雷帕霉素作為疫苗佐劑的用途及制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及雷帕霉素作為疫苗佐劑的用途及制備方法。本發(fā)明首次揭示雷帕霉素具有佐劑活性，能夠促進(jìn)一些免疫因子的生成，并且，其與單磷酸脂質(zhì)A共同應(yīng)用，可發(fā)揮增效的效果，極大地增強(qiáng)機(jī)體對(duì)于抗原的免疫反應(yīng)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】雷帕霉素作為疫苗佐劑的用途及制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于免疫學(xué)以及藥學(xué)領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及雷帕霉素作為疫苗佐劑 的用途及制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 應(yīng)用佐劑是優(yōu)化抗原免疫效果的重要手段，佐劑不僅可以從量方面增強(qiáng)疫苗誘導(dǎo) 的免疫反應(yīng)，提高中和性抗體的滴度；還可以從質(zhì)方面優(yōu)化免疫反應(yīng)，比如增強(qiáng)記憶性B細(xì) 胞和T細(xì)胞的數(shù)量并延長(zhǎng)它們的存活時(shí)間，達(dá)到比"自然感染"本身誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)更優(yōu)越 的保護(hù)效果。迄今為止，人用佐劑只有三種，分別為鋁佐劑、MF59和單磷酸脂質(zhì)A (MPL)，遠(yuǎn) 遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足眾多疫苗研發(fā)的需要，因此研發(fā)佐劑勢(shì)在必行。鋁佐劑主要是能夠加強(qiáng)Th2型 抗體反應(yīng)，這對(duì)于清除胞外病原菌和寄生蟲(chóng)感染有效，但對(duì)于治療胞內(nèi)病毒感染療效甚微。 MPL也僅在針對(duì)人乳頭瘤病毒HPV和乙型肝炎病毒HBV的疫苗策略中有效。研究表明，MPL 刺激樹(shù)突細(xì)胞僅能誘導(dǎo)有限的IL-12,使得它在增強(qiáng)Thl反應(yīng)方面的能力有限。而T細(xì)胞介 導(dǎo)的免疫反應(yīng)和IFNy的分泌已被證明在清除HIV，HCV和TB感染，以及治療癌癥中起關(guān)鍵 作用。因此，研發(fā)能夠成功誘導(dǎo)T細(xì)胞反應(yīng)的疫苗佐劑策略就尤為迫切。
[0003] mTOR信號(hào)通路是調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖的一個(gè)關(guān)鍵通路，該通路將從營(yíng)養(yǎng)分子、能 量狀態(tài)以及生長(zhǎng)因子傳來(lái)的信號(hào)整合在一起，調(diào)控大量的生命過(guò)程。該通路的失調(diào)與多種 人類(lèi)疾病相關(guān)，包括癌癥、糖尿病與心血管疾病。最近的研究表明mTOR也參與調(diào)節(jié)天然免 疫和適應(yīng)性免疫，因此是一個(gè)具有多種功能的調(diào)節(jié)分子。雷帕霉素（Rapamycin)是一種能 夠特異性抑制mTOR的小分子化合物，它在1999年已被美國(guó)FAD批準(zhǔn)用于腎移植的抗排異 治療，目前也正被研究用于治療癌癥等疾病。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供雷帕霉素作為疫苗佐劑的用途及制備方法。
[0005] 在本發(fā)明的第一方面，提供一種免疫增強(qiáng)劑組合物，該組合物包括雷帕霉素或其 衍生物和單磷酸脂質(zhì)A (MPL)。
[0006] 在另一優(yōu)選例中，所述的免疫增強(qiáng)劑組合物中，雷帕霉素或其衍生物與單磷酸脂 質(zhì)A按照重量比為（0. 2?20) : 1 ;較佳地為（0. 5?15) : 1 ;更佳地為（2?12) : 1。
[0007] 在另一優(yōu)選例中，所述免疫增強(qiáng)劑組合物中還包括：藥學(xué)上可接受的載體（如PBS 或生理鹽水）。
[0008] 在另一優(yōu)選例中，雷帕霉素或其衍生物和單磷酸脂質(zhì)A在所述的組合物中的含量 是有效量的，例如在組合物中占〇. 01_80%(w/w);較佳地0. l-20%(w/w)。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述免疫增強(qiáng)劑組合物中還包括：抗原；較佳地，所述抗原包括 (但不限于）：滅活或減毒的病毒顆粒、假病毒顆粒（VLP)或者多肽抗原、蛋白質(zhì)抗原。 [0010] 在另一優(yōu)選例中，所述的抗原與單磷酸脂質(zhì)A按照重量比為（0. 2?20) : 1 ;較佳 地為（0· 5 ?10) :1 ;如 1:1，2:1，1:2。 toon] 在另一優(yōu)選例中，抗原在所述的組合物中的含量是有效量的，例如在組合物中占 0· 01-80% (w/w);較佳地 0· 1-20% (w/w)。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述的抗原包括（但不限于）：乙型肝炎病毒的表面抗原，丙型 肝炎病毒抗原、艾滋病毒抗原、腫瘤抗原或卵清蛋白。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的雷帕霉素的衍生物包括（但不限于）：替西羅莫 司（temsirolimus)、依維莫司（everolimus)、Deforolimus (AP23573)，Zotarolimus， Ridaforolimus，CCI-779, RAD001，ABT-578, SDZ RAD，SAR943,1139-52Biolimus A9 或其它 類(lèi)型的 mTOR 抑制劑，包括（但不限于）Ku0063794, PP242, PI-103, AZD8055, Palomid529， AZD2014, Torinl,SNS-032。
[0014] 在本發(fā)明的另一方面，提供了一種藥盒，所述藥盒中含有所述的免疫增強(qiáng)劑組合 物；或所述藥盒中含有分別獨(dú)立包裝的雷帕霉素或其衍生物和單磷酸脂質(zhì)A。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥盒中還包含有抗原。
[0016] 在本發(fā)明的另一方面，提供雷帕霉素或其衍生物的用途，用于制備增強(qiáng)單磷酸脂 質(zhì)A的佐劑活性的制劑。
[0017] 在本發(fā)明的另一方面，提供一種制備所述的免疫增強(qiáng)劑組合物的方法，所述方法 包括：將雷帕霉素或其衍生物和單磷酸脂質(zhì)A(MPL)進(jìn)行混合，獲得免疫增強(qiáng)劑組合物。
[0018] 在一個(gè)優(yōu)選例中，雷帕霉素或其衍生物和單磷酸脂質(zhì)A按照重量比為（0. 2? 20) : 1 ;較佳地為（0· 5?15) : 1 ;更佳地為（2?12) : 1進(jìn)行混合。
[0019] 本發(fā)明的其它方面由于本文的公開(kāi)內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn) 的。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1、雷帕霉素增強(qiáng)LPS誘導(dǎo)BMDC產(chǎn)生IL-12和IL-23,而抑制IL-10的產(chǎn)生。
[0021] 圖2、雷帕霉素對(duì)BMDM中LPS誘導(dǎo)基因表達(dá)的影響。
[0022] (a)雷帕霉素對(duì)BMDM中LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響；
[0023] (b)雷帕霉素對(duì)BMDM中LPS誘導(dǎo)的共刺激分子轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響；
[0024] (c)雷帕霉素對(duì)BMDM中LPS誘導(dǎo)的促炎因子和趨化因子轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響。
[0025] 圖3、雷帕霉素增強(qiáng)OVA特異性T細(xì)胞反應(yīng)和抗體反應(yīng)。
[0026] (a)雷帕霉素促進(jìn)OVA特異性Thl和⑶8+細(xì)胞反應(yīng)；
[0027] (b)雷帕霉素促進(jìn)OVA特異性IgG2b和IgG2c抗體滴度。
[0028] 圖4、雷帕霉素能顯著增強(qiáng)MPL的佐劑活性。
[0029] (a)雷帕霉素提高M(jìn)PL增強(qiáng)的HBsAg特異性抗體反應(yīng)；
[0030] (b)雷帕霉素提高M(jìn)PL增強(qiáng)的HBsAg特異性⑶4+和⑶8+T細(xì)胞反應(yīng)；
[0031] (c)雷帕霉素提高M(jìn)PL增強(qiáng)的HBsAg特異性Th2細(xì)胞反應(yīng)；
[0032] ⑷雷帕霉素提高M(jìn)PL增強(qiáng)的HBsAg特異性Thl7細(xì)胞反應(yīng)。
[0033] 圖5、不同劑量的雷帕霉素都能顯著增強(qiáng)MPL的佐劑活性。
[0034] (a)不同劑量的雷帕霉素提高M(jìn)PL增強(qiáng)的HBsAg特異性抗體反應(yīng)；
[0035] (b)不同劑量的雷帕霉素提高M(jìn)PL增強(qiáng)的HBsAg特異性⑶4+和⑶8+T細(xì)胞反應(yīng)。
[0036] 圖6、在同源性初免-增強(qiáng)的免疫方案中，雷帕霉素能顯著增強(qiáng)MPL的佐劑活性。

【具體實(shí)施方式】
[0037] 本發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期而廣泛的研究，意外地發(fā)現(xiàn)雷帕霉素具有佐劑活性，能夠促進(jìn) 一些免疫因子的生成。并且，所述的雷帕霉素與單磷酸脂質(zhì)A(MPL)共同應(yīng)用，可發(fā)揮增效 的效果，極大地增強(qiáng)機(jī)體對(duì)于抗原的免疫反應(yīng)?；诖送瓿闪吮景l(fā)明。
[0038] 雷帕霉素及其用途
[0039] 雷帕霉素的分子式為C51H79NO13，其結(jié)構(gòu)式為式（I):
[0040]

【權(quán)利要求】
1. 一種免疫增強(qiáng)劑組合物，其特征在于，該組合物包括雷帕霉素或其衍生物和單磷酸 脂質(zhì)A。
2. 如權(quán)利要求1所述的免疫增強(qiáng)劑組合物，其特征在于，雷帕霉素或其衍生物與單磷 酸脂質(zhì)A按照重量比為（0. 2?20) : 1 ;較佳地為（0. 5?15) : 1 ;更佳地為（2?12) : 1。
3. 如權(quán)利要求1所述的免疫增強(qiáng)劑組合物，其特征在于，所述免疫增強(qiáng)劑組合物中還 包括：藥學(xué)上可接受的載體。
4. 如權(quán)利要求4所述的免疫增強(qiáng)劑組合物，其特征在于，所述免疫增強(qiáng)劑組合物中還 包括：抗原；較佳地，所述抗原包括：滅活或減毒的病毒顆粒、假病毒顆?；蛘叨嚯目乖?、蛋 白質(zhì)抗原。
5. 如權(quán)利要求4所述的免疫增強(qiáng)劑組合物，其特征在于，所述的抗原包括：乙型肝炎病 毒的表面抗原，丙型肝炎病毒抗原、艾滋病毒抗原、腫瘤抗原或卵清蛋白。
6. 如權(quán)利要求1所述的免疫增強(qiáng)劑組合物，其特征在于，所述的雷帕霉素的衍生 物包括：替西羅莫司、依維莫司、Deforolimus，Zotarolimus，Ridaforolimus，CCI-779， RAD001，ABT-578, SDZ RAD，SAR943,1139-52Biolimus A9,或其它類(lèi)型的 mTOR 抑制劑，包括 Ku0063794, PP242, PI-103, AZD8055, Palomid529, AZD2014, Torinl 或 SNS-032。
7. -種藥盒，其特征在于，所述藥盒中含有權(quán)利要求1-5任一所述的免疫增強(qiáng)劑組合 物；或 所述藥盒中含有分別獨(dú)立包裝的雷帕霉素或其衍生物和單磷酸脂質(zhì)A。
8. 如權(quán)利要求7所述的藥盒，其特征在于，所述的藥盒中還包含有抗原。
9. 如權(quán)利要求7或8所述的藥盒，其特征在于，所述的雷帕霉素的衍生物包括：替西羅 莫司、依維莫司、Deforolimus，Zotarolimus，Ridaforolimus，CCI-779，RAD001，ABT-578， SDZ RAD，SAR943,1139-52Biolimus A9,或其它類(lèi)型的mTOR抑制劑，包括Ku0063794，PP242， PI-103, AZD8055, Palomid529, AZD2014, Torinl 或 SNS-032。
10. 雷帕霉素或其衍生物的用途，用于制備增強(qiáng)單磷酸脂質(zhì)A的佐劑活性的制劑。
11. 如權(quán)利要求10所述的用途，其特征在于，所述的雷帕霉素的衍生物包括：替西羅 莫司、依維莫司、Deforolimus，Zotarolimus，Ridaforolimus，CCI-779，RAD001，ABT-578， SDZ RAD，SAR943,1139-52Biolimus A9,或其它類(lèi)型的mTOR抑制劑，包括Ku0063794，PP242， PI-103, AZD8055, Palomid529, AZD2014, Torinl 或 SNS-032。
12. -種制備權(quán)利要求1所述的免疫增強(qiáng)劑組合物的方法，其特征在于，所述方法包 括：將雷帕霉素或其衍生物和單磷酸脂質(zhì)A進(jìn)行混合，獲得免疫增強(qiáng)劑組合物。
13. 如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，雷帕霉素或其衍生物和單磷酸脂質(zhì)A按照 重量比為（〇. 2?20) : 1 ;較佳地為（0. 5?15) : 1 ;更佳地為（2?12) : 1進(jìn)行混合。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述的雷帕霉素的衍生物包括：替西羅 莫司、依維莫司、Deforolimus，Zotarolimus，Ridaforolimus，CCI-779，RAD001，ABT-578， SDZ RAD，SAR943,1139-52Biolimus A9,或其它類(lèi)型的mTOR抑制劑，包括Ku0063794，PP242， PI-103, AZD8055, Palomid529, AZD2014, Torinl 或 SNS-032。
【文檔編號(hào)】A61K39/39GK104338129SQ201310320670
【公開(kāi)日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2013年7月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月26日
【發(fā)明者】肖暉, 袁川評(píng), 臧愛(ài)萍, 杜旻 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海巴斯德研究所