白介素-6多肽抑制劑及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制白介素-6，能預(yù)防和治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的多肽。其序列為RPVYTTSQQVAAAALV是全新的序列，本發(fā)明的有益效益是可用于治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，具有潛在的新藥開(kāi)發(fā)價(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】白介素-6多肽抑制劑及其應(yīng)用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于預(yù)防和治療或預(yù)防類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的白介素-6多肽抑制劑。
[0002]【背景技術(shù)】:
類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是臨床最常見(jiàn)的炎性關(guān)節(jié)病和主要致殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%，RA的發(fā)病在我國(guó)約為0.4%。RA可發(fā)生于任何年齡，隨著年齡的增長(zhǎng)，發(fā)病率也隨之增高。女性高發(fā)年齡為45-55歲，性別與RA發(fā)病關(guān)系密切，男女之比約1:3。RA是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對(duì)稱(chēng)性、多滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病。患者常以手部或腕部疼痛及腫脹(特別是腕背部的腫脹)為首發(fā)癥狀，癥狀持續(xù)不緩解，普通的對(duì)癥治療雖可以緩解癥狀，但常常由于用藥不規(guī)則或不足量而導(dǎo)致癥狀反復(fù)。病情進(jìn)展時(shí)可以出現(xiàn)明顯的晨僵，通?？蛇_(dá)I小時(shí)以上，并不斷加重；同時(shí)出現(xiàn)一定的關(guān)節(jié)功能障礙。
[0003]類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，其基本病理特點(diǎn)是血管炎和滑膜炎。關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜血管增生，形成血管翳，導(dǎo)致滑膜增厚，滲出增多，分泌多種細(xì)胞因子，侵犯軟骨并引起骨質(zhì)損害。對(duì)其周?chē)募∏弧㈨g帶、腱鞘以及肌肉等組織也均可侵蝕，從而影響關(guān)節(jié)的穩(wěn)定，容易發(fā)生關(guān)節(jié)畸形而出現(xiàn)功能障礙。血管炎亦可侵犯周身各臟器組織，形成系統(tǒng)性疾病。
[0004]目前治療RA的藥物分為兩大類(lèi):控制癥狀藥和控制疾病藥。由于RA病因不明，故當(dāng)今并無(wú)堪稱(chēng)控制疾病的藥?？刂瓢Y狀的抗風(fēng)濕藥分為四類(lèi):一、非留體類(lèi)抗炎藥，通常稱(chēng)為一線(xiàn)藥，這類(lèi)藥物種類(lèi)繁多，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)已多達(dá)數(shù)十種。二、類(lèi)固醇激素，激素是一個(gè)非常好的止痛抗炎藥，但長(zhǎng)期單獨(dú)使用不能改善病情，反而帶來(lái)許多副作用，激素作為二線(xiàn)慢作用藥起效前的過(guò)渡性用是可以的，但用量要小，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。在病情較重，伴有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)的患者，短期治療沖擊，并聯(lián)合二線(xiàn)藥治療時(shí)必須的。三、慢作用抗風(fēng)濕藥，通常稱(chēng)為二線(xiàn)藥，所謂慢作用藥包括抗瘧藥、金鹽、青霉胺和柳氮碘胺吡啶，它們治療RA起效慢，長(zhǎng)期作用對(duì)RA病情有一定緩解作用，故也稱(chēng)病情改善藥。四、免疫抑制劑:常用有甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、雷公藤、青風(fēng)藤等。
[0005]在治療RA的生物制劑中，臨床上研究較多的就是白介素-6(11-6)的拮抗劑。11_6是活化的T細(xì)胞和成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子。能使B細(xì)胞前體成為產(chǎn)生抗體的細(xì)胞；和集落刺激因子協(xié)同，能促進(jìn)原始骨髓源細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的裂解功能，在RA發(fā)病過(guò)程中起著重要作用。11-6拮抗劑的作用是特異性地拮抗11-6，抑制RA的病情進(jìn)展。目前已批準(zhǔn)上市的11-6拮抗劑主要是Actemra (托珠單抗)。由于該藥物為單抗，存在著分子量較大，及產(chǎn)生抗原反應(yīng)等缺點(diǎn)，大大限制了其在臨床的使用。
[0006]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明目的是針對(duì)現(xiàn)有11-6拮抗劑的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種分子量小的11-6多肽拮抗劑，可以避免產(chǎn)生抗原反應(yīng)，更加適用于臨床的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明技術(shù)方案是提供一種白介素-6多肽抑制劑5，其序列為RPVYTTSQQVAAAALV,及在治療或預(yù)防類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
[0008]有益結(jié)果:
本發(fā)明中的白介素-6多肽抑制劑5序列RPVYTTSQQVAAAALV，可以靶向抑制白介素-6，抑制腫瘤壞死因子受體產(chǎn)生的生理或病理的效應(yīng)，達(dá)到預(yù)防或治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效果O
[0009]發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)獲知白介素-6多肽抑制劑5能夠抑制佐劑型大鼠類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和DBA/1小鼠膠原型類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明具有顯著的治療類(lèi)風(fēng)濕型關(guān)節(jié)炎的效果，并且副作用少，用量少成本降低。說(shuō)明本發(fā)明設(shè)計(jì)的白介素-6多肽抑制劑5科學(xué)、合理、可行有效，能作為治療或預(yù)防類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1
白介素-6多肽抑制劑5在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用構(gòu)建膠原型小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，研究白介素-6多肽抑制劑5對(duì)小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis, CIA)的治療作用。采用小鼠作為受試動(dòng)物,SPF級(jí)DBA/1小鼠90只(由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(Sino-British SIPPR Lab.AnimalLtd)提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)碼:SCXK (滬)2008-0016)，雄性，7-8周齡，體重為18-22 g，隨機(jī)分成6組，分別是正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，多肽抑制劑5低中高3個(gè)劑量組(0.4,0.8,
1.6mg/kg)和陽(yáng)性藥對(duì)照組(甲氨蝶呤2 mg/kg)。除正常組外，第O天各實(shí)驗(yàn)組建立小鼠CIA模型，方法是雞軟骨II型膠原(c II )用0.1 mol/1醋酸溶解成4 mg/ml的溶液，于4°C冰箱過(guò)夜。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天用 II 型膠原與含 4 mg/ml Myeobaeterium tuberculosis strainH37Rv的完全弗氏佐劑(CFA)等體積充分乳化，待DBA/1小鼠麻醉后，于其尾部皮內(nèi)每只注射乳化劑50 μL進(jìn)行致敏，21 d后用4 mg/ml的II型膠原(c II )與不完全弗氏佐劑(IFA)等體積充分乳化后以相同劑量的乳化劑于尾部進(jìn)行再次免疫。造模第30 d起皮下注射給藥:多肽5的3個(gè)劑量組(0.4,0.8，1.6 mg/kg ):每日兩次，連續(xù)10天；陽(yáng)性藥對(duì)照組(甲氨蝶呤2 mg/kg ):每五天一次，連續(xù)3次；正常對(duì)照組和模型對(duì)照組(生理鹽水):連續(xù)10天。分別于造模后第21天至第70天每3天稱(chēng)量體重、關(guān)節(jié)評(píng)分、分別檢測(cè)左右后足足踝直徑來(lái)觀察藥物對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎的影響。
[0011]結(jié)果:造模后小鼠與正常小鼠相比較，免疫后第27天，CIA小鼠足爪紅腫，關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分增高，模型組第45-60天為腫脹高峰，模型組自第35天開(kāi)始體重幾乎不增加，后期還略微有下降。白介素-6多肽抑制劑5在膠原誘導(dǎo)小鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用具體結(jié)果如下:
白介素-6多肽抑制劑5對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎左足足爪腫脹度的影響，陽(yáng)性對(duì)照組、白介素-6多肽抑制劑5高、中、低劑量組左后足踝直徑與模型組比較，均有極顯著性差異(P〈0.01)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。白介素-6多肽抑制劑5對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎右足足爪腫脹度的影響，陽(yáng)性對(duì)照組、白介素-6多肽抑制劑5高、中、低劑量組右后足踝直徑與模型組比較，均有極顯著性差異(P〈0.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。白介素-6多肽抑制劑5對(duì)膠原型關(guān)節(jié)炎小鼠臨床評(píng)分的影響，多肽5低、中、高劑量組四肢評(píng)分顯著低于模型對(duì)照組(P < 0.01)，與模型對(duì)照組比較極顯著性差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。白介素-6多肽抑制劑5對(duì)膠原型關(guān)節(jié)炎小鼠體重影響，多肽5高、中、低劑量組體重顯著高于模型對(duì)照組(P < 0.0I)，與模型對(duì)照組比較極顯著性差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0012]結(jié)論:白介素-6多肽抑制劑5對(duì)小鼠膠原型關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
[0013]實(shí)施例2
白介素-6多肽抑制劑5對(duì)佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用構(gòu)建佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，研究白介素-6多肽抑制劑5對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎(Adjuvant arthritis, AA)大鼠的治療作用。采用大鼠作為受試動(dòng)物，SPF級(jí)SD大鼠90只(由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司(Sino-British SIPPR Lab.Animal Ltd)提供,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)碼:SCXK (滬)2008-0016)，雄性，體重為140 g-160 g，隨機(jī)分成6組，分別是正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，白介素-6多肽抑制劑5低中高3個(gè)劑量組(0.2,0.4,0.8 mg/kg)和陽(yáng)性藥對(duì)照組(甲氨蝶呤I mg/kg)。除正常組外，第O天各實(shí)驗(yàn)組建立大鼠AA模型，方法是在大鼠的左側(cè)后足足跎注射含滅活的結(jié)核分枝桿菌(H37RA，10 mg/ml)完全弗氏佐劑0.08 ml造成大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。造模第10天起皮下注射給藥:多肽5的3個(gè)劑量組(0.2，0.4，0.8 mg/kg ):每日兩次，連續(xù)10天；陽(yáng)性藥對(duì)照組(甲氨蝶呤I mg/kg ):每五天一次，連續(xù)3次；正常對(duì)照組和模型對(duì)照組(生理鹽水):連續(xù)10天。分別于造模后第8，11，14，17，20，23和26天，稱(chēng)量體重、關(guān)節(jié)評(píng)分、分別檢測(cè)左右后足足踝直徑來(lái)觀察藥物對(duì)大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎的影響。[0014]結(jié)果:造模后大鼠與正常大鼠相比較，AA大鼠左后足會(huì)迅速產(chǎn)生原發(fā)性關(guān)節(jié)炎，出現(xiàn)明顯的腫脹，并伴有潰爛；右后足大約10 d后開(kāi)始出現(xiàn)繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎，評(píng)分的分值逐漸增大；同時(shí)耳部血管增生明顯，紅腫明顯；尾部關(guān)節(jié)出現(xiàn)腫脹。白介素-6多肽抑制劑5在佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用，具體結(jié)果如下:
白介素-6多肽抑制劑5對(duì)大鼠原發(fā)性關(guān)節(jié)炎足爪腫脹度的影響，大鼠陽(yáng)性對(duì)照組、白介素-6多肽抑制劑5的低、中、高劑量組左后足踝直徑與模型組比較，有極顯著性差異(P〈0.01);白介素-6多肽抑制劑5低、中、高劑量組左后足踝直徑與模型組比較，均有顯著性差異(P〈0.05)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。白介素-6多肽抑制劑5對(duì)大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎足爪腫脹度的影響，大鼠陽(yáng)性對(duì)照組、白介素-6多肽抑制劑5低、中、高劑量組右后足踝直徑與模型組比較，有顯著性差異(P〈0.05)。白介素-6多肽抑制劑5對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠臨床評(píng)分的影響，多肽5低、中、高劑量組四肢評(píng)分顯著低于模型對(duì)照組(P < 0.05)，與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。白介素-6多肽抑制劑5對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠體重影響，多肽5高、中、低劑量組體重顯著高于模型對(duì)照組(P < 0.05)，與模型對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0015]結(jié)論:白介素-6多肽抑制劑5對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
【權(quán)利要求】
1.白介素-6多肽抑制劑5，其特征在于其序列為RPVYTTSQQVAAAALV。
2.白介素-6多肽抑制 劑5，在治療或預(yù)防類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P19/02GK103923185SQ201410020875
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年1月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月17日
【發(fā)明者】邢將軍, 許劉華, 彭立軍, 任世闊, 華俊國(guó), 曹銘, 劉加根, 劉明明, 汪士金, 施新華, 劉偉峰, 嚴(yán)明 申請(qǐng)人:南通誠(chéng)信氨基酸有限公司