專利名稱：一種楊樹花口服液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及獸藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種楊樹花口服液的制備方法。
背景技術(shù)：
楊樹花系楊柳科植物加拿大楊柳populus canadensis Mench.花序,富含黃酮、生物堿、有機酸、維生素、酚類等成分，具有健脾養(yǎng)胃、化濕止痢、澀腸止瀉、清熱解毒之功效。楊樹花口服液被收載于2010版《中國獸藥典》二部，臨床多用于豬、羊、禽下痢?，F(xiàn)代藥理學研究表明楊樹花具有抗菌、解熱抗炎、止痢止瀉等作用。傳統(tǒng)楊樹花口服液是通過浸泡、力口熱煮沸、煎煮、濃縮等方法制備而成，工藝時間長，熱能消耗高、工藝用水消耗大、提取率低。每生產(chǎn)I噸口服液從浸泡、煎煮、濃縮、沉淀、過濾到分裝前需要十幾個多小時；煎煮、濃縮需要消耗熱蒸汽3-5噸；藥材煎煮2次，需要消耗純化水8噸(按飲用水標準需要40噸)，濃縮需要用水10噸；有效成分黃酮含量最高為0.132%。中藥的有效成分大多儲存在于細胞壁纖維素構(gòu)成的框架中，被纖維素包裹在內(nèi)，提取其有效成分，必須先打破其細胞壁的纖維素框架使有效成分充分溶解出來。用于中藥提取研究較多的是纖維素酶，纖維素則是由P-D-葡萄糖以1，4-0葡萄糖苷鍵連接，用纖維素酶酶解可以破壞3-D-葡萄糖鍵，使植物細胞壁破壞，有利于對有效成分的提取。近年來，國內(nèi)采用纖維素酶提取中藥有效成分的報道不斷出現(xiàn)。呂衛(wèi)明等介紹采用酶水解法從黃芩中提取分離黃芩素達75.67%，收率為2.46%。有人在纖維素酶的作用下，從葛根中提取總黃酮，收率提高了 13%。在三七提取過程中，用纖維素酶酶解作用破壞細胞壁，三七總皂昔提取率提高23.5%。此外，上海中藥一廠首先應用酶法成功地制備了生脈飲口服液。與傳統(tǒng)提取方法比較纖維素酶解法具有提高收率、節(jié)約能源，減少溶劑使用量的等優(yōu)勢，但至今未見采用纖維素酶解提取楊樹花的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種楊樹花口服液的制備方法，利用纖維素酶解技術(shù)提取楊樹花，開發(fā)了一種提取楊樹花的新工藝，大大縮短了提取時間、降低了熱能耗、減小了工藝用水量，達到了節(jié)能減排、提高工作效率和提取率的目的，具有良好的社會和經(jīng)濟效益。一種楊樹花口服液的制備方法，包括下述步驟:
(1)將楊樹花放入提取罐中，加入楊樹花質(zhì)量4-6倍的水，攪拌并升溫至45-50°C；
(2)在提取罐中加入楊樹花質(zhì)量3-7%的纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值至5.0-5.5，45_50°C下酶解 90-120min ；
(3)將酶解液過濾，收集濾液，即得楊樹花口服液。步驟(2)中用10-50%的乳酸溶液或10-50%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值。步驟(2)中纖維素酶的質(zhì)量為楊樹花質(zhì)量的4%。步驟(2)中酶解時間為120min。其用法用量為:馬、牛50 IOOml ;羊、豬10 20ml ;兔、禽I 2ml。
酶添加量、酶解溫度、酶解時間、溶劑pH值等單因素對黃酮提取率影響試驗:
1.纖維素酶活性檢測
纖維素酶是一種重要的生物復合酶，主要由外切￠-葡聚糖酶、內(nèi)切￠-葡聚糖酶和^ -葡萄糖苷酶等組成，還有很高活力的木聚糖酶。纖維素和半纖維素構(gòu)成了植物細胞壁構(gòu)架，楊樹花有效成分存在于有纖維素和半纖維素構(gòu)成的框架內(nèi)。纖維素酶具有專一性，纖維素酶分解纖維素，木聚糖酶分解半纖維素，葡聚糖酶將纖維素和半纖維素分解產(chǎn)物繼續(xù)分解成葡萄糖。楊樹花在纖維素酶和木聚糖酶作用下細胞壁充分分解釋放出楊樹花有效成分。采用分光光度法測定纖維素酶和木聚糖酶活力。檢測纖維素酶中纖維素酶> 30000U/g，木聚糖酶> 100000U/g，P -葡聚糖酶≥120000U/g。2、標準溶液配制和標準曲線繪制
2.1蘆丁對照品溶液的制備:
資料顯示黃酮檢測以蘆丁為標準對照品。準確稱取蘆丁對照品10mg，置于50ml容量瓶中，加30%的乙醇30ml，超聲震蕩使之溶解，冷卻至室溫，并稀釋至刻度，搖勻得濃度為200i! g/ml的蘆丁對照品溶液，冷藏，備用。2.2吸收波長的選擇:
對照品測定波長的確定:取對照品溶液1ml，按標準曲線項下的方法進行，在400 700nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在500nm波長處為最大吸收。樣品測定波長的確定:取樣品的乙醇提取液1ml，按標準曲線項下的方法進行，在400 700nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在500nm波長處為最大吸收。2.3標準曲線繪制:
精密稱取蘆丁對照品溶液0，1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml分別至25ml容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6min，加入10%硝酸鋁溶液0.3ml，放置6min，加入Imol氫氧化鈉溶液4ml，分別用30%的乙醇定容，搖勻，放置15min，置比色皿中，在500nm波長處測定吸光度。以吸光度A為縱坐標，濃度C為橫坐標，繪制標準曲線(見

圖1)。經(jīng)回歸統(tǒng)計，得標準曲線方程:A=0.0486+0.0002 R2=0.9996。濃度在0-400 u g/ml范圍內(nèi)R的平方達到0.9996，線性關(guān)系良好。3、單因素影響試驗
3.1纖維素酶添加量對楊樹花口服液中黃酮提取率的影響(A因素)
取楊樹花7份，每份IOOg,纖維素酶添加量分別為2g、3g、4g、5g、6g、7 g、8 g,酶解溫度控制在45°C、酶解pH值控制在5.0條件下，酶解時間控制在90 min,收集酶解液，依照檢測楊樹花口服液中總黃酮含量的測定方法檢測總黃酮含量，纖維素酶添加量對楊樹花口服液中黃酮提取率的影響見圖2。由圖2可知，酶添加量單因素影響試驗結(jié)果顯示，取IOOg楊樹花制備楊樹花口服液，隨著酶添加量增加，口服液中黃酮提取率升高，當酶添加到3g時樣品中黃酮提取率，比添加2g的提取率大幅度升高，添加到4-8g時黃酮提取率一直提高，添加到7g以上時黃酮提取率提高的幅度變小，綜合生產(chǎn)成本與楊樹花中黃酮提取率等多方面因素，取IOOg楊樹花制備口服液，添加3-7g纖維素酶比較適宜，優(yōu)選為4g。3.2酶解溫度對楊樹花口服液中黃酮提取率的影響(B因素)
取楊樹花5份，每份100g，纖維素酶添加量為4g，酶解溫度分別為35°C、40°C、45°C、50°C >55°C，酶解pH值控制在5.0等條件下，酶解時間控制在90 min,收集酶解液，依照檢測楊樹花口服液中總黃酮含量的測定方法檢測總黃酮含量，酶解溫度對楊樹花口服液中黃酮提取率的影響見圖3。由圖3可知，在相同酶添加量、酶解時間和酶解pH條件下，酶解溫度單因素影響試驗結(jié)果顯示，酶解溫度從35°C到45°C，隨溫度升高楊樹花口服液中黃酮提取率由0.102%升高到0.154%，酶解溫度升高50°C時提取率0.144%，當酶解溫度達到55°C時提取率下降到0.016%，由此看來，酶解溫度在纖維素酶法提取中影響較大，適宜提取的溫度在45°C到50°C之間。酶解時間對楊樹花口服液中黃酮提取率的影響(C因素)
取楊樹花500g，分成5份，每份100g，纖維素酶添加量為4g，酶解溫度45°C，酶解時間分別為30min、60 min,90 min、120 min、150 min，酶解pH值控制在5.0，酶解時間到，收集酶解液，依照檢測楊樹花口服液中總黃酮含量的測定方法檢測總黃酮含量，酶解時間對楊樹花口服液中黃酮提取率的影響見圖4。由圖4可知，在相同酶添加量、酶解溫度和酶解pH條件下，酶解時間單因素影響試驗結(jié)果顯示:從酶解30min時間開始取樣，隨酶解時間延長提取率不斷提高，當酶解時間達到120min之后提取率基本不變，酶解150min和120min的提取率基本一致。因此，從單因素試驗來看，酶解時間在90-120min比較適宜，優(yōu)選為120min。

3.4酶解pH值對楊樹花口服液中黃酮提取率的影響(D因素)
取楊樹花500g，分成5份，每份100g，纖維素酶添加量為4g，酶解溫度45°C酶解時間90 min, pH值分別為4.0,4.5,5.0,5.5,6.0，收集酶解液，依照檢測楊樹花口服液中總黃酮含量的測定方法檢測總黃酮含量，酶解PH值對楊樹花口服液中黃酮提取率的影響見圖5。由圖5可知，在相同酶添加量、酶解溫度和酶解時間的條件下，酶解pH值單因素影響試驗結(jié)果顯示:酶解pH值在5.0,5.5時楊樹花口服液中黃酮提取率明顯高于酶解pH值為4.0、4.5、6.0時的提取率，其中酶解pH值為6.0時的提取率0.023%明顯低于pH值為4.0的提取率0.082%。由此看來pH值為6.0對纖維素酶破壞嚴重，造成纖維素酶失活，影響了酶解效果。因此，在纖維素酶解法提取楊樹花口服液工藝中設(shè)定酶解pH范圍為5.0-5.5。4、正交試驗結(jié)果:
選用L9 (34)正交設(shè)計表以黃酮提取率為考核指標，考察纖維素酶解法提取楊樹花口服液中酶添加量因素A、酶解溫度因素B、酶解時間因素C、酶解pH值因素D對楊樹花口服液提取工藝的影響，正交試驗結(jié)果見表I。表I L9 (34)正交設(shè)計表
權(quán)利要求
1.一種楊樹花口服液的制備方法，其特征在于包括下述步驟:(1)將楊樹花放入提取罐中，加入楊樹花質(zhì)量4-6倍的水，攪拌并升溫至45-50°C； (2)在提取罐中加入楊樹花質(zhì)量3-7%的纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值至5.0-5.5，45_50°C下酶解 90-120min ； (3)將酶解液過濾，收集濾液，即得楊樹花口服液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的楊樹花口服液的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中加入楊樹花質(zhì)量4倍的水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的楊樹花口服液的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中用10-50%的乳酸溶液或10-50%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的楊樹花口服液的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中纖維素酶的質(zhì)量為楊樹花質(zhì)量的4%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的楊樹花口服液的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中酶解時間為120min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種楊樹花口服液的制備方法，屬于獸藥技術(shù)領(lǐng)域。其包括下述步驟(1)將楊樹花放入提取罐中，加入楊樹花質(zhì)量4-6倍的水，攪拌并升溫至45-50℃；(2)在提取罐中加入楊樹花質(zhì)量3-7%的纖維素酶，調(diào)節(jié)pH值至5.0-5.5，45-50℃下酶解90-120min；(3)將酶解液過濾，收集濾液，即得楊樹花口服液。本發(fā)明利用纖維素酶解技術(shù)提取楊樹花，開發(fā)了一種提取楊樹花的新工藝，大大縮短了提取時間、降低了熱能耗、減小了工藝用水量，達到了節(jié)能減排、提高工作效率和提取率的目的，具有良好的社會和經(jīng)濟效益。
文檔編號A61K133/00GK103142742SQ20131009185
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月21日
發(fā)明者惠孝鑫, 趙鳳玲, 馮繼宗 申請人:河北康利動物藥業(yè)有限公司