一種層層自組裝的microRNA納米載體的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種層層自組裝的microRNA納米載體的制備方法及其應(yīng)用屬于納米材料生物學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種基于靜電吸引力的層層自組裝技術(shù)，是以納米金剛石作為基底材料，以生物安全性良好的魚精蛋白硫酸鹽和具有腫瘤靶向功能的小分子葉酸為自組裝材料，構(gòu)建出具有葉酸受體靶向功能的microRNA納米載體。本發(fā)明制備的microRNA納米載體具有自組裝形成，microRNA保護(hù)能力較強(qiáng)，細(xì)胞靶向能力較強(qiáng)，基因沉默效率較高等特點。
【專利說明】—種層層自組裝的microRNA納米載體的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于納米材料生物學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種基于靜電吸引力的層層自組裝技術(shù)，是以納米金剛石作為基底材料，以生物安全性良好的魚精蛋白硫酸鹽和具有腫瘤靶向功能的小分子葉酸為自組裝材料，構(gòu)建出具有葉酸受體祀向功能的microRNA納米載體。本發(fā)明制備的microRNA納米載體具有自組裝形成,microRNA保護(hù)能力較強(qiáng),細(xì)胞祀向能力較強(qiáng)，基因沉默效率較高等特點。
【背景技術(shù)】:
[0002]RNA干擾(RNAi)是一種存在于植物和哺乳動物細(xì)胞中的基因沉默的自然機(jī)制。microRNA就是人們近年來剛剛發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源的具有RNA干擾活性的小RNA。這樣的小RNA被通稱為小干擾RNA。將大小在21-25bp左右的外源雙鏈RNA (double strand RNA,dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞即可被加工成為單鏈的小干擾RNA (micro interfering RNA,以下簡稱miRNA),與單鏈miRNA互補(bǔ)的mRNA即可被降解并抑制其翻譯表達(dá)即導(dǎo)致基因沉默。RNAi具有較好的特異性，RNAi技術(shù)的應(yīng)用將為人類疾病的基因治療開辟一個革命性的領(lǐng)域，對生命科學(xué)的影響將不亞于PCR技術(shù)。目前有3種方法可以觸發(fā)RNA干擾:在靶細(xì)胞中引入可轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生干擾RNA的DNA質(zhì)粒；引入干擾RNA前體分子；在靶細(xì)胞中引入合成的小分子干擾RNA(miRNA)。其中，第三種方法因合成miRNA的化學(xué)反應(yīng)步驟比較簡單、非特異性不良反應(yīng)小而引起了廣泛關(guān)注。
[0003]miRNA不穩(wěn)定，易被酶降解，難以被細(xì)胞吞噬，高效的轉(zhuǎn)染載體對于其應(yīng)用的發(fā)揮至關(guān)重要。目前利用重組病毒作為miRNA體內(nèi)傳遞載體雖然傳遞效率高，但是潛在的生物安全性問題限制了其應(yīng)用。非病毒型miRNA載體通常包括陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物兩大類，陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率高 ，但是其生物相容性差、細(xì)胞毒性大。陽離子聚合物雖然對質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率較高，但是對于小分子量的miRNA，其轉(zhuǎn)染能力較弱，而且腫瘤組織靶向性較差。因此選擇合適的miRNA傳遞載體,制備安全、穩(wěn)定、高效且具有腫瘤祀向性的載體/miRNA復(fù)合粒子具有重要意義。
[0004]miR-34a被發(fā)現(xiàn)在乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞中低表達(dá)，而提高miR_34a在MDA-MB-231細(xì)胞中的表達(dá)量能夠抑制MDA-MB-231細(xì)胞中Fra-1基因的表達(dá)，從而抑制 MDA-MB-231 細(xì)胞的遷移能力(Yang, S.，Li，Y.，Gao, J.，Zhang, Τ.，Li，S.，Luo, A.，…&Liu,Z.(2012).MicroRNA-34suppresses breast cancer invasion and metastasis bydirectly targeting Fra-1.0ncogene.X
[0005]納米金剛石是一種碳納米材料，生物相容性好，細(xì)胞毒性小，它與PEI等高分子相互作用，被用作基因載體。我們使用納米金剛石與魚精蛋白硫酸鹽相互作用形成的納米顆粒作為siRNA載體(專利
【發(fā)明者】盛望, 鄧雄威, 曹敏軍, 曾毅, 肖向茜, 胡琴, 張芳 申請人:北京工業(yè)大學(xué)