專利名稱：一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物，特別是一種抗老年癡呆癥毒性體 A β先導(dǎo)化合物。
背景技術(shù)：
目前，全球至少有3500萬(wàn)人患有老年癡呆癥，且每年的致死率正在上升。每年全球的總花費(fèi)估計(jì)達(dá)到2000億美元，研究表明，A β (Amyloid β -peptide)寡聚體是老年癡呆癥病人體內(nèi)的顯著毒性體，因此抑制A β寡聚體的生成是阻止老年癡呆癥發(fā)生最有效的策略。然而，目前無(wú)有效方法用于Αβ抑制劑設(shè)計(jì)，主要面對(duì)三方面的嚴(yán)重挑戰(zhàn)1、缺少有效的高通量篩選方法實(shí)驗(yàn)篩選方法需要合成和純化Αβ，這對(duì)于大量化合物的篩選無(wú)疑是費(fèi)時(shí)、昂貴且不現(xiàn)實(shí)。2、缺少Αβ寡聚體的高分辨率結(jié)構(gòu)Αβ寡聚體呈亞穩(wěn)態(tài)，因此利用X-射線衍射和NMR技術(shù)很難得到其結(jié)構(gòu)，使基于結(jié)構(gòu)的合理藥物設(shè)計(jì)難以實(shí)現(xiàn)。3、缺少對(duì)A β自組裝機(jī)制的理解包括肽的哪一部分構(gòu)成在淀粉樣纖維生成過(guò)程中起著關(guān)鍵作用；種子和纖維生成相關(guān)的路徑與中間體是什么；Αβ是否親和到特定的受體;Αβ如何生成毒性體以及毒性的機(jī)制是什么。因此，設(shè)計(jì)新型Aβ抑制劑對(duì)老年癡呆癥診斷和治療具有重要的實(shí)踐意義。發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物， 可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為抗老年癡呆癥治療藥物。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的它的氨基酸序列為氨基端-VTLffffG-羧基端。
本發(fā)明的一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物，選取一組具有聚集行為的6肽樣本，經(jīng)過(guò)肽定量構(gòu)效關(guān)系建模技術(shù)設(shè)計(jì)具有聚集行為的肽分子，經(jīng)原子力顯微鏡檢測(cè)其對(duì) Αβ的抑制特征，借助細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)其對(duì)細(xì)胞毒性的抑制作用，依此方法找到了本發(fā)明所述的氨基酸序列，即氨基端-VTLffffG-羧基端。
合成本發(fā)明所述的氨基酸序列方法均是現(xiàn)有的成熟技術(shù)，它是按照如下方法制成的
采用標(biāo)準(zhǔn)Fmoc方案，起始選用0. 0125mmol, PSC樹(shù)脂(ABI公司生產(chǎn)，批號(hào) A5F013)，按照權(quán)利要求1所述的序列特征，使肽鏈從C端逐個(gè)向N端延伸，各氨基酸的用量為0. lmmol，各種氨基酸保護(hù)基團(tuán)是各氨基酸的alpha氨基Pmoc保護(hù)，其余側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)，Arg(Mtr)，Tyr (tBu), Thr (tBu), Asp (OtBu)，對(duì)于生物素基和十八?；鶊F(tuán)的修飾， Fmoc-Lys (biotin) -OH和十八酸分別連接到肽的C末端和N末端。每步縮合都加入HoBT/ Dcc活化保護(hù)氨基酸的羧基。每步縮合用含有20%六氫吡啶的NMP溶液去除Fmoc保護(hù)基， 肽側(cè)鏈合成后，按照ABI公司推薦的步驟，將含樹(shù)脂的肽鏈加入處于冰浴條件下的混合反應(yīng)液中，反應(yīng)液的成分結(jié)晶苯酸0. 75g，酒石酸乙二胺(EDT)O. 25ml，苯硫基甲烷0. 5ml, 去離子水0. 5ml，三氟乙酸10ml。在室溫條件下持續(xù)攪拌，反應(yīng)時(shí)間為4. 5小時(shí)，把肽鏈從樹(shù)枝上裂解下來(lái)，同時(shí)去除多種保護(hù)基團(tuán)。將混合液經(jīng)4G的玻璃濾器過(guò)濾，以濾掉切下的樹(shù)脂和保護(hù)集團(tuán)，并用三氟乙酸沖洗反應(yīng)瓶和濾器，將濾液在常溫下低壓蒸發(fā)至ι-aiii，加乙醚50ml，使多肽沉淀后，經(jīng)6G濾器過(guò)濾后，冷凍干燥，所得便是肽產(chǎn)品。以上過(guò)程都是在ABI-431A固相自動(dòng)肽合成儀中完成。所合成肽經(jīng)過(guò)RP-HPLC純化，純度達(dá)到95%，并經(jīng) TOF-MS鑒定結(jié)構(gòu)。
用原子力顯微鏡掃描技術(shù)測(cè)定上述所合成肽對(duì)A β的抑制作用。
用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)上述所合成肽對(duì)A β毒性的抑制作用。
本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征在某種程度上將在隨后的說(shuō)明書(shū)中進(jìn)行闡述，并且在某種程度上，基于對(duì)下文的考察研究對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見(jiàn)的，或者可以從本發(fā)明的實(shí)踐中得到教導(dǎo)。本發(fā)明的目標(biāo)和其他優(yōu)點(diǎn)可以通過(guò)下面的說(shuō)明書(shū)，權(quán)利要求書(shū)，以及附圖中所特別指出的結(jié)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)和獲得。


為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，其中
圖1是新設(shè)計(jì)肽VTLffffG對(duì)Αβ抑制作用的原子力顯微鏡掃描結(jié)果；
圖2是新設(shè)計(jì)肽對(duì)Αβ的細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果。
具體實(shí)施方式
以下對(duì)采用本發(fā)明的方法用于老年癡呆癥病人種主要毒性體_Αβ抑制劑的設(shè)計(jì)和鑒定為例進(jìn)行詳細(xì)的描述，包括以下步驟
a)肽的定量構(gòu)效關(guān)系建模；
al)肽結(jié)構(gòu)表征從文獻(xiàn)(Matsubara et al.，Nat Methods, 2010, 7 (3) :237; Thompson et al.，PNAS，2006，103 (11) :4074)選擇278個(gè)肽樣本，其中可聚集肽樣本為 117,非聚集肽樣本為162個(gè)，每個(gè)肽含有6個(gè)氨基酸殘基。精選20種天然氨基酸的516種性質(zhì)參數(shù)，借助多元統(tǒng)計(jì)分析中的因子分析法，經(jīng)斜交旋轉(zhuǎn)，并用主成分法提取6個(gè)因子， 這6個(gè)因子解釋了原始變量83. 47%的信息。
對(duì)6個(gè)因子進(jìn)行載荷分析發(fā)現(xiàn)，每個(gè)因子分別涉及疏水性、α -螺旋與轉(zhuǎn)角傾向、 體積性質(zhì)、構(gòu)成特征、局部柔性及靜電性質(zhì)。進(jìn)一步計(jì)算各因子得分，見(jiàn)表1，此6個(gè)因子得分矢量綜合了 516個(gè)原始氨基酸性質(zhì)參數(shù)大部分信息，可將其用于肽或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)表征。 肽序列中的每個(gè)氨基酸殘基用次6個(gè)因子得分表征，對(duì)于每個(gè)6肽序列，則可用6X6個(gè)= 36個(gè)變量表征。
表1 20種天然氨基酸的516個(gè)性質(zhì)參數(shù)的6個(gè)因子得分
權(quán)利要求
1. 一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物，其特征在于它的氨基酸序列為氨基端-VTLffffG-羧基端。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種新型抗老年癡呆癥先導(dǎo)化合物，其特征在于它的氨基酸序列為氨基端-VTLWWG-羧基端。本肽序列是基于肽的定量結(jié)構(gòu)功能關(guān)系模型設(shè)計(jì)，經(jīng)原子力顯微鏡掃描技術(shù)檢測(cè)，進(jìn)一步用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)得到。它對(duì)導(dǎo)致老年癡呆癥的毒性體-Aβ的聚集具有良好的抑制作用，可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)為抗老年癡呆癥藥物。
文檔編號(hào)C07K7/06GK102492022SQ20111040530
公開(kāi)日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月8日
發(fā)明者呂鳳林, 張進(jìn), 梁桂兆, 溫文軼, 苗霞, 鄭潔 申請(qǐng)人:重慶大學(xué)