一種富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，該方法包括以下步驟：取蝙蝠蛾被毛孢菌絲體，以質(zhì)量百分比濃度為30～50％的乙醇溶液為提取液進行超聲提取，菌絲體與提取液的質(zhì)量體積比為1:10～30(kg/L)，再采用截留分子量為2000～4000道爾頓的膜進行過濾，所得濃縮液進行離心，棄去沉淀物，取上清液，冷凍干燥得到菌絲體濃縮凍干粉。本發(fā)明選用特有的發(fā)酵、提取、濃縮方法，充分將其中有效成分富集濃縮且不發(fā)生破壞，在保留了蟲草的基本有效成分的同時，最大限度地減少了服用量，方便消費者服用。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 冬蟲夏草，別名蟲草，為麥角菌科蟲草屬的藥用真菌。主產(chǎn)于青海、西藏、四川、 云南、貴州等海拔4000m?5000m的山中、草甸土中。它是由冬蟲夏草菌（Cordycepss inensissall)寄生在蝙蝠科昆蟲蝙蝠蛾（Hepfalusarmoricanusoberthur)幼蟲上的子座 及幼蟲尸體產(chǎn)生的復合體，為較常用的名貴中藥材之一。
[0003]早在清代，吳儀洛在《本草從新》中對冬蟲夏草就有翔實的記載："冬在土中，身活 如老蠶，有毛能動，夏至則毛出土上，連身俱化為草";其性味功用為："甘、平""保肺益腎、止 血化痰、以勞嗽"。《中華人民共和國藥典》2010年版記載，其主要功效是"補肺益腎，止血， 化痰；用于久咳虛喘，勞嗽咯血，陽瘺遺精，腰膝酸痛"。現(xiàn)代研宄發(fā)現(xiàn)，冬蟲夏草具有抑制腫 瘤、抗癌和顯著提高人體免疫功能等獨特功效?，F(xiàn)代醫(yī)學研宄冬蟲夏草含有免疫活性蟲草 腺苷、蟲草多糖、甘露醇、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸、維生素和有機硒等多種微量元素，具有提 高人體免疫力、耐力、活力、抗疲勞、延緩衰老、抗腫瘤、治療腎和肺部疾病等多種藥用功能。
[0004] 但是，冬蟲夏草有著極其苛刻的寄生性和特殊的生態(tài)環(huán)境，天然資源十分稀少，加 之近年來人為地亂采亂挖，給自然環(huán)境造成了巨大的破壞，野生資源逐年萎縮，生態(tài)破壞愈 演愈烈。冬蟲夏草野生資源藥材已無法滿足人們保健和用藥的要求。為了擴大蟲草的藥源， 人們開始探索用人工方法培育仿冬蟲夏草。20多年來，我國先后有60多個科研單位、數(shù)千 人開展人工培育仿冬蟲夏草的研宄。雖然也有成功進行冬蟲夏草蝙蝠蛾系統(tǒng)飼養(yǎng)繁育的報 道，但這些距離全人工培育以及產(chǎn)業(yè)化尚有多個環(huán)節(jié)的關(guān)鍵技術(shù)有待攻克。不過人們采用 新型生物技術(shù)液體發(fā)酵培養(yǎng)獲得冬蟲夏草菌絲體的技術(shù)已獲得成功，并且此技術(shù)是目前解 決蟲草藥源的唯一途徑。20世紀80年代人們?yōu)榱送貙挾x夏草的藥源，專家學者們開展了 冬蟲夏草菌的人工培養(yǎng)，并對其化學成分、藥理作用進行了大量的研宄工作。經(jīng)過大量的化 學成分、藥理作用研宄發(fā)現(xiàn)：天然蟲草以及蟲草菌體中含有活性成分腺苷、甘露醇、生物堿、 有機酸、維生素等化學成分，而且二者所含成分十分相近；藥理作用研宄表明，天然蟲草及 蟲草菌絲制劑均具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用。化學成分及藥理作用的研宄為天然蟲草的替代 提供了理論基礎，為拓寬天然蟲草的資源開辟了有效的途徑，使其在藥品保健食品的研發(fā) 和生產(chǎn)展現(xiàn)出廣闊的前景。目前已有百令膠囊，金水寶膠囊等多種產(chǎn)品面市，廣受消費者歡 迎。
[0005] 蝙蝠蛾被毛孢菌絲體系將蟲草蝙蝠蛾被毛孢菌在培養(yǎng)基中培養(yǎng)出來，在實驗室中 創(chuàng)造高原、低溫、稀氧環(huán)境培養(yǎng)出來的無有害菌，潔白、純凈、質(zhì)量穩(wěn)定的天然野生冬蟲夏草 的蝙蝠蛾被毛孢菌絲體菌種，在顯微鏡下可見菌絲體由蟲草蝙蝠蛾被毛孢繁殖而成的菌絲 體，目前工人效果最接近野生天然蟲草。蝙蝠蛾被毛孢已被2010版藥典一部列入冬蟲夏 草名錄，同時也是國家食品藥品監(jiān)督管理局明確可用于保健食品的真菌品種之一。其安全 性和功效已得到了公認，當前以蝙蝠蛾被毛孢菌絲體為原料的藥品和保健食品已有產(chǎn)品面
[0006] 目前蟲草菌絲體中有報道通過水提醇沉方法提取其中蟲草多糖或通過醇提方法 提取其中蟲草素，也有報道采用二氧化碳超臨界萃取發(fā)提取的有效成分。但都較為復雜煩 瑣且收率較低。而蟲草菌絲體中含有多種有效成分，目前比較公認的有蟲草素、蟲草多糖、 蟲草酸、各種低分子蛋白質(zhì)等等，而很難用一種方法將之充分提取濃縮，本發(fā)明選用特有的 發(fā)酵、提取濃縮方法，可充分將其中有效成分富集濃縮且不發(fā)生破壞。在保留了蟲草的基本 有效成分的同時，最大限度地減少了服用量，方便消費者服用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是克服上述不足之處，提供一種富含活性成分的蟲草菌絲體加工方 法。
[0008] 本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的：
[0009] -種富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，該方法包括以下步驟：
[0010] 取蝙蝠蛾被毛孢菌絲體，以質(zhì)量百分比濃度為30?50%的乙醇溶液為提取液 進行超聲提取，菌絲體與提取液的質(zhì)量體積比為1:10?30 (kg/L)，再采用截留分子量為 2000?4000道爾頓的膜進行過濾，所得濃縮液進行離心，棄去沉淀物，取上清液，冷凍干燥 得到菌絲體濃縮凍干粉。所采用的膜優(yōu)選為聚酰胺膜。
[0011] 優(yōu)選超聲溫度20?30°C，超聲時間為20?75min。上述超聲功率與提取罐的體 積比為10?20KW/m3。
[0012] 所述的離心為在5000?8000rpm轉(zhuǎn)速下離心5?20分鐘，優(yōu)選在6000rpm轉(zhuǎn)速 下離心10分鐘。
[0013] 所述的冷凍干燥條件為：溫度彡30°C，真空度5Pa?IOPa條件下冷凍干燥35? 40小時。蝙蝠蛾被毛孢菌絲體在進行提取、超濾、濃縮全過程全程溫度不超過30°C。
[0014] 本發(fā)明使用的蝙蝠蛾被毛孢菌絲體可采用菌種發(fā)酵培養(yǎng)方式得到，該菌種發(fā)酵培 養(yǎng)步驟及條件如下：菌種搖瓶裝液量80ml/250ml，溫度16?18°C，搖床轉(zhuǎn)速110?160/ min，發(fā)酵培養(yǎng)基組成：葡萄糖3?9g，玉米粉2?6g，牛肉胨4?7g，蠶蛹粉3?4g，鮮牛 奶 60 ?90ml，加入NH4Cl0? 4 ?0? 6g、KH2PO4O. 1 ?0? 2g、MgSOJH2O0? 1 ?0? 2g、核黃素 0. 3?0. 6g，發(fā)酵液初始pH6. 0?7. 0,隨著發(fā)酵進行，pH值逐漸升高，補入刺梨汁，保持發(fā) 酵液pH6. 5?7. 0,發(fā)酵時間126-130小時，得到蝙蝠蛾被毛孢菌絲體。優(yōu)選菌種發(fā)酵培養(yǎng) 步驟及條件如下：菌種搖瓶裝液量80ml/250ml，溫度16?18°C，搖床轉(zhuǎn)速150/min，發(fā)酵 培養(yǎng)基組成：葡萄糖5g，玉米粉5g，牛肉胨5g，蠶蛹粉3g，鮮牛奶80ml，加入NH4Cl0. 5g、 KH2PO4O.lg、MgSOJH2O0.lg、核黃素0. 5g，發(fā)酵液初始PH6. 5,隨著發(fā)酵進行，pH值逐漸升 高，補入刺梨汁，保持發(fā)酵液PH6. 5?7. 0,發(fā)酵時間128小時，得到蝙蝠蛾被毛孢菌絲體。
[0015] 原料蝙蝠蛾被毛孢菌絲體也可采用市售商品。
[0016] 眾所周知，超氧化物歧化酶（SOD)屬于人體內(nèi)自身含有的一種抗氧化酶，是生物 體內(nèi)清除自由基的重要物質(zhì)，它可對抗與阻斷自由基對細胞造成的傷害，而現(xiàn)代生活壓力 大，各種環(huán)境污染，輻射和超量運動都會造成氧自由基的大量生成，所以研宄富含SOD的藥 品及保健品是對人體有極大好處的。
[0017] 但通常情況下，SOD制劑中的SOD含量非常不穩(wěn)定，極易被氧化而起不到相應功 效，但本發(fā)明的蝙蝠蛾被毛孢濃縮凍干粉中SOD含量高較穩(wěn)定，常溫放置24個月后，其SOD 含量仍可達到原來起始檢測值的92%，說明在菌絲體發(fā)酵過程中SOD被有效包裹在菌絲體 內(nèi)，而在提取濃縮過程中，又未對包裹物產(chǎn)生破壞。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)比較本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明選用特有的發(fā)酵、提取、濃縮方法，可 充分將其中有效成分富集濃縮且不發(fā)生破壞，得到的產(chǎn)品可顯著增強免疫力和抗氧化能 力，而且，在保留了蟲草的基本有效成分的同時，最大限度地減少了服用量，方便消費者服 用。
[0019] 以下通過藥效實驗對本發(fā)明進行闡述：
[0020] 1、增強免疫力實驗
[0021] 小鼠碳廓清試驗：
[0022] 各劑量組動物連續(xù)灌胃1個月后，每鼠尾靜脈注入4倍稀釋的印度墨汁 (0.lmL/10g*bw)，待墨汁注入，立即計時。注入墨汁后2min及IOmin分別從眼內(nèi)目此靜脈叢 取血20yL，并將其加到2mL0. 1 %Na2CO3溶液中，用721分光光度計在600nm波長處測光密 度值，并取胸腺、肝、脾，利用光密度值、肝重和脾重計算吞噬指數(shù)a。另計算胸腺/體比、脾 /體比。
[0023] 以吞噬指數(shù)表示小鼠碳廓清的能力。受試樣品組的吞噬指數(shù)顯著高于對照組的吞 噬指數(shù)，可判定該項實驗結(jié)果陽性。
[0024] 經(jīng)口給予小鼠不同劑量的本實施例1樣品1個月后，吞噬指數(shù)a經(jīng)方差齊性檢驗， 滿足方差齊性要求，用單因素方差分析方法中多個實驗組與一個對照組（空白組）間均數(shù) 的兩兩比較方法進行統(tǒng)計處理。由表1結(jié)果可見，〇. 〇8g/kg?bw、0. 15g/kg?bw、0. 46g/ kg?bw組碳廓清能力顯著高于Og/kg?bw組。
[0025] 表I本發(fā)明小鼠碳廓清實驗結(jié)果表
[0026]

【權(quán)利要求】
1. 一種富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，其特征在于該方法包括以下步驟： 取蝙蝠蛾被毛孢菌絲體，以質(zhì)量百分比濃度為30?50%的乙醇溶液為提取液進行超 聲提取，菌絲體與提取液的質(zhì)量體積比為1:10?30 (kg/L)，再采用截留分子量為2000? 4000道爾頓的膜進行過濾，所得濃縮液進行離心，棄去沉淀物，取上清液，冷凍干燥得到菌 絲體濃縮凍干粉。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，其特征在于超聲溫度 20?30°C，超聲時間為20?75min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，其特征在于超聲功率 與提取罐的體積比為10?20KW/m3。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，其特征在于所述的離 心為在5000?8000rpm轉(zhuǎn)速下離心5?20分鐘。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，其特征在于所述的冷 凍干燥條件為：溫度彡30°C，真空度5Pa?10Pa條件下冷凍干燥35?40小時。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，其特征在于菌種發(fā)酵 培養(yǎng)條件如下：溫度16?18°C，搖床轉(zhuǎn)速110?160/min，發(fā)酵培養(yǎng)基組成：葡萄糖3?9g， 玉米粉2?6g，牛肉胨4?7g，蠶蛹粉3?4g，鮮牛奶60?90ml，加入NH4C1 0? 4?0? 6g、 KH2P040. 1 ?0? 2g、MgS047H20 0? 1 ?0? 2g、核黃素 0? 3 ?0? 6g，發(fā)酵液初始 pH6. 0 ?7. 0， 隨著發(fā)酵進行，pH值逐漸升高，補入刺梨汁，保持發(fā)酵液pH6. 5?7. 0,發(fā)酵時間126-130小 時，得到蝙蝠蛾被毛孢菌絲體。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的富含活性成分的蟲草菌絲體加工方法，其特征在于菌種發(fā)酵 培養(yǎng)條件如下：溫度16?18°C，搖床轉(zhuǎn)速150/min，發(fā)酵培養(yǎng)基組成：葡萄糖5g，玉米粉5g， 牛肉胨 5g，蠶蛹粉 3g，鮮牛奶 80ml，NH4C1 0. 5g、KH2P040. lg、MgS047H20 0. lg、核黃素 0. 5g， 發(fā)酵液初始pH6. 5,隨著發(fā)酵進行，pH值逐漸升高，補入刺梨汁，保持發(fā)酵液pH6. 5?7. 0， 發(fā)酵時間128小時，得到蝙蝠蛾被毛孢菌絲體。
【文檔編號】A61P37/04GK104473978SQ201410693153
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月26日
【發(fā)明者】馮敏, 沈建, 錢一帆 申請人:南京中科藥業(yè)有限公司, 南京中科集團股份有限公司