本專利申請(qǐng)要求2013年12月5日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/912,120的優(yōu)先權(quán)和權(quán)益，該臨時(shí)專利申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容在此以引用的方式整體并入。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用鞘內(nèi)施加的丹曲洛林治療痙攣患者的方法。

發(fā)明背景

痙攣是在許多神經(jīng)病癥如中風(fēng)、大腦性麻痹、脊髓損傷和多發(fā)性硬化之后的常見(jiàn)繼發(fā)性致殘病狀。其特征在于增加的肌張力(張力過(guò)高)、增加的非隨意軀體反射(反射亢進(jìn))、陣攣以及痛苦的肌肉痙攣和增加的響應(yīng)于拉伸的抗性[Kheder&Nair，2012]。用于痙攣的藥物療法是針對(duì)癥狀的，其目的是增加功能能力和緩解不適。

丹曲洛林是用于治療痙攣的FDA批準(zhǔn)的口服藥物[Kita&Goodkin，2000]。全身性施用的丹曲洛林(尤其是在高劑量下)有效降低肌肉僵硬和疼痛，并且改善許多患者的生命質(zhì)量[Pinder等人，1977；Ketel&Kolb，1984]，但不幸的是一些嚴(yán)重副作用如胎兒肝毒性[Chan，1990；Strommen，2013]和全身肌肉無(wú)力[Verrotti等人，2006]的風(fēng)險(xiǎn)也隨著劑量增加而顯著增加，特別是在高于400mg/天的劑量下[丹曲洛林FDA批準(zhǔn)的標(biāo)簽]，這常常限制丹曲洛林的臨床效用[Strommen，2013]。

在過(guò)去十年中，新的慢性痙攣動(dòng)物模型的可用性[Bennett等人， 2004；Marsala等人，2005]顯著促進(jìn)對(duì)痙攣的潛在病理生理學(xué)和抗痙攣藥物的作用機(jī)制的理解[Murray等人，2010]，以及測(cè)試新療法和新穎藥物候選物的功效[Kakinohana等人，2012]。

雖然丹曲洛林在痙攣中的治療功效通常被認(rèn)為是通過(guò)其對(duì)骨骼肌的收縮機(jī)制的直接作用以減少收縮力來(lái)產(chǎn)生[Pinder等人，1977；Kheder&Nair，2012；另參見(jiàn)丹曲洛林FDA批準(zhǔn)的標(biāo)簽中的“臨床藥理學(xué)”部分]，但丹曲洛林的另外作用位點(diǎn)尚未深入探索和在適當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型中進(jìn)行測(cè)試。與全身性(如口服或靜脈內(nèi))藥物施用相比，在作用部位處的局部藥物遞送(如鞘內(nèi)，如在用于治療痙攣的巴氯芬的情況下[Kita&Goodkin，2000；Kheder&Nair，2012])常常可提高功效，并且顯著減少所需藥物的量，這通常會(huì)顯著減少全身性副作用。

EP2548594提及鞘內(nèi)巴氯芬藥物劑型和相關(guān)遞送系統(tǒng)。

US20120040970提及一種用于通過(guò)經(jīng)由鼻途徑施用將單獨(dú)或與其它化合物組合的丹曲洛林或其衍生物快速且可靠地遞送至全身循環(huán)以在惡性高熱(MH)、痙攣和迷幻藥中毒的治療或預(yù)防中產(chǎn)生有益作用的快速發(fā)作的方法。

US20070065463提及用治療有效量的麥角生物堿、骨骼肌松弛劑(例如，丹曲洛林)、血清素激動(dòng)劑及其組合治療偏頭痛和/或叢集性頭痛、肌肉扭傷、肌肉痙攣、痙攣、緊張性頭痛、緊張相關(guān)偏頭痛以及伴有肌肉緊張和疼痛的相關(guān)病狀的局部制劑和方法。

參考文獻(xiàn)

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Bennett DJ，Sanelli L，Cooke CL，Harvey PJ，Gorassini MA.(2004)Spastic long-lasting reflexes in the awake rat after sacral spinal cord injury.J Neurophysiol，91：2247-2258.

丹曲洛林FDA批準(zhǔn)的標(biāo)簽：http：//dailymed.nlm.nih.gov/dailyme d/lookup.cfm？setid＝c3c45b27-f786-456e-95d6-2e38ef36190a

Ketel WB，Kolb ME.(1984)Long-term treatment with dantrolenesodium of stroke patients with spasticity limiting the return of function.Curr Med Res Opin，9：16116-9.

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Kita M，Goodkin DE.(2000)Drugs used to treat spasticity.Drugs，59：487-495.

Marsala M，Hefferan MP，Kakinohana O，Nakamura S，Marsala J，Tomori Z.(2005)Measurement of peripheral muscle resistance in rats with chronic ischemia-induced paraplegia or morphine-induced rigidity using a semi-automated computer-controlled muscle resistance meter.J Neurotrauma.22：1348-1361.

Kakinohana O等人，(2012)Combinational spinal GAD65gene delivery and systemic GABA-mimetic treatment for modulation of spasticity.PLoS One，7(1)：e30561.

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Pinder RM，Brogden RN，Speight TM，Avery GS.(1977)Dantrolene sodium：a review of its pharmacological properties and therapeutic efficacy in spasticity.Drugs，13：3-23.

Strommen JA.(2013)Management of spasticity from spinal cofd dysfunction.Neurol Clin，31：269-286.

Verrotti A，Greco R，Spalice A，Chiarelli F，Iannetti P(2006)Pharmacotherapy of spasticity in children with cerebral palsy.Pediatr Neurol，34：1-6.

發(fā)明概述

本發(fā)明提供一種用鞘內(nèi)施加的治療有效量的丹曲洛林(呈不同形式、溶液、聚合物等的丹曲洛林)治療痙攣患者的方法。

附圖簡(jiǎn)述

圖1示出丹曲洛林鈉的結(jié)構(gòu)。

圖2描述大鼠痙攣模型。(A，B)當(dāng)使用計(jì)算機(jī)控制的踝旋轉(zhuǎn)裝置以(40°/3秒)的速度旋轉(zhuǎn)腳踝時(shí)來(lái)自清醒但受約束的正常和代表性痙攣大鼠的肌電圖(EMG)反應(yīng)(從腓腸肌記錄的)。痙攣的存在是通過(guò)脈沖EMG活動(dòng)的外觀(活動(dòng)性EMG)來(lái)鑒別。(C)為了計(jì)算在踝背屈期間測(cè)試劑對(duì)痙攣肌肉活動(dòng)的抑制百分比，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)將動(dòng)物用異氟烷麻醉，并且在異氟烷麻醉下測(cè)量的在踝背屈期間的活動(dòng)性EMG的量值隨后用作最大可能作用并在每個(gè)痙攣動(dòng)物中加以限定。在處理之后產(chǎn)生的所有藥物治療數(shù)據(jù)隨后使用在異氟烷麻醉下觀察到的最大作用以％進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

圖3示出丹曲洛林的全身性施用(腹膜內(nèi)(IP)注射)以劑量依賴性方式減少清醒痙攣大鼠中的痙攣活動(dòng)。在所測(cè)試的最高劑量(50mg/kg，單次注射)下，痙攣活動(dòng)被減少至處理前水平的約30％(減少70％)持續(xù)至少2個(gè)小時(shí)。這些結(jié)果證實(shí)全身性丹曲洛林在這種痙攣大鼠模型中的功效，這也類似于在人痙攣患者中觀察到的功效。

圖4示出鞘內(nèi)(IT)施用的丹曲洛林(單次250μg彈丸注射)具有有效的抗痙攣?zhàn)饔?，這至少(如果不超過(guò))與在清醒痙攣大鼠(n＝6)中在最高(50mg/kg)全身性施用的丹曲洛林情況下一樣穩(wěn)健。

圖5示出來(lái)自那些大鼠中的3只的在IT丹曲洛林注射之后的不同時(shí)間記錄的代表性肌電圖(紅色跡線)。在此大鼠模型中實(shí)際上消除所有痙攣活動(dòng)的異氟烷麻醉在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用作0％(最大抗痙攣?zhàn)饔?的陽(yáng)性對(duì)照。

發(fā)明詳述

本發(fā)明的實(shí)施方案

本發(fā)明提供一種治療人受試者的痙攣的方法，所述方法包括向需要此種治療的所述受試者鞘內(nèi)施用治療有效量的丹曲洛林或其藥學(xué)上可接受的鹽。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“鞘內(nèi)(IT)施用”、“鞘內(nèi)注射”、“鞘內(nèi)遞送”或語(yǔ)法等效物是指注射至脊椎管中的任何地方(脊髓周圍的鞘內(nèi)空間)。在一些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的“鞘內(nèi)施用”或“鞘內(nèi)遞送”是指經(jīng)由脊髓的胸椎、腰椎和骶區(qū)段/區(qū)IT施用或遞送。

丹曲洛林的鹽包括藥學(xué)上可接受的堿加成鹽、藥學(xué)上可接受的金屬鹽、銨以及烷基化銨鹽。金屬鹽的實(shí)例包括鋰、鈉、鉀、鎂鹽等。堿鹽包括但不限于與藥學(xué)上可接受的陽(yáng)離子，如鈉、鉀、鋰、鈣、鎂、銨和烷基銨形成的那些鹽。銨和烷基化銨鹽的實(shí)例包括銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、乙基銨、羥乙基銨、二乙基銨、丁基銨、四甲基銨鹽等。

丹曲洛林的季銨鹽的實(shí)例已公開(kāi)于出版物“Synthesis and skeletal muscle relaxant activity of quaternary ammonium salts of dantrolene and clodanolene”，K.O.Ellis，R.L.Whatie Jr.，G.C.Wright，F(xiàn).L.Wessels，J.Pharm Sci.，第69卷，第3期，第327-331頁(yè)，1980年3月中。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥學(xué)上可接受的鹽是鈉鹽，即，所述化合物具有如在圖1中列出的式。

丹曲洛林的鞘內(nèi)遞送可通過(guò)彈丸注射或連續(xù)輸注來(lái)進(jìn)行。彈丸注 射被定義為一次以相對(duì)大量(稱為大丸劑)注射一種藥物(或多種藥物)，其是與逐漸施用(例如，靜脈內(nèi)輸注)相反的。連續(xù)輸液被定義為在延長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)施用藥物或藥物組合(長(zhǎng)期施用)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，丹曲洛林可長(zhǎng)期施用，即通過(guò)連續(xù)鞘內(nèi)輸注施用。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)連續(xù)鞘內(nèi)輸注施用是使用植入泵進(jìn)行。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，丹曲洛林的施用可潛在地減少或消除來(lái)自丹曲洛林的全身性施用的副作用，如肝毒性和全身肌無(wú)力。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，丹曲洛林的施用可潛在地產(chǎn)生更佳功效(比較圖3和圖4中的結(jié)果)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，丹曲洛林是以約0.05mg/kg/天至約6mg/kg/天的劑量鞘內(nèi)施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述劑量是用鞘內(nèi)輸液泵施用的。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，丹曲洛林是作為單次彈丸劑量鞘內(nèi)注射施用的。

測(cè)定

痙攣大鼠模型

動(dòng)物：在該測(cè)定中使用雄性Sprague-Dawley大鼠(大約350克體重)。將所述大鼠在室溫(65-82°F)和30％與70％之間范圍內(nèi)的相對(duì)濕度下圈養(yǎng)。房間將用熒光燈照明按每天12小時(shí)光照/黑暗循環(huán)進(jìn)行照明。所有動(dòng)物將自由獲取干燥食物。將自由地獲得城市用水。

痙攣發(fā)展和測(cè)量：通過(guò)主動(dòng)脈球囊閉塞使大鼠暴露于瞬時(shí)脊髓缺血持續(xù)10-12分鐘。將在缺血性損傷之后4-8周選擇具有充分發(fā)展的 痙攣的動(dòng)物，并且準(zhǔn)備用于痙攣測(cè)量。痙攣的存在將通過(guò)在計(jì)算機(jī)控制的踝背屈期間測(cè)量的外周肌肉抵抗增加和在腓腸肌中測(cè)量的EMG(肌電圖)活動(dòng)的相關(guān)變化來(lái)定義(參見(jiàn)圖2)。

由踝背屈誘導(dǎo)的EMG活動(dòng)增加是痙攣的一致且可靠的量度。在施用丹曲洛林之前，進(jìn)行基線EMG測(cè)量。然后將具有鑒別的痙攣的動(dòng)物分配至通過(guò)腹膜內(nèi)和鞘內(nèi)途徑用丹曲洛林或媒介物治療的實(shí)驗(yàn)組。

腹膜內(nèi)給藥：腹膜內(nèi)注射三種不同劑量(5、15、50mg/kg)的丹曲洛林和媒介物(6只大鼠/處理/劑量)。在丹曲洛林施用之后，記錄在腹膜內(nèi)注射之后15、30、60、90和120分鐘時(shí)EMG的相關(guān)變化。然后分析基線EMG活動(dòng)和踝旋轉(zhuǎn)誘發(fā)的EMG活動(dòng)的變化并且計(jì)算處理對(duì)痙攣的功效。

鞘內(nèi)給藥：將具有鑒別的痙攣的動(dòng)物鞘內(nèi)植入精密塑料(例如，PE-10)導(dǎo)管以用于彈丸藥物遞送。在鞘內(nèi)導(dǎo)管植入后兩至三天，測(cè)量基線痙攣反應(yīng)，并且然后將動(dòng)物鞘內(nèi)注射丹曲洛林(250μg，6只大鼠)并且測(cè)量痙攣反應(yīng)持續(xù)2小時(shí)。在對(duì)照動(dòng)物(6只大鼠)中僅注射媒介物。

本文中公開(kāi)的各個(gè)和每個(gè)參考文獻(xiàn)(無(wú)論是專利公布/授權(quán)的專利還是科學(xué)出版物)均出于所有目的以引用的方式并入本文。

應(yīng)理解，以上描述本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案并且可在不背離如權(quán)利要求書中闡述的本發(fā)明的范圍的情況下在其中做出修改。