O-D-葡萄糖的鎮(zhèn)痛活性(韓國專利公開N0.1998-0043925)和用于增強血循環(huán)的包含梅提取物或級分作為活性成分的組合物(韓國專利公開N0.2010-0042414)。另一報道稱包含梅、玉竹(吾音司1 ,Polygonatum odoratum)、葛根(Galgeun)和肉桂(月]詞，Cinnamomi cortex)之提取物的改性四君子湯(外口'!入modifiedSAGUNZA-TANG)在預(yù)防和治療癡呆方面是有效的(韓國專利公開N0.2005-0035906)。已知所述改性四君子湯中的梅提取物促進消化和碳水化合物代謝，以平穩(wěn)地向腦提供能量(葡萄糖)供應(yīng)，從而提高腦活性。其中的梅提取物因其獨特的酸味還起著增強口感和風(fēng)味的作用。但是，沒有證據(jù)表明梅提取物在預(yù)防和治療癡呆方面是有效的。還沒有對由梅加工的烏梅提取物之海馬損傷恢復(fù)活性進行研究。因此，本發(fā)明人研究了烏梅提取物的作用，并因此確定了烏梅提取物在血管性癡呆動物模型中在改善空間識別能力和使海馬損傷正?；矫媸怯行У模⑶彝ㄟ^進一步確證烏梅提取物可有效用作用于預(yù)防或治療癡呆之組合物的活性成分，從而完成本發(fā)明。發(fā)明詳述技術(shù)目的本發(fā)明的一個目的是提供用于預(yù)防或治療癡呆的包含烏梅提取物作為活性成分的藥物組合物。本發(fā)明的另一個 目的是提供用于預(yù)防或緩解癡呆的包含烏梅提取物作為活性成分的功能性保健食品。技術(shù)解決方案為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療癡呆的包含烏梅提取物作為活性成分的藥物組合物。本發(fā)明還提供了用于預(yù)防或緩解癡呆的包含烏梅提取物作為活性成分的功能性保健食品組合物。本發(fā)明還提供了用于治療癡呆的方法，其包括將藥用有效劑量的烏梅提取物施用于患癡呆之對象的步驟。本發(fā)明還提供了用于預(yù)防癡呆的方法，其包括將藥用有效劑量的烏梅提取物施用于對象的步驟。本發(fā)明還提供了烏梅提取物在制備用于預(yù)防或治療癡呆的醫(yī)用藥物中的用途。此外，本發(fā)明提供了烏梅提取物在制備用于預(yù)防或緩解癡呆的功能性保健食品中的用途。下文中，詳細(xì)描述本發(fā)明。本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療癡呆的包含烏梅提取物作為活性成分的藥物組合物。本發(fā)明的烏梅提取物優(yōu)選通過以下步驟制備:I)通過使用水、醇或其混合物對烏梅進行提??；以及2)通過在減壓下濃縮步驟I)的提取物并且將其干燥得到干燥粉末，但不總限于此。在上述方法中，步驟I)的烏梅是梅的未成熟果實，將其放入鍋中并蓋上蓋子，然后用泥密封并加熱直至果實變?yōu)楹谏Ｋ龉麑嵖傻米杂诟N或購買自市場。在上述方法中，步驟I)的所述水是蒸餾水。當(dāng)使用醇時，優(yōu)選C1-C4低級醇。此時，本文中低級醇是乙醇或甲醇。有機材料在100%醇中被很好地洗脫，苷類在醇的水溶液中被較好地洗脫。所以，可使用醇或醇的水溶液。優(yōu)選添加體積為烏梅體積的2至10倍的用于提取的溶劑，更優(yōu)選添加體積為烏梅體積的3至4倍的用于提取的溶劑，但不總限于此。所述提取方法是本領(lǐng)域公認(rèn)的常規(guī)方法之一，其實例為熱水提取、提取香精法(平晉，enfleurage)、回流提取、過濾和超聲提取。本文中，優(yōu)選超聲提取或熱水提取，并且更優(yōu)選超聲/熱組合提取，但不總限于此。用于提取的溶劑溫度優(yōu)選為20V IOO0C，更優(yōu)選95°C，但不總限于此。提取時間優(yōu)選為I 24小時，更優(yōu)選2小時，但不總限于此。提取優(yōu)選重復(fù)I 5次，更優(yōu)選重復(fù)3次，但不總限于此。在上述方法中，步驟2)的減壓下濃縮和干燥可根據(jù)本領(lǐng)域使用的常規(guī)方法進行。所述癡呆優(yōu)選是血管性癡呆或阿爾茨海默病，更優(yōu)選是血管性癡呆，但不總限于此。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，將干燥的烏梅(2kg)放在超聲/熱組合提取器(0M30-E P，S0NIMEDI)中，向其中添加8L蒸餾水，然后在95°C提取120分鐘。將提取的溶液在Exdryer(SONMEDI)中干燥以得到烏梅提取物(產(chǎn)率:16.225% )。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，用于構(gòu)建血管性癡呆動物模型的測試動物是Wister大鼠。通過雙側(cè)頸總動脈閉塞(bilateral common carotid artery occlusion,2V0，下文中稱為“BCCAo”)誘導(dǎo)慢性腦灌注不足(chronic cerebral hypoperfusion)(Wakita等，1994)。為了將本發(fā)明的烏梅提取物經(jīng)口施用于以上構(gòu)建的受試動物，提取物被制備為不同濃度[低濃度(100mg/kg)、中等濃度(200mg/kg)和高濃度(400mg/kg)]。將動物總共分成6組,包括用釣藤散(2:吾社，Chotosan) (300mg/kg)處理的對照組、載劑處理組和實驗組。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，用血管性癡呆動物模型進行行為分析以研究本發(fā)明烏梅提取物的作用。特別地，向血管性癡呆動物模型施用本發(fā)明的烏梅提取物三周并進行訓(xùn)練試驗(training trial,在水迷宮中找到標(biāo)記平臺的能力)。由在水迷宮中進行的空間記憶測試的結(jié)果確證，與BCCAo組相比，在烏梅提取物處理組中觀察到海馬依賴性學(xué)習(xí)和記憶缺陷(圖1)。與BCCAo組動物相比，載劑處理組動物在水迷宮中很好地執(zhí)行空間記憶任務(wù)。在用實施例1的200mg/kg烏梅提取物處理的組中，證實動物與對照組的空間記憶學(xué)習(xí)能力一樣好。由統(tǒng)計學(xué)評價結(jié)果確定，組間具有差異(F(5，53) = 8.26，p = 0.000)，并且隨著訓(xùn)練試驗的重復(fù)，發(fā)現(xiàn)隱藏平臺的速度提高(F(3，159) = 98.48，p = 0.000)。為了分析組間差異，進行了事后比較(post hoc) ο結(jié)果是,與BCCAo組相比,用200mg/kg烏梅提取物處理的動物組表現(xiàn)出極好的空間記憶學(xué)習(xí)能力(P = 0.027)。因此，確定本發(fā)明的烏梅提取物能夠有效地使空間記憶能力正?；⑶矣行в糜陬A(yù)防或治療癡呆。由兩組探索試驗(probe trial)結(jié)果確定,與載劑處理組相比，BCCAo組很難記憶平臺的位置(F(5,53) = 7.05，P = 0.000)(圖2)。在訓(xùn)練后進行探索試驗4天和8天。結(jié)果是，在是平臺5倍大的區(qū)域中，BCCAo組和用200mg/kg烏梅提取物處理的組的動物比載劑處理組動物游得顯著更少(P = 0.014，第一次探索試驗)。該結(jié)果表明本發(fā)明的烏梅提取物提高了動物的記憶能力。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，進行了體內(nèi)神經(jīng)生物學(xué)測試。圖4a舉例說明了 Western印跡結(jié)果，圖4b是舉例說明通過施用本發(fā)明烏梅提取物而呈現(xiàn)海馬損傷正?；?使ERK磷酸化正常化并增加ChAT)之結(jié)果的圖。圖4c舉例說明了 Western印跡結(jié)果，圖4d是舉例說明通過施用本發(fā)明烏梅提取物而呈現(xiàn)海馬損傷正常化(使NF- K B正?；?之結(jié)果的圖。與載劑處理組相比，BCCAo組動物表現(xiàn)出相似的ERK水平，但是有更高的ERK磷酸化。烏梅提 取物的處理顯著降低了 ERK磷酸化水平(P <0.05)。與載劑處理組相比，BCCAo組動物中海馬ChAT (膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(choline acetyl transferase),用于產(chǎn)生乙酰膽堿的酶)減少，并且通過施用烏梅提取物使降低的ChAT水平正?；?。也就是說，通過烏梅提取物處理使NF- K B水平正常化。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，還進行了體內(nèi)組織學(xué)測試。單克隆抗體Iba-1 (離子|丐結(jié)合銜接分子(ionized calcium-binding adaptormolecule))用于尋找海馬體中的小膠質(zhì)細(xì)胞。Iba-1在小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞(HSSj] O] microphase)中表達。圖5舉例說明了通過施用烏梅提取物海馬體中小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目的變化。圖5a舉例說明了免疫組織學(xué)染色的結(jié)果，圖5b是舉例說明所述免疫組織學(xué)染色的結(jié)果的圖。與BCCAo組相比，載劑處理組表現(xiàn)出顯著高數(shù)量的小膠質(zhì)細(xì)胞。通過濃度為200mg/kg的本發(fā)明烏梅提取物的處理，小膠質(zhì)細(xì)胞的表達水平顯著降低(P < 0.05)。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，在整個實驗時期內(nèi)觀察了測試動物的重量變化以研究本發(fā)明烏梅提取物的毒性。結(jié)果是，BCCAo組動物的體重不如載劑處理組的體重增長的多，并且總體上很難觀察到烏梅提取物處理引起的重量變化(圖6)。因此，確定本發(fā)明提取物沒有毒性，使得它可有效用于預(yù)防或治療癡呆。本發(fā)明的烏梅提取物可有效地使海馬損傷正?；⑶覜]有毒性，使得它可有效用于預(yù)防或治療癡呆?？蓪⒈景l(fā)明的用于預(yù)防或治療癡呆的組合物制劑為用于經(jīng)口施用，例如散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑和氣溶膠；以及用于腸胃外施用，例如外用、栓劑和無菌注射劑等。用于經(jīng)口施用的固體制劑包括散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑和丸齊U。用于經(jīng)口施用的液體制劑包括混懸劑、溶液劑、乳劑和糖漿劑，并且上述制劑除通常使用的一般稀釋劑(如水和液體石蠟)之外可包含多種賦形劑，例如濕潤劑、甜味劑、芳香劑和防腐劑。對于用于腸胃 外施用的制劑，可通過常規(guī)方法制備散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、無菌混懸劑、液劑、非水溶性賦形劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、栓劑、外用如氣溶膠和無菌注射齊U，并且優(yōu)選地可制備皮膚外用藥物組合物，例如乳膏劑、凝膠劑、貼劑、噴霧劑、軟膏劑、膏藥劑(項衛(wèi)習(xí)1，plaster)、洗劑、搽劑、糊劑或泥審劑(外B].晉H].土口 ， cataplasm)，但不總限于此。除活性化合物之外，非水溶性賦形劑和混懸劑可包含丙二醇(propyleneglycol)、聚乙二醇(巻E]叫皇鈕音司署.，polyethylene glycol)、植物油(如橄欖油)、可注射酯(如油酸乙( 0A皇魯刮01蘭.，ethylolate))等。除活性化合物之外,栓劑可包含witepsol、聚乙二醇(口].丑旦音，macrogol)、吐溫61、可可脂、月桂酸甘油酯、甘油明I父等。本發(fā)明的用于預(yù)防或治療癡呆的組合物還可包含通常使用的載體、賦形劑、崩解齊U、甜味劑、潤滑劑、調(diào)味劑和稀釋劑。載體、賦形劑和稀釋劑的實例為乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、藻酸酯/鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。崩解劑的實例為羧甲基淀粉鈉、交聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、藻酸、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、殼聚糖、瓜爾膠、低取代羥丙基纖維素、硅酸鎂鋁、波拉克林鉀(署司-彐皇鉭坌晉， polacrilin potassium)等。本發(fā)明的用于預(yù)防或治療癡呆的組合物可另外地包含可藥用添加劑，其實例為淀粉、糊化淀粉、微晶纖維素、乳糖、聚維酮、膠質(zhì)二氧化硅、磷酸氫鈣、乳糖、甘露醇、太妃糖( , taffy)、阿拉伯膠、預(yù)糊化淀粉、玉米淀粉、纖維素粉、羥丙基纖維素、歐巴代(立碑三H}叫，Opadry)、羧甲基淀粉鈉、巴西棕櫚蠟(外旦社)、合成硅酸鋁、硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鋁、硬脂酸鈣、白糖、右旋糖、山梨糖醇、滑石等。本文的可藥用添加劑優(yōu)選以0.1 90的重量份添加至藥物組合物。除上述成分之外，本發(fā)明的用于預(yù)防或治療癡呆的組合物可包含一種或更多種與烏梅提取物功能相同或相似的活性成分。本發(fā)明的組合物可包含組合物總重量的按重量計0.0001 10%的烏梅提取物，優(yōu)選按重量計0.001 I %的烏梅提取物。本發(fā)明的用于預(yù)防或治療癡呆的組合物可通過經(jīng)口或腸胃外進行施用，并且所述腸胃外使用包括外用于皮膚、腹腔內(nèi)注射、直腸內(nèi)注射、皮下注射、靜脈內(nèi)注射、肌內(nèi)注射或胸腔內(nèi)注射(魯早Ifl平入I， intrathoracic injection)。本發(fā)明還提供了包含烏梅提取物作為活性成分的用于預(yù)防或緩解癡呆的功能性保健食品組合物?？赏ㄟ^如制備與用作活 性成分的用于預(yù)防或治療癡呆之組合物的烏梅提取物所述的相同方式來制備本文中的烏梅提取物。所述癡呆優(yōu)選是血管性癡呆或阿爾茨海默病，并且更優(yōu)選血管性癡呆，但不總限于此。本發(fā)明的烏梅提取物可用作食品添加劑。在該情況下，本發(fā)明的烏梅提取物可原樣添加或者根據(jù)常規(guī)方法與其他食品組分混合添加?；钚猿煞值幕旌媳壤筛鶕?jù)使用目的(預(yù)防或緩解)調(diào)節(jié)。一般來說，為了生產(chǎn)保健食品或飲料，優(yōu)選添加按重量計0.2 20%的本發(fā)明烏梅提取物，更優(yōu)選添加按重量計0.24 10%的本發(fā)明烏梅提取物。但是，如果為了健康和衛(wèi)生或調(diào)節(jié)健康狀況需要長期施用，含量可低于上述含量，但是因為已證明本發(fā)明的烏梅提取物非常安全，所以也可接受更高含量。本發(fā)明的功能性保健食品還可包含多種調(diào)味劑或天然碳水化合物等。上述天然碳水化合物可以是以下之一:單糖，如葡萄糖和果糖；二糖，例如麥芽糖和蔗糖；多糖，例如糊精和環(huán)糊精；和葡萄糖醇，例如木糖醇、山梨糖醇、赤蘚糖醇。此外，可包含以下作為甜味劑:天然甜味劑，例如奇異果甜蛋白(鈄早口I^Lthaumatin)和甜葉菊提取物(厶砷叫呌平晉晉，stevia extract);和合成甜味劑，例如糖精和阿斯巴甜(外土碎旦導(dǎo)，aspartame)。所述天然碳水化合物的含量優(yōu)選為100重量份本發(fā)明功能性保健食品的0.01 0.04重量份，更優(yōu)選0.02 0.03重量份。本文中的功能性保健食品不被限制。例如，可將本發(fā)明的烏梅提取物添加到飲品、肉類、香腸、面包、餅干(ti"| 土項，h Lscuit)、糍粑(寫，tteok)(年糕)、巧克力、糖果、零食(土砷吾， snack)、曲奇( 碎;4畀，cookie)、披薩、拉面(珅amyuns)、面產(chǎn)品、口香糖、乳制品(包括冰激凌)、湯類、飲料、酒精飲料和維生素復(fù)合物等中，并且在廣義上可包含可用于生產(chǎn)保健食品的幾乎每一種食物。除了上述成分之外，本發(fā)明的功能性保健食品可包含多種營養(yǎng)物、維生素、礦物質(zhì)、調(diào)味劑、著色劑、果膠酸及其鹽、藻酸及其鹽、有機酸、保護性膠質(zhì)增稠劑、PH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇、用于添加至碳酸飲料的碳酸化劑(赴丑許習(xí)I ,carbonator)等。本發(fā)明的功能性保健食品可還包含天然果汁、水果飲料和/或可添加到蔬菜飲料中的果肉。所有的所述成分可單獨或一起添加。那些成分的混合比例實際上沒有關(guān)系，但是一般來說，每100重量份本發(fā)明功能性保健食品可添加0.01 0.1重量份的每一種成分。本發(fā)明還提供了用于治療癡呆的方法，其包括將藥用有效劑量的烏梅提取物施用于患癡呆之對象的步驟。此外，本發(fā)明提供了用于預(yù)防癡呆的方法，其包括將藥用有效劑量的烏梅提取物施用于對象的步驟。所述癡呆優(yōu)選是血管性癡呆或阿爾茨海默病。本文的對象可以是任何動物，包括人。所述烏梅提取物可另外地包含一種或更多種具有與所述烏梅提取物相同或相似功能的活性成分。可通過經(jīng)口施用或腸胃外施用(包括皮下注射、靜脈內(nèi)注射或肌內(nèi)注射)進行施用。本發(fā)明的烏梅提取物可以以藥物制劑的一般形式使用。單位劑量(平 句:導(dǎo)I，dosage unit)可包含，例如1、2、3或4次單獨劑量
(7]] individual dose)或單獨劑量的1/2、1/3或1/4。單獨劑量優(yōu)選包含在一次應(yīng)用中施用的活性化合物的量，并且其通常對應(yīng)于日劑量的全部、1/2、1/3或1/4。有效劑量是每天0.0001 10g/kg,并且優(yōu)選每天0.0001 5g/kg,施用頻率優(yōu)選一天I 6次。

有利作用如本文之前所解釋的，本發(fā)明的烏梅提取物在血管性癡呆動物模型中在改善空間識別能力和使由慢性血管性腦損傷引起的海馬損傷正?；?使ERK磷酸化正常化、增加ChAT并使NF-K B正?；?方面具有顯著作用，使得它可有效用于預(yù)防或治療伴有血管性腦損傷的這種疾病(包括血管性癡呆)。


圖1是舉例說明試驗時段(session)中的搜索誤差(search error)的圖，示出本發(fā)明烏梅提取物對空間識別能力正常化的作用。假手術(shù)+載劑；載劑處理組
BCCA0+載劑；腦損傷組BCCA0+釣藤散300 ;用300mg/kg釣藤散處理的腦損傷組BCCA0+烏梅100 ;用100mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅200 ;用200mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅400 ;用400mg/kg烏梅處理的腦損傷組圖2是舉例說明探索試驗中目標(biāo)計數(shù)器中的時間％的圖，示出本發(fā)明烏梅提取物對空間識別能力正常化的作用。假手術(shù)+載劑；載劑處理組BCCA0+載劑；腦損傷組BCCA0+釣藤散300 ;用300mg/kg釣藤散處理的腦損傷組BCCA0+烏梅100 ;用100mg/kg烏梅處理的腦損傷組
BCCA0+烏梅200 ;用200mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅400 ;用400mg/kg烏梅處理的腦損傷組圖3是舉例說明試驗時段中游泳速度(m/秒)的圖，表明沒有發(fā)現(xiàn)腦損傷引起的
運動障礙。假手術(shù)+載劑；載劑處理組BCCA0+載劑；腦損傷組BCCA0+釣藤散300 ;用300mg/kg釣藤散處理的腦損傷組BCCA0+烏梅100 ;用100mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅200 ;用200mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅400 ;用400mg/kg烏梅處理的腦損傷組圖4a是一組舉例說明Western印跡結(jié)果的照片，圖4b是一組舉例說明所述Western印跡結(jié)果的圖，示出本發(fā)明烏梅提取物對海馬損傷正常化的作用(使ERK(胞外細(xì)胞調(diào)節(jié)激酶)磷酸化正?；⒃黾覥hAT)。假手術(shù)+載劑；載劑處理組BCCA0+載劑；腦損傷組BCCA0+釣藤散300 ;用300mg/kg釣藤散處理的腦損傷組BCCA0+烏梅100 ;用100mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅200 ;用200mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅400 ;用400mg/kg烏梅處理的腦損傷組圖4c是一組舉例說明Western印跡結(jié)果的照片，圖4d是一組舉例說明所述Western印跡結(jié)果的圖，示出本發(fā)明烏梅提取物對海馬損傷正?；淖饔?使NF-κ B正常化)。假手術(shù)+載劑；載劑處理組BCCA0+載劑；腦損傷組BCCA0+釣藤散300 ;用300mg/kg釣藤散處理的腦損傷組BCCA0+烏梅200 ;用200mg/kg烏梅處理的腦損傷組圖5a是一組舉例說明免疫組織學(xué)染色結(jié)果的照片，圖5b是舉例說明所述免疫組織學(xué)染色結(jié)果的圖，示出本發(fā)明烏梅提取物對海馬損傷正?；淖饔?抑制小膠質(zhì)細(xì)胞表達)。CAl ;阿蒙角 I (Cornus Ammonisl)CA3 ;阿蒙角 3 (Cornus Ammonis3)
DG:齒狀回(dentate gyrus)假手術(shù)+載劑；載劑處理組BCCA0+載劑；腦損傷組BCCA0+釣藤散300 ;用300mg/kg釣藤散處理的腦損傷組BCCA0+烏梅200 ;用200mg/kg烏梅處理的腦損傷組圖6是舉例說明本發(fā)明烏梅提取物處理期間的重量變化的圖。假手術(shù)+載劑；載劑處理組BCCAtl+載劑；腦損傷組
BCCA0+釣藤散300 ;用300mg/kg釣藤散處理的腦損傷組BCCA0+烏梅100 ;用100mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅200 ;用200mg/kg烏梅處理的腦損傷組BCCA0+烏梅400 ;用400mg/kg烏梅處理的腦損傷組優(yōu)選實施方案以下是本發(fā)明實施和制備的詳細(xì)說明。下面是實施和制備本發(fā)明的實施例(但不限于此)。實施例1:烏梅提取物的制備用于本實施例的烏梅購買自Kwangmyungdang (守)(Ulsan,Korea)，并且在用于實驗之前通過韓國韓醫(yī)學(xué)研究院草藥質(zhì)量控制組(迸；釷詞哥鉭干省迸畔吾峑召蚪荀， Herbal Quality Control Team, KoreaInstitute of Oriental Medicine)檢查外部形態(tài)。將干燥的烏梅(2kg)放在超聲/熱組合提取器(0M30-EP，SONMEDI)中，向其中添加8L蒸餾水。在95°C進行提取120分鐘。將提取的溶液加載到Exdryer (S0NIMEDI)中，然后在80°C、_95kPa下干燥48小時以得到烏梅提取物(產(chǎn)率:16.225% )0實施例2:血■管性癡呆動物模型的構(gòu)建和藥物的經(jīng)口施用(體內(nèi))<2~1>血■管性癡呆動物模型的構(gòu)建為了研究本發(fā)·明烏梅提取物對抑制血管性癡呆進展的作用，進行以下實驗。用于本實施例的測試動物是12周齡的Wister大鼠，重量為350 400g。得到測試動物后，通過目測檢查外形。然后使動物適應(yīng)7天。觀察到任何一般癥狀之后，只選擇健康的動物，隨機(但根據(jù)重量)分組。用于適應(yīng)期和實驗期的環(huán)境條件如下；溫度:23±3°C，相對濕度:50±10%，空氣循環(huán):12 16次/小時，光照/黑暗循環(huán):12/12小時(在7:00開燈并在19:00關(guān)燈)，光照強度:150 300Lx。對所有的工具滅菌。自由提供水和固體飼料(PMI營養(yǎng)，USA) 24小時。為了構(gòu)建血管性癡呆動物模型，通過雙側(cè)頸總動脈閉塞(2V0，下文中稱為“BCCAo”)誘導(dǎo)慢性腦灌注不足(Wakita等，1994)。簡言之，用4%異氟烷麻醉動物并在手術(shù)期間通過1.5%異氟烷維持麻醉。切開中央頸部以暴露雙側(cè)頸總動脈，小心不要對交感神經(jīng)產(chǎn)生任何損傷。用#3絲線進行兩次縫合。<2~2>向血管件癡呆動物樽型經(jīng)口施用藥物如下地制備實驗組:在BCCAo手術(shù)之后20日向Wistar大鼠經(jīng)口施用烏梅提取物。總共制備6組并且每一組由16只大鼠構(gòu)成。根據(jù)初步實驗的結(jié)果，約40%的大鼠具有視力障礙。因此，在進行行為分析(水迷宮測試)之前一周，通過使用穿梭箱(shuttle Box)將動物分為盲組(Blind group)和非盲組(non-Blind group)。使盲組的大鼠經(jīng)口施用提取物42天，而非盲組的大鼠完成記憶測試，然后經(jīng)口施用提取物42天。表I
權(quán)利要求
1.用于預(yù)防或治療癡呆的藥物組合物，其包含烏梅(FructusMume)提取物作為活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防或治療癡呆的藥物組合物，其中所述提取物通過使用水、醇或其混合物作為溶劑進行提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于預(yù)防或治療癡呆的藥物組合物，其中所述醇是C1 (；低級醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于預(yù)防或治療癡呆的藥物組合物，其中所述低級醇是乙醇或甲醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防或治療癡呆的藥物組合物，其中所述提取物通過超聲/熱組合提取法進行提取。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于預(yù)防或治療癡呆的藥物組合物，其中所述癡呆是血管性癡呆或阿爾茨海默病。
7.用于預(yù)防或緩解癡呆的功能性保健食品，其包含烏梅提取物作為活性成分。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于預(yù)防或緩解癡呆的功能性保健食品，其中所述提取物通過使用水、醇或其混合物作為溶劑進行提取。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于預(yù)防或緩解癡呆的功能性保健食品，其中所述癡呆是血管性癡呆或阿爾茨海默病。
10.用于治療癡呆的方法，其包括將藥用有效劑量的烏梅提取物施用于患有癡呆之對象的步驟。
11.用于預(yù)防癡呆的方法，其包括將藥用有效劑量的烏梅提取物施用于對象的步驟。
12.烏梅提取物在制備用于預(yù)防或治療癡呆的醫(yī)用藥物中的用途。
13.烏梅提取物在制備用于預(yù)防或緩解癡呆的功能性保健食品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于預(yù)防或治療癡呆的包含梅(Prunus mume)(烏梅(Fructus Mume))提取物的組合物，并且本發(fā)明的梅提取物在血管性癡呆動物模型中在改善空間識別能力和使由慢性血管性腦損傷誘導(dǎo)的海馬損傷正常化(使ERK磷酸化正?；?、增加ChAT并使NF-κB正?；?方面具有顯著作用，因此可有利地用作用于預(yù)防或治療癡呆疾病的藥品，以及用作用于預(yù)防或緩解伴隨血管性腦損傷之癡呆疾病(例如血管性癡呆)的功能性保健食品。
文檔編號A61K36/73GK103237556SQ201180058231
公開日2013年8月7日 申請日期2011年10月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月4日
發(fā)明者全園璟, 韓正洙, 韓昌賢, 崔高也 申請人:韓國韓醫(yī)學(xué)研究院