桔梗皂苷d在制備治療黑色素瘤轉(zhuǎn)移藥物中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開(kāi)一種桔梗皂苷D在制備治療黑色素瘤轉(zhuǎn)移藥物中的用途，為桔梗皂苷 D的新的醫(yī)用用途，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 大多數(shù)腫瘤治療失敗的原因是因?yàn)榫l(fā)生了不同程度和不同部位的腫瘤轉(zhuǎn)移，這 對(duì)腫瘤的治療和治愈都造成了極大的困難。癌癥經(jīng)過(guò)手術(shù)、放化療綜合治療，能遏制主要部 位腫瘤的發(fā)展，但無(wú)法遏制腫瘤轉(zhuǎn)移的特性。腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程又涉及多個(gè)步驟和環(huán)節(jié)，其機(jī)制 及其復(fù)雜，給腫瘤的治療帶來(lái)了極大困難。
[0003] 惡性黑色素瘤是一種源于表皮黑色素細(xì)胞的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的3%左 右。據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的資料顯示，惡性黑色素瘤的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)表現(xiàn)出逐步增 高的趨勢(shì)，且逐步趨于低齡化。由于以往醫(yī)生及病人對(duì)其嚴(yán)重性認(rèn)識(shí)不足，導(dǎo)致此病療效不 佳，預(yù)后較差，而且極易發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，病人發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移后，其平均生存期僅為6-9個(gè)月， 5年生存率低于5%。因此，開(kāi)發(fā)抗惡性黑色素瘤的藥物具有重要的意義。
[0004]目前臨床上尚無(wú)治療黑色素瘤的有效方法，化療藥物對(duì)惡性黑色素瘤雖有一定的 療效，但毒副作用較大；中成藥對(duì)黑色素瘤的療效作用緩慢且均不理想，因此開(kāi)發(fā)多途徑、 多靶點(diǎn)的抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物是具有重大醫(yī)學(xué)價(jià)值的策略之一。
[0005] 對(duì)桔梗皂苷D藥理學(xué)活性的研宄表明，桔梗皂苷D具有抗炎、鎮(zhèn)痛、減肥、保 肝和抗腫瘤作用。桔梗皂苷D可抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，腫瘤細(xì)胞包 括肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、膠質(zhì)瘤等。TingLi發(fā)現(xiàn)桔梗皂苷D可誘導(dǎo)IfepG2肝癌細(xì) 胞凋亡，同時(shí)降低HepG2肝癌細(xì)胞粘、迀移和侵襲能力（Li,T,etal.，PlatycodinD inducesapoptosis,andinhibitsadhesion,migrationandinvasioninHepG2 hepatocellularcarcinomacells.AsianPacJCancerPrev, 2014. 15:p. 1745-1749)。JaemooChun發(fā)現(xiàn)桔梗皂苷D可通過(guò)表皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的Akt和MAPK作用 通路抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、迀移和侵襲（Chun,J.andY.S.Kim,PlatycodinDinhibits migration,invasion,andgrowthofMDA-MB-231humanbreastcancercells viasuppressionofEGFR-mediatedAktandMAPKpathways.Chemic〇-bioIogical interactions, 2013. 205(3):p. 212-221)。目前尚未有桔梗皂苷D抑制B16F10 黑色素 瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開(kāi)一種桔梗皂苷D在制備治療黑色素瘤轉(zhuǎn)移藥物中的用途，針對(duì)腫瘤轉(zhuǎn) 移在臨床上治療效果不理想的現(xiàn)狀，提供桔梗皂苷D抗腫瘤轉(zhuǎn)移的新用途。
[0007]本發(fā)明所述的桔梗阜苷D(PlatycodinD)是桔梗（platycodongrandifIorum)的 干燥根；其分子式為C57H92O28;分子量為1224. 38。
[0008] 所述腫瘤為B16F10黑色素瘤。
[0009] 所述抗腫瘤轉(zhuǎn)移是指抑制腫瘤細(xì)胞活性。
[0010] 所述抗腫瘤轉(zhuǎn)移是指抑制腫瘤細(xì)胞迀移。
[0011] 所述抗腫瘤轉(zhuǎn)移是指抗腫瘤細(xì)胞侵襲的能力。
[0012] 所述抗腫瘤轉(zhuǎn)移是指抑制腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力。
[0013] 所述抗腫瘤轉(zhuǎn)移應(yīng)用劑量范圍為10-400mg/人/天，應(yīng)用劑量?jī)?yōu)選為40-200mg/ 人/天。
[0014] 所述的藥物劑型為膠囊劑、片劑、滴丸劑、微囊制劑、注射劑、栓劑、噴霧劑或軟膏 劑。
[0015] 所述的藥物的給藥方式為注射、口服、吸入式噴霧或透皮給藥。
[0016] 本發(fā)明的積極效果在于：提供了桔梗皂苷D的一種新用途。公開(kāi)了桔梗皂苷D的 抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用；桔梗皂苷D可有效抑制B16F10黑色素瘤細(xì)胞活性、迀移及侵襲；桔梗皂 苷D具有抑制腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附作用；桔梗皂苷D可抑制C57BL/6J荷瘤小鼠 肺轉(zhuǎn)移，明顯減少肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量，以上發(fā)現(xiàn)說(shuō)明桔梗皂苷D具有抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性，為腫瘤轉(zhuǎn) 移的治療提供了一種新的方法。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1是桔梗皂苷D抑制B16F10黑色素瘤細(xì)胞迀移照片； 圖2是桔梗皂苷D抑制B16F10黑色素瘤細(xì)胞侵襲照片； 圖3是小鼠體內(nèi)B16F10實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移結(jié)果照片。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離 本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對(duì)本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何改 動(dòng)或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
[0019] 實(shí)施例1 桔梗皂苷D膠囊劑的制備 單體桔梗皂苷D500g，藥用淀粉250g，用80%乙醇濕法制粒，整粒，干燥，裝膠囊，每粒 0. 2g〇
[0020] 實(shí)施例2 桔梗皂苷D片劑的制備 單體桔梗皂苷D500g，淀粉250g，糊精500g，50%乙醇適量，制粒、整粒，干燥，壓片，每 片 〇. 2g。
[0021] 實(shí)施例3 桔梗皂苷D滴丸劑的制備 將750g聚乙二醇4000在水浴上加熱Ih得熔融液，加入桔梗皂苷D單體250g，在保溫 鍋中保持65°C約1小時(shí)。用滴丸機(jī)滴制，滴速約110丸/分，滴制溫度65-70°C，在液體石 賭中冷卻，制得的丸重約60mg，按規(guī)定干燥后丸重約4〇-45mg。
[0022] 以上所述僅為清楚地說(shuō)明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì)于本技術(shù)領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn) 和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0023] 以下試驗(yàn)表明本發(fā)明的抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性 試驗(yàn)例1 桔梗皂苷D對(duì)B16F10黑色素瘤活性的影響 采用MTT法。染色劑為3- (4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽，簡(jiǎn)稱MTT， 檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié) 晶甲瓚（Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO)能溶解細(xì)胞中 的甲瓚，用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的 量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值（0D值)，來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量，OD值越大，細(xì)胞活性 越強(qiáng)。采用此法檢測(cè)桔梗皂苷D對(duì)B16F10活性的影響 B16F10細(xì)胞接種于96孔板中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)率到80%后，棄去上清培養(yǎng)液，用PBS清洗2遍，將桔梗皂苷D按以下濃度0、5、10、20、40、80yg/ml加入孔中，100y1/孔，繼 續(xù)培養(yǎng)24h后加入20y IMTT，4h后棄去孔中溶液，加入150y IDMSO溶解甲瓚，IOmin后測(cè) 定490nm下的OD值。按如下公式計(jì)算細(xì)胞活力： 細(xì)胞活力（％)=(0D sample - OD blank)/(0D control- OD blank) X 100%〇
[0024] 結(jié)果：如表I所示，桔梗皂苷具有抑制B16F10黑色素瘤細(xì)胞活性作用且呈劑量依 賴關(guān)系。桔梗皂苷D的濃度為10yg/ml時(shí)，B16F10的細(xì)胞活力為93. 83%，隨著桔梗皂苷D 濃度的升高，細(xì)胞活力逐漸下降。
[0025] 結(jié)論：桔梗皂苷D具有抑制B16F10活性作用。
[0026] 表1桔梗皂苷D對(duì)B1610黑色素瘤細(xì)胞的活性影響
:與對(duì)照組相比具有極顯著性差異（P〈 0.01) 試驗(yàn)例2 桔梗皂苷D抑制B16F10黑色素瘤迀移實(shí)驗(yàn) 采用細(xì)胞劃痕法，本法借鑒體外細(xì)胞致傷愈合實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，測(cè)定腫瘤細(xì)胞在細(xì)胞外基質(zhì) 上的運(yùn)動(dòng)特性。B16F10細(xì)胞接種于6孔板中培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)率達(dá)到90%后，沿培養(yǎng)板 底部呈"一"字形劃痕，PBS清洗后，將Iml含桔梗皂苷D的DM