一種聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑多肽及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-2活性，治療急性淋巴細(xì)胞性白血病的多肽。此多肽經(jīng)過了聚乙二醇修飾，其序列為mPEG-SC10k-PRO-THR-THR-ASN-ARG是全新的序列，它們可以在體外抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-2活性，并在體內(nèi)試驗(yàn)中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【專利說明】—種聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑及其應(yīng)用，具體涉及具有抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-2活性、可治療實(shí)體腫瘤的的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來隨著醫(yī)學(xué)研究的深入，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶在實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)中扮演著重要角色。基質(zhì)金屬蛋白酶是一組由20幾種結(jié)構(gòu)相似和功能相關(guān)的蛋白內(nèi)切酶組成。它們可以發(fā)揮正常的生理功能，例如卵細(xì)胞著床，骨骼生長(zhǎng)和器官發(fā)育等；這些酶還可以在諸如炎癥，傷口愈合和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移中發(fā)揮病理作用?；|(zhì)金屬蛋白酶被更多的看作是這些病理過程的調(diào)節(jié)因子。在基質(zhì)金屬蛋白酶家族中，MMP-2和MMP-9，是MMP家族的重要成員，分別編碼72kDa和92kDa的明膠酶A和明膠酶B。正常穩(wěn)定狀態(tài)下，組織較少合成、分泌MMP-2，在炎癥、腸化、增生和損傷等刺激下，細(xì)胞內(nèi)部調(diào)控平衡機(jī)制紊亂，合成、分泌MMP-2
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[0003]PRO-THR-THR-ASN-ARG是一個(gè)全新的序列，前期的研究表明，該多肽經(jīng)反復(fù)體內(nèi)外活性評(píng)價(jià)證實(shí)具有較好的抑瘤效果，能夠顯著抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-2活性。然而上述多肽的半衰期短，擬用臨床人的給藥是每天靜脈滴注，這給患者帶來了一定的痛苦。 [0004]文獻(xiàn)報(bào)道中，對(duì)分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾或改造是解決半衰期較短、需連續(xù)給藥問題的常用方法，其中以化學(xué)修飾應(yīng)用最為廣泛，常用的化學(xué)修飾劑有聚乙二醇(polye thyleneglycol, PEG)、葡聚糖、聚氨基酸、聚酸酐等。PEG具有無毒、無免疫原性、水溶性好的特點(diǎn)，被美國(guó)食品與藥物管理局(FDA)認(rèn)可作為藥品的輔助原料和修飾劑。蛋白質(zhì)類藥物經(jīng)PEG修飾后，分子量增加，腎小球的濾過率減少，PEG的屏障作用保護(hù)了蛋白質(zhì)不易被蛋白水解酶水解，同時(shí)減少了中和抗體的產(chǎn)生，這些均有助于蛋白質(zhì)類藥物生物半衰期的延長(zhǎng)。目前已有多種PEG修飾的蛋白質(zhì)類藥物上市銷售。但PEG修飾同時(shí)也可能影響蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性，其影響大小與修飾劑、修飾條件及蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)。對(duì)于具體的蛋白質(zhì)，其最佳修飾需通過制備PEG修飾的蛋白質(zhì)及生物活性研究來決定。合成小分子多肽的PEG修飾研究起步較晚，但已引起不少研究者的關(guān)注。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的
本發(fā)明針對(duì)mPEG-SC-PRO-THR-THR-ASN-ARG做了進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)其在降低給藥頻率的情況下對(duì)多種腫瘤有治療作用。
[0006]技術(shù)方案
一種聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑多肽，其特征在于其序列為mPEG-SC1(lk-PRO-THR-THR-ASN-ARG。mPEG-SC 的分子量為 5000-20000。一種聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為起源于人的胃部、皮膚、頭頸部、甲狀腺、胰腺、肺臟、食管、乳腺、腎臟、膽囊、結(jié)腸/直腸、卵巢、子宮、子宮頸、前列腺、膀胱、睪丸的原發(fā)/繼發(fā)的癌或肉瘤。
[0007]有益效果
為了延長(zhǎng)多肽PRO-THR-THR-ASN-ARG的半衰期，我們采用不同分子量的聚乙二醇(PEG)對(duì)此多肽進(jìn)行了修飾，發(fā)現(xiàn)mPEG-SC1(lk-PRO-THR-THR-ASN-ARG具有延長(zhǎng)半衰期，但又不影響其體內(nèi)外活性的特點(diǎn)。一個(gè)多肽的修飾產(chǎn)物屬于一個(gè)新型分子，往往與修飾前的分子在活性上產(chǎn)生不同的效果。本發(fā)明針對(duì)上述聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑mPEG-SClok-PRO-THR-THR-ASN-ARG對(duì)多種腫瘤有治療作用進(jìn)行了大量的體內(nèi)外活性研究，發(fā)現(xiàn)給藥頻率降低的情況下，mPEG-SC1Qk-PRO-THR-THR-ASN-ARG對(duì)抑制多種腫瘤生長(zhǎng)保持了很好的活性，拓展了其社會(huì)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0008]實(shí)施例1
聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活I(lǐng)C50。
[0009]采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的U937細(xì)胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽(yáng)性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑和陽(yáng)性對(duì)照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)4811，分別在他、211、811、1411、2011、2411、3611、，4811每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測(cè)定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值)X 100%。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為7.64 μ Μ。
[0010]實(shí)施例2
用腫瘤模型檢測(cè)聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑的體內(nèi)活力。
[0011]建立U937腫瘤模型，陽(yáng)性對(duì)照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑，實(shí)驗(yàn)組設(shè)3個(gè)劑量:0.75、1.5μΜ、3μΜ mg/Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計(jì)算存活率。結(jié)果顯示，聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑可有效地保護(hù)小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達(dá)到76.09%ο
【權(quán)利要求】
1.一種聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑多肽，其特征在于其序列為mPEG-SClok-PRO-THR-THR-ASN-ARG。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑多肽，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量為10000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種聚乙二醇修飾的基質(zhì)金屬蛋白酶-2抑制劑多肽在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤為起源于人的胃部、皮膚、頭頸部、甲狀腺、胰腺、肺臟、食管、乳腺、腎 臟、膽囊、結(jié)腸/直腸、卵巢、子宮、子宮頸、前列腺、膀胱、睪丸的原發(fā)/繼發(fā)的癌或肉瘤。
【文檔編號(hào)】A61K38/08GK103923171SQ201410020872
【公開日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年1月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月17日
【發(fā)明者】邢將軍, 許劉華, 彭立軍, 任世闊, 華俊國(guó), 曹銘, 劉加根, 劉明明, 汪士金, 施新華, 劉偉峰, 嚴(yán)明 申請(qǐng)人:南通誠(chéng)信氨基酸有限公司