專利名稱：桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法。
背景技術(shù)：
桔梗為桔梗科桔梗屬植物，藥、食、賞三用資源，藥用其根，于春、秋二季采挖，洗凈，干燥。桔梗中主要含有桔梗皂苷和桔梗多糖兩個(gè)活性成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明桔梗皂苷有多種生理活性，可用于咳嗽痰多、胸悶不暢、咽痛、音啞、肺癰吐膿、瘡瘍膿成不潰等癥。而桔梗多糖則具有很好的抗腫瘤和增強(qiáng)機(jī)體免疫活性等作用。目前，桔梗皂苷的提取方法主要有回流法、水提法、冷浸法、熱提法和醇提法等。楊獻(xiàn)文等人(楊獻(xiàn)文，劉墨祥，劉云剛等.大孔吸附樹脂柱色譜法分離桔梗總皂苷.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，23 (2):50-52.)取桔梗干品適量，室溫下用70%乙醇浸泡提取5次(每次36小時(shí)，每4-6小時(shí)充分?jǐn)嚢鐸次)，合并浸提液，濃縮，氯仿脫脂，上ZTC-1大孔膠吸附樹月旨，分別用水和不同濃度的乙醇洗脫，將含皂苷的洗脫液濃縮至干即得桔梗皂苷。此后，楊獻(xiàn)文等人(楊獻(xiàn)文，劉墨祥，劉桂艷等.水提-大孔吸附樹脂柱色譜法制備桔梗總皂苷.揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版)，2002，23 (I):15-17.)又考查了水提-大孔吸附樹脂柱色譜分離法用于桔梗皂苷的提取。孫印石等人(孫印石，劉政波，王建華等.微波輔助萃取桔梗中桔梗皂苷D.中藥現(xiàn)代化技術(shù)，2008，25 (11):1070-1074.)以不同的桔梗/提取液(質(zhì)量比)，甲醇體積分?jǐn)?shù)，微波功率，微波輻射時(shí)間，樣品粒徑和萃取溫度等實(shí)驗(yàn)參數(shù)，探討了桔梗微波輔助萃取的最優(yōu)條件。當(dāng)樣品粒徑為80-100目，萃取溫度為60°C，桔梗/提取液為1/20，甲醇體積分?jǐn)?shù)為20%，微波功率為600W，微波輻射時(shí)間為110秒時(shí)，桔梗皂苷D的提取率可達(dá)3.87mg/g。盧朝國等人(盧朝國 ，趙俊廷，黃雪等.超臨界CO2萃取桔梗有效成分的工藝研究.河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2007，28 (I):43-45.)優(yōu)化了桔梗皂苷的超臨界CO2萃取技術(shù)。得出的最優(yōu)萃取條件為:萃取溫度40°C、萃取壓力35MPa，萃取時(shí)間4小時(shí)，夾帶劑(無水乙醇)用量為100mL/100g。桔梗多糖提取的研究比較少，主要是水提醇沉法。王慧玲等人(王慧玲，張曉霞，韓美艷等.桔梗多糖的含量測定.鄭州鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，23 (3):44-46.)將桔梗藥材粉碎后用石油醚脫脂，80%乙醇回流除雜，再以水提醇沉法處理桔梗粉末，提取物經(jīng)無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀從而獲得桔梗多糖。吳彥(吳彥.桔梗中多糖的提取及測定.安慶師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009，15 (3) =78-79,82.)用熱水浸提、乙醇沉淀、DEAE纖維素柱層析的方法從桔梗中提取并純化桔梗多糖。以上列舉的各種提取工藝以及發(fā)明人檢索到的其他專利文獻(xiàn)和期刊論文都僅僅是將關(guān)注點(diǎn)單一的放在桔梗皂苷或桔梗多糖上，還沒有綜合提取這兩種物質(zhì)的報(bào)道。單一提取桔梗皂苷或桔梗多糖的工藝造成了桔梗資源的巨大浪費(fèi)且成本相對(duì)較高。近年來我國的中藥材價(jià)格整體走高，在這種情形下，如果桔梗資源還不能被合理、充分的利用，勢必造成藥品生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)成本增加，從而導(dǎo)致患者用藥成本的增加。
本發(fā)明是對(duì)桔梗中的桔梗皂苷和桔梗多糖進(jìn)行綜合提取研究的結(jié)果，旨在提供一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法。發(fā)明人經(jīng)國內(nèi)外專利文獻(xiàn)檢索和公開發(fā)表的期刊論文檢索，未發(fā)現(xiàn)桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，也未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明相關(guān)的報(bào)道或文獻(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服桔?，F(xiàn)有提取技術(shù)的不足，提供一種充分利用桔梗資源且成本較低的桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下:一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，包括如下步驟:(I)取桔梗適量，加10-50倍質(zhì)量的水，勻漿，加乙醇至乙醇濃度為60% -80%, M勻，50°C _90°C回流浸泡4-8小時(shí)，冷卻至室溫，離心。(2)取上清液，減壓濃縮至無醇味，加1-5倍體積的水，混勻，上大孔樹脂柱，10% -50%乙醇除雜，60% -90%乙醇洗脫，經(jīng)干燥即得桔梗皂苷。(3)取步驟⑴得到的桔梗殘?jiān)?0-30倍體積的水，混勻，60°C -100°C回流浸泡2-4小時(shí)，趁熱過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后加乙醇沉淀多糖，離心，取沉淀于低溫干燥，即得桔梗多糖。所述的一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征是先用乙醇處理桔梗。所述的一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征是將步驟(I)得到的桔梗殘?jiān)盟崛〗酃６嗵?。所述的一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征是所述大孔樹脂柱可以選用各種型號(hào)，如AB-8、D101、S-8等，最好是AB-8型和DlOl型大孔樹脂柱。本發(fā)明首次提供了桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，相比于以往僅僅提取皂苷或僅僅提取多糖的工藝，不僅可以充分利用桔梗資源，還大大降低了桔梗系列產(chǎn)品的生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施方式
:下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，應(yīng)理解，這些實(shí)施方式僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講述的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實(shí)施例1:一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征包括如下步驟:(I)取桔梗適量，加40倍質(zhì)量的水，勻漿，加乙醇至乙醇濃度為70%，混勻，70°C回流浸泡6小時(shí),冷卻至室溫,離心。(2)取上清液，減壓濃縮至無醇味，加4倍體積的水，混勻，上AB-8型大孔樹脂柱，50%乙醇除雜，70%乙醇洗脫，經(jīng)噴霧干燥即得桔梗皂苷。(3)取步驟(I)得到的桔梗殘?jiān)?0倍體積的水，混勻，90°C回流浸泡3小時(shí)，趁熱過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后加乙醇沉淀多糖 ，離心，取沉淀經(jīng)冷凍干燥，即得桔梗多糖。
實(shí)施例2:一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征包括如下步驟:(I)取桔梗適量，加50倍質(zhì)量的水，勻漿，加乙醇至乙醇濃度為80%，混勻，90°C回流浸泡4小時(shí),冷卻至室溫,離心。(2)取上清液，減壓濃縮至無醇味，加5倍體積的水，混勻，上DlOl型大孔樹脂柱，30%乙醇除雜，60%乙醇洗脫，經(jīng)減壓干燥即得桔梗皂苷。(3)取步驟(I)得到的桔梗殘?jiān)?，?0倍體積的水，混勻，IOO0C回流浸泡2小時(shí)，趁熱過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后加乙醇沉淀多糖，離心，取沉淀經(jīng)減壓干燥，即得桔梗多糖。實(shí)施例3:一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征包括如下步驟:(I)取桔梗適量，加30倍質(zhì)量的水，勻漿，加乙醇至乙醇濃度為60%，混勻，50°C回流浸泡8小時(shí),冷卻至室溫,離心。(2)取上清液，減壓濃縮至無醇味，加I倍體積的水，混勻，上AB-8大孔樹脂柱，10%乙醇除雜，90%乙醇洗脫，經(jīng)噴霧干燥即得桔梗皂苷。(3)取步驟(I)得到的桔梗殘?jiān)?，?0倍體積的水，混勻，60°C回流浸泡4小時(shí)，趁熱過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后加乙醇沉淀多糖，離心，取沉淀經(jīng)冷凍干燥，即得桔梗多糖。實(shí)施例4:桔梗皂苷含量測 定線性回歸方程的獲得精密吸取人參皂苷Rgl對(duì)照品液(濃度0.5mg/mL) 10 uL,25u L、50 u L、150 u L、250ii L、350ii L、450ii L、600ii L、750ii L、900ii L，置試管中，揮干，加 8%香草醛-冰醋酸液
0.6mL和高氯酸5.0mL,搖勻，80°C水浴15分鐘，取出，流動(dòng)自來水冷卻至室溫，于540nm處測定吸光度，經(jīng)計(jì)算得回歸方程。樣品含量測定準(zhǔn)確稱取供試品適量，加含水乙醇溶解，精密移取該乙醇溶液少許，揮干，加8%香草醛-冰醋酸液0.6mL和高氯酸5.0mL,搖勻，80°C水浴15分鐘，取出，流動(dòng)自來水冷卻至室溫，于540nm處測定吸光度。以線性回歸方程確定桔梗皂苷的含量。本發(fā)明的實(shí)施例1得到的桔梗皂苷經(jīng)測定含量約為50% (提取率約為桔梗質(zhì)量的
0.9% ) o實(shí)施例5:桔梗多糖含量測定線性回歸方程的獲得精密吸取濃度為0.015,0.03,0.07,0.14,0.22,0.3,0.36mg/mL 的葡萄糖對(duì)照液
0.4mL置試管中，加6 %的苯酚溶液1.0mL,搖勻，置冰水浴中，加硫酸5mL，搖勻，100°C水浴10分鐘，流動(dòng)自來水冷卻至室溫，于484nm處測定吸光度，經(jīng)計(jì)算得回歸方程。樣品含量測定準(zhǔn)確稱取供試品適量，加水溶解，精密移取該水溶液少許，加6 %的苯酚溶液
1.0mL,搖勻，置冰水浴中，加硫酸5mL，搖勻，100°C水浴10分鐘，流動(dòng)自來水冷卻至室溫，于484nm處測定吸光度。以線性回歸方程確定桔梗多糖的含量。
本發(fā)明的實(shí)施例1得到的桔梗多糖經(jīng)測定含量約為30% (提取率約為桔梗質(zhì)量的
1.4% ) 。
權(quán)利要求
1.一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征是包括如下步驟: (1)取桔梗適量，加10-50倍質(zhì)量的水，勻漿，加乙醇至乙醇濃度為60%-80%，混勻，500C _90°C回流浸泡4-8小時(shí)，冷卻至室溫，離心； (2)取上清液，減壓濃縮至無醇味，加1-5倍體積的水，混勻，上大孔樹脂柱，10%-50%乙醇除雜，60% -90%乙醇洗脫，經(jīng)干燥即得桔梗皂苷； (3)取步驟⑴得到的桔梗殘?jiān)?，?0-30倍體積的水，混勻，60°C-100°C回流浸泡2-4小時(shí)，趁熱過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后加乙醇沉淀多糖，離心，取沉淀于低溫干燥，即得桔梗多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征是所述提取方法是先用乙醇 處理桔梗。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征是所述提取方法將步驟(I)得到的桔梗殘?jiān)盟崛〗酃６嗵恰?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，其特征是所述大孔樹脂柱為AB-8型大孔樹脂柱和DlOl型大孔樹脂柱。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種桔梗皂苷和桔梗多糖的綜合提取方法，包括如下步驟取桔梗，加10-50倍質(zhì)量的水，勻漿，加乙醇至濃度為60％-80％，混勻，50℃-90℃回流浸泡4-8小時(shí)，冷卻，離心；取上清，減壓濃縮至無醇味，加1-5倍體積的水，混勻，上大孔樹脂柱，10％-50％乙醇除雜，60％-90％乙醇洗脫，經(jīng)干燥得桔梗皂苷；取離心得到的桔梗殘?jiān)?，?0-30倍體積的水，混勻，60℃-100℃回流浸泡2-4小時(shí)，趁熱過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后加乙醇沉淀多糖，離心，取沉淀于低溫干燥，得桔梗多糖。本發(fā)明相比于以往僅僅提取皂苷或僅僅提取多糖的工藝，不僅可以充分利用桔梗資源，還大大降低了桔梗系列產(chǎn)品的生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)A61P11/10GK103222998SQ20121002062
公開日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2012年1月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月30日
發(fā)明者周巧霞, 張經(jīng)碩 申請(qǐng)人:蘇州九龍醫(yī)院有限公司