專(zhuān)利名稱(chēng)：利拉魯肽在制備治療2型糖尿病骨病變藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥制備領(lǐng)域，特別涉及利拉魯肽在制備治療2型糖尿病所致的骨病變藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種慢性血糖升高性疾病，可并發(fā)多種慢性疾病，如糖尿病腎病、糖尿病心血管病變、糖尿病神經(jīng)病變、糖尿病視網(wǎng)膜病變等。此外，在動(dòng)物及人群研究中顯示，糖尿病狀態(tài)下骨密度較正常對(duì)照明顯降低，骨重建過(guò)程發(fā)生紊亂，骨微結(jié)構(gòu)受到損害，骨折風(fēng)險(xiǎn)較正常對(duì)照明顯增加。因此，骨應(yīng)該作為糖尿病治療關(guān)注的另一靶器官。利拉魯肽是一種人胰高糖素樣肽-1 (GLP-1)類(lèi)似物，該藥的活性成份利拉魯肽(通過(guò)基因重組技術(shù)，利用酵母生產(chǎn)的人胰高糖素樣肽-1 (GLP-1)類(lèi)似物)?；瘜W(xué)名稱(chēng) Arg34Lys26- (N- ε - ( y -Glu (N- α -十六?；?))_GLP_1 [7-37]。同天然的 GLP-1 有 97%的相似性，且經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)修飾后，利拉魯肽不僅可耐受二肽基肽酶-1V，還能明顯延長(zhǎng)血漿半衰期，這些使其適合每日一次的注射給藥。利拉魯肽作為GLP-1受體激動(dòng)劑，已通過(guò)美國(guó)FDA批準(zhǔn)，被應(yīng)用于2型糖尿病的治療。但是，利拉魯肽對(duì)于治療或預(yù)防2型糖尿病所致的骨病變的作用還未有報(bào)道，并且包括GLP-1各種類(lèi)似物對(duì)患有糖尿病的幼齡大鼠的骨病變治療和預(yù)防亦尚未有文獻(xiàn)提及。具有多向分化潛能的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，在一定條件下，通過(guò)經(jīng)典Wnt或非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路可誘導(dǎo)分化為多種細(xì)胞系，如成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等。最近報(bào)道發(fā)現(xiàn)GLP-1可通過(guò)MAPK和PKC信號(hào)通路抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化。又由于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞作為成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞可能的共同前體細(xì)胞，因此根據(jù)骨-脂肪平衡理論，是否利拉魯肽對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的定向分化有影響，這將給利拉魯肽的除了糖尿病以外的治療效果提供更多的科學(xué)數(shù)據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供利拉魯肽在治療2型糖尿病骨病變中的新用途，為臨床上更合理的使用利拉魯肽提供更多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。本發(fā)明涉及利拉魯肽制備治療2型糖尿病骨病變藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用幼齡DK大鼠作為動(dòng)物模型，利拉魯肽的注射頻率為一天一次，注射量為 O. 6U/kg。本發(fā)明采用2周齡雄性Wistar大鼠和2周齡雄性GK大鼠作為動(dòng)物模型，因?yàn)镚K大鼠是一種自發(fā)性2型糖尿病的模型鼠，出生時(shí)就已經(jīng)存在胰島β細(xì)胞的數(shù)量和質(zhì)量的缺陷，導(dǎo)致胰島素分泌障礙和胰島β細(xì)胞量減少。隨著年齡的增長(zhǎng)，這些缺陷逐漸嚴(yán)重，并在大約6-8周齡的時(shí)候血糖突然升高，而被認(rèn)為是糖尿病開(kāi)始發(fā)作，而且，GK大鼠和人類(lèi)2型糖尿病有相似的胰島β細(xì)胞損傷變化。采用Wistar大鼠作為對(duì)比，Wistar大鼠是1907年由美國(guó)維斯塔爾(wistar)研究所育成，Wistar大鼠是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠類(lèi)最為常用及生物醫(yī)學(xué)研究中使用歷史最長(zhǎng)的品種，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)試。將GK大鼠同窩隨機(jī)分成GK空白組和GK加藥組，Wistar大鼠作為對(duì)照組，每組6只。GK加藥組給予每日注射一次利拉魯肽，注射量為O. 6U/kg，GK空白組給予等體積的注射用水。利拉魯肽給藥4周后，對(duì)大鼠進(jìn)行骨密度及骨微觀結(jié)構(gòu)測(cè)試、股骨各組成骨分化標(biāo)志基因的表達(dá)及利拉魯肽對(duì)股骨Wnt及MAPK通路的影響的測(cè)試。從三維重建圖、二維圖及相關(guān)各檢測(cè)參數(shù)可以看出，GK大鼠空白組無(wú)論是BMD還是骨微結(jié)構(gòu)(BV/TV，Tb. Th, Tb.N, Tb. Sp, mean thickness,和 Ct. Ar/Tt. Ar)均出現(xiàn)了明顯損傷，除股骨的 Tb. Th.外，P 值均〈O. 01，說(shuō)明高血糖狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致骨代謝的異常，且早期即可發(fā)生。GK加藥組大鼠血糖較GK空白組大鼠相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Micro-CT掃描股骨結(jié)構(gòu)的結(jié)果顯示，無(wú)論是皮質(zhì)骨還是松質(zhì)骨，利拉魯肽加藥組的各參數(shù)顯示藥物有明顯的逆轉(zhuǎn)高血糖狀態(tài)所致骨病變的作用。此夕卜，從股骨成骨分化基因轉(zhuǎn)錄水平結(jié)果也顯示，GK加藥組和GK空白組相比，各個(gè)基因表達(dá)都明顯增加。由此可證明利拉魯肽可以明顯改善幼齡GK大鼠在糖尿病發(fā)展中的骨損傷。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明提供了利拉魯肽在制備治療2型糖尿病骨病變藥物 中的新用途，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，得到了確切的利拉魯肽治療GK大鼠骨變的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，為臨床上更合理的使用利拉魯肽提供更多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。


圖1是大鼠的第五腰椎CT掃描圖，其中，圖1(a)為Wistar組，圖1(b)為GK空白組，圖1 (c)為GK給藥組。圖2是大鼠的右側(cè)股骨CT掃描后的三維重建圖，其中，圖2(a)為Wistar組，圖2(b)為GK空白組，圖2(c)為GK給藥組。圖3是大鼠的右側(cè)股骨CT掃描后的二維冠狀面圖，其中，圖3(a)為Wistar組，圖3(b)為GK空白組，圖3(c)為GK給藥組。圖4是股骨成骨分化標(biāo)志基因的表達(dá)圖。圖5是股骨Wnt通路相關(guān)基因的表達(dá)圖。圖6是股骨Wnt及MAPK通路相關(guān)基因的表達(dá)圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明本實(shí)施例中用到的大鼠模型為'2周齡雄性Wistar大鼠和2周齡GK大鼠，均從上海中科院斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)買(mǎi)。實(shí)驗(yàn)大鼠均正常飲食喂養(yǎng)于塑料鼠盒內(nèi)，自由取食和飲水。試驗(yàn)室內(nèi)室溫18 25°C，相對(duì)濕度40-60%，12小時(shí)光照交替。利拉魯肽購(gòu)買(mǎi)自諾和諾德制藥公司實(shí)施例1將GK大鼠同窩隨機(jī)分成GK空白組和GK加藥組，Wistar大鼠作為對(duì)照組，每組6只。GK加藥組給予每日早上8點(diǎn)注射一次利拉魯肽，注射量為O. 6U/kg，GK空白組給予等體積的注射用水。喂養(yǎng)期間監(jiān)測(cè)體重，每周監(jiān)測(cè)一次血糖。利拉魯肽給藥4周后，處死取其雙側(cè)股骨、脛骨、第四第五腰椎(L4/L5)，剔除肌肉，右側(cè)長(zhǎng)骨置于4%多聚甲醛中，左側(cè)用PBS沖洗骨髓至標(biāo)本為透明白色，錫紙包裹標(biāo)記后-80°C保存，進(jìn)行如下測(cè)試
(I)、骨密度及骨微觀結(jié)構(gòu)測(cè)試選取大鼠的第五腰椎，行Micro CT薄層掃描(以14 μ m遞增)，掃描范圍為整個(gè)第五腰椎。掃描后，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行冠狀面、矢狀面分析并行三維重建。其中，圖1(a)為Wistar組，圖1(b)為GK空白組，圖1(c)為GK給藥組，從三組腰椎的冠狀面、矢狀面及三維重建的Micro CT圖像上觀察到與Wistar組相比，空白組大鼠骨髓腔中，骨小梁數(shù)量變少，骨小梁間隔距離增加且形態(tài)、結(jié)構(gòu)紊亂，一些部位可見(jiàn)骨小梁斷裂、不連續(xù)，說(shuō)明GK大鼠早期即有骨損傷。GK加藥組與GK空白組相比，這些現(xiàn)象均有一定程度的改善。選取大鼠的右側(cè)股骨，行Micro CT薄層掃描(以14 μ m遞增)，掃描范圍為股骨干骺端上方約3cm往下的股骨部分。掃描后，得到三維重建圖，具體見(jiàn)圖2，其中圖2(a)為Wistar組，圖2(b)為GK空白組，圖2(c)為GK給藥組，股骨二維冠狀面圖，見(jiàn)圖3所示，其中，圖3(a)為Wistar組，圖3(b)為GK空白組，圖3(c)為GK給藥組，從圖中可以看出GK空白組大鼠比Wistar組大鼠骨皮質(zhì)變薄，骨小梁結(jié)構(gòu)破壞明顯，說(shuō)明GK大鼠早期即有骨損傷，GK加藥組損傷程度較GK空白組有不同程度的減輕。具體骨皮質(zhì)、骨松質(zhì)各參數(shù)見(jiàn)下表表I股骨和第五腰椎Micro CT掃描各松質(zhì)骨參數(shù)
權(quán)利要求
1.利拉魯肽在制備治療2型糖尿病骨病變藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利拉魯肽在制備治療2型糖尿病骨病變藥物中的應(yīng)用，其特征在于采用幼齡DK大鼠作為動(dòng)物模型，利拉魯肽的注射頻率為一天一次，注射量為0. 6U/kg o
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥制備領(lǐng)域，特別涉及利拉魯肽在制備治療2型糖尿病所致的骨病變藥物中的應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)采用幼齡DK大鼠作為動(dòng)物模型，利拉魯肽的注射頻率為一天一次，注射量為0.6U/kg。利拉魯肽給藥4周后，對(duì)大鼠進(jìn)行骨密度及骨微觀結(jié)構(gòu)測(cè)試、股骨各組成骨分化標(biāo)志基因的表達(dá)等測(cè)試。結(jié)果顯示無(wú)論是皮質(zhì)骨還是松質(zhì)骨，利拉魯肽加藥組大鼠的各參數(shù)顯示藥物有明顯的逆轉(zhuǎn)高血糖狀態(tài)所致骨病變的作用。從股骨成骨分化基因轉(zhuǎn)錄水平結(jié)果也顯示，GK加藥組大鼠和GK空白組大鼠相比，各個(gè)基因表達(dá)都明顯增加。由此可證明利拉魯肽可以明顯改善幼齡GK大鼠在糖尿病發(fā)展中的骨損傷。為臨床上更合理的使用利拉魯肽提供更多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和科學(xué)依據(jù)。
文檔編號(hào)A61K38/26GK103007255SQ201210592430
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月29日
發(fā)明者寧光, 孫寒曉, 劉建民, 趙紅燕, 崔斌, 孫立昊 申請(qǐng)人:上海市內(nèi)分泌代謝病研究所