專利名稱：從桔梗中提取桔?？傇碥蘸蛦误w桔梗皂苷d的方法及其醫(yī)藥新用途和中藥制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開(kāi)了一種從藥桔梗中提取的總皂苷和單體桔梗皂苷D的方法。同時(shí)也公開(kāi)了桔?？傇碥蘸蛦误w桔梗皂苷D的醫(yī)藥新用途及其中藥制劑，屬于中藥有效成分提取制備方法及其醫(yī)藥新用途技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
桔梗[Platycodon grandflorum(Jacq.)A.DC.]是最常用中藥之一，中醫(yī)常用來(lái)治療各種咳嗽痰多、胸悶不暢、及感冒咽痛等疾病?，F(xiàn)代藥理研究表明桔梗還具有明顯的抗炎和抑制胃酸分泌和抗?jié)冏饔茫簿哂薪档痛笫竽懝檀嫉淖饔?。用中藥桔梗為原料，大量制備桔?？傇碥蘸蛦误w皂苷D并制成降血糖藥物用于糖尿病的預(yù)防和治療至今未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開(kāi)了一種從桔梗中制備大量桔?？傇碥蘸蛦误w桔梗皂苷D的方法，這種提取方法適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明的另一目的是提供將桔?？傇碥罩苽涑尚碌乃幬锏姆椒ú⒂糜诟哐前Y的預(yù)防和治療。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案包括以下幾個(gè)步驟1.桔?？傇碥盏奶崛∪≈兴幗酃Ｋ幉闹瞥沙Ｒ?guī)的飲片，用3～8倍量的60～95％的乙醇提取三次，或用水提取95％乙醇沉淀的方法提取，提取液用2％的藥用活性碳脫色，過(guò)濾，回收乙醇，再用去離子水適當(dāng)稀釋，過(guò)濾，經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂柱純化，先用去離子水洗近無(wú)色，再用60～95％的乙醇洗脫，收集乙醇液，減壓濃縮回收乙醇，濃縮液干燥得桔?？傇碥?。
2.單體桔梗皂苷D的制備上述得到的桔?？傇碥?，用甲醇溶解，過(guò)濾，加桔梗總皂苷重量的6～12倍量的層析硅膠G混合均勻，干燥，在中低壓柱層析上分離，用正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5)上層為展開(kāi)劑進(jìn)行分離。用硅膠薄層鑒定，相同Rf值斑點(diǎn)的流分合并，(其中最大的斑點(diǎn)為桔梗皂苷D)，揮去溶劑，得單體桔梗皂苷D(Platycodin D)。
本發(fā)明制備桔梗總皂苷經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂柱純化乙醇洗脫濃度優(yōu)選含有50％-95％的乙醇。
本發(fā)明制備桔梗皂苷經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂柱純化乙醇洗脫濃度優(yōu)選最好含有85％乙醇和15％的水。
本發(fā)明的降血糖藥物優(yōu)選含有1％-99％的桔?？傇碥栈騿误w桔梗皂苷D和99％-1％的藥用賦形劑。
本發(fā)明的降血糖藥物優(yōu)選含有10％-90％的桔?？傇碥栈騿误w桔梗皂苷D和90％-10％的藥用賦形劑。
本發(fā)明的降血糖藥物優(yōu)選含有30％-80％的桔?？傇碥栈蚪酃误w皂苷D和70％-20％的藥用賦形劑。
本發(fā)明的降血糖藥物最好優(yōu)選含有60％-70％的桔?？傇碥栈騿误w桔梗皂苷D和40％-60％的賦形劑。
本發(fā)明的桔梗總皂苷和單體桔梗皂苷D作為藥物制劑含有治療有效量的提取物為活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上允許的藥物載體。
本發(fā)明的提取物桔?？傇碥蘸蛦误w桔梗皂苷D可用于治療和預(yù)防糖尿病藥物的制備。
本發(fā)明可以根據(jù)需要制成口服、直腸給藥、肌肉注射等給藥方式用于治療和預(yù)防糖尿病。按藥劑學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，如片劑、顆粒劑、滴丸、沖劑、液體制劑、膠囊劑、栓劑、噴霧劑、氣霧劑和注射劑。也可將其活性成分與一種或多種載體或藥物混合，制成所需劑型。
上文的載體是指藥劑學(xué)常規(guī)應(yīng)用的載體，其中包括防腐劑、矯味劑、稀釋劑、崩解劑、吸附劑、著色劑、賦形劑等。
本發(fā)明的藥物對(duì)人的用藥劑量可根據(jù)年齡、體重和糖尿病的類型及病情的嚴(yán)重程度而確定，安全有效劑量為20-100mg/人/次，由以下試驗(yàn)得到驗(yàn)證。
桔?？傇碥盏乃幚碜饔谜?、10、20mg/kg劑量下，多次灌服桔?？傇碥諏?duì)腎上腺素、葡萄糖、鏈脲佐菌素和四氧嘧啶引起的高血糖均有明顯的降低作用，且有明顯的量效關(guān)系。但對(duì)動(dòng)物正常血糖卻無(wú)明顯影響。
目的 桔?？傇碥諡榧痔焖幙萍脊煞萦邢薰狙兄频闹委熖悄虿〉男滤?，為在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上驗(yàn)證其療效，我們對(duì)其主要藥效學(xué)進(jìn)行了研究?，F(xiàn)報(bào)告如下藥物桔?？傇碥沼杉痔焖幙萍脊煞萦邢薰咎峁瑸榈S色粉末，批號(hào)20010617，桔梗皂苷D也由吉林天藥科技股份有限公司提供。糖尿樂(lè)膠囊由吉林省東豐藥業(yè)股份有限公司出品，規(guī)格0.3g/粒，批號(hào)20010301。實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配成所需濃度。鏈脲佐菌素和四氧嘧啶均為Sigma公司產(chǎn)品。
動(dòng)物 昆明種小鼠，體重18-22g，雌雄兼用，動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)為10-5113；Wistar大鼠，雄性，體重210-230g，動(dòng)物質(zhì)量合格證編號(hào)為10-5112，以上動(dòng)物均由中國(guó)人民解放軍農(nóng)牧大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
統(tǒng)計(jì)結(jié)果均經(jīng)“t”檢驗(yàn)，結(jié)果以X±SD表示。
試驗(yàn)結(jié)果1.1桔?？傇碥諏?duì)小鼠正常血糖的影響取雌雄各半小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，分別為空白對(duì)照組(10ml/kg)，糖尿樂(lè)膠囊組(2g/kg)，桔?？傇碥杖齻€(gè)劑量組(20、10和5mg/kg)，于7日內(nèi)每天灌胃給藥一次，灌胃體積均為10ml/kg，末次給藥后1小時(shí)，小鼠眶靜脈取血，用葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖。結(jié)果表明桔?？傇碥諏?duì)小鼠正常血糖無(wú)明顯影響。上述各組動(dòng)物血糖平均值分別為6.14±1.295；6.27±1.495；6.05±1.623；5.87±2.101；6.88±1.450mmol/L。
1.2桔?？傇碥諏?duì)葡萄糖引起小鼠高血糖的影響取雌雄各半小鼠180只，按體重隨機(jī)分為6組，分別為空白對(duì)照組(10ml/kg水)，模型對(duì)照組(10ml/kg水)，糖尿樂(lè)膠囊組(2g/kg)，桔?？傇碥杖齻€(gè)劑量組(20、10和5mg/kg)，于7日內(nèi)每天灌胃給藥一次，灌胃體積均為10ml/kg，末次給藥前禁食5小時(shí)，末次給藥1小時(shí)后，除空白對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射葡萄糖2g/kg，分別于注射葡萄糖后0.5、1和2小時(shí)，將每組動(dòng)物處死10只(雌雄各半)，取血，以葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖。結(jié)果表明桔梗總皂苷在注射葡萄糖后0.5和1小時(shí)可明顯降低葡萄糖引起的高血糖。見(jiàn)表1表1 桔?？傇碥諏?duì)葡萄糖引起小鼠高血糖的影響(X±SD)組別 劑量 動(dòng)物數(shù) 血糖值(mmol/L)mg/kg (只) 0.5h 1h 2h正常對(duì)照組- 104.89±1.2353.61±0.7673.50±0.744模型對(duì)照組- 1011.5±3.3299.48±2.1685.35±1.560糖尿樂(lè)膠囊2g/kg 107.54±3.027*7.27±2.134*4.91±0.881桔?？傇碥?0107.75±2.530*6.89±2.494*5.14±1.29010108.10±2.395*7.50±1.323*4.87±1.4645 109.93±2.1057.23±1.400*4.89±0.956注*P＜0.05；**P＜0.011.3桔梗總皂苷對(duì)腎上腺素引起小鼠高血糖的影響分組與給藥同實(shí)驗(yàn)二。不同之處為末次給藥(不禁食)1小時(shí)后，除空白對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射腎上腺素250ug/kg，分別于注射腎上腺素后0.5、1和2小時(shí)，將每組動(dòng)物處死10只(雌雄各半)，取血，以葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖。結(jié)果表明桔?？傇碥赵谒^察時(shí)間范圍內(nèi)均可明顯降低腎上腺素引起的高血糖，尤以0.5小時(shí)作用最為顯著，見(jiàn)表2。
表2桔?？傇碥諏?duì)腎上腺素引起小鼠高血糖的影響(X±S)

注*P＜0.05；**P＜0.01 ***p＜0.0011.4桔?？傇碥諏?duì)鏈脲佐菌素引起小鼠高血糖的影響雄性小鼠90只，隨機(jī)取10只作為空白對(duì)照組，其余小鼠尾靜脈注射鏈脲佐菌素(在4C冰浴中用0.05M檸檬酸pH4.5溶液配制，立即使用)200mg/kg，造成糖尿病模型。注射后72小時(shí)小鼠眶靜脈取血測(cè)血糖，刪除未造成糖尿病模型者(測(cè)前禁食12小時(shí)，血糖值低于11.11mmol/L)，留用小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，于7日內(nèi)按表3所示劑量每天給藥一次，末次給藥后2小時(shí)，，眶靜脈取血，以鄰甲苯胺法(超微量法)測(cè)血糖。結(jié)果表明桔梗總皂苷中劑量組和高劑量組對(duì)鏈脲佐菌素引起小鼠高血糖具有明顯的降低作用，見(jiàn)表3。
表3桔?？傇碥諏?duì)鏈脲佐菌素引起小鼠高血糖的影響(X±S)

注*P＜0.05；**P＜0.01
1.5桔?？傇碥諏?duì)四氧嘧啶引起小鼠高血糖的影響雄性小鼠120只，隨機(jī)取20只作為空白對(duì)照組，其余小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶70mg/kg，造成糖尿病模型，然后，隨機(jī)分為6組，每組20只，。注射后第二天，開(kāi)始按表4所示劑量每天給藥一次，分別于注射后14天和21天，在當(dāng)天給藥后2小時(shí)，每組小鼠分別處死10只，取血，以葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖。結(jié)果表明在所用劑量下，桔?？傇碥諏?duì)四氧嘧啶引起小鼠高血糖具有明顯的降低作用，且有明顯量效關(guān)系，見(jiàn)表4。
表4桔梗總皂苷對(duì)四氧嘧啶引起小鼠高血糖的影響(X±S)

注*P＜0.05；**P＜0.01 ***p＜0.001桔梗總皂苷對(duì)四氧嘧啶引起大鼠高血糖的影響雄性大鼠70只，隨機(jī)取10只作為空白對(duì)照組，其余60只大鼠尾靜脈注射四氧嘧啶50mg/kg，造成糖尿病模型，然后，隨機(jī)分為6組，每組10只，。注射后第二天，開(kāi)始按表5所示劑量每天給藥一次，于注射后第10天，給藥后2小時(shí)，摘眼球取血，以葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖。結(jié)果表明在所用劑量下，桔?？傇碥諏?duì)四氧嘧啶引起大鼠高血糖具有明顯的降低作用，且有明顯量效關(guān)系。赫博-d 10mg/kg對(duì)四氧嘧啶引起大鼠高血糖也具有明顯的降低作用，見(jiàn)表5。
表5、桔?？傇碥諏?duì)四氧嘧啶引起大鼠高血糖的影響(X±S)

注*P＜0.05；**P＜0.01結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明多次灌胃給予桔?？傇碥湛娠@著降低葡萄糖和腎上腺素所致的高血糖小鼠的血糖含量，而對(duì)正常小鼠的血糖含量則無(wú)明顯影響。鏈脲佐菌素和四氧嘧啶為胰島β細(xì)胞殺傷劑，可選擇性地?fù)p傷胰島β細(xì)胞，引起實(shí)驗(yàn)性糖尿病，灌服桔?？傇碥湛娠@著降低鏈脲佐菌素和四氧嘧啶所致的動(dòng)物血糖升高，且作用強(qiáng)度隨劑量的增加而加強(qiáng)，既有明顯的量效關(guān)系，單劑量10mg/kg灌服桔梗皂苷D在大鼠四氧嘧啶模型中也具有明顯的降血糖作用，提示桔?？傇碥蘸蛦误w桔梗皂苷D可能具有促進(jìn)動(dòng)物損傷的胰島β細(xì)胞恢復(fù)作用。我們的上述藥效學(xué)試驗(yàn)為臨床應(yīng)用桔?？傇碥仗峁┝艘欢ǖ乃幚韺W(xué)依據(jù)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1桔?？傇碥盏奶崛∪≈兴幗酃Ｋ幉?kg，切成2mm厚的飲片，用5倍量的85％的乙醇提取三次，或用水提取95％乙醇沉淀的方法提取，提取液用2％的藥用活性碳脫色，過(guò)濾，回收乙醇，再用去離子水稀釋到1500ml，過(guò)濾，經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂柱純化，先用去離子水洗3000ml，再用85％的乙醇洗脫，收集乙醇液，減壓濃縮回收乙醇，濃縮液干燥得桔?？傇碥?。
實(shí)施例2單體桔梗皂苷D的制備將實(shí)施例1得到的桔?？傇碥?0g，用甲醇溶解，過(guò)濾，加50g層析硅膠G混合均勻，干燥，在中低壓柱層析上分離，用正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5)上層為展開(kāi)劑進(jìn)行分離。用硅膠薄層鑒定，相同Rf值斑點(diǎn)的流分合并，(其中最大的斑點(diǎn)為桔梗皂苷D)，揮去溶劑，得單體桔梗皂苷D(Platycodin D)。
實(shí)施例3桔?？傇碥?kg，藥用淀粉0.5kg，用80％乙醇濕法制粒，整粒，干燥，裝1#膠囊，每粒0.2。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國(guó)藥典2000年版膠囊項(xiàng)下要求。
實(shí)施例4單體桔梗皂苷D 1kg，藥用淀粉0.5kg，用80％乙醇濕法制粒，整粒，干燥，裝1#膠囊，每粒0.2。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國(guó)藥典2000年版膠囊項(xiàng)下要求。
實(shí)施例5桔?？傇碥?kg，淀粉0.5kg，糊精1kg，50％乙醇適量，制粒，整粒，干燥，壓片，每片0.3g。
實(shí)施例6將1.5kg聚乙二醇4000在水浴上加熱1小時(shí)得熔融液，趁熱加入桔梗總皂苷細(xì)粉0.5kg，在保溫鍋中保持65℃約1小時(shí)。用定量泵滴丸機(jī)滴制，滴速約120丸/分，滴制溫度65-70℃，在約14℃的液體石蠟中冷卻，制得的丸重約60mg，按規(guī)定干燥后丸重約40-45mg。
權(quán)利要求
1.一種從中藥桔梗中提取純化的總皂苷的方法，其特征在于包括以下工藝步驟取中藥桔梗藥材切成常規(guī)的飲片，用60～95％乙醇提取三次，或用水提取60～95％乙醇沉淀的方法提取，提取液用2％的藥用活性碳脫色，過(guò)濾，回收乙醇，再用去離子水稀釋，過(guò)濾，經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂柱純化，先用去離子水洗近無(wú)色，再用60～95％的乙醇洗脫，收集乙醇液，減壓濃縮回收乙醇，濃縮液干燥得桔?？傇碥?。
2.一種從中藥桔梗中提取純化的單體桔梗皂苷D的方法，其特征在于將得到的桔?？傇碥沼眉状既芙?，過(guò)濾，加桔?？傇碥罩亓?～12倍量的層析硅膠G混合均勻，干燥，在中低壓柱層析上分離，用正丁醇∶醋酸∶水(4∶1∶5)上層為展開(kāi)劑進(jìn)行分離；通過(guò)硅膠薄層鑒定，相同Rf值斑點(diǎn)的流分合并，最大的斑點(diǎn)為桔梗皂苷D，揮去溶劑，得單體桔梗皂苷D。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的桔梗總皂苷提取方法，優(yōu)選含有85％乙醇和15％的水。
4.桔?？傇碥蘸蛦误w皂苷桔梗皂苷D用于制備降血糖藥物，其中包括I型和II型糖尿病的預(yù)防和治療，也可以制成保健食品用于糖尿病的預(yù)防和患者恢復(fù)期用藥。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和2所得的提取物作為治療有效量的活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于優(yōu)選含有1％-99％的桔?？傇碥栈騿误w桔梗皂苷D和99％-1％的賦形劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于含有10％-90％的桔梗總皂苷或單體桔梗皂苷D和90％-10％的賦形劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于含有30％-80％的桔?？傇碥栈騿误w桔梗皂苷D和70％-20％的賦形劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于含有60％-70％的桔?？傇碥栈騿误w桔梗皂苷D和40％-30％的賦形劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于所說(shuō)的藥物是任何一種藥劑學(xué)上所說(shuō)的劑型，包括片劑、顆粒劑、滴丸、沖劑、液體制劑、膠囊劑、栓劑、噴霧劑、氣霧劑和注射劑；也可將其活性成分與一種或多種載體或藥物混合，制成所需劑型。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從桔梗中提取桔梗總皂苷和單體桔梗皂苷D的方法及其醫(yī)藥用途和中藥制劑。將中藥桔梗用乙醇提取，或用水提取乙醇沉淀純化，再經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂柱純化干燥得桔?？傇碥?。上述得到的桔梗總皂苷在中低壓柱層析上分離，用硅膠薄層鑒定，相同Rf值斑點(diǎn)的流分合并，(其中最大的斑點(diǎn)為桔梗皂苷D)，揮去溶劑，得單體桔梗皂苷D(Platycodin D)。本發(fā)明的桔?？傇碥蘸蛦误w桔梗皂苷D可用于制備治療和預(yù)防高血糖癥和由糖尿病引起的并發(fā)癥等疾病的藥物。本發(fā)明可以根據(jù)需要制成口服、直腸給藥、肌肉注射等給藥方式用于治療和預(yù)防糖尿病。
文檔編號(hào)C07H1/00GK1397560SQ0213276
公開(kāi)日2003年2月19日 申請(qǐng)日期2002年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月13日
發(fā)明者趙全成, 楊明 申請(qǐng)人:吉林天藥科技股份有限公司