一種關(guān)于Npas2蛋白激動劑多肽及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有促進(jìn)Npas2蛋白表達(dá)，治療治療乳腺癌的多肽。其序列為QTEICDAAIQQDWKP是全新的序列，該多肽可體內(nèi)促進(jìn)Npas2蛋白表達(dá)，治療乳腺癌。提高在體內(nèi)荷瘤小鼠生存率；抑制人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S的增殖、遷移；具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【專利說明】—種關(guān)于Npas2蛋白激動劑多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及Npas2蛋白激動劑多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有促進(jìn)Npas2蛋白表達(dá)，治療乳腺癌的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]晝夜節(jié)律是生物體的生理功能、生化指標(biāo)和生理行為等多種生命現(xiàn)象以24小時為周期呈節(jié)律性振蕩的一種生物節(jié)律。生物鐘系統(tǒng)涉及人體系統(tǒng)的生理、生化和行為的各個方面，在整體水平、細(xì)胞水平影響周圍器官、組織和細(xì)胞，控制和調(diào)節(jié)代謝、睡眠和覺醒、內(nèi)分泌、免疫以及細(xì)胞周期等，使生命活動協(xié)調(diào)一致；在分子水平上，調(diào)控與細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖和凋亡、DNA損傷修復(fù)應(yīng)答有關(guān)的一系列細(xì)胞因子，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和治療等關(guān)系密切。因此晝夜節(jié)律紊亂可引起生物鐘基因及其相關(guān)蛋白產(chǎn)物的異常表達(dá)，從而促使腫瘤發(fā)生，加速腫瘤進(jìn)展。
[0003]乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，其死亡率的上升速度在女性惡性腫瘤位居第
一。流行病學(xué)的研究表明，晝夜節(jié)律的破壞與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。Npas2在乳腺癌中表達(dá)明顯下調(diào)，與乳腺癌的發(fā)生、病理和臨床分期關(guān)系密切。Npas2基因是在哺乳動物中最大生物鐘基因，是Clock的同源基因，可以通過調(diào)控和干擾癌基因、抑癌基因、與細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因，在細(xì)胞周期調(diào)控、DNA損傷修復(fù)應(yīng)答和腫瘤生長抑制的過程等多方面可能參與了乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展。研究表明，Npas2蛋白低表達(dá)與腫瘤瘤體大小、浸潤深度有關(guān)，Npas2蛋白高 表達(dá)對乳腺癌發(fā)展具有保護(hù)性作用。在乳腺癌癌前病變中Npas2表達(dá)增強(qiáng)，可以阻止癌前病變惡變。Npas2蛋白功能降低是乳腺癌發(fā)生的一個重要因素。因此，促進(jìn)Npas2蛋白表達(dá)，抑制乳腺癌發(fā)展，是治療乳腺癌的新靶點。但是，尚未有開發(fā)成熟的Npas2蛋白激動劑多肽的治療乳腺癌的藥物
本專利中的Npas2蛋白激動劑多肽已證明在乳腺癌中有效，具有在其他腫瘤模型中開發(fā)的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列Npas2蛋白激動劑多肽，對乳腺癌具有很好的療效。
[0005]技術(shù)方案
一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多肽與一種以上藥學(xué)上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
[0006]所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
[0007]所述的Npas2蛋白激動劑多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
[0008]所述的Npas2蛋白激動劑多妝在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
[0009]有益效果
利用固相合成法化學(xué)合成Npas2蛋白激動劑多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體內(nèi)促進(jìn)Npas2蛋白表達(dá)，治療乳腺癌。提高在體內(nèi)荷瘤小鼠生存率；抑制人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S的增殖，遷移；具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【具體實施方式】
[0010]本發(fā)明涉及的多肽由吉爾生化(上海)合成。
[0011]實施例1
Npas2蛋白激動劑多肽對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S增殖的作用。
[0012]采用MTT比色法。將對數(shù)生長的MDA-MB-435S細(xì)胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物Npas2蛋白激動劑多肽4和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個復(fù)孔，培養(yǎng)48h，分別在011、211、811、1411、2011、2411、3611、4811 每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMS0，孵育 30min，在酶標(biāo)儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長抑制率=(1_實驗組吸光值/對照組吸光值)X 100%。計算出實驗藥物的最大增殖抑制率為74.02%。
[0013]實施例2
Npas2蛋白激動劑多肽對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S遷移的作用。
[0014]將IOmg/ml Matrigel (BD公司，USA)用無血清的細(xì)胞培養(yǎng)液以1:3稀釋,涂布于Transwell小室(Greiner公司，USA)膜上，室溫風(fēng)干。將培養(yǎng)到對數(shù)生長期的人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S用胰蛋白酶消化，收集，用無血清細(xì)胞培養(yǎng)液重懸，于顯微鏡下計數(shù)，將細(xì)胞濃度調(diào)整到I X 105個/ml。配制各組試驗用液，分組如下:空白對照組:為不含藥物的無血清細(xì)胞培養(yǎng)液；恩度組:用不含藥物的無血清細(xì)胞培養(yǎng)液將5mg/ml的恩度儲液稀釋到預(yù)定濃度；Npas2蛋白激動劑多肽組:用不含藥物的無血清細(xì)胞培養(yǎng)液將Npas2蛋白激動劑多肽稀釋到各個預(yù)定濃度。將細(xì)胞接種到Transwell小室中，每孔100 μ I,并將各組試驗用液加入小室中。24孔板中加入0.6ml含5%胎牛血清和1%內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(ECGS)的細(xì)胞培養(yǎng)液刺激細(xì)胞遷移，于5%C02，37°C孵育24小時。棄去孔中培液，用無水乙醇常溫固定30分鐘，0.1%結(jié)晶紫常溫染色10分鐘，清水漂凈，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細(xì)胞，顯微鏡下觀察并隨機(jī)選擇四個視野拍照計數(shù)。按照公式計算遷移抑制率(migration inhibition, MI):
MI (%) = (1-Ntest/Ncontrol) X 100%
其中Ntest為測試組的細(xì)胞遷移數(shù)，Ncontrol為空白對照組的細(xì)胞遷移數(shù)。試驗得到的結(jié)果以mean 土 SD表示，并進(jìn)行統(tǒng)計T檢驗，*P < 0.05為顯著性差異，#P <0.01為極顯
著性差異。
[0015]表1多肽對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-435S遷移抑制作用
【權(quán)利要求】
1.Npas2蛋白激動劑多肽，其特征在于其序列為QTEICDAAIQQDWKP。
2.一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多肽與一種以上藥學(xué)上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
4.如權(quán)利要求1所述的Npas2蛋白激動劑多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
5.如權(quán)利要求1所述的Npas2蛋白激動劑多肽在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK104004063SQ201410289014
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月25日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司