用于鑒定和治療抗黃體制劑敏感性腫瘤的方法和系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】提供了用于鑒定和治療懷疑患有對(duì)通過抗黃體制劑(anti-progestin)的生長抑制敏感的腫瘤的患者的方法和系統(tǒng)。黃體酮受體的局灶性分布程度可被用于鑒定對(duì)抗黃體制劑療法的治療敏感的腫瘤。
【專利說明】用于鑒定和治療抗黃體制劑敏感性腫瘤的方法和系統(tǒng)
[0001]背景
[0002]本申請(qǐng)要求2011年10月4日提交的美國臨時(shí)專利號(hào)61/542，931的優(yōu)先權(quán)，其公開內(nèi)容在此通過引用整體并入本文。
[0003]黃體酮受體(PR)以兩種主要的同種型(isoform)，PR-A和PR-B，存在于細(xì)胞中。在結(jié)合的黃體制劑(progestin)配體,諸如黃體酮的存在下,PR在特定的位點(diǎn)被磷酸化，二聚化，與許多不同的細(xì)胞元件(例如，P300和類固醇受體共激活因子)形成復(fù)合物，并結(jié)合被稱為黃體酮應(yīng)答元件(PRE)的特異性DNA序列以啟動(dòng)DNA轉(zhuǎn)錄成RNA。PR配體復(fù)合物還吸引了許多其他共激活因子(co-activator)或共阻抑因子(co-repressor),其形成進(jìn)而轉(zhuǎn)錄特定基因的細(xì)胞元件。在含有黃體酮受體的細(xì)胞的細(xì)胞核中，這些PR復(fù)合物(還稱為灶(foci))可使用免疫組織熒光技術(shù)作為熒光聚集體被可視化，并可使用本專利中描述的免疫組織化學(xué)技術(shù)作為致密且深染色的核聚集體被可視化。
[0004]在絕經(jīng)前的女性中，在當(dāng)雌激素(estrogen)是主要激素且黃體酮被最低限度地分泌時(shí)的增生期(月經(jīng)周期的第一部分)期間，針對(duì)PR-A和PR-B染色正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞(例如，使用免疫熒光技術(shù)和共聚焦顯微術(shù))顯示彌漫性的黃體酮受體細(xì)胞核染色模式(pattern)。在當(dāng)黃體酮是主要激素時(shí)的分泌期(月經(jīng)周期的第二部分)期間，使用相同的免疫熒光技術(shù)和共聚焦顯微術(shù)針對(duì)PR-A和PR-B染色顯示為可易于檢測的熒光細(xì)胞核灶。
[0005]已顯示RNA轉(zhuǎn)錄抑制因子(inhibitor)阻止PR灶的形成,且已顯示26S蛋白酶體抑制因子擾亂PR細(xì)胞核灶。因此認(rèn)為細(xì)胞中PR灶的存在對(duì)應(yīng)于活性轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，并表明PR的激活和隨后的基因表達(dá)。相反地，彌漫性的細(xì)胞核染色或PR灶的不存在表明PR的存在是無轉(zhuǎn)錄活性的。當(dāng)將正常乳腺和子宮內(nèi)膜組織(其對(duì)黃體酮產(chǎn)生生理反應(yīng))暴露于黃體制劑配體時(shí)，可觀察到從彌漫性的細(xì)胞核染色模式到局灶性亞細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的變化，表明黃體酮受體的活化。
[0006]雌激素對(duì)正常乳腺上皮細(xì)胞和子宮內(nèi)膜細(xì)胞是促有絲分裂的(例如，導(dǎo)致細(xì)胞增殖)，而黃體制劑的作用則更為復(fù)雜。在子宮內(nèi)膜中，黃體制劑在G1期的早期抑制雌激素誘導(dǎo)的細(xì)胞周期進(jìn)程，而在乳腺中，黃體制劑可既刺激又抑制增殖。正常乳腺組織活組織檢查中已經(jīng)顯示，通過黃體酮刺激增殖活性(Am J Obstet Gynecol, 1997)。這種復(fù)雜性導(dǎo)致了乳腺癌中混淆的實(shí)驗(yàn)觀察。例如，當(dāng)使用不含酹紅的培養(yǎng)基時(shí)，孕激素(progestogen)表現(xiàn)對(duì)體外乳腺癌細(xì)胞具有直接增殖作用。H.J.Kloosterboer, J.Steroid Biochem.Molec.Biol.第49卷，第4-6期，第311-318頁，1994。然而，當(dāng)在雌激素依賴性DMBA大鼠乳腺癌模型中研究在乳腺癌細(xì)胞系中誘導(dǎo)增殖的相同避孕孕激素時(shí)，這些孕激素抑制了腫瘤進(jìn)程。厘上。最近已顯示，許多這樣的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ褪遣怀浞值摹⒁?，MM，Lange C.等人Progesterone Receptor Action:Translating Studies in Breast Cancer Models toClinical Insights.1nnovative Endocrinology of Cancer 中第 7 章；94-111 (2010)。盡管在這些實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭幸扬@示黃體酮誘導(dǎo)增殖，大多數(shù)增殖細(xì)胞不表達(dá)PR。因此，這些模型不一定預(yù)測用抗黃體制劑(ant1-progestin)治療的功效。
[0007]惡性細(xì)胞也表現(xiàn)出細(xì)胞核PR灶，但其與正常細(xì)胞的灶的大小和組成是不同的。在癌癥中觀察到PR灶表明與細(xì)胞的惡性性質(zhì)相關(guān)的PR的特殊作用。例如，惡性(癌癥)乳腺細(xì)胞中由PR激活的基因與正常乳腺細(xì)胞中由PR激活的基因不同；在子宮內(nèi)膜癌中，PR灶而不是PR水平，與惡性特征有關(guān)；癌細(xì)胞中的灶較大，這可能是由于癌癥中常見的染色質(zhì)重塑的改變，以及；無論激素狀態(tài)(例如，絕經(jīng)前和絕經(jīng)后女性中分別存在和不存在循環(huán)黃體酮)，而觀察到乳腺癌中的PR灶。在約50%的PR受體陽性人類乳腺癌活組織檢查的腫瘤細(xì)胞中(例如，使用免疫熒光技術(shù)和共聚焦顯微術(shù))已觀察到PR灶。使用免疫熒光技術(shù)和共聚焦顯微術(shù)，其他患者的腫瘤樣品呈現(xiàn)腫瘤細(xì)胞中的彌漫性的PR細(xì)胞核染色模式，指示PR的未激活的或無功能的形式。
[0008]大多數(shù)乳腺癌可用激素治療(即，抗雌激素或芳香化酶抑制劑)，這是目前在乳腺癌治療中使用的一些最有效的藥物。激素治療通?；诎┌Y細(xì)胞內(nèi)激素受體的鑒定被指示。奧那司酮(ONA)是最初被開發(fā)用于避孕用途的抗黃體制劑藥物。然而，其在晚期乳腺癌中展示了重要的活性，具有在101例患有乳腺癌的預(yù)后不良患者的10%的緩解率，所述患者先前的激素治療已失敗(例如，盡管患者接受抗雌激素他莫昔芬，乳腺癌依然進(jìn)展)。在使用ONA作為一線激素治療的小乳腺癌的研究中，ONA產(chǎn)生了該疾病的最佳有效治療的上限功效的56%的客觀緩解率。ONA結(jié)合PR，不會(huì)誘發(fā)PR磷酸化且不允許PR 二聚化。PR-ONA復(fù)合物與其靶DNA片段微弱結(jié)合、或者根本不結(jié)合，并因此不會(huì)激活為DNA轉(zhuǎn)錄必要進(jìn)程的染色質(zhì)重塑。在體外系統(tǒng)中，ONA已顯示逆轉(zhuǎn)通過人工配體與PR的結(jié)合產(chǎn)生的PR細(xì)胞核聚集體。基因激活研究一致顯示，雖然黃體制劑及其他抗黃體制劑激活黃體酮應(yīng)答基因，ONA具有最小激活(即，3個(gè)基因)。[0009]此外，ONA在生理上可達(dá)到的濃度下是純的PR拮抗劑。在人類受試者中，ONA不會(huì)干擾其他類固醇受體且不會(huì)增加雌激素的分泌，增加雌激素的分泌是乳腺癌治療中由其他抗黃體制劑諸如米非司酮展示出的不希望有的副作用。
[0010]雖然奧那司酮先前已被研究作為針對(duì)乳腺癌的潛在的治療劑，由于毒性憂慮停止了其研發(fā)。Robertson 等人，Onapristone, a Progesterone ReceptorAntagonist,as First-line Therapy in Primary Breast Cancer European J.0fCancer35⑵214-218 (1999)。鑒定患有最大可能響應(yīng)ONA和其他抗黃體制劑治療的腫瘤患者的子集是重要的，且鑒定患有最小可能響應(yīng)ONA和其他抗黃體制劑治療的腫瘤患者的子集同樣重要。鑒定這些患者的子集將允許那些患有APF的患者使用潛在有效的癌癥治療，并將避免將患有ONA或其他抗黃體制劑可能不會(huì)提供益處的那些癌癥的患者暴露于不必要的毒性中。
[0011]目前，當(dāng)作出關(guān)于是否在某些癌癥(例如，乳腺癌)中使用內(nèi)分泌治療的治療決定時(shí)，僅考慮雌激素或孕酮受體的存在或不存在。因此，針對(duì)PR的常規(guī)檢驗(yàn)將來自癌癥患者的腫瘤分為兩類:PR陽性或PR陰性。一種類型的檢驗(yàn)定量PR/細(xì)胞總蛋白的量。這些方法可以是自動(dòng)的并且是定量的，但關(guān)于精確度、靈敏度和細(xì)胞亞細(xì)胞核受體結(jié)構(gòu)的分析并不令人滿意。第二種類型的檢驗(yàn)包括使用福爾馬林固定的組織樣本和靶向受體的熒光或發(fā)色團(tuán)標(biāo)記的單克隆抗體(針對(duì)PR-A和PR-B各自的抗體，或可識(shí)別二者的單個(gè)抗體)的免疫組織化學(xué)方法。對(duì)于免疫組織化學(xué)方法，呈超過特定細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(通常> 1%)的任何通過顯微鏡可檢測的細(xì)胞核染色反應(yīng)，按照專業(yè)協(xié)會(huì)的指導(dǎo)被報(bào)告為PR陽性。通常，> 1096ER或PR陽性細(xì)胞的臨床截止值被用于作出關(guān)于使用抗激素治療的治療決定。不考慮細(xì)胞或細(xì)胞核染色模式。相對(duì)染色強(qiáng)度(即，低、中、或高)也被用作激素受體陽性的定性測量。該第二種類型的檢驗(yàn)是更加勞動(dòng)密集的，且不標(biāo)準(zhǔn)。通常，低倍率顯微鏡檢查用于IHC分析以鑒定激素受體(雌激素受體(ER)或PR)的存在。使用常規(guī)的方法，除了表達(dá)鑒定的激素受體的腫瘤細(xì)胞的百分比的評(píng)價(jià)之外，未進(jìn)行細(xì)胞分布的分析。PR的亞細(xì)胞核分布模式的分析需要高功率的顯微鏡。相比之下，腫瘤組織中激素受體的標(biāo)準(zhǔn)IHC測定則不需要高功率顯微鏡。因此，激素受體測定的這些常規(guī)方法不能提供關(guān)于亞細(xì)胞核PR分布的信息。
[0012]黃體制劑通過靶向不同的細(xì)胞和對(duì)不表達(dá)PR的細(xì)胞具有間接影響，在乳腺和其他激素敏感組織中具有綜合作用。PR灶復(fù)合物在正常組織和癌組織中并不是定性地相同，且它們不一定激活相同的黃體酮受體相關(guān)基因。可用的臨床數(shù)據(jù)不完全支持用于鑒定激素受體陽性細(xì)胞的常規(guī)技術(shù)預(yù)測抗激素功效的定位，無論其是被用于抗雌激素或抗黃體制劑的定向的治療。目前，對(duì)乳腺癌和其他激素敏感性腫瘤的患者使用激素治療(例如，抗雌激素或芳香化酶抑制劑)的決定是基于腫瘤樣品中激素受體的簡單存在。激素受體(ER或PR)的存在并未完全預(yù)測對(duì)激素治療的應(yīng)答，因?yàn)橹挥?0-60%的激素受體陽性腫瘤病例有望從治療中獲益。
[0013]對(duì)用于預(yù)測ONA和其他抗黃體制劑對(duì)于異質(zhì)性“天然發(fā)生”的腫瘤的功效的一致方法存在需求。此外，對(duì)預(yù)測ONA和其他抗黃體制劑針對(duì)個(gè)體患者中的癌癥的治療功效的檢驗(yàn)存在需求。
[0014]概述
[0015]與抗黃體制劑治療有關(guān)的重要問題是如何鑒定為相關(guān)臨床治療靶的激活的PR。本示例性方法旨在表征以功能(激活)狀態(tài)存在于臨床環(huán)境中常規(guī)可獲得的人類腫瘤組織中的PR。由于用特定的 抗黃體制劑拮抗非活性PR是沒有治療意義的，本發(fā)明的方法提供了新的和重要的信息以指導(dǎo)用抗黃體制劑治療患者。此預(yù)測性診斷測試將提供(I)支持作出關(guān)于ONA和其他抗黃體制劑的治療決定的一致方法，(2)有可能響應(yīng)治療的個(gè)體患者和患者群體的指導(dǎo)選擇，以及(3)排除響應(yīng)抗黃體制劑治療或從中獲益的可能性最小的那些個(gè)體患者。
[0016]在一方面，提供了用于鑒定和治療對(duì)抗黃體制劑諸如奧那司酮(ONA)的治療最為敏感的黃體酮受體(PR)陽性腫瘤的子集的方法。如本文所述的，表現(xiàn)出致密、局灶性PR細(xì)胞核分布模式的黃體酮受體陽性腫瘤對(duì)抗黃體制劑諸如奧那司酮的治療更為敏感。來自體外同質(zhì)、實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕Y(jié)果不一定預(yù)測天然發(fā)生的異質(zhì)性腫瘤的特征。
[0017]在另一方面，提供了抑制對(duì)通過抗黃體制劑的生長抑制敏感的腫瘤生長的方法。懷疑是發(fā)生腫瘤的或癌性的組織樣品可以從患者獲得?？设b定組織樣品中的黃體酮受體陽性細(xì)胞。之后，來自組織樣品的黃體酮陽性細(xì)胞的細(xì)胞核中的黃體酮受體灶的分布程度可以被確定，且如果組織樣品中的局灶性分布程度大于黃體酮受體陽性細(xì)胞的約5%，則可以向患者施用抗黃體制劑。
[0018]相比其腫瘤不表達(dá)激活的PR的患者，這些患者更可能從用失活激活的黃體酮灶(APF)并阻止APF的進(jìn)一步形成的抗黃體制劑(例如，0ΝΑ)的治療中受益。PR的非激活形式通常被視為彌漫性的細(xì)胞核PR染色。APF通過抗黃體制劑的失活可通過多種機(jī)制的任一種發(fā)生，包括灶的分解、和灶的激活的抑制而實(shí)質(zhì)上不改變其結(jié)構(gòu)。在一個(gè)方面，APF形成可以通過多種機(jī)制被抗黃體制劑抑制或阻止。例如，奧那司酮可使單個(gè)黃體酮受體不能夠二聚化并阻止PR在配體磷酸化位點(diǎn)被磷酸化。PR-ONA復(fù)合物與其靶DNA片段(PRE)微弱結(jié)合、或者根本不結(jié)合，并不能誘導(dǎo)為DNA轉(zhuǎn)錄必要的進(jìn)程的染色質(zhì)重塑。在另一個(gè)實(shí)例中，其他抗黃體制劑可使得PR能夠二聚化并與共激活因子或共阻抑因子形成不會(huì)誘導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)錄的復(fù)合物。
[0019]在該實(shí)例中，DNA結(jié)合可在PRE發(fā)生，但轉(zhuǎn)錄不會(huì)發(fā)生。只要?jiǎng)└蓴_PR通路，APF的鑒定就可報(bào)告任何抗黃體制劑治療的決定。在一方面，APF的鑒定決定了 PR通路的激活與否的狀態(tài)。例如，米非司酮或任何與PR復(fù)合并與DNA結(jié)合的黃體制劑的使用，可通過APF的鑒定被報(bào)告。其他劑，包括會(huì)抑制PR磷酸化并從而干擾PR激活的那些的活性，將通過APF在各種癌癥中的存在來預(yù)測。因此，APF的鑒定可用于報(bào)告通過抑制PR的功能起作用的各種類型的化合物的治療建議。
[0020]未表達(dá)激活的PR灶(APF)的患者的腫瘤可包括通過常規(guī)檢驗(yàn)為PR陰性的那些、或通過常規(guī)檢驗(yàn)為PR陽性的那些。在一個(gè)方面，顯示APF的任何腫瘤/癌癥都是用此類抗黃體制劑治療的候選腫瘤/癌癥，包括乳腺癌、腦癌、腦膜瘤、前列腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮肌瘤、肺癌和子宮癌。如果APF在異常組織中表達(dá)，則至今尚未被正式列為癌性病癥的肺平滑肌瘤病也將可能受益。在另一方面，用標(biāo)準(zhǔn)治療是非可控制的但呈現(xiàn)APF的良性腫瘤，可通過抗黃體制劑治療，因?yàn)锳PF的存在表明腫瘤是由PR的異常激活驅(qū)動(dòng)，即由黃體制劑通路驅(qū)動(dòng)。
[0021]另一方面提供了治療患有對(duì)通過抗黃體制劑的生長抑制敏感的腫瘤的患者的方法，所述方法從患者獲得懷疑是發(fā)生腫瘤的或癌性的組織樣品并將該組織暴露于抗黃體酮受體抗體?？设b定組織樣品中的黃體酮受體陽性細(xì)胞。可確定來自該組織的細(xì)胞的細(xì)胞核中的黃體酮受體的局灶性結(jié)合分布程度。如果局灶性結(jié)合分布大于組織樣品中的黃體酮受體陽性細(xì)胞的約5%，則根據(jù)抗黃體制劑的效力、生物利用度和安全特性以約IOmg至約200mg/天的劑量范圍向患者施用抗黃體制劑。
[0022]在另一個(gè)方面，組織是選自由以下構(gòu)成的組的腫瘤組織的樣本:乳腺、腦、腦膜瘤、前列腺、卵巢、子宮內(nèi)膜、子宮肌瘤、肺和子宮組織。
[0023]在另一個(gè)方面，通過熒光、比色法反應(yīng)(例如，酶促反應(yīng))、用復(fù)染抗體成像(例如，發(fā)色團(tuán))、放射活性、和蛋白質(zhì)印跡(例如，PR的差別磷酸化)檢測局灶性分布的存在或不存在。
[0024]在又另一個(gè)方面,抗黃體制劑是選自由奧那司酮、洛那立生(lonaprisan)、米非司酮、PF-02413873、特拉司酮(telapristone)、利洛司酮、0RG2058、asoprisnil 和優(yōu)力司特(ulipristal)所構(gòu)成的組。
[0025]通過大于黃體酮受體陽性細(xì)胞的約5%的細(xì)胞核局灶性分布的程度表明，活性黃體酮受體局灶性分布的存在。在另一個(gè)方面，關(guān)于局灶性分布腫瘤可以是異質(zhì)性的，并在腫瘤的多個(gè)區(qū)域表現(xiàn)出具有明顯的黃體酮受體灶的活性結(jié)合模式(A)、沒有明顯的黃體酮受體灶的彌漫性性結(jié)合模式(D)、或A模式和D模式的混合物(AD)。
[0026]在任何上述方面中，當(dāng)局灶性分布(A或AD模式)存在時(shí)，可定量此局灶性分布的強(qiáng)度或密度。例如，黃體酮受體抗體可被放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記、用復(fù)染抗體成像(發(fā)色團(tuán))、用比色反應(yīng)成像(例如，酶促反應(yīng))、或以其中標(biāo)記物的強(qiáng)度可以被測量和定量的另一種方式被標(biāo)記。[0027]附圖
[0028]圖1A和IB顯示使用針對(duì)黃體酮受體的抗體，來自福爾馬林固定和石蠟包埋的活組織檢查的人乳腺癌樣品中示例性免疫組織化學(xué)棕色細(xì)胞核染色模式；
[0029]圖2A和2B顯示使用針對(duì)黃體酮受體的抗體，來自福爾馬林固定和石蠟包埋的活組織檢查的人乳腺癌樣品中示例性綠色細(xì)胞核染色模式；
[0030]圖3A和3B顯示使用針對(duì)黃體酮受體的抗體，來自福爾馬林固定和石蠟包埋的活組織檢查的人乳腺癌樣品中的具有HES背景復(fù)染的示例性免疫組織化學(xué)棕色細(xì)胞核染色模式；及
[0031]圖4顯示3種結(jié)合模式，A、AD、和D的PR-A和PR-B陽性的乳腺癌樣品的百分比。
[0032]詳述
[0033]在描述本文描述的一些示例性方面之前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并不限于下文描述中所陳述的構(gòu)建(construction)或工藝步驟的詳細(xì)內(nèi)容。本文所描述的方面能夠以各種方式被實(shí)踐或被實(shí)施。
[0034]如本文使用的，短語“治療腫瘤(treating a tumor) ”和“腫瘤治療(treatmentof a tumor) ”是指抑制腫瘤細(xì)胞的復(fù)制、抑制腫瘤的擴(kuò)散、減小腫瘤大小、減少或降低體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量、或改善或減輕由腫瘤引起的疾病的癥狀、減少腫瘤的生長(增加腫瘤進(jìn)展所花費(fèi)的時(shí)間)或當(dāng)死 亡是由于癌癥或癌癥的繼發(fā)效應(yīng)時(shí)改善患者的存活。該術(shù)語還包括癌癥治療。腫瘤包括癌癥和非癌性腫瘤二者。如果存在死亡率和/或發(fā)病率的減少、腫瘤相關(guān)癥狀的改善、或存在疾病負(fù)荷(disease burden)的減少，則認(rèn)為治療是有療效的，疾病負(fù)荷的減少可表現(xiàn)為減少的體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量、減小的腫瘤大小或疾病進(jìn)展時(shí)間的改善、無進(jìn)展存活的改善或無疾病存活的改善。
[0035]如本文使用的，術(shù)語“APF-活性抗黃體制劑”和其等同物是指抗黃體制劑藥物，其展示在細(xì)胞的細(xì)胞核中溶解或分解激活的PR灶(APF)的能力或在細(xì)胞的細(xì)胞核中抑制APF形成的能力，表明其作用機(jī)制是通過細(xì)胞的PR激活通路。
[0036]術(shù)語“APF陽性”、“PR灶陽性”、“激活的PR”、“處于功能狀態(tài)的PR”等是指細(xì)胞的
細(xì)胞核中黃體酮受體聚集體的存在。
[0037]術(shù)語“局灶性分布”指的是黃體酮陽性細(xì)胞的細(xì)胞核中“灶”(即，黃體酮受體聚集體)的分布。斑點(diǎn)狀(speckled)或超斑點(diǎn)狀(hyperspeckled)模式是在生物學(xué)中可以用來指類固醇細(xì)胞核受體灶模式的術(shù)語。
[0038]術(shù)語“局灶性分布程度”指的是存在于黃體酮陽性細(xì)胞的細(xì)胞核中的PR灶的相對(duì)量。局灶性分布程度可被定量或定性地確定。
[0039]例如，使用比色法，酶促或放射性標(biāo)記的配體諸如黃體酮受體抗體可被用于結(jié)合細(xì)胞的細(xì)胞核中的黃體酮受體。局灶性分布程度可被定量地確定，例如，通過測量顏色強(qiáng)度、熒光或通過定量標(biāo)記的抗體發(fā)出的放射活性的水平。可以通過使用適當(dāng)放大倍率下的光學(xué)顯微鏡比較對(duì)照樣品和標(biāo)記樣品之間的結(jié)合強(qiáng)度或通過包括但不限于以下的技術(shù)定性地確定局灶性分布程度=DNA微陣列、蛋白質(zhì)分析譜、放射性標(biāo)記或用于測量APF的其他替代方法。
[0040]術(shù)語“彌漫性模式”指的是指示不存在局灶性分布的精細(xì)粒狀模式。
[0041]術(shù)語“黃體制劑”指的是天然或合成的模擬黃體酮的部分或全部作用的促孕物質(zhì)，還被稱為黃體酮受體調(diào)節(jié)劑(PRM)或選擇性黃體酮受體調(diào)節(jié)劑(SPRM)。
[0042]術(shù)語“抗黃體制劑”是指抑制促孕劑的形成、轉(zhuǎn)運(yùn)、或作用或失活促孕劑的物質(zhì)，包括但不限于，奧那司酮、洛那立生、米非司酮、PF-02413873、特拉司酮、利洛司酮、0RG2058、asoprisnil和優(yōu)力司特。PRM或SPRM可具有一定的抗黃體制劑性能，且取決于使用的環(huán)境被認(rèn)為是抗黃體制劑或黃體制劑。
[0043]術(shù)語“抗體(antibody ) ”或“抗體(ant ibodies ) ”是指能夠特異性結(jié)合抗原的蛋白且包括具有針對(duì)抗原的特異性結(jié)合親和力以排除其他物質(zhì)的任何物質(zhì)、或物質(zhì)的基團(tuán)。一般地，術(shù)語“抗體”包括多克隆抗體、單克隆抗體、源自人或動(dòng)物的抗體、人源化抗體(例如，源自人的非結(jié)合部分、源自動(dòng)物的結(jié)合部分)和其片段。
[0044]術(shù)語“抗-PR-A ”和“抗-PR-B”抗體是指分別針對(duì)黃體酮受體同種型一 PR-A和PR-B的抗體。“抗-PR-AB”是指能夠結(jié)合PR-A和PR-B兩者的抗體。適于根據(jù)本文的方面使用的特定抗體包括，但不限于，PgR636 和 PgR1294(M.Press，等人(Steroids (2002) 67:799-813))、Novacastra 克隆 16、克隆 SAN27、克隆 1A6、Dako 克隆 PgR636、Ventana,克隆 1E2、Novus Biologicals Progesterone Receptor[p Ser162]Antibody Clonel064-E2 ；Novus Biologicals Progesterone Receptor [p Serl90]Antibody Clone EP1516Y、Novus Biologicals Progesterone Receptor [p Ser294]Antibody Clone608、AbeamProgesterone Receptor[p Ser400]Antibody 編號(hào) ab60954、和 Genetex ProgesteroneReceptor [p Ser554]Antibody 編號(hào) GTX118987。
[0045]術(shù)語“施用”指的是提供一種藥物或多種藥物、開出一種或多種藥物、或?qū)⒁环N或多種藥物置于藥方中。術(shù)語“提供”是指通過任何合適的施用途徑(例如，口服、注射、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和經(jīng)皮等)直接 向患者分配藥物或向患者提供說明以進(jìn)行上述分配藥物的過程。
[0046]—個(gè)方面提供了抑制對(duì)通過抗黃體制劑的生長抑制敏感的腫瘤的生長的方法，所述方法通過從患者獲得懷疑是發(fā)生腫瘤的組織，并確定來自該組織的細(xì)胞的細(xì)胞核中的抗黃體酮受體的局灶性分布程度。如果局灶性分布程度大于約5%，可向患者施用抗黃體制劑(例如，奧那司酮、洛那立生、米非司酮、PF-02413873、特拉司酮、利洛司酮、0RG2058、asoprisnil和優(yōu)力司特)。
[0047]雖然在乳腺癌和其他癌癥中曾研究了 PR、黃體制劑和抗黃體制劑的作用，但結(jié)果一直沒有定論，導(dǎo)致診斷和治療患者中的困難。多個(gè)模型已經(jīng)顯示除了其他因素之外的物種、品系、癌癥類型、致癌物、和腫瘤環(huán)境的大量和復(fù)雜的相互作用。不受理論束縛，PR可在病理上激活，具有影響配體的激活潛力的改變的生理特征，導(dǎo)致細(xì)胞生長和增殖的異常的或不受控制的刺激。然而，最常研究的模型來源于少數(shù)原始腫瘤，并因此沒有準(zhǔn)確地代表腫瘤類型之間或不同患者的腫瘤之間的生理變異性。也就是說，有限數(shù)目的癌癥模型不足以覆蓋在人類群體中的異質(zhì)性癌癥的復(fù)雜性。
[0048]PR灶形成的研究已被用于測試化合物以確定它們?cè)诨蚬こ碳?xì)胞系中誘導(dǎo)PR從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核的能力。這些檢驗(yàn)例如Thermo Scientific PR (黃體酮受體)
Rcdisiribulion"檢驗(yàn)，使用圖像分析和熒光顯微術(shù)來定量測試化合物存在下的PR的細(xì)胞核積累。相比之下，本文所提供的方面旨在用于不考慮PR配體或藥物的存在，分析原發(fā)腫瘤組織中的PR灶。在一方面，本文描述的示例性方法涉及天然發(fā)生的腫瘤的細(xì)胞的細(xì)胞核中PR灶的存在，表明可被用于預(yù)測具有PR拮抗劑性質(zhì)的抗黃體制劑在該患者中的效力的異常。在另一方面，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)臨床中組成型激活的PR的特征指示腫瘤和癌癥對(duì)用抗黃體制劑包括奧那司酮的治療敏感。
[0049]奧那司酮，(例如，(8S，11R，13R，14S，17S)-ll-[4_(二甲氨基)苯基]-17-羥基-17-(3-羥丙基)-13-甲基-1，2，6，7，8，11，12，14，15，16-十氫環(huán)戊烷[a]菲-3-酮)
具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu):
[0050]
【權(quán)利要求】
1.一種抑制對(duì)通過抗黃體制劑的生長抑制敏感的腫瘤生長的方法，所述方法包括: a)從患者獲得懷疑是發(fā)生腫瘤的或癌性組織樣品； b)鑒定所述組織樣品中的黃體酮受體陽性細(xì)胞； c)確定來自所述組織樣品的所述黃體酮陽性細(xì)胞的細(xì)胞核中所述黃體酮受體的局灶性分布程度；以及 d)如果所述組織樣品中局灶性分布程度大于所述黃體酮受體陽性細(xì)胞的約5%，則向所述患者施用抗黃體制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，還包括通過將所述組織暴露于抗黃體酮受體抗體確定來自所述組織的細(xì)胞的細(xì)胞核中的局灶性分布程度。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述腫瘤選自由以下構(gòu)成的組:乳腺、腦、腦膜瘤、前列腺、卵巢、子宮內(nèi)膜、子宮肌瘤、肺和子宮組織。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗黃體制劑選自由以下構(gòu)成的組:奧那司酮、洛那立生(lonaprisan)、米非司酮、PF-02413873、特拉司酮(telapristone)、利洛司酮、0RG2058> apoprisnil 和優(yōu)力司特(ulipristal)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述局灶性分布程度通過鑒定所述組織的所述黃體酮陽性細(xì)胞中的所述黃體酮受體的結(jié)合模式被確定。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述結(jié)合模式選自由以下構(gòu)成的組:彌漫性(D)、活性(A)、和活性/彌漫性(AD )。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中至少兩種抗體被用于確定所述局灶性分布程度。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述抗體選自由以下構(gòu)成的組:抗-PR-A抗體、抗-PR-B抗體、和抗-PR-A和抗-PR-B抗體的混合物、和針對(duì)PR-A和PR-B的雙特異性抗體。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述黃體酮受體的局灶性分布程度通過選自由以下構(gòu)成的組的檢測方法被確定:免疫組織化學(xué)、免疫熒光、和蛋白質(zhì)印跡。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中以約IOmg/天至約200mg/天的量向所述患者施用所述抗黃體制劑。
11.一種治療患有對(duì)通過抗黃體制劑的生長抑制敏感的腫瘤的患者的方法，所述方法包括: a)從患者獲得懷疑是發(fā)生腫瘤的組織樣品； b)將所述組織暴露于抗黃體酮受體抗體； c)鑒定所述組織樣品中的黃體酮受體陽性細(xì)胞； d)確定來自所述組織的細(xì)胞的細(xì)胞核中所述黃體酮受體的局灶性結(jié)合分布，其中如果所述局灶性結(jié)合分布大于具有A或AD結(jié)合模式的所述組織樣品中的所述黃體酮受體陽性細(xì)胞的5%,則以約IOmg/天至約200mg/天的劑量范圍向所述患者施用抗黃體制劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述腫瘤選自由以下構(gòu)成的組:乳腺、腦、腦膜瘤、前列腺、卵巢、子宮內(nèi)膜、子宮肌瘤、肺和子宮組織。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述抗黃體制劑選自由以下構(gòu)成的組:奧那司酮、洛那立生、米非司酮、PF-02413873、特拉司酮、利洛司酮、0RG2058、apoprisnil和優(yōu)力司特。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述局灶性分布程度通過鑒定來自所述組織的所述細(xì)胞中黃體酮受體的結(jié)合模式被確定。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述結(jié)合模式選自由以下構(gòu)成的組:彌漫性(D)、活性(A)、和活性/彌漫性(AD)。
16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述抗體選自由以下構(gòu)成的組:抗-PR-A抗體、抗-PR-B抗體、針對(duì)PR-A和PR-B的雙特異性抗體、和抗-PR-A和抗-PR-B抗體的混合物。
17.一種治療懷疑患有對(duì)通過奧那司酮的生長抑制敏感的腫瘤的患者的方法，所述方法包括: a)鑒定腫瘤組織活組織檢查中呈現(xiàn)大于約5%的黃體酮受體陽性細(xì)胞的細(xì)胞核中的黃體酮受體的局灶性分布的患者；以及 b)以約IOmg/天至約200mg/天的量向所述患者施用奧那司酮。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，還包括向所述患者施用選自由以下構(gòu)成的組的抗腫瘤化合物:依維莫司、曲妥單抗、TMl-D、抗HER2藥物、貝伐單抗、紫杉醇、多西他奇、紫杉烷、阿霉素、脂質(zhì)體阿霉素、聚乙二醇化脂質(zhì)體阿霉素、蒽環(huán)類、蒽醌類、卡鉬、順鉬、5-FU、吉西他濱和環(huán)磷酰胺。
19.一種篩選藥物候選物的減少腫瘤中黃體酮受體陽性細(xì)胞的細(xì)胞核中黃體酮受體的局灶性分布的能力的方法，所述方法包括:從相同的腫瘤獲得至少兩個(gè)腫瘤組織樣本，將一個(gè)腫瘤組織樣本暴露于藥物候選物，將所述腫瘤組織樣本暴露于抗黃體酮受體抗體，確定來自所述腫瘤組織樣本的所述黃體酮受體陽性細(xì)胞的細(xì)胞核中黃體酮受體的局灶性分布程度，并確定對(duì)比未暴露于所述藥物候選物的腫瘤組織樣本，暴露于所述藥物候選物的所述腫瘤組織樣本中的所述黃體酮受體的局灶性分布是否降低，其中如果所述藥物候選物降低了暴露于所述藥物候選物的所述組織樣本的所述黃體酮受體陽性細(xì)胞中所述黃體酮受體的局灶性分布，則所述藥物候選物能夠降低所述腫瘤的黃體酮受體陽性細(xì)胞中所述黃體酮受體的局灶性分布。
20.一種用于分類對(duì)抗黃體制劑治療敏感的腫瘤的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括組織樣品和能夠檢測黃體酮受體的至少一種抗體或抗體結(jié)合片段，其中所述抗體或抗體結(jié)合片段被用于確定來自腫瘤組織樣本的細(xì)胞的黃體酮受體陽性細(xì)胞核中的所述黃體酮受體的局灶性分布程度，且其中如果黃體酮受體陽性細(xì)胞的細(xì)胞核中的局灶性分布程度大于約5%，則所述腫瘤對(duì)抗黃體制劑的治療敏感。
【文檔編號(hào)】A61K31/58GK103957920SQ201280048864
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2012年10月4日 優(yōu)先權(quán)日:2011年10月4日
【發(fā)明者】埃拉爾·吉勒斯 申請(qǐng)人:因維維斯制藥公司