因子X(jué)Ia是參與血液凝固調(diào)節(jié)的血漿絲氨酸蛋白酶。雖然血液凝固是調(diào)節(jié)有機(jī)體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的必要和重要的部分，但異常凝血也可能具有有害作用。例如，血栓形成是在血管或心腔內(nèi)形成或存在血塊。這種血塊可以滯留在血管中，從而阻斷循環(huán)并誘導(dǎo)心臟病發(fā)作或中風(fēng)。血栓栓塞病癥是工業(yè)化世界中死亡和殘疾的最大原因。

血液凝固是控制哺乳動(dòng)物生存所必需的血流的過(guò)程。在血管損傷后開(kāi)始凝固過(guò)程及隨后的傷口愈合發(fā)生后的凝塊溶解，并且可以分為四個(gè)階段。第一階段，血管收縮或血管緊縮，可導(dǎo)致?lián)p傷區(qū)域的失血量減少。在下一階段，凝血酶導(dǎo)致血小板活化，血小板粘附到血管壁損傷部位并形成血小板聚集體。在第三階段，凝塊復(fù)合物的形成導(dǎo)致凝血酶大量形成，其通過(guò)裂解兩個(gè)小肽將可溶性纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。在第四階段，傷口愈合后，通過(guò)內(nèi)源性纖維蛋白溶解系統(tǒng)的關(guān)鍵酶纖維蛋白溶酶的作用溶解血栓。

兩種可替換的途徑可以導(dǎo)致纖維蛋白凝塊的形成，即內(nèi)在途徑和外在途徑。這些途徑由不同的機(jī)制啟動(dòng)，但在后期階段，它們匯聚得到共同的最終的凝血級(jí)聯(lián)路徑。在這個(gè)最終的凝血路徑中，凝血因子X(jué)被活化?；罨囊蜃覺(jué)負(fù)責(zé)從在血液中循環(huán)的無(wú)活性前體凝血酶原形成凝血酶。在沒(méi)有傷口的血管壁異常的底部上形成血栓是內(nèi)在途徑的結(jié)果。作為對(duì)組織損傷或傷害作出反應(yīng)的纖維蛋白凝塊形成是外在途徑的結(jié)果。兩種途徑都包含相對(duì)大量的蛋白質(zhì)，其被稱(chēng)為凝血因子。內(nèi)在途徑需要凝血因子V、VIII、IX、X、XI和XII以及前激肽釋放酶、高分子量激肽原、鈣離子和來(lái)自血小板的磷脂。因子X(jué)Ia的活化是凝固活化的兩個(gè)途徑之間的中心交叉點(diǎn)。因子X(jué)Ia在血液凝固中具有重要作用。

當(dāng)血液暴露于人工表面(例如，在血液透析期間、“體外循環(huán)”心血管手術(shù)、血管移植物、細(xì)菌性敗血癥)、細(xì)胞表面上、細(xì)胞受體、細(xì)胞碎片、DNA、RNA和細(xì)胞外基質(zhì)時(shí)，凝血開(kāi)始。該過(guò)程也被稱(chēng)為接觸活化。因子X(jué)II的表面吸收導(dǎo)致因子X(jué)II分子的構(gòu)象變化，從而促進(jìn)對(duì)蛋白水解活性因子X(jué)II分子(因子25 XIIa和因子X(jué)IIf)的活化。因子X(jué)IIa(或XIIf)具有許多靶蛋白，包括血漿前激肽釋放酶和因子X(jué)I?；钚匝獫{激肽釋放酶進(jìn)一步活化因子X(jué)II，導(dǎo)致接觸活化的擴(kuò)大?；蛘?，絲氨酸蛋白酶脯氨酰羧肽酶可以活化在細(xì)胞和基質(zhì)表面上形成的多蛋白復(fù)合物中與高分子量激肽原復(fù)合的血漿激肽釋放酶(Shariat-Madar等人，Blood，108:192-199 (2006))。接觸活化是部分地負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)血栓形成和炎癥的表面介導(dǎo)的過(guò)程，并且至少部分地由纖維蛋白溶解、補(bǔ)體、激肽原/激肽和其他體液和細(xì)胞途徑介導(dǎo)(綜述，Coleman，R.，“Contact ActivationPathway”，Hemostasis and Thrombosis，pp. 103-122，Lippincott Williams & Wilkins(2001)；Schmaier，A.H.，“Contact Activation”，Thrombosis and Hemorrhage，pp. 105-128 (1998))。接觸活化系統(tǒng)對(duì)5種血栓栓塞性疾病的生物相關(guān)性由因子X(jué)II缺陷小鼠的表型支持。更具體地，在幾種血栓形成模型以及中風(fēng)模型中保護(hù)因子X(jué)II缺陷小鼠免于血栓性血管閉塞，并且XII缺陷小鼠的表型與XI缺陷小鼠相同(Renne等人，J Exp. Med.，202:271-281 (2005)；Kleinschmitz等人，J Exp. Med.，203:513-518 (2006))。因子X(jué)I是因子X(jué)IIa的下游，與XII和XI缺陷小鼠的相同表型相結(jié)合的事實(shí)表明接觸活化系統(tǒng)可在體內(nèi)XI因子活化中起主要作用。

血漿激肽釋放酶是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的酶原并且存在于血漿中?；蚪Y(jié)構(gòu)類(lèi)似于因子X(jué)I的基因結(jié)構(gòu)?？偟膩?lái)說(shuō)，血漿激肽釋放酶的氨基酸序列與因子X(jué)I具有58%的同源性。通過(guò)因子X(jué)IIa在內(nèi)部I 389-R390鍵處的蛋白水解活化產(chǎn)生重鏈(371個(gè)氨基酸)和輕鏈(248個(gè)氨基酸)。血漿激肽釋放酶的活性位點(diǎn)包含在輕鏈中。血漿激肽釋放酶的輕鏈與15種蛋白酶抑制劑反應(yīng)，包括α2巨球蛋白和Cl抑制劑。有趣的是，在高分子量激肽原(HMWK)存在下，肝素顯著加速抗凝血酶III對(duì)血漿激肽釋放酶的抑制。在血液中，大多數(shù)血漿激肽釋放酶與HMWK復(fù)合循環(huán)。血漿激肽釋放酶裂解HMWK以釋放緩激肽。緩激肽釋放導(dǎo)致血管通透性和血管擴(kuò)張的增加(綜述，Coleman，R.，“Contact Activation Pathway”，Hemostasis and Thrombosis，pp. 103-122，Lippincott Williams & Wilkins (2001)；Schmaier A.H.，“Contact Activation”，Thrombosis and Hemorrhage，pp. 105-128 (1998))。

在C1酯酶抑制劑上呈現(xiàn)遺傳缺陷的患者患有遺傳性血管水腫(HAE)，其是導(dǎo)致在包括手、腳、臉、咽喉、生殖器和胃腸道在內(nèi)的整個(gè)身體內(nèi)間歇性腫脹的終身疾病。由急性發(fā)作引起的水皰的分析已經(jīng)顯示含有高水平的血漿激肽釋放酶，并且用基于蛋白質(zhì)的可逆血漿激肽釋放酶抑制劑Ecallantide(Kalbitor)治療，其已被FDA批準(zhǔn)用于治療HAE的急性發(fā)作(Schneider，L等人，J.Allergy Clin.Immunol.，120：p.416 (2007))。

此外，血漿激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)在診斷為晚期糖尿病性黃斑水腫(DME)的患者中異常豐富。最近的出版物已經(jīng)顯示血漿激肽釋放酶有助于糖尿病嚙齒動(dòng)物模型中觀察到的視網(wǎng)膜血管滲漏和功能障礙(A. Clermont等人，Diabetes，60:1590 (2011))，并且用小分子血漿激肽釋放酶抑制劑治療改善了觀察到的視網(wǎng)膜血管通透性和其他與視網(wǎng)膜血流量相關(guān)的異常。

因子X(jué)Ia抑制劑化合物描述于WO2014160592、WO2013022814、WO 2013022814、WO 2013022818、WO 2013055984、WO2013056034、WO2013056060、WO2013118805、WO2013093484、WO2002042273、WO2002037937、WO2002060894、WO2003015715、WO2004002405、US20040180855、WO2004080971、WO2004094372、US20050228000、US20050282805、WO2005123680、US20090036438、US20120088758、US20060074103、WO2006062972、WO2006076246、US20060154915、US20090062287、US20060183771、WO2007070818、WO2007070816、WO2007070826、WO2008076805、WO2008157162、WO2009114677、WO2011100402和WO2011100401中

發(fā)明概述

本發(fā)明涉及式I化合物：

或其藥學(xué)上可接受的鹽。式I化合物是選擇性因子X(jué)Ia抑制劑或因子X(jué)Ia和血漿激肽釋放酶的雙重抑制劑，因此可用于治療、抑制或改善可受益于因子X(jué)Ia或血漿激肽釋放酶抑制的一種或多種疾病狀態(tài)，包括血栓形成、栓塞、高凝狀態(tài)或纖維化變化。本發(fā)明化合物可以進(jìn)一步與其它治療有效的試劑組合使用，包括但不限于可用于治療血栓形成、栓塞、高凝狀態(tài)或纖維化變化的其它藥物。本發(fā)明還涉及制備式I化合物的方法和包含式I化合物的藥物組合物。

發(fā)明詳述

本發(fā)明涉及式I化合物：

其中R¹為芳基、雜芳基、C_3-6環(huán)烷基或雜烷基，其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴、OR⁴、(C=O)R⁴、(C=O)OR⁴、NR⁴R⁵、(C_1-3烷基)NR⁴R⁵、NH(C=O)R⁴、NH(C=O)OR⁴、C(NH)NR⁴R⁵、C_3-6環(huán)烷基和雜芳基(其任選被鹵素、氰基、(C=O)NR⁴R⁵或R⁴取代)的取代基取代；

R²為氫、羥基或CH(R^2a)(R^2b)；

R^2a為C_1-6烷基、芳基、雜芳基、C_3-6環(huán)烷基或雜烷基，其中所述烷基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基和氰基的取代基取代，并且其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴和OR⁴的取代基取代；

R^2b為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基和氰基的取代基取代；

R³為芳基、雜芳基、C_3-10環(huán)烷基或雜烷基，其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴、OR⁴、(C=O)R⁴、(C=O)OR⁴、NR⁴R⁵、NH(C=O)R⁴、NH(C=O)OR⁴、C(NH)NR⁴R⁵和雜芳基的取代基取代；

R⁴為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素和羥基的基團(tuán)取代；

R⁵為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素和羥基的基團(tuán)取代；

R⁶為氫、氰基、鹵素、R⁴或OR⁴；

R⁷為氫、氰基、鹵素、R⁴或OR⁴；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及式Ia化合物：

其中R¹為芳基、雜芳基、C_3-6環(huán)烷基或雜烷基，其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴、OR⁴、(C=O)R⁴、(C=O)OR⁴、NR⁴R⁵、(C_1-3烷基)NR⁴R⁵、NH(C=O)R⁴、NH(C=O)OR⁴、C(NH)NR⁴R⁵、C_3-6環(huán)烷基和雜芳基(其任選被R⁴取代)的取代基取代；

R^2a為C_1-6烷基、芳基、雜芳基、C_3-6環(huán)烷基或雜烷基，其中所述烷基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基和氰基的取代基取代，并且其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴和OR⁴的取代基取代；

R^2b為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基和氰基的取代基取代；

R³為芳基、雜芳基、C_3-10環(huán)烷基或雜烷基，其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴、OR⁴、(C=O)R⁴、(C=O)OR⁴、NR⁴R⁵、NH(C=O)R⁴、NH(C=O)OR⁴、C(NH)NR⁴R⁵和雜芳基的取代基取代；

R⁴為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素和羥基的基團(tuán)取代；

R⁵為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素和羥基的基團(tuán)取代；

R⁶為氫、鹵素、R⁴或OR⁴；

R⁷為氫、鹵素、R⁴或OR⁴；

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R¹為芳基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、C_3-6環(huán)烷基和雜芳基(其任選被R⁴取代)的取代基取代。在一類(lèi)實(shí)施方案中，R¹為苯基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、C_3-6環(huán)烷基、四唑基、噁唑基、三唑基、噻唑基、吡啶基、噻二唑基、吡嗪基和吡唑基的取代基取代。在實(shí)施方案的一個(gè)子類(lèi)中，R¹為苯基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自氯、氟、C_3-6環(huán)烷基和四唑基的取代基取代。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R²為氫。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，R²為CH(R^2a)(R^2b)。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R^2a為芳基，其任選被1至3個(gè)鹵素取代。在一類(lèi)實(shí)施方案中，R^2a為苯基。在另一類(lèi)實(shí)施方案中，R^2a為被鹵素取代的苯基。在該實(shí)施方案的另一實(shí)施方案中，R^2a為環(huán)丙基。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R^2b為氫。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R³為芳基或雜芳基，其中所述芳基和雜芳基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、R⁴和(C=O)OR⁴的取代基取代。在一類(lèi)實(shí)施方案中，R³為任選被(C=O)OR⁴取代的芳基。在另一類(lèi)實(shí)施方案中，R³為雜芳基。

本發(fā)明還涉及下式化合物：

其中R¹為芳基、雜芳基、C_3-6環(huán)烷基或雜烷基，其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴、OR⁴、(C=O)R⁴、(C=O)OR⁴、NR⁴R⁵、NH(C=O)R⁴、NH(C=O)OR⁴、C(NH)NR⁴R⁵、C_3-6環(huán)烷基和雜芳基的取代基取代，其所述取代基任選被R⁴取代；

R²為氫或CH(R^2a)(R^2b)；

R^2a為C_1-6烷基、芳基、雜芳基、C_3-6環(huán)烷基或雜烷基，其中所述烷基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基和氰基的取代基取代，并且其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴和OR⁴的取代基取代；

R^2b為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、羥基和氰基的取代基取代；

R³為芳基、雜芳基、C_3-10環(huán)烷基或雜烷基，其中所述芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、R⁴、OR⁴、(C=O)R⁴、(C=O)OR⁴、NR⁴R⁵、NH(C=O)R⁴、NH(C=O)OR⁴、C(NH)NR⁴R⁵和雜芳基的取代基取代；

R⁴為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素和羥基的基團(tuán)取代，

R⁵為氫或C_1-6烷基，其任選被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素和羥基的基團(tuán)取代，

或其藥學(xué)上可接受的鹽。

除非另有說(shuō)明，否則提及上述優(yōu)選類(lèi)別和子類(lèi)意味著包括特定和優(yōu)選基團(tuán)的所有組合。

本發(fā)明的具體實(shí)施方案包括但不限于本文中鑒定為實(shí)施例1至59的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明范圍內(nèi)還包括包含上述式I或式Ia化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明還意圖涵蓋包含藥學(xué)上可接受的載體和本申請(qǐng)中具體公開(kāi)的任何化合物的藥物組合物。本發(fā)明的這些和其它方面將從本文包含的教導(dǎo)中顯而易見(jiàn)。

本發(fā)明還包括在哺乳動(dòng)物中抑制血小板損失、抑制血小板聚集體形成、抑制纖維蛋白形成、抑制血栓形成、抑制栓子形成和治療炎性病癥的組合物，其包含在藥學(xué)上可接受的載體中的本發(fā)明化合物。這些組合物可任選包括抗凝劑、抗血小板劑和溶栓劑?？梢詫⒔M合物加入到血液、血液制品或哺乳動(dòng)物器官中，以便實(shí)現(xiàn)所需的抑制。

本發(fā)明還包括用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物的不穩(wěn)定型心絞痛、難治性心絞痛、心肌梗死、短暫性腦缺血發(fā)作、心房顫動(dòng)、血栓性中風(fēng)、栓塞性中風(fēng)、深靜脈血栓形成、彌散性血管內(nèi)凝血、纖維蛋白的眼部積聚、以及再通血管的再閉塞或再狹窄的組合物，其包含在藥學(xué)上可接受的載體中的本發(fā)明化合物。這些組合物可任選包括抗凝劑、抗血小板劑和溶栓劑。

本發(fā)明還包括通過(guò)將本發(fā)明化合物共價(jià)或非共價(jià)連接到表面來(lái)降低哺乳動(dòng)物表面的血栓形成的方法。

本發(fā)明化合物為因子X(jué)Ia抑制劑，并且可具有例如預(yù)防冠狀動(dòng)脈疾病的治療價(jià)值。所述化合物為選擇性因子X(jué)Ia抑制劑或因子X(jué)Ia和血漿激肽釋放酶的雙重抑制劑。

本發(fā)明化合物可以以藥學(xué)上可接受的鹽的形式施用。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指由藥學(xué)上可接受的無(wú)毒堿或酸制備的鹽，包括無(wú)機(jī)或有機(jī)堿和無(wú)機(jī)或有機(jī)酸。包括在術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”中的堿性化合物的鹽是指本發(fā)明化合物的無(wú)毒鹽，其通常通過(guò)游離堿與合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸反應(yīng)制備。本發(fā)明的堿性化合物的代表性鹽包括但不限于以下：乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、aspirate、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、右旋樟腦磺酸鹽(camsylate)、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二乙基乙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、二鹽酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯月桂硫酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽(esylate)、乙烷磺酸鹽(ethanesulfonate)、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽(gluceptate)、葡庚糖酸鹽(glucoheptanoate)、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、甘油磷酸鹽、對(duì)羥乙酰氨基苯胂酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、己基間苯二酚鹽、海巴明鹽(hydrabamine)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、異煙酸鹽、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、甲磺酸鹽、粘酸鹽、2-萘磺酸鹽、萘磺酸鹽(napsylate)、煙酸鹽、硝酸鹽、N-甲基葡糖胺銨鹽、油酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽(雙羥萘酸鹽)、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、果膠酸鹽(pectinate)、過(guò)硫酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、庚二酸鹽、苯丙酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物、三氟乙酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。此外，當(dāng)本發(fā)明化合物攜帶酸性部分時(shí)，其合適的藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于衍生自無(wú)機(jī)堿的鹽，包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳、亞錳、鉀、鈉、鋅等。特別優(yōu)選的是銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽和鈉鹽。衍生自藥學(xué)上可接受的有機(jī)無(wú)毒堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺、環(huán)胺、二環(huán)己基胺和堿性離子交換樹(shù)脂，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N,N-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、組氨酸、海巴明、異丙胺、賴(lài)氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、多胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。還包括堿性含氮基團(tuán)，其可被諸如以下的試劑季銨化：低級(jí)烷基鹵化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如二甲酯、二乙酯、二丁酯；和硫酸二戊基酯；長(zhǎng)鏈鹵化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物如芐基和苯乙基溴化物等。

這些鹽可以通過(guò)已知的方法獲得，例如，通過(guò)將本發(fā)明化合物與等量的含有所需的酸、堿等的溶液混合，然后通過(guò)過(guò)濾鹽或蒸餾出溶劑來(lái)收集所需的鹽。本發(fā)明化合物及其鹽可以與溶劑如水、乙醇或甘油形成溶劑合物。本發(fā)明化合物可以形成酸加成鹽并根據(jù)側(cè)鏈的取代基的類(lèi)型同時(shí)與堿形成鹽。

本發(fā)明包括式I和式Ia化合物的所有立體異構(gòu)體形式。除非另有說(shuō)明，存在于式I和式Ia化合物中的不對(duì)稱(chēng)中心均可以彼此獨(dú)立地具有(R)構(gòu)型或(S)構(gòu)型。當(dāng)與手性碳的鍵在本發(fā)明的結(jié)構(gòu)式中表示為直線時(shí)，應(yīng)理解手性碳的(R)和(S)構(gòu)型以及因此兩種對(duì)映異構(gòu)體及其混合物都包含在該式中。類(lèi)似地，當(dāng)記載化合物名稱(chēng)而沒(méi)有手性碳的手性命名時(shí)，應(yīng)理解，手性碳的(R)和(S)構(gòu)型以及因此單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體及其混合物都被該名稱(chēng)包括。在獲得這些立體異構(gòu)體或混合物的實(shí)施例中可以鑒定特定立體異構(gòu)體或其混合物的制備，但這決不限制所有立體異構(gòu)體及其混合物包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

本發(fā)明包括所有可能的對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體以及兩種或更多種立體異構(gòu)體的混合物，例如所有比例的對(duì)映異構(gòu)體和/或非對(duì)映異構(gòu)體的混合物。因此，本發(fā)明的主題是左旋和右旋對(duì)映體形式的對(duì)映異構(gòu)體純形式、外消旋體形式和所有比例的兩種對(duì)映異構(gòu)體混合物的形式的對(duì)映異構(gòu)體。在順式/反式異構(gòu)的情況下，本發(fā)明包括順式和反式兩種形式以及這些形式的所有比例的混合物。如果需要的話(huà)，可以通過(guò)常規(guī)方法，例如通過(guò)色譜或結(jié)晶分離混合物，通過(guò)使用立體化學(xué)均勻的原料用于合成或通過(guò)立體選擇性合成來(lái)進(jìn)行單獨(dú)的立體異構(gòu)體的制備。任選地，可以在分離立體異構(gòu)體之前進(jìn)行衍生化。立體異構(gòu)體混合物的分離可以在合成式I或式Ia化合物期間的中間步驟中進(jìn)行，或者可以在最終的外消旋產(chǎn)物上進(jìn)行。絕對(duì)立體化學(xué)可以通過(guò)結(jié)晶產(chǎn)物或結(jié)晶中間體的X射線晶體學(xué)確定，如果需要的話(huà)，其用含有已知構(gòu)型的立體中心的試劑衍生化。當(dāng)本發(fā)明化合物能夠互變異構(gòu)時(shí)，所有單獨(dú)的互變異構(gòu)體及其混合物都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明包括所有這些異構(gòu)體，以及這些外消旋體、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體和互變異構(gòu)體及其混合物的鹽、溶劑合物(包括水合物)和溶劑化鹽。

在本發(fā)明化合物中，原子可以顯示出它們的天然同位素豐度，或者可以將一個(gè)或多個(gè)原子人工富集在具有相同原子序數(shù)，但原子量或質(zhì)量數(shù)不同于自然界中主要發(fā)現(xiàn)的原子量或質(zhì)量數(shù)的特定同位素中。本發(fā)明意在包括具體和一般描述的化合物的所有合適的同位素變體。例如，氫(H)的不同同位素形式包括氕(¹H)和氘(²H)。氕是自然界中發(fā)現(xiàn)的主要的氫同位素。氘的富集可提供某些治療優(yōu)點(diǎn)，例如增加體內(nèi)半衰期或降低劑量需要，或可提供可用作表征生物樣品的標(biāo)準(zhǔn)的化合物?？梢圆挥眠^(guò)度實(shí)驗(yàn)，通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)，或通過(guò)與本文的一般方法方案和實(shí)施例中描述的方法類(lèi)似的方法，使用合適的同位素富集的試劑和/或中間體來(lái)制備同位素富集的化合物。

當(dāng)任何變量(例如R⁴等)在任何成分中出現(xiàn)多于一次時(shí)，其在每次出現(xiàn)時(shí)的定義獨(dú)立于其它每次出現(xiàn)時(shí)的定義。此外，取代基和變量的組合是允許的，只要這種組合產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。從取代基畫(huà)到環(huán)系中的線表示所示的鍵可以連接到任何可取代的環(huán)原子。如果環(huán)系統(tǒng)是雙環(huán)的，則意味著該鍵連接至雙環(huán)部分的任一環(huán)上的任何合適的原子。

應(yīng)理解，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以將一個(gè)或多個(gè)硅(Si)原子摻入本發(fā)明化合物中以代替一個(gè)或多個(gè)碳原子，以提供化學(xué)穩(wěn)定的化合物，并且其可以容易地通過(guò)本領(lǐng)域已知的技術(shù)由容易獲得的原料合成。當(dāng)比較類(lèi)似的C元素和Si元素鍵時(shí)，碳和硅的共價(jià)半徑不同導(dǎo)致鍵距離和空間排列的差異。當(dāng)與碳相比時(shí)，這些差異導(dǎo)致含硅化合物的尺寸和形狀的微小變化。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解，大小和形狀差異可導(dǎo)致效力、溶解性、脫靶活性缺乏、包裝性質(zhì)等的微小或顯著變化。(Diass，J. O.等人，Organometallics (2006) 5:1188-1198；Showell，G.A.等人，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2006) 16:2555-2558)。

應(yīng)理解，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以選擇本發(fā)明化合物上的取代基和取代模式，以提供化學(xué)穩(wěn)定的并且可以容易地通過(guò)本領(lǐng)域已知的技術(shù)以及下述那些方法由容易獲得的原料合成的化合物。如果取代基本身被多于一個(gè)基團(tuán)取代，應(yīng)理解這些多個(gè)基團(tuán)可以在相同的碳或不同的碳上，只要得到穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。短語(yǔ)(被一個(gè)或多個(gè)取代基)“任選取代的”應(yīng)理解為是指所述基團(tuán)未被取代或可以被一個(gè)或多個(gè)取代基取代。

此外，本發(fā)明化合物可以以無(wú)定形形式和/或一種或多種結(jié)晶形式存在，并且因此式I和式Ia化合物的所有無(wú)定形和結(jié)晶形式及其混合物旨在包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。此外，本發(fā)明的一些化合物可與水形成溶劑合物(即水合物)或與普通有機(jī)溶劑形成溶劑合物。本發(fā)明化合物的這種溶劑合物和水合物，特別是藥學(xué)上可接受的溶劑合物和水合物，以及未溶劑化和無(wú)水形式，同樣包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

提及本發(fā)明化合物作為具體式或?qū)嵤┓桨?例如式I或式Ia)或本文描述或要求保護(hù)的任何其它通用結(jié)構(gòu)式或具體化合物的那些化合物，旨在涵蓋落入所述式或?qū)嵤┓桨阜秶鷥?nèi)的具體的一個(gè)或多個(gè)化合物，包括其鹽，特別是藥學(xué)上可接受的鹽，這些化合物的溶劑合物及其溶劑化鹽形式，其中這些形式是可能的，除非另有說(shuō)明。

此外，在本發(fā)明化合物中存在羧酸(-COOH)或醇基的情況下，可以使用羧酸衍生物的藥學(xué)上可接受的酯，例如甲基、乙基或新戊酰氧基甲基酯，或醇的酰基衍生物，例如O-乙酰基、O-新戊酰基、O-苯甲酰基和O-氨基?；?。包括本領(lǐng)域已知的用于改變用作緩釋或前藥制劑的溶解性或水解特性的那些酯和?；?/p>

如果式I或式Ia化合物在分子中同時(shí)含有酸性和堿性基團(tuán)，除了所提及的鹽形式外，本發(fā)明還包括內(nèi)鹽或內(nèi)銨鹽(兩性離子)?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法由式I和式Ia化合物獲得鹽，例如通過(guò)在溶劑或分散劑中與有機(jī)或無(wú)機(jī)酸或堿組合，或通過(guò)與其它鹽進(jìn)行陰離子交換或陽(yáng)離子交換。本發(fā)明還包括式I和式Ia化合物的所有鹽，由于低的生理相容性，它們不直接適用于藥物，而是可例如用作化學(xué)反應(yīng)或制備藥學(xué)上可接受的鹽的中間體。

導(dǎo)致體內(nèi)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物的本發(fā)明化合物的任何藥學(xué)上可接受的前藥修飾也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，酯可以任選通過(guò)可用的羧酸基團(tuán)的酯化或通過(guò)在化合物中可用的羥基上形成酯來(lái)制備。類(lèi)似地，可以制備不穩(wěn)定的酰胺?？梢灾苽浔景l(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的酯或酰胺以作為前藥起作用，其可以水解回到酸(或-COO-，取決于發(fā)生轉(zhuǎn)化時(shí)的流體或組織的pH)或羥基形式，特別是在體內(nèi)，并因此包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。藥學(xué)上可接受的前藥修飾的實(shí)例包括但不限于-C_1-6烷基酯和用苯基酯取代的-C_1-6烷基。

因此，本文描述和要求保護(hù)的通用結(jié)構(gòu)式、實(shí)施方案和具體化合物內(nèi)的化合物包括其鹽、所有可能的立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體、物理形式(例如，無(wú)定形和結(jié)晶形式)、溶劑合物和水合物形式以及這些形式的任何組合，以及其鹽、其前藥形式和其前藥形式的鹽，其中這些形式是可能的，除非另有指出。

除非本文另有指出，否則術(shù)語(yǔ)“烷基”旨在包括具有指定數(shù)目碳原子的支鏈和直鏈飽和脂族烴基。在整個(gè)說(shuō)明書(shū)中使用烷基的常用縮寫(xiě)，例如，甲基可以由包括“Me”或CH₃的常規(guī)縮寫(xiě)或作為末端基團(tuán)的延伸鍵的符號(hào)例如表示，乙基可以由“Et”或CH₂CH₃表示，丙基可以由“Pr”或CH₂CH₂CH₃表示，丁基可以由“Bu”或CH₂CH₂CH₂CH₃表示等。“C_1-4烷基”(或“C₁-C₄烷基”)例如是指具有指定數(shù)目碳原子的直鏈或支鏈烷基，包括所有異構(gòu)體。例如，結(jié)構(gòu)

和

具有等同含義。C_1-4烷基包括正、異、仲和叔丁基，正和異丙基，乙基和甲基。如果沒(méi)有指定數(shù)目，1-4個(gè)碳原子意圖用于直鏈或支鏈烷基。

除非本文另有指出，“烷醇”旨在包括具有指定數(shù)目碳原子的脂肪醇，例如甲醇、乙醇、丙醇等，其中-OH基團(tuán)連接在任何脂族碳上，例如，丙-1-醇、丙-2-醇等。

除非另有指出，術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指具有指定數(shù)目碳原子的單環(huán)或雙環(huán)飽和脂族烴基，并且可包括橋連和稠合體系。例如，“環(huán)烷基”包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、雙環(huán)[2.2.2]辛基等。

除非另有指出，術(shù)語(yǔ)“鹵素(halogen或halo)”是指氟、氯、溴或碘。

除非另有指出，本文所用的術(shù)語(yǔ)“雜芳基”表示在每個(gè)環(huán)中至多10個(gè)原子的穩(wěn)定的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的，并且至少一個(gè)環(huán)含有1至4個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子。雜芳基可以包括雙環(huán)稠環(huán)體系，其中至少一個(gè)環(huán)含有1至4個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子，并且其中一個(gè)環(huán)是芳族的并且一個(gè)是飽和的。在該定義范圍內(nèi)的雜芳基包括但不限于：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、吲哚啉基(indolinyl)、吲哚基、吲哚嗪基、吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、萘啶基、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、異噁唑啉、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噁唑基、二氫吲哚基(dihydroindolyl)、二氫喹啉基、亞甲二氧基苯、苯并噻唑基、苯并噻吩基、喹啉基、異喹啉基、噁唑基、四氫喹啉和3-氧代-3,4二氫-2N苯并[b][1,4]噻嗪。如果雜芳基含有氮原子，應(yīng)理解其相應(yīng)的N-氧化物也包括在該定義中。

除非另有指出，否則本文所用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”旨在表示5至10元非芳族環(huán)，除非另有說(shuō)明，含有1至4個(gè)選自O(shè)、N、S、SO或SO₂的雜原子并包括雙環(huán)基團(tuán)。因此，“雜環(huán)基”包括但不限于以下：哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基、二氫哌啶基、四氫噻吩基等。如果雜環(huán)含有氮，應(yīng)理解其相應(yīng)的N-氧化物也包括在該定義中。

除非另有指出，術(shù)語(yǔ)“芳基”旨在表示在每個(gè)環(huán)中至多12個(gè)原子的任何穩(wěn)定的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳族的。這種芳基元素的實(shí)例包括苯基、萘基、四氫萘基和茚滿(mǎn)基。

“Celite?”(Fluka)硅藻土(diatomite)是硅藻土(diatomaceous earth)，并且可以被稱(chēng)為“硅藻土(celite)”。

除非本文另有指出，否則含有取代基變量如下面的變量“R”的結(jié)構(gòu)：

其被描繪為不連接至任何一個(gè)特定雙環(huán)碳原子，表示其中變量可任選連接至任何雙環(huán)碳原子的結(jié)構(gòu)。例如，上述結(jié)構(gòu)中所示的變量R可以連接至6個(gè)雙環(huán)碳原子i、ii、iii、iv、v或vi中的任一個(gè)。

除非本文另有指出，雙環(huán)系統(tǒng)包括稠環(huán)系統(tǒng)，其中兩個(gè)環(huán)共享兩個(gè)原子，以及螺環(huán)系統(tǒng)，其中兩個(gè)環(huán)共享一個(gè)原子。

本發(fā)明還包括充當(dāng)前藥和溶劑合物的式I和式Ia化合物的衍生物。在施用于患者之后，前藥通過(guò)正常代謝或化學(xué)過(guò)程，例如通過(guò)在血液中水解，在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為式1或式Ia化合物。這樣的前藥包括顯示增強(qiáng)的生物利用度、組織特異性和/或細(xì)胞遞送的那些，以改善式I或式Ia化合物的藥物吸收。這種前藥的作用可以由物理化學(xué)性質(zhì)如親脂性、分子量、電荷和確定藥物滲透性質(zhì)的其它物理化學(xué)性質(zhì)的改變引起。

由能夠形成鹽的式I和式Ia化合物(包括其立體異構(gòu)形式)制備藥學(xué)上可接受的鹽以本身已知的方式進(jìn)行。使用堿性試劑如氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、醇鹽和氨或有機(jī)堿，例如三甲胺或三乙胺、乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺、氨丁三醇或堿性氨基酸，例如賴(lài)氨酸、鳥(niǎo)氨酸或精氨酸，式I和式Ia化合物形成穩(wěn)定的堿金屬、堿土金屬或任選取代的銨鹽。如果式I和式Ia化合物具有堿性基團(tuán)，也可以使用強(qiáng)酸制備穩(wěn)定的酸加成鹽。為此，無(wú)機(jī)和有機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、半硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、4-溴苯磺酸、環(huán)己基氨基磺酸、三氟甲磺酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、甘油磷酸、乳酸、蘋(píng)果酸、己二酸、檸檬酸、富馬酸、馬來(lái)酸、葡糖酸、葡萄糖醛酸、棕櫚酸或三氟乙酸是合適的。

本發(fā)明還涉及含有至少一種式I或式Ia化合物和/或式I或式Ia化合物的藥學(xué)上可接受的鹽和/或任選的式I或式Ia化合物的立體異構(gòu)形式或式I或式Ia化合物的立體異構(gòu)形式的藥學(xué)上可接受的鹽以及藥學(xué)上合適的和藥學(xué)上可接受的媒介物、添加劑和/或其它活性物質(zhì)和助劑的藥物。

抗凝治療指示用于治療和預(yù)防多種血栓形成病狀，特別是冠狀動(dòng)脈和腦血管疾病。在這一領(lǐng)域有經(jīng)驗(yàn)的人很容易知道需要抗凝治療的情況。本文使用的術(shù)語(yǔ)“患者”是指哺乳動(dòng)物，例如靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、人、羊、馬、牛、豬、狗、貓、大鼠和小鼠。

因子X(jué)Ia或雙重因子X(jué)Ia/血漿激肽釋放酶抑制不僅可用于具有血栓形成病狀的個(gè)體的抗凝治療，而且每當(dāng)需要抑制血液凝固時(shí)是有用的，例如防止儲(chǔ)存的全血凝固和防止在用于測(cè)試或儲(chǔ)存的其它生物樣品中凝固。因此，因子X(jué)Ia或雙重因子X(jué)Ia/血漿激肽釋放酶抑制劑可以加入到或接觸含有或疑似含有凝血酶的任何培養(yǎng)基，并且其中希望抑制血液凝固，例如當(dāng)哺乳動(dòng)物的血液與選自血管移植物、支架、矯形假體、心臟修復(fù)物和體外循環(huán)系統(tǒng)的材料接觸時(shí)。

本發(fā)明化合物可用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的靜脈血栓栓塞(例如，由分離的血栓阻塞或閉塞靜脈；由分離的血栓阻塞或閉塞肺動(dòng)脈)、心源性血栓栓塞(例如，由分離的血栓阻塞或閉塞心臟)、動(dòng)脈血栓形成(例如，在動(dòng)脈內(nèi)形成血栓，其可能導(dǎo)致由動(dòng)脈供應(yīng)的組織梗塞)、動(dòng)脈粥樣硬化(例如，以不規(guī)則分布的脂質(zhì)沉積為特征的動(dòng)脈硬化)，以及用于降低與血液接觸的裝置凝結(jié)血液的傾向。

可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的靜脈血栓栓塞的實(shí)例包括靜脈阻塞、肺動(dòng)脈阻塞(肺栓塞)、深靜脈血栓形成、與癌癥和癌癥化療相關(guān)的血栓形成、血栓形成性疾病遺傳的血栓形成如蛋白C缺乏、蛋白S缺乏、抗凝血酶III缺乏和因子V萊頓，以及由獲得性血栓形成性病癥例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(炎性結(jié)締組織病)引起的血栓形成。同樣關(guān)于靜脈血栓栓塞，本發(fā)明化合物可用于保持留置導(dǎo)管的通暢。

可以用本發(fā)明化合物治療或預(yù)防的心源性血栓栓塞的實(shí)例包括血栓栓塞性中風(fēng)(導(dǎo)致與腦血液供應(yīng)受損有關(guān)的神經(jīng)性痛苦的分離性血栓)、與心房顫動(dòng)相關(guān)的心源性血栓栓塞(上心室肌原纖維的快速、不規(guī)律抽搐)、與假體心臟瓣膜例如機(jī)械心臟瓣膜相關(guān)的心源性血栓栓塞以及與心臟病相關(guān)的心源性血栓栓塞。

動(dòng)脈血栓形成的實(shí)例包括不穩(wěn)定型心絞痛(冠狀動(dòng)脈起源的胸部嚴(yán)重的收縮性疼痛)、心肌梗死(由供血不足引起的心肌細(xì)胞死亡)、缺血性心臟病(由于供血阻塞(例如通過(guò)動(dòng)脈狹窄)引起的局部貧血)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)期間或之后的再閉塞、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)后的再狹窄、冠狀動(dòng)脈旁路移植的閉塞和閉塞性腦血管疾病。同樣關(guān)于動(dòng)脈血栓形成，本發(fā)明化合物可用于保持動(dòng)靜脈插管的通暢。

動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)例包括動(dòng)脈硬化。

本發(fā)明化合物還可以是激肽釋放酶抑制劑，并且特別可用于治療遺傳性血管水腫。

與血液接觸的裝置的實(shí)例包括血管移植物、支架、矯形假體、心臟修復(fù)物和體外循環(huán)系統(tǒng)。

根據(jù)本發(fā)明的藥物可以通過(guò)口服、吸入、直腸或經(jīng)皮施用或通過(guò)皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)注射施用。優(yōu)選口服施用。用式(I)化合物和與體內(nèi)血液接觸的其它表面涂覆支架是可能的。

本發(fā)明還涉及制備藥物的方法，其包括使用藥學(xué)上合適的和藥學(xué)上可接受的載體和任選的其它合適的活性物質(zhì)、添加劑或助劑將至少一種式(I)化合物引入合適的施用形式。

合適的固體或蓋侖制劑形式是例如顆粒、粉末、包衣片劑、片劑、(微)膠囊、栓劑、糖漿、果汁、懸浮液、乳劑、滴劑或可注射溶液和具有活性物質(zhì)的延長(zhǎng)釋放的制劑，在所述制劑中使用常規(guī)賦形劑，例如媒介物、崩解劑、粘合劑、包衣劑、溶脹劑、助流劑或潤(rùn)滑劑、調(diào)味劑、甜味劑和增溶劑?？梢蕴峒暗某Ｓ弥鷦┦翘妓徭V、二氧化鈦、乳糖、甘露醇和其它糖、滑石、乳糖、明膠、淀粉、纖維素及其衍生物、動(dòng)物和植物油如魚(yú)肝油、向日葵、花生或芝麻油、聚乙二醇和溶劑，例如無(wú)菌水和一元醇或多元醇如甘油。

根據(jù)多種因素選擇利用因子X(jué)Ia抑制劑或雙因子X(jué)Ia/血漿激肽釋放酶抑制劑的劑量方案，包括患者的類(lèi)型、物種、年齡、體重、性別和醫(yī)學(xué)狀況；待治療病狀的嚴(yán)重程度；施用途徑；患者的腎和肝功能；和所用的具體化合物或其鹽。普通技術(shù)的醫(yī)師或獸醫(yī)可以容易地確定和開(kāi)出預(yù)防、對(duì)抗或阻止病狀進(jìn)展所需的藥物的有效量。

當(dāng)用于指示效應(yīng)時(shí)，因子X(jué)Ia抑制劑或雙重因子X(jué)Ia/血漿激肽釋放酶抑制劑的口服劑量范圍為約0.01mg/kg體重/天(mg/kg/天)至約30mg/kg/天，優(yōu)選0.025-7.5mg/kg/天，更優(yōu)選0.1-2.5mg/kg/天，最優(yōu)選0.1-0.5mg/kg/天(除非另有指出，活性成分的量以游離堿計(jì))。例如，80kg患者將接受約0.8mg/天至2.4g/天，優(yōu)選2-600mg/天，更優(yōu)選8-200mg/天，最優(yōu)選8-40mg/kg/天。因此，適當(dāng)制備的用于每天一次施用的藥物將含有0.8mg至2.4g，優(yōu)選2mg至600mg，更優(yōu)選8mg至200mg，最優(yōu)選8mg至40mg，例如，8mg、10mg、20mg和40mg。有利地，因子X(jué)Ia抑制劑可以每天兩次、三次或四次的分劑量施用。對(duì)于每天兩次施用，適當(dāng)制備的藥物將含有0.4mg至4g，優(yōu)選1mg至300mg，更優(yōu)選4mg至100mg，最優(yōu)選4mg至20mg，例如4mg、5mg、10mg和20mg。

靜脈內(nèi)，患者將接受足以遞送0.025-7.5mg/kg/天，優(yōu)選0.1-2.5mg/kg/天，更優(yōu)選0.1-0.5mg/kg/天的量的活性成分。這樣的量可以以許多合適的方式施用，例如，在一個(gè)延長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)或每天幾次施用大體積的低濃度的活性成分，在短時(shí)間段內(nèi)例如每天一次施用低體積的高濃度的活性成分。通常，可以制備常規(guī)靜脈內(nèi)制劑，其含有約0.01-1.0mg/mL，例如0.1mg/mL、0.3mg/mL和0.6mg/mL濃度的活性成分，并以每天0.01mL/kg患者體重至10.0mL/kg患者體重，例如0.1mL/kg、0.2mL/kg、0.5mL/kg的量施用。在一個(gè)實(shí)例中，每天兩次接受8mL的活性成分濃度為0.5mg/mL的靜脈內(nèi)制劑的80kg患者，每天接受8mg活性成分。葡萄糖醛酸、L-乳酸、乙酸、檸檬酸或在靜脈內(nèi)施用可接受的pH范圍內(nèi)具有合理緩沖能力的任何藥學(xué)上可接受的酸/共軛堿可用作緩沖劑。取決于待施用的藥物的溶解度，適當(dāng)?shù)木彌_液和制劑pH的選擇容易由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員進(jìn)行。

式I和式Ia化合物可以作為單一療法和與其它治療劑組合施用，包括抗血栓形成劑(抗凝劑和血小板聚集抑制劑)、溶栓劑(纖溶酶原激活劑)、其它纖溶酶原活性物質(zhì)、降壓藥、血糖調(diào)節(jié)劑、降脂劑和抗心律失常藥。

因子X(jué)Ia抑制劑或雙重因子X(jué)Ia/血漿激肽釋放酶抑制劑也可以與合適的抗凝劑共同施用，所述抗凝劑包括但不限于其它因子X(jué)Ia抑制劑、凝血酶抑制劑、凝血酶受體拮抗劑、因子VIIa抑制劑、因子X(jué)a抑制劑、因子IXa抑制劑、因子X(jué)IIa抑制劑、二磷酸腺苷抗血小板劑(例如，P2Y12拮抗劑)、纖維蛋白原受體拮抗劑(例如，用于治療或預(yù)防不穩(wěn)定型心絞痛或預(yù)防血管成形術(shù)后的再閉塞和再狹窄)、其它抗凝劑例如阿司匹林和溶栓劑例如纖溶酶原激活劑或鏈激酶以在治療各種血管病變中實(shí)現(xiàn)協(xié)同作用。這樣的抗凝劑包括例如阿哌沙班、達(dá)比加群、坎格雷洛、替卡格雷、沃拉帕沙、氯吡格雷、依度沙班、米泊美生、普拉格雷、利伐沙班和semuloparin。例如，患有冠狀動(dòng)脈疾病的患者和經(jīng)受血管成形術(shù)程序的患者將受益于纖維蛋白原受體拮抗劑和凝血酶抑制劑的共同施用。因子X(jué)Ia抑制劑可以在血栓形成之后首先施用，并且此后施用組織纖溶酶原激活劑或其它纖溶酶原激活劑。

或者或另外，一種或多種另外的藥理活性劑可以與本發(fā)明化合物組合施用。另外的一種活性劑(或多種活性劑)旨在表示在體內(nèi)有活性的一種藥物活性劑(或多種活性劑)，包括施用后轉(zhuǎn)化為藥學(xué)活性形式的前藥，其不同于本發(fā)明化合物，并且還包括所述另外的活性劑的游離酸、游離堿和藥學(xué)上可接受的鹽，當(dāng)這些形式以商業(yè)銷(xiāo)售或另外化學(xué)上可能時(shí)。通常，任何合適的另外的一種或多種活性劑，包括但不限于抗高血壓劑、另外的利尿劑、抗動(dòng)脈粥樣硬化劑例如脂質(zhì)修飾化合物、抗糖尿病劑和/或抗肥胖劑，可以在單一劑量制劑中與本發(fā)明化合物以任何組合使用(固定劑量藥物組合)，或可以以一個(gè)或多個(gè)分開(kāi)的劑量制劑施用于患者，其允許同時(shí)或順序施用活性劑(共同施用單獨(dú)的活性劑)?？梢允褂玫牧硗獾幕钚詣┑膶?shí)例包括但不限于血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(例如，阿拉普利、貝那普利、卡托普利、西洛普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉、福辛普利、咪達(dá)普利、賴(lài)諾普利、莫維普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、螺普利、替莫普利或群多普利)；血管緊張素II受體拮抗劑，也稱(chēng)為血管緊張素受體阻斷劑或ARB，其可以是游離堿、游離酸、鹽或前藥形式，如阿齊沙坦例如阿齊沙坦酯鉀(EDARBI?)、坎地沙坦例如坎地沙坦西酯(ATACAND?)、依普沙坦例如甲磺酸依普沙坦(TEVETAN?)、依貝沙坦(AVAPRO?)、氯沙坦例如氯沙坦鉀(COZAAR?)、奧美沙坦例如奧美沙坦酯(BENICAR?)、替米沙坦(MICARDIS?)、纈沙坦(DIOVAN?)和與噻嗪類(lèi)利尿劑如氫氯噻嗪(例如，HYZAAR?、DIOVAN HCT?、ATACAND HCT?等)組合使用的這些藥物中的任一種；保鉀利尿劑如鹽酸阿米洛利、螺內(nèi)酯、依普利酮、氨苯蝶啶，各自具有或不具有HCTZ；中性肽鏈內(nèi)切酶抑制劑(例如，塞奧芬和磷酸阿米酮)；醛固酮拮抗劑；醛固酮合酶抑制劑；腎素抑制劑；enalkrein；RO 42-5892；A 65317；CP 80794；ES 1005；ES 8891；SQ 34017；阿利吉侖(2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-氨基甲?；?2-甲基丙基)-5-氨基-4-羥基-2,7-二異丙基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)-苯基]-辛酰胺半富馬酸鹽) SPP600、SPP630和SPP635)；內(nèi)皮素受體拮抗劑；血管擴(kuò)張劑(例如硝普鹽)；鈣通道阻滯劑(例如，氨氯地平、硝苯地平、維拉帕米、地爾硫卓、非洛地平、戈洛帕米、尼魯?shù)仄?、尼莫地平、尼卡地?；鉀通道激活劑(例如，尼可地爾、吡那地爾、克羅卡林、米諾地爾、aprilkalim、氯普唑侖)；交感神經(jīng)阻滯藥(sympatholitics)、β-腎上腺素能阻滯藥(例如，醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、卡維地洛、美托洛爾、酒石酸美托洛爾、納多洛爾、普萘洛爾、索他洛爾、噻嗎洛爾)；α腎上腺素能阻斷藥(例如，多沙唑嗪、哌唑嗪或α甲基多巴)；中樞α腎上腺素能激動(dòng)劑；外周血管擴(kuò)張劑(例如肼屈嗪)；降脂劑，例如HMG-CoA還原酶抑制劑，例如辛伐他汀和洛伐他汀，其以?xún)?nèi)酯前藥形式作為ZOCOR?和MEVACOR?銷(xiāo)售和在施用后起抑制劑作用，以及二羥基開(kāi)環(huán)酸HMG-CoA還原酶抑制劑的藥學(xué)上可接受的鹽，如阿托伐他汀(特別是以LIPITOR?銷(xiāo)售的鈣鹽)、羅蘇伐他汀(特別是以CRESTOR?銷(xiāo)售的鈣鹽)、普伐他汀(特別是以PRAVACHOL?銷(xiāo)售的鈉鹽)和氟伐他汀(特別是以LESCOL?銷(xiāo)售的鈉鹽)；膽固醇吸收抑制劑例如依澤替米貝(ZETIA?)，和與任何其它降脂劑例如上述HMG-CoA還原酶抑制劑，特別是與辛伐他汀(VYTORIN?)或與阿托伐他汀鈣組合的依澤替米貝；立即釋放或控釋形式的煙酸，特別是與DP拮抗劑如拉羅皮蘭和/或與HMG-CoA還原酶抑制劑組合的煙酸；煙酸受體激動(dòng)劑如阿昔莫司和阿昔呋喃，以及煙酸受體部分激動(dòng)劑；代謝改變劑，包括胰島素敏化劑和相關(guān)化合物，其用于治療糖尿病，例如雙胍類(lèi)(例如，二甲雙胍)、氯茴苯酸類(lèi)(例如，瑞格列奈、那格列奈)、磺脲類(lèi)(例如，氯磺丙脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲)、噻唑烷二酮類(lèi)也稱(chēng)為格列酮類(lèi)(例如，吡格列酮、羅格列酮)、α葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖、米格列醇)、二肽基肽酶抑制劑(例如，西他列汀(JANUVIA?)、阿格列汀、維格列汀、沙格列汀、利格列汀、度格列汀(dutogliptin)、吉格列汀)、麥角生物堿(例如，溴麥角環(huán)肽)、組合藥物如JANUMET?(西他列汀與二甲雙胍)和可注射的糖尿病藥物如艾塞那肽和醋酸普蘭林肽；或與有益于預(yù)防或治療上述疾病的其它藥物，包括但不限于二氮嗪；并且包括化學(xué)上可能的游離酸、游離堿和藥學(xué)上可接受的鹽形式、前藥形式例如酯，和上述藥劑的前藥的鹽。提供上面提及的藥物的商標(biāo)名稱(chēng)是為了舉例說(shuō)明市售形式的活性劑；這樣的藥物可以用于單獨(dú)劑型中，其用于與本發(fā)明化合物同時(shí)或順序施用，或其中的活性劑可以用于包括本發(fā)明化合物的固定劑量藥物組合中。

與其它合適的抗血小板劑、抗凝劑或溶栓劑組合的本發(fā)明的因子X(jué)Ia抑制劑或因子X(jué)Ia/血漿激肽釋放酶抑制劑的典型劑量可以與不共同施用另外的抗血小板劑、抗凝劑或溶栓劑的情況下施用的因子X(jué)Ia抑制劑的那些劑量相同，或者可以基本上少于不共同施用另外的抗血小板劑、抗凝劑或溶栓劑的情況下施用的凝血酶抑制劑的那些劑量，這取決于患者的治療需要。

所述化合物以治療有效量施用于哺乳動(dòng)物?！爸委熡行Я俊笔侵副景l(fā)明化合物的量，當(dāng)單獨(dú)或與另外的治療劑組合施用于哺乳動(dòng)物時(shí)，其有效治療(即預(yù)防、抑制或改善)血栓栓塞性和/或炎性疾病狀況或治療宿主中疾病的進(jìn)展。

本發(fā)明化合物優(yōu)選以治療有效量單獨(dú)施用于哺乳動(dòng)物。然而，本發(fā)明化合物還可以以治療有效量與如下定義的另外的治療劑組合施用于哺乳動(dòng)物。當(dāng)以組合施用時(shí)，化合物的組合優(yōu)選但不一定是協(xié)同組合。例如由Chou and Talalay，Adv. Enzyme Regul.1984，22，27-55所述，當(dāng)組合施用時(shí)化合物的作用(在該情況下，為抑制期望靶標(biāo))大于當(dāng)作為單一試劑單獨(dú)施用時(shí)每種化合物的加和作用時(shí)，發(fā)生協(xié)同作用。通常，在化合物非最佳濃度下最明顯地顯示協(xié)同作用。協(xié)同作用可以是與單獨(dú)的組分相比具有較低的細(xì)胞毒性、增加的抗凝作用或組合的一些其他有益作用。

“組合施用”或“聯(lián)合治療”是指將本發(fā)明化合物和一種或多種另外的治療劑同時(shí)施用于正在治療的哺乳動(dòng)物。當(dāng)組合施用時(shí)，每種組分可以同時(shí)施用或在不同時(shí)間點(diǎn)以任何順序依次施用。因此，每種組分可以分開(kāi)施用，但在時(shí)間上足夠接近，以提供所需的治療效果。

本發(fā)明的范圍不限于實(shí)施例中公開(kāi)的具體實(shí)施方案，其旨在作為本發(fā)明的幾個(gè)方面的說(shuō)明，并且功能上等同的任何實(shí)施方案在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)際上，除了本文所示和所述的那些之外，本發(fā)明的各種修改對(duì)于相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員將是顯而易見(jiàn)的，并且旨在落入所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。

為了本說(shuō)明書(shū)的目的，以下縮寫(xiě)具有所示的含義：

縮寫(xiě)列表：

ACN = 乙腈

DAST = 二乙基氨基三氟化硫

DMF = 二甲基甲酰胺

DMS = 硫酸二甲酯

DCM = 二氯甲烷

dppf = 1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵

EtOAc = 乙酸乙酯

EtOH = 乙醇

RP HPLC = 反相高壓液相色譜

[Ir(dF-CF3-ppy)2(dtbbpy)]PF6 = [4,4'-雙(叔丁基)-2,2'-聯(lián)吡啶]雙[3,5-二氟-2-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]苯基]銥(III)六氟磷酸鹽

LDA = 二異丙基氨基鋰

LHMDS = 六甲基二硅基胺基鋰

LiOH = 氫氧化鋰

Me = 甲基

mCPBA = 間氯過(guò)氧苯甲酸

PCC = 氯鉻酸吡啶鎓

Ph = 苯基

rt或RT = 室溫

THF = 四氫呋喃

Sat. = 飽和的

SFC = 超臨界流體色譜

SM = 原料

TFA = 三氟乙酸

Vac = 真空

HATU = 2-(1H-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽甲銨鹽。

此外，TLC為薄層色譜；Ts為甲苯磺酰基；UV為紫外線；W為瓦特；wt.%為重量百分比；x g為重力加速度倍數(shù)；αD為偏振光在589nm的比旋光度；℃為攝氏度；%w/v為前一種試劑的重量相對(duì)于后一種試劑的體積的百分比。

LCMS條件：柱：SUPELCO Ascentis Express C18 3x100mm，2.7um。溶劑系統(tǒng)：A-0.05% TFA的水溶液和B-0.05% TFA的乙腈溶液。

梯度條件：在3.5分鐘內(nèi)10%B至99%B。

一般方案

<步驟1-1> 由式(i-b)表示的化合物可以在堿如雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰(LHMDS)、二異丙基氨基鋰(LDA)或氫化鈉存在下，在對(duì)反應(yīng)無(wú)活性的溶劑如四氫呋喃或甲苯中，在-78℃至室溫的溫度下，通過(guò)熟知的方法或類(lèi)似于公開(kāi)的文獻(xiàn)(例如，Hajri，Majdi；Blondelle，Clement；Martinez，Agathe；Vasse，Jean-Luc；Szymoniak，Jan Tetrahedron Letters (2013)，54(8)，1029-1031)中描述的方法，使市售的(i-a)與適當(dāng)取代的烷基化試劑如烷基鹵、甲烷磺酸烷基酯或?qū)妆交撬嵬榛シ磻?yīng)來(lái)制備。

<步驟1-2> 由式(i-c)表示的化合物可以在含水和有機(jī)共溶劑如甲醇、乙腈和四氫呋喃的水性溶劑中，通過(guò)熟知的方法或類(lèi)似于公開(kāi)的文獻(xiàn)(例如，Huang，Hanmin；Xia，Chungu；Xie，Pan，Ger. Offen. (2013)，DE 102012224021 A1 Nov 14，2013)中描述的方法，使適當(dāng)取代的(i-b)與無(wú)機(jī)或有機(jī)堿如氫氧化鋰、氫氧化鈉或叔丁醇鈉反應(yīng)來(lái)制備。

<步驟1-3> 由式(i-e)表示的化合物可以在縮合劑如1,3-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(WSC·HCl或EDC HCl)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻鎓六氟磷酸鹽(BOP試劑)或雙(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)存在下，在對(duì)反應(yīng)無(wú)活性的溶劑如鹵化溶劑，例如二氯甲烷或氯仿；醚溶劑，例如乙醚或四氫呋喃；芳烴溶劑，例如甲苯或苯；極性溶劑，例如N,N-二甲基甲酰胺；或醇溶劑，例如甲醇、乙醇或2-丙醇中；在堿，例如三乙胺或N,N-二異丙基乙胺存在或不存在下；在0℃至溶劑回流溫度的溫度下，通過(guò)熟知的方法或類(lèi)似于公開(kāi)的文獻(xiàn)(例如，Organic synthesis IV，Acids，amino acids，and peptides，pp. 191-309，1992，Maruzen Co.，Ltd.)中描述的方法，通過(guò)使酸(i-c)與胺(R³-NH₂)反應(yīng)來(lái)制備。

<步驟1-4> 由式(i-f)表示的化合物可以通過(guò)通常稱(chēng)為Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)的方法制備。(i-f)型化合物可以在合適的鈀催化劑如[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]-二氯化鈀(II)或四(三苯基膦)鈀(0)??等，和弱堿如碳酸鈉、磷酸鈉等存在下，用R¹-B(OH)₂型的芳基-或雜芳基-硼酸，或者可選地，R¹-B(OR)₂型的芳基-或雜芳基硼酸酯處理(Pure Appl. Chem. 1991，63，419-422)。該反應(yīng)通常在惰性有機(jī)溶劑如甲苯、乙醇或二噁烷的適當(dāng)脫氣水性混合物中，在升高的溫度下，通常在70℃至溶劑混合物的沸騰溫度進(jìn)行3-24h?；蛘撸绢I(lǐng)域技術(shù)人員可以在合適的容器中進(jìn)行上述Suzuki反應(yīng)，所述容器能夠在微波反應(yīng)器中加熱至過(guò)熱的反應(yīng)溫度，其可以將反應(yīng)時(shí)間減少至1min至1h。適合于在室溫下進(jìn)行Suzuki反應(yīng)的條件已經(jīng)公開(kāi)(例如，參見(jiàn)J. Am. Chem. Soc. 2000，122，4020-4028及其中的參考文獻(xiàn))。

<步驟1-5> 由式(i-g)表示的化合物可以通過(guò)使適當(dāng)取代的吡啶酰胺(i-f)與通常被稱(chēng)為過(guò)氧化物的氧化劑如過(guò)氧化氫、間氯過(guò)氧苯甲酸、過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合鹽、二甲基二氧雜環(huán)丙烷和過(guò)乙酸，在適當(dāng)?shù)娜軇┌ㄋ?、二氯甲烷和乙酸中反?yīng)來(lái)制備。反應(yīng)通常在0至70℃的溫度下進(jìn)行幾分鐘至幾天的時(shí)間段。這樣的一種或多種方法類(lèi)似于公開(kāi)的文獻(xiàn)(例如，參見(jiàn)Deng，Lisheng；Sundriyal，Sandeep；Rubio，Valentina；Shi，Zheng-zheng；Song，Yongcheng，Journal of Medicinal Chemistry (2009)，52(21)，6539-6542)中描述的方法。

中間體

1-(4-氯-2-碘苯基)-1H-四唑

將4-氯-2-碘苯胺(3000mg，11.84mmol)與三甲氧基甲烷(3800mg，35.5mmol)和疊氮化鈉(2300mg，35.5mmol)混合。將混合物冷卻至5℃。緩慢加入乙酸(10ml)。將混合物在5℃下攪拌1小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。加入另外的三甲氧基甲烷(2mL)、疊氮化鈉(1000mg)和乙酸(15mL)。然后將混合物在室溫下再攪拌一天。將混合物濃縮，并加入水。產(chǎn)物用乙酸乙酯溶解，并用水和鹽水洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，濃縮溶液。粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜，Isolute Flash Si；預(yù)填充100g，用梯度0~30% EtOAc/異己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物。

5-(2-溴-4-氯苯基)噁唑

將2-溴-4-氯苯甲醛(3g，14mmol)與甲苯磺?；谆惽杌?3.20g，16mmol)和碳酸鉀(2.3g，16mmol)在MeOH(24ml)中混合。將所得混合物加熱至70℃達(dá)7小時(shí)。將混合物濃縮，并加入水。產(chǎn)物用乙酸乙酯溶解，并用水和鹽水洗滌。經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，濃縮溶液。粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜Isolute Flash Si；預(yù)填充100g，用梯度0~30% EtOAc/異己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物。

2-溴-4-氯-1-(二氟甲基)-3-氟苯

步驟1. 2-溴-4-氯-3-氟苯甲酸 在-78℃下通過(guò)注射泵經(jīng)30min將4-氯-3-氟苯甲酸(2.0g，11.46mmol)的THF(25ml)溶液加入到LDA(13.18ml，26.4mmol)的THF(50ml)溶液中。隨后在-78℃下攪拌3h。然后，加入1,2-二溴四氯乙烷(7.5g，23mmol)的THF(25ml)溶液。反應(yīng)在-78℃下進(jìn)行30min，然后緩慢升溫至室溫并攪拌過(guò)夜。反應(yīng)混合物用水淬滅，并用Et₂O萃取。水相用4N HCl的二噁烷溶液(45.8ml，45.8mmol)中和，并用EtOAc萃取。有機(jī)相經(jīng)MgSO₄干燥，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 276.04 (M+H)。

步驟2. (2-溴-4-氯-3-氟苯基)甲醇 在0℃下將BH₃.DMS(2.367ml，4.73mmol)加入到2-溴-4-氯-3-氟苯甲酸(1.0g，3.95mmol)的THF(30ml)溶液中。將混合物在0℃下攪拌1h后，除去冰浴，并將反應(yīng)在室溫下進(jìn)行5h。在0℃下向反應(yīng)混合物中加入另外的BH₃.DMS(2.367ml，4.73mmol)，并繼續(xù)攪拌過(guò)夜，同時(shí)緩慢溫?zé)嶂潦覝?。然后，將混合物?N HCl(10ml)處理，并用EtOAc(2×50ml)萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)MgSO₄干燥，過(guò)濾，濃縮，并通過(guò)硅膠柱快速色譜，用0-30% EtOAc/己烷純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 240.25 (M+H)。

步驟3. 2-溴-4-氯-3-氟苯甲醛. 在0℃下將PCC(0.57g，2.66mmol)加入到(2-溴-4-氯-3-氟苯基)甲醇(0.58g，2.42mmol)的CH₂Cl₂(10ml)溶液中。然后，除去冰浴，并將反應(yīng)在室溫下進(jìn)行2h。除去溶劑，殘余物通過(guò)硅膠柱快速色譜，用0-20% EtOAc/己烷純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 238.31 (M+H)。

步驟4. 2-溴-4-氯-1-(二氟甲基)-3-氟苯. 在0℃下將DAST(0.31ml，2.37mmol)加入到2-溴-4-氯-3-氟苯甲醛(0.45g，1.90mmol)的CH₂Cl₂(15ml)溶液中。將混合物攪拌1h后，除去冰浴，并將反應(yīng)在室溫下進(jìn)行5h。混合物用1N HCl淬滅。分離有機(jī)相。水相用EtOAc萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)MgSO₄干燥，過(guò)濾，濃縮，并通過(guò)硅膠柱快速色譜，用0-20% EtOAc/己烷純化，得到產(chǎn)物。MS (ESI) m/z 397.25 (M+H)。

(1-(4-氯-2-碘苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲醇

步驟1. 1-疊氮基-4-氯-2-碘苯 向在冰水浴中的4-氯-2-碘苯胺(5600mg，22mmol)的乙酸乙酯(40ml)和水(5mL)溶液中加入濃HCl溶液(12ml，146mmol)。將所得混合物攪拌10分鐘。經(jīng)3分鐘向該溶液中加入亞硝酸鈉(2550mg，37.0mmol)的水(7.5mL)溶液。將混合物攪拌30分鐘。緩慢加入疊氮化鈉(2400mg，37mmol)的水(8mL)溶液。然后將混合物在冰水浴中攪拌過(guò)夜。將水(60mL)加入到反應(yīng)混合物中。產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用水(2×50mL)、碳酸氫鈉稀溶液和鹽水洗滌。分離有機(jī)層，并經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥。濃縮后，粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜Isolute Flash Si；預(yù)填充100g，用0~50%梯度DCM/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物。

步驟2. (1-(4-氯-2-碘苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲醇 將1-疊氮基-4-氯-2-碘苯(1400mg，5mmol)和丙-2-炔-1-醇(280mg，5.00mmol)在DMF(5ml)中混合。加入硫酸銅(1M，1.0ml，1.0mmol)，然后加入抗壞血酸鈉(0.4ml，0.400mmol)。將混合物在50℃下攪拌過(guò)夜。將混合物倒入100mL水中，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。通過(guò)過(guò)濾收集沉淀，并用水洗滌，然后在真空中干燥過(guò)夜。MS (ESI) m/z 335.9 (M+H)。

1-(4-氯-2-碘苯基)-4-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑

步驟1. 1-(4-氯-2-碘苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲醛 將(1-(4-氯-2-碘苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲醇(500mg，1.490mmol)的DCM(7ml)溶液與Dess-Martin高碘烷(758mg，1.79mmol)混合。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，并用DCM洗滌固體。濃縮溶液，并將殘余物通過(guò)硅膠柱色譜Isolute Flash Si；預(yù)填充50g，用梯度0~40% EtOAc/異己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物。

步驟2. 1-(4-氯-2-碘苯基)-4-(二氟甲基)-1H-1,2,3-三唑 將1-(4-氯-2-碘苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲醛(300mg，0.9mmol)的DCM(6ml)溶液在冰水浴中冷卻。加入DAST(0.47ml，3.6mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時(shí)，然后在室溫下攪拌3小時(shí)。加入DCM(50mL)，并將混合物冷卻至0℃。緩慢加入NaHCO₃(1M溶液)以猝滅過(guò)量的DAST。分離有機(jī)層，并經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥。將其過(guò)濾并濃縮后，粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜Isolute Flash Si；預(yù)填充50g，用梯度0~50% DCM/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物。MS (ESI) m/z 355.8 (M+H)。

2-(2-溴-4-氯苯基)噻唑

步驟1. 2-溴-4-氯苯甲酰胺 將2-溴-4-氯苯甲酸(3000mg，12.7mmol)的甲苯(30ml)溶液與SOCl₂(1.4ml，19mmol)和DMF(0.020ml，0.26mmol)混合。然后將混合物加熱至80℃保持1.5小時(shí)。冷卻至室溫后，將混合物濃縮至干。將酰氯中間體溶于DCM(50ml)中并在0℃下滴加到預(yù)冷卻的氫氧化銨(8.86ml，63.7mmol)溶液中。將混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，然后通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。產(chǎn)物用水洗滌并在真空烘箱中在50℃下干燥過(guò)夜。

步驟2. 2-溴-4-氯硫代苯甲酰胺 將2-溴-4-氯苯甲酰胺(2g，8.5mmol)的THF(40ml)溶液與Lawesson試劑(4.1g，10mmol)混合。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物與硅膠混合，并濃縮至干。用粗產(chǎn)物裝載硅膠，并連接到80克大小的硅膠柱上，用梯度0~40% EtOAc/異己烷洗脫，得到產(chǎn)物。MS (ESI) m/z 251.8 (M+H)。

步驟3. 2-(2-溴-4-氯苯基)噻唑 將2-溴-4-氯硫代苯甲酰胺(970mg，3.87mmol)的乙醇(4ml)溶液與溴乙醛縮二乙醇(839mg，4.26mmol)混合。將混合物在78℃下攪拌過(guò)夜。冷卻至室溫后，加入己烷以進(jìn)一步沉淀產(chǎn)物。通過(guò)過(guò)濾收集產(chǎn)物，并用己烷洗滌。將產(chǎn)物在真空烘箱中在50℃下干燥過(guò)夜。MS (ESI) m/z 275.8 (M+H)。

1-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1H-1,2,4-三唑

步驟1. 1-(2-溴-4-氯苯基)-1H-1,2,4-三唑. 向2-溴-4-氯-1-氟苯(2g，9.6mmol)和4H-1,2,4-三唑(0.79g，11.5mmol)在DMF(20mL)中的混合物中加入K₂CO₃(5.28g，38.2mmol)，并將混合物在100℃下攪拌16h?；旌衔镉盟?50mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(50mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)硅膠梯度色譜(SiO₂，石油醚:EtOAc = 10:1-1:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.48 (s，1H)，8.14 (s，1H)，7.77 (s，1H)，7.46 (d，J=1.1 Hz，2H)。

步驟2. 1-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1H-1,2,4-三唑. 向1-(2-溴-4-氯苯基)-1H-1,2,4-三唑(100mg，0.39mmol)和1,1,1,2,2,2-六甲基二錫烷(380mg，1.2mmol)在甲苯(2mL)中的混合物中加入Pd(Ph₃P)₄(89mg，0.077mmol)，并將所得混合物在90℃下攪拌12h。混合物用水(50mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(10mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)制備型TLC(SiO₂，石油醚:EtOAc = 10:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.25 (s，1H)，7.88 (s，1H)，7.42 (d，J=2.2 Hz，1H)，7.20-7.25 (m，1H)，7.13-7.18 (m，1H)，0.00 (s，9H)。 MS (ESI) m/z 343.9 (M+H)。

氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)吡嗪

步驟1. 2-(2-溴-4-氯苯基)吡嗪. 向2-溴-4-氯-1-碘苯(1.26g，4.0mmol)、2-(三丁基甲錫烷基)吡嗪(1.32g，3.6mmol)的DMF(20mL)脫氣溶液中加入Pd(Ph₃P)₄(230mg，0.2mmol)和CuI(80mg，0.4mmol)。然后將混合物用微波在100℃在N₂保護(hù)下加熱4h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后用飽和KF水溶液(20mL)稀釋?zhuān)⒂肈CM(20mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并濃縮。然后將殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(PE/EtOAc = 100/1至10/1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.94 (br. s，1H)，8.52 - 8.77 (m，2H)，7.75 (br. s，1H)，7.39 - 7.61 (m，2H)。MS (ESI) m/z 270.8 (M+H)。

步驟2. 2-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)吡嗪. 向2-(2-溴-4-氯苯基)吡嗪(380mg，1.410mmol)和1,1,1,2,2,2-六甲基二錫烷(924mg，2.82mmol)在甲苯(4mL)中的混合物中加入Pd(Ph₃P)₄(163mg，0.141mmol)，并將混合物在100℃下攪拌12h?；旌衔镉盟?50mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(10mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)制備型TLC(SiO₂，石油醚:EtOAc = 10:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

MS (ESI) m/z：396.1 (M+ CH₃CN)

4-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1,2,3-噻二唑

步驟1. (E)-2-(1-(2-溴-4-氯苯基)亞乙基)肼甲酸乙酯. 在10℃下向1-(2-溴-4-氯苯基)乙酮(1g，4.3mmol)和肼甲酸乙酯(0.54g，5.1mmol)在2-丙醇(5mL)和水(15mL)中的混合物中加入HOAc (0.012mL，0.21mmol)。將混合物在90℃下攪拌3h。將混合物過(guò)濾。濾餅用水(20mL)洗滌并真空干燥，得到標(biāo)題化合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化而用于下一步驟。MS (ESI) m/z 320.8 (M+H)。

步驟2. 4-(2-溴-4-氯苯基)-1,2,3-噻二唑. 將(E)-2-(1-(2-溴-4-氯苯基)亞乙基)肼甲酸乙酯(600mg，1.3mmol)在SOCl₂(2880μL，39.4mmol)中的混合物在100℃下攪拌5h。將混合物濃縮。殘余物用飽和NaHCO₃(30mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(30mL×3)萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)硅膠梯度色譜(SiO₂，石油醚:EtOAc = 500:1-100:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 9.01 (s，1H)，7.94 (d，J=8.4 Hz，1H)，7.76 (d，J=1.8 Hz，1H)，7.46 (dd，J=8.4，1.5 Hz，1H)。

步驟3. 4-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1,2,3-噻二唑. 向4-(2-溴-4-氯苯基)-1,2,3-噻二唑(100mg，0.363mmol)和1,1,1,2,2,2-六甲基二錫烷(357mg，1.089mmol)在甲苯(2mL)中的混合物中加入Pd(Ph₃P)₄(84mg，0.073mmol)，并將混合物在90℃下攪拌12h?；旌衔镉盟?50mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(10mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)制備型TLC(SiO₂，石油醚:EtOAc = 10:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ = 8.41 (s，1H)，7.48 (d，J=2.2 Hz，1H)，7.42 (d，J=7.9 Hz，1H)，7.21 (dd，J=8.4，2.2 Hz，1H)，0.00 (s，9H)。

1-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1H-1,2,3-三唑

步驟1. 1-(2-溴-4-氯苯基)-1H-1,2,3-三唑. 向2-溴-4-氯-1-氟苯(5g，24mmol)和2H-1,2,3-三唑(6.60g，95mmol)的DMF(2mL)溶液中加入K₂CO₃(16.50 g，119mmol)。將混合物在100℃在N₂氣氛下攪拌13h。混合物用水(10mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(10mL×2)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物通過(guò)柱色譜(SiO₂，PE:EtOAc = 100:1至3:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

MS (ESI) m/z 260.0 (M+H)。

步驟2. 1-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1H-1,2,3-三唑. 向1-(2-溴-4-氯苯基)-1H-1,2,3-三唑(300mg，1.16mmol)和1,1,1,2,2,2-六甲基二錫烷(0.602mL，2.90mmol)的甲苯(2mL)溶液中加入Pd(Ph₃P)₄(268mg，0.23mmol)。將反應(yīng)脫氣三次，并用N₂再填充，然后在100℃下攪拌2h。反應(yīng)用水(20mL)淬滅，并用EtOAc(20mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。殘余物通過(guò)柱色譜(SiO₂，PE:EtOAc = 10:1至5:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

MS (ESI) m/z 343.8 (M+H)。

1-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1H-吡唑

步驟1. 1-(2-溴-4-氯苯基)-1H-吡唑.

向2-溴-4-氯-1-氟苯(1g，4.77mmol)、1H-吡唑(0.341g，5.01mmol)的DMF(5mL)溶液中加入K₂CO₃ (1.98g，14mmol)，并將混合物在80℃下攪拌16h。混合物用水(30mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(30mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(50mL×3)洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)硅膠梯度色譜(SiO₂，石油醚:EtOAc = 10:1-3:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 7.80 (d，J=2.4 Hz，1H)，7.73 (d，J=1.5 Hz，1H)，7.70 (d，J=2.2 Hz，1H)，7.42-7.49 (m，1H)，7.35-7.41 (m，1H)，6.46 (t，J=2.1 Hz，1H)。MS (ESI) m/z 258.8 (M+H)。

步驟2. 1-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1H-吡唑. 向1-(2-溴-4-氯苯基)-1H-吡唑(100mg，0.39mmol)和1,1,1,2,2,2-六甲基二錫烷(382mg，1.2mmol)在甲苯(2mL)中的混合物中加入Pd(Ph₃P)₄ (90mg，0.078mmol)，并將混合物在90℃下攪拌12h?；旌衔镉盟?50mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(10mL)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)制備型TLC(SiO₂，石油醚:EtOAc = 10:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 7.66 (d，J=2.2 Hz，1H)，7.38-7.49 (m，2H)，7.12-7.24 (m，2H)，6.29 (d，J=2.2 Hz，1H)，0.00 (s，9H)。

實(shí)施例1 & 2

(R)-2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例1)和(S)-2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶-1-氧化物(實(shí)施例2)

步驟1. 2-(5-溴吡啶-2-基)-3-苯基丙酸甲酯(1-A)：在-78℃下向2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸甲酯(1g，4.35mmol)的THF (20mL)溶液中加入LHMDS(4.35mL，4.35mmol，1M)。將混合物在-78℃下攪拌2hrs。緩慢加入(溴甲基)苯(0.743g，4.35mmol)。接著，除去冷浴，并將混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋?zhuān)盟?、鹽水洗滌，并經(jīng)Na₂SO₄干燥。真空除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜，用EtOAc/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物1-A。¹H NMR (500 MHz，CDCl₃)δ：3.24 (1 H，dd)，3.45 (1 H，dd)，3.66 (3 H，s)，4.09 (1 H，t)，7.12-7.09 (4 H，m)，7.24-7.12 (2H，m)，7.73 (1 H，dd)，8.65 (1 H，d)。

步驟2. 4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-B)：向2-(5-溴吡啶-2-基)-3-苯基丙酸甲酯(1-A)(780mg，2.4mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入LiOH水溶液(2.92mL，2.92mmol，1M)。將混合物在50℃下加熱15min。真空除去溶劑。將其通過(guò)甲苯和MeOH共沸兩次。將酸中間體溶于DMF(10mL)中。加入4-氨基苯甲酸叔丁酯(706mg，3.65mmol)和HATU(1.85g，4.87mmol)。將其在室溫下攪拌30min?；旌衔镉盟銣?，并用EtOAc萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)Na₂SO₄干燥，并除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜，用EtOAc/己烷洗脫純化，得到標(biāo)題化合物1-B。¹H NMR (500 MHz，CDCl₃) δ：1.67 (9 H，s)，3.23 (1 H，dd)，3.51 (1 H，dd)，4.16 (1 H，m)，7.04 (3 H，t)，7.22-7.17 (3 H，m)，7.60 (2H，d)，7.74 (1 H，d)，7.95 (2H，d)，8.73 (1 H，d)，9.71 (1 H，s)。

步驟3. 4-(2-(5-(5-氯-2-硝基苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-C) 在微波管中向4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-B)(0.475g，0.987mmol)、(5-氯-2-硝基苯基)硼酸(0.397g，1.973mmol)、PdCl₂(dppf)-CH₂Cl₂加合物(0.16g，0.197mmol)在THF(5mL)中的混合物中加入磷酸鉀水溶液(2mL，4mmol，2M)。將管密封，脫氣并用N₂再填充。將混合物在100℃下通過(guò)微波加熱1小時(shí)。反應(yīng)混合物用水稀釋?zhuān)肊tOAc萃取，合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，并經(jīng)Na₂SO₄干燥。真空除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜，用EtOAc/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物1-C。¹H NMR (500 MHz，CDCl₃) δ：1.66 (9H，s)，3.32 (1 H，dd)，3.60 (1 H，dd)，4.10 (1 H，m)，7.05 (2 H，d)，7.10-7.24 (4H,m)，7.42 (1 H，d)，7.58-7.63 (4H，m)，7.95 (2 H，d)，8.03 (1 H，d)，8.59 (1 H，s)，10.00 (1 H，s)。

步驟4. 4-(2-(5-(2-氨基-5-氯苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-D) 向4-(2-(5-(5-氯-2-硝基苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-C)(0.61g，1.093mmol)的EtOH(2mL)和EtOAc(1mL)懸浮液中加入二氯化錫(II)二水合物(0.987g，4.37mmol)。將反應(yīng)混合物在油浴中在50℃下加熱3小時(shí)，并冷卻至室溫。然后用EtOAc稀釋?zhuān)?N NaOH水溶液、鹽水洗滌，并經(jīng)Na₂SO₄干燥。真空除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜，用EtOAc/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物1-D。¹H NMR (500 MHz，CDCl₃)δ：1.69 (9 H，s)，3.34 (1 H，dd)，3.63 (1 H，dd)，4.23 (1 H，m)，6.75 (1 H，d)，7.30-7.01 (9 H，m)，7.65 (2H，d)，7.78 (1 H，d)，7.96 (3 H，d)，8.72 (1 H，s)，10.05 (1 H，s)。

步驟5. 4-(2-(5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-E)將在燒瓶中的4-(2-(5-(2-氨基-5-氯苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-D)(0.48g，0.909mmol)、疊氮化鈉(0.177g，2.73mmol)和三甲氧基甲烷(0.289g，2.73mmol)在乙酸(9mL)中的反應(yīng)混合物在90℃下加熱3小時(shí)。將混合物冷卻，并真空除去溶劑。殘余物用乙酸乙酯稀釋?zhuān)盟?、鹽水洗滌，并經(jīng)Na₂SO₄干燥。減壓蒸發(fā)溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜，用EtOAc/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物1-E。¹H NMR (500 MHz，CDCl₃)δ：1.67 (9H，m)，3.23 (1 H，dd)，3.53 (1 H，dd)，4.00 (1 H，dd)，7.02-6.96 (3 H，m)，7.25-7.15 (4 H)，7.65-7.56 (5 H，m)，7.95-7.93 (2 H，m)，8.36 (2 H，s)，9.79 (1 H，s)。

步驟6. 2-(1-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(1-F) 在室溫下向4-(2-(5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-E)(0.42g，0.723mmol)的CH₂Cl₂(3mL)溶液中加入mCPBA(0.356g，1.446mmol)。將其攪拌2小時(shí)。真空除去溶劑。殘余物通過(guò)二氧化硅柱色譜，用EtOAc/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物1-F。¹H NMR (500 MHz，CDCl₃)δ：1.71 (9H，s)，3.15 (1 H，dd)，3.70 (1 H，dd)，4.98 (1 H，t)，6.93 (1 H，dd)，7.3-7.1 (5H,m)，7.42 (1 H，d)，7.57-7.52 (4 H，m)，7.68 (1 H，dd)，7.90-7.88 (2 H，m)，8.27 (1 H，d)，8.55 (1 H，s)，10.34 (1 H，s)。

步驟7. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶-1-氧化物 (1-G) 向2-(1-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物 (1-F)(300mg，0.502mmol)的CH₂Cl₂(0.5mL)溶液中加入TFA(1mL，12.98mmol)。將其在室溫下攪拌15分鐘。真空除去溶劑。將殘余物再溶于1mL ACN和0.5mL水中。將溶液冷凍干燥，得到產(chǎn)物1-G。通過(guò)SFC用手性柱(AS-H)拆分化合物1-G，得到(R)-2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例1)和(S)-2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶-1-氧化物 (實(shí)施例2)。¹H NMR (500 MHz，丙酮-d6)δ：3.25 (1 H，dd)，3.57 (1 H，dd)，4.91 (1 H，t)，7.12 (1 H，d)，7.19 (1 H，t)，7.34-7.26 (5 H，m)，7.66 (3 H，dd)，7.84 (2 H，s)，7.88 (1 H，s)，7.97 (2 H，d)，8.39 (1 H，s)，9.33 (1 H，s)，10.63 (1 H，s)。

實(shí)施例3和4

(R)-2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-1-氧化物 (實(shí)施例3) & (S)-2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-1-氧化物(實(shí)施例4)

步驟1. 4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(2-A) 在微波管中向4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1-B)(0.65g，1.35mmol)、(3-氯-2,6-二氟苯基)硼酸(0.39g，2.0mmol)、乙酸鈀(II)/1,1'-雙(二叔丁基膦基)二茂鐵/磷酸鉀混合物(0.246g，0.27mmol)在THF(12mL)中的混合物中加入磷酸鉀水溶液(2.7mL，5.4mmol，2M)。將反應(yīng)管密封，脫氣并用N₂再填充。將混合物在100℃下通過(guò)微波加熱1hr。反應(yīng)混合物用水稀釋?zhuān)肊tOAc萃取，有機(jī)相用鹽水洗滌，經(jīng)Na₂SO₄干燥。真空除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜，用EtOAc/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物2-A。¹H NMR (500 MHz，CDCl₃)δ：1.59 (9H，s)，3.35 (1 H，dd)，3.61 (1 H，dd)，4.07-4.05 (1H，m)，7.08-7.04 (3H，m)，7.22-7.16 (4 H，m)，7.46 (1 H，td)，7.64 (2 H，d)，7.71 (1 H，d)，7.97 (2 H，d)，8.79 (1 H，s)，10.05 (1 H，s)。

步驟2. 2-(1-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-1-氧化物 (2-B) 在室溫下向4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(2-A)(250mg，0.455mmol)的DCM(5mL)溶液中加入mCPBA(225mg，0.911mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌1.5小時(shí)。減壓除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜，用EtOAc/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物2-B。¹H NMR (500 MHz，CDCl₃)δ：1.70 (9H，s)，3.23 (1H，dd)，3.81 (1 H，dd)，4.13 (1 H，q)，5.14-5.13 (1 H，m)，7.04 (1 H，dd)，7.20 (1 H，t)，7.34-7.24 (4H，m)，7.51-7.47 (2 H，m)，7.59 (3 H，t)，7.90 (2 H，d)，8.50 (1 H，s)，10.73 (1 H，s)。

步驟3. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-1-氧化物 (2-C) 向2-(1-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-1-氧化物(2-B)(0.17g，0.25mmol)的CH₂Cl₂(0.5mL)溶液中加入TFA(1mL，12.98mmol)。將其在室溫下攪拌1小時(shí)。真空除去溶劑。將殘余物再溶于1mL ACN和0.5mL水中。將溶液冷凍干燥，得到產(chǎn)物2-C。

將2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-1-氧化物通過(guò)SFC用手性柱(AS-H)拆分，得到實(shí)施例3 (R)-2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-1-氧化物和實(shí)施例4 (S)-2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-1-氧化物。¹H NMR (500 MHz，丙酮-d6) δ：3.33 (1 H，s)，3.36 (1 H，m)，3.64 (1 H，d)，3.91 (1 H，t)，5.06 (1 H，b)，7.19 (1 H，d)，7.28 (3H，m)，7.42 (2 H，d)，7.65 (1 H，m)，7.70 (3 H，d)，7.87 (1 H，d)，7.96 (2 H，d)，8.64 (1 H，s)，10.71 (1 H，s)。

通過(guò)使用上述方法和合適的原料，合成以下化合物。這些化合物通過(guò)LC/MS表征。

實(shí)施例23 & 24

2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-氰基苯基)-4-甲氧基吡啶1-氧化物(實(shí)施例23和24)

步驟1. 2-氯-4-甲氧基-5-硝基吡啶 (3-B) 向圓底燒瓶中加入THF(200mL)和氫化鈉(3.42g，85mmol，60%在油中)。然后，在0℃下滴加甲醇(2.490g，78mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌10min。滴加3-A(15g，78mmol)的THF(50mL)溶液。將混合物在0℃下攪拌1h?；旌衔镉盟?300mL)淬滅并用EtOAc(150mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，80g Agela flash柱，0-20% EtOAc/PE，60min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.88 (s，1H)，7.10 (s，1H)，6.35 (s，1 H)，4.10 (s，3H)，4.05 (s，1H)。MS (ESI) m/z 189.2 (M+H)。

步驟2. 2-(4-甲氧基-5-硝基吡啶-2-基)丙二酸1-叔丁基3-乙基酯(3-C) 向圓底燒瓶中加入氫化鈉(2.316g，57.9mmol，60%在油中)、DMF(200mL)和丙二酸叔丁基乙基酯(10.90g，57.9mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌20min。然后，加入3-B(9.1g，38.6mmol)。將混合物在50℃下攪拌18h?；旌衔镉盟?500mL)淬滅，并用EtOAc(200mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(200mL×3)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)柱色譜(SiO₂，PE:EtOAc=10:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.93 (s，1H)，7.32 (s，1H)，4.87 (s，1 H)，4.25 (dd，J = 13.0，6.9 Hz，2H)，4.04 (s，3H)，1.47 (s，9H)，1.28 (t，J = 7.0 Hz，3H)。MS (ESI) m/z 341.2 (M+H)。

步驟3. 2-(4-甲氧基-5-硝基吡啶-2-基)乙酸乙酯(3-D) 向圓底燒瓶中加入3-C(5.5g，16.16mmol)、DCM(60mL)和2,2,2-三氟乙酸(7.37g，64.6mmol)。將反應(yīng)混合物在45℃下攪拌4h。將混合物濃縮，用水稀釋并用飽和NaHCO₃溶液調(diào)節(jié)至pH 8-9。混合物用DCM(100mL×3)萃取，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，40g Agela flash柱，0-20% EtOAc/PE，60min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 9.01 (s，1 H)，7.13 (s，1 H)，4.26 (q，J=7.1 Hz，2 H)，4.09 (s，3 H)，3.92 (s，2 H)，1.33 (t，J=7.0 Hz，3 H)。MS (ESI) m/z 240.9 (M+H)。

步驟4. 2-(4-甲氧基-5-硝基- -吡啶-2-基)-3-苯基丙酸乙酯(3-E) 在-78℃下向3-D(3.0g，12.5mmol)的THF(40mL)溶液中滴加二異丙基氨基鋰(2M的THF溶液，6.24mL，12.5mmol)。將混合物攪拌10min，然后加入(溴甲基)苯(2.136g，12.49mmol)。將混合物在14℃下進(jìn)一步攪拌3h。混合物用飽和NH₄Cl溶液(10mL)淬滅，用水(60mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(40mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，40g Agela flash柱，0-20% EtOAc/PE，30min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.98 (s，1 H)，7.17 - 7.30 (m，4 H)，7.10 (d，J=6.8 Hz，2 H)，6.82 (s，1 H)，4.13 (dd，J=12.7，7.0 Hz，3 H)，3.91 (s，3 H)，3.43 (dd，J=13.7，7.5 Hz，1 H)，3.24 (dd，J=13.8，8.1 Hz，1 H)，1.16 (t，J=7.2 Hz，3 H)。MS (ESI) m/z 331.2 (M+H)。

步驟5. 2-(5-氨基-4-甲氧基吡啶-2-基)-3-苯基丙酸乙酯(3-F) 向圓底燒瓶中加入3-E(3.2g，9.69mmol)、NH₄Cl(5.18g，97mmol)、EtOH(32mL)、水(8mL)和鐵(5.41g，97mmol)。將反應(yīng)混合物在80℃下攪拌3h，然后過(guò)濾并真空濃縮濾液。殘余物用水(50mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(40mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 7.95 (s，1 H)，7.11 - 7.24 (m，5 H)，6.64 (s，1 H)，4.05 - 4.13 (m，2 H)，3.97 (t，J=7.8 Hz，1 H)，3.83 (s，3 H)，3.37 (dd，J=13.7，8.6 Hz，1 H)，3.15 - 3.21 (m，1 H)，1.12 (t，J=7.1 Hz，3 H)。MS (ESI) m/z 301.2 (M+H)。

步驟6. 2-(5-溴-4-甲氧基吡啶-2-基)-3-苯基丙酸乙酯(3-G) 向圓底燒瓶中加入二溴化銅(II)(2.082g，9.32mmol)、溴化鋰(0.810g，9.32mmol)、乙腈(40mL)和亞硝酸叔丁酯(1.442g，13.98mmol)。將所得混合物在45℃下攪拌10min。然后加入3-F(2.8g，9.32mmol)的乙腈(20mL)溶液。將反應(yīng)混合物在45℃下攪拌30min?；旌衔镉盟?60mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(30mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，20g Agela flash柱，0-10% EtOAc/PE，40min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.51 (s，1 H)，7.09 - 7.26 (m，5 H)，6.68 (s，1 H)，4.11 (dd，J=7.1，5.5 Hz，2 H)，4.02 (t，J=7.8 Hz，1 H)，3.83 - 3.88 (m，3 H)，3.37 - 3.44 (m，1 H)，3.18 - 3.25 (m，1 H)，1.14 (t，J=7.2 Hz，3 H)。MS (ESI) m/z 364.1 (M+H)。

步驟7. 2-(5-(5-氯-2-氰基苯基)-4-甲氧基吡啶-2-基)-3-苯基丙酸乙酯(3-I)在55℃下向圓底燒瓶中加入3-G(950mg，2.6mmol)、K₃PO₄ (1660mg，7.8mmol)、3-H(825mg，3.13mmol)、二噁烷(30mL)和Pd(dppf)Cl₂ (170mg，0.26mmol)。將反應(yīng)混合物在55℃下攪拌18h。過(guò)濾混合物，并濃縮濾液。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，20g Agela flash柱，0-10% EtOAc/PE，40min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.32 (s，1 H)，7.69 (d，J=8.4 Hz，1 H)，7.38 - 7.52 (m，2 H)，7.15 - 7.27 (m，5 H)，6.83 (s，1 H)，4.14 (dd，J=13.6，7.0 Hz，3 H)，3.82 (s，3 H)，3.45 (dd，J=13.6，8.5 Hz，1 H)，3.28 (d，J=7.1 Hz，1 H)，1.16 (t，J=7.1 Hz，3 H)。MS (ESI) m/z 421.1 (M+H)。

步驟8. 2-(5-(5-氯-2-氰基苯基)-4-甲氧基吡啶-2-基)-3-苯基丙酸(3-J) 向圓底燒瓶中加入3-I(420mg，1.0mmol)、MeOH(5mL)、水(1mL)和氫氧化鋰水合物(50.3mg，1.2mmol)。將反應(yīng)混合物在12℃下攪拌18h。LCMS顯示50%轉(zhuǎn)化。將溫度升至50℃，并將反應(yīng)混合物進(jìn)一步攪拌3.5h。LCMS顯示反應(yīng)完成。將混合物濃縮，用HCl溶液(1M)調(diào)節(jié)至pH 5-6，并用DCM(10mL×4)萃取。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥并過(guò)濾，得到粗溶液，將其直接用于下一步驟。MS (ESI) m/z 393.2 (M+H)。

步驟9. 4-(2-(5-(5-氯-2-氰基苯基)-4-甲氧基吡啶-2-基)-3-苯基丙- -酰胺基)苯甲酸乙酯 (3-K) 向圓底燒瓶中加入3-J(20mL，0.50mmol)(約0.025M DCM溶液)、HATU(228mg，0.60mmol)、4-氨基苯甲酸乙酯(99mg，0.60mmol)和Et₃N(0.209mL，1.5mmol)。將反應(yīng)混合物在12℃下攪拌1.5h。反應(yīng)混合物用水(50mL)稀釋?zhuān)⒂肈CM(20mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，12g Agela flash柱，0-10% EtOAc/PE，30min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 10.35 (br. s.，1 H)，8.42 (s，1 H)，8.01 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.61 - 7.75 (m，3 H)，7.44 - 7.52 (m，2 H)，7.14 - 7.31 (m，4 H)，7.04 (d，J=7.1 Hz，2 H)，6.53 (s，1 H)，4.36 (d，J=7.3 Hz，2 H)，3.95 (dd，J=9.3，6.2 Hz，1 H)，3.71 (s，3 H)，3.58 (dd，J=13.2，6.0 Hz，1 H)，3.29 (dd，J=13.0，9.7 Hz，1 H)，1.39 (t，J=7.1 Hz，3 H)。MS (ESI) m/z 540.2 (M+H)。

步驟10. 5-(5-氯-2-氰基苯基)-2-(1-((4-(乙氧基羰基)-苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-4-甲氧基吡啶1-氧化物(3-L) 在14℃下向圓底燒瓶中加入3-K(50mg，0.093mmol)、DCM(3mL)和mCPBA(25mg，0.11mmol)。將反應(yīng)混合物在氮?dú)夥障略?0℃攪拌18h。加入飽和Na₂SO₃溶液(10mL)，并將混合物在室溫下攪拌5min。混合物用DCM(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用飽和NaHCO₃溶液(10mL×3)洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 8.17 (s，1 H)，7.89 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.65 (d，J=8.4 Hz，1 H)，7.55 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.47 (dd，J=8.4，1.8 Hz，1 H)，7.35 (d，J=1.5 Hz，1 H)，7.20 - 7.29 (m，4 H)，7.16 (d，J=7.1 Hz，2 H)，6.93 (s，1 H)，4.24 - 4.30 (m，2 H)，3.86 (s，4 H)，3.75 (dd，J=13.9，9.0 Hz，1 H)，3.16 (br. s.，1 H)，1.30 (t，J=7.1 Hz，3 H)。MS (ESI) m/z 556.2 (M+H)。

步驟11. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-氰基苯基)-4-甲氧基吡啶1-氧化物(3-M) 向圓底燒瓶中加入3-L(150mg，0.27mmol)、MeOH(3mL)、水(0.3mL)和氫氧化鋰水合物(13.6mg，0.32mmol)。將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌3h。將混合物真空濃縮，并將殘余物通過(guò)制備型HPLC(中性條件)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹HNMR (CDCl₃，400MHz)：δ 10.29 (br. s.，1 H)，8.33 (s，1 H)，8.00 (d，J=8.0 Hz，2 H)，7.78 (d，J=8.2 Hz，2 H)，7.71 (d，J=8.2 Hz，1 H)，7.53 (dd，J=8.3，1.7 Hz，1 H)，7.35 - 7.48 (m，3 H)，7.24 - 7.31 (m，3 H)，7.20 (d，J=7.3 Hz，1 H)，5.40 (d，J=6.8 Hz，1 H)，3.94 (s，3 H)，3.51 - 3.60 (m，1 H)，3.18 (d，J=10.4 Hz，1 H)。MS (ESI) m/z 528.2 (M+H)。

步驟12. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-氰基苯基)-4-甲氧基吡啶1-氧化物(實(shí)施例23和24) 通過(guò)SFC(條件：儀器 SFC-80-(8)，柱AD(250mm*30mm，10um)，堿-EtOH，流速(mL/min) 80)純化3-M(80mg，0.15mmol)，得到2-(1-((4-羧基苯基) 氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(5-氯-2-氰基苯基)-4-甲氧基吡啶1-氧化物(實(shí)施例23，第一個(gè)峰)和2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基-丙-2-基)-5-(5-氯-2-氰基苯基)-4-甲氧基吡啶1-氧化物(實(shí)施例24，第二個(gè)峰)。

實(shí)施例23 ¹HNMR (400MHz，CD₃OD)：δ 8.37 (s，1 H)，7.92 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.84 (d，J=8.8 Hz，1 H)，7.57 - 7.66 (m，4 H)，7.47 (s，1 H)，7.35 (d，J=7.3 Hz，2 H),,7.27 (t，J=7.4 Hz，2 H)，7.15 - 7.21 (m，1 H)，4.99 (t，J=7.8 Hz，1 H)，3.96 (s，3 H)，3.50 - 3.58 (m，1 H)，3.38 - 3.45 (m，1 H)。MS (ESI) m/z 528.1 (M+H)。

實(shí)施例24¹HNMR (400MHz，CD₃OD)：δ 8.28 (s，1 H)，7.82 (d，J=8.4 Hz，2 H)，7.74 (d，J=9.0 Hz，1 H)，7.44 - 7.58 (m，4 H)，7.37 (s，1 H)，7.25 (d，J=7.3 Hz，2 H)，7.17 (t，J=7.4 Hz，2 H)，7.04 - 7.11 (m，1 H)，4.89 (t，J=7.7 Hz，1 H)，3.86 (s，3 H)，3.44 (dd，J=13.5，8.8 Hz，1 H)，3.28 - 3.35 (m，1 H)。MS (ESI) m/z 528.1 (M+H)。

實(shí)施例25 & 26

2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)-4-甲基吡啶1-氧化物(實(shí)施例25)和6-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-3-(3-氯-2,6-二氟苯基)-2-甲基吡啶1-氧化物 (實(shí)施例26)

步驟1. 4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸，TFA 向4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(0.4g，0.73mmol)的CH₂Cl₂(2ml)溶液中加入TFA(2ml，26.0mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑和過(guò)量的TFA。粗產(chǎn)物通過(guò)凍干進(jìn)一步干燥。MS (ESI) m/z 493 (M+H)。

步驟2. 4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)-4-甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸和4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)-6-甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸 在手套箱中，向小瓶中的4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸，TFA(410mg，0.676mmol)的乙酸(3378μl)和乙腈(3378μl)溶液中加入[Ir(dF-CF₃-ppy)2(dtbbpy)]PF₆(37.9mg，0.034mmol)，然后加入于溶劑油中的過(guò)氧化乙酸叔丁酯(431μl，1.351mmol)。將反應(yīng)小瓶密封，并在LED藍(lán)光下在室溫下攪拌過(guò)夜。然后將反應(yīng)混合物與0.3g二氧化硅-DMT樹(shù)脂混合并攪拌1小時(shí)，然后過(guò)濾。濃縮溶液，并將粗產(chǎn)物通過(guò)反相制備型HPLC在C-18柱上并用梯度乙腈/水(含有0.1%TFA)洗脫純化，得到4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)-4-甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸和4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)-6-甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸。MS (ESI) m/z 507 (M+H)。

步驟3. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-5-(3-氯-2,6-二氟苯基)-4-甲基吡啶1-氧化物(實(shí)施例25) 向4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)-4-甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸(26mg，0.051mmol)的MeOH(1ml)溶液中加入H₂O₂(0.022ml，0.256mmol)和甲基三氧化錸(VII)(6.39mg，0.026mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。用NaHSO₃(10%水溶液)淬滅反應(yīng)。產(chǎn)物用EtOAc萃取，并經(jīng)無(wú)水Na₂SO₄干燥。濃縮后，殘余物通過(guò)硅膠柱色譜Redi 12g金，用梯度EtOAc/己烷(0-60%)洗脫純化，得到所需產(chǎn)物(實(shí)施例25)。MS (ESI) m/z 523 (M+H)。

步驟4. 6-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-3-(3-氯-2,6-二氟苯基)-2-甲基吡啶1-氧化物(實(shí)施例26) 向4-(2-(5-(3-氯-2,6-二氟苯基)-6-甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸(18mg，0.036mmol)的MeOH(1ml)溶液中加入H₂O₂(0.16ml，1.8mmol)和甲基三氧化錸(VII)(4.43mg，0.018mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。減壓除去溶劑，殘余物通過(guò)反相制備型HPLC在C-18柱上并用梯度乙腈/水(含0.1%TFA)洗脫純化，得到6-(1-((4-羧基苯基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-3-(3-氯-2,6-二氟苯基)-2-甲基吡啶1-氧化物 (實(shí)施例26)。MS (ESI) m/z 523 (M+H)。

實(shí)施例27 & 28

2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例27和28)

步驟1. 2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸乙酯 將THF(25ml)中的2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸乙酯(2.0g，8.2mmol)冷卻至-78℃。加入雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰(1M，在己烷中，8.2ml，8.2mmol)。將混合物攪拌1.5小時(shí)。緩慢加入(碘甲基)環(huán)丙烷(0.795ml，8.19mmol)。將混合物在-78℃下攪拌1小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。通過(guò)加入飽和NH₄Cl水溶液(7mL)猝滅反應(yīng)。產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，并用鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾并濃縮后，粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜Isolute Flash Si；預(yù)填充80g，用梯度0-30% EtOAc/異己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物。MS (ESI) m/z 299.9 (M+H)。

步驟2. 2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸鋰 將MeOH(19ml)中的2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸乙酯(1.7g，5.70mmol)與LiOH溶液(1M，8.55ml，8.55mmol)混合，并加熱至50℃達(dá)30分鐘。將混合物濃縮至干，然后在真空烘箱中在50℃下進(jìn)一步干燥過(guò)夜。產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步處理直接用于下一步驟。MS (ESI) m/z 271.9 (M+H)。

步驟3. 4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯 將DMF(10ml)中的2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸鋰(1570mg，5.7mmol)與4-氨基苯甲酸叔丁酯(1300mg，6.84mmol)和HATU(2600mg，6.84mmol)混合，然后加熱至50℃達(dá)2小時(shí)。冷卻至室溫后，在攪拌下將混合物緩慢倒入200mL水中。通過(guò)過(guò)濾收集沉淀，并用水洗滌，然后在真空烘箱中在50℃下干燥過(guò)夜。產(chǎn)物不經(jīng)進(jìn)一步純化而用于下一步驟。

步驟4. 將4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1000mg，2.245mmol)與4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-聯(lián)(1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷)(570mg，2.245mmol)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II) (329mg，0.449mmol)和乙酸鉀(661mg，6.74mmol)在微波反應(yīng)小管中混合。然后將小瓶蓋上。通過(guò)真空除去空氣并用氮?dú)饣靥?X3)。加入1,4-二噁烷(9ml)。將混合物在微波反應(yīng)器中加熱至120℃達(dá)2小時(shí)。將反應(yīng)混合物直接用于下一步驟。

步驟5. 4-(2-(5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯 將1-(4-氯-2-碘苯基)-1H-四唑(690mg，2.250mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)(165mg，0.225mmol)加入到步驟4的反應(yīng)混合物中。將小瓶蓋上，真空除去空氣，并用氮?dú)饣靥?X3)。通過(guò)注射器加入K₂CO₃溶液(1M，6.75ml，6.75mmol)。然后將混合物加熱至85℃達(dá)2小時(shí)。冷卻至室溫后，混合物用乙酸乙酯稀釋。將混合物過(guò)濾。分離有機(jī)層，并經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥。過(guò)濾并濃縮后，粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜(預(yù)填充100g)，用梯度0~70% EtOAc/己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物。MS (ESI) m/z 545 (M+H)。

步驟6. 2-(1-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物 將DCM(12ml)中的4-(2-(5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸叔丁酯(1200mg，2.202mmol)與甲基三氧化錸(165mg，0.661mmol)和過(guò)氧化氫(35%，1.012ml，11.01mmol)混合，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。將混合物濃縮，并通過(guò)硅膠柱色譜Isolute Flash Si；預(yù)填充100g，用0~80%梯度EtOAc/異己烷洗脫純化，得到產(chǎn)物。MS (ESI) m/z 561 (M+H)。

步驟7和8. 將DCM(3ml)中的2-(1-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(500mg，0.891mmol)與TFA(3.00ml)混合，然后在室溫下攪拌0.5小時(shí)。加入甲苯(20mL)。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮混合物。粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠柱色譜Isolute Flash Si；預(yù)填充100g，用0~8%梯度的MeOH/DCM洗脫純化，得到產(chǎn)物。外消旋產(chǎn)物通過(guò)SFC在AS 21x250mm柱上，用2:1 MeOH/MeCN/CO₂，70mL/min，100bar，35℃洗脫分離，得到兩種對(duì)映異構(gòu)體：緩慢洗脫的異構(gòu)體(實(shí)施例27)，MS (ESI) m/z 505 (M+H))和快速洗脫的異構(gòu)體(實(shí)施例28)，MS (ESI) m/z 505 (M+H)。

實(shí)施例29 & 30

2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(3-氯-6-氰基-2-氟苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例29和30)

步驟1. 4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸甲酯(6-B) 將LiOH H₂O (0.44g，10.6mmol)加入到2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸甲酯(2.50g，8.8mmol)的甲醇(25ml)和水(5ml)溶液中，然后在50℃下攪拌1h。將混合物冷卻至室溫，減壓濃縮，并將殘余物在50℃下在真空烘箱中干燥，得到中間體，無(wú)需進(jìn)一步純化。

將中間體溶于DMF(25ml)中，然后加入4-氨基苯甲酸甲酯(1.66g，11.0mmol)、HATU(4.18g，11.0mmol)和Hunig's堿(1.92ml，11.0mmol)。在室溫下攪拌4h后，混合物用CH₂Cl₂和水稀釋。分離有機(jī)相，水相用CH₂Cl₂(2×20ml)萃取。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，用MgSO₄干燥，過(guò)濾并在減壓下蒸發(fā)溶劑。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(Teledyne Isco Si；預(yù)填充120g)，用0-10% EtOAc/CH₂Cl₂洗脫純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 404.69 (M+H)。

步驟2. 4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸 (6-C) 將LiOH H₂O (0.08g，2.0mmol)加入到4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸甲酯(0.62g，1.54mmol)在MeOH(4ml)、THF(4ml)和水(2ml)的混合物中的溶液中，然后在50℃下攪拌1.5h。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫后，減壓除去溶劑，并將殘余物溶于EtOAc(20ml)中。混合物用1N HCl(2ml，2.0mmol)中和。分離有機(jī)相，水相用EtOAc(2×10ml)萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)MgSO₄干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(Teledyne Isco Si；預(yù)填充40g)，用0-30% EtOAc/CH₂Cl₂洗脫純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 390.04 (M+H)。

步驟3和4. 4-(2-(5-(3-氯-6-氰基-2-氟苯基)吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)-苯甲酸 (6-F) 向微波小瓶中裝入4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸(119mg，0.3mmol)、雙(頻哪醇合)二硼(84mg，0.33mmol)、乙酸鉀(58.9mg，0.600mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(33mg，0.05mmol)并加蓋。通過(guò)真空/回填N₂(X2)將空氣與N₂交換。向混合物中加入二噁烷(3ml)和DMF(0.5ml)，并將其在120℃下加熱1h。冷卻后，將2-溴-4-氯-3-氟芐腈(63mg，0.27mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)二氯甲烷絡(luò)合物(33mg，0.05mmol)、碳酸鉀(83mg，0.60mmol)和水(0.4ml)加入到混合物中，并通過(guò)冷凍-真空-解凍和回填N₂將其脫氣。然后，將混合物在90℃下加熱2h。冷卻后，反應(yīng)混合物用EtOAc和水稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)硅藻土過(guò)濾并用EtOAc洗滌。分離有機(jī)相，水相用EtOAc萃取。合并的有機(jī)相經(jīng)MgSO₄干燥，過(guò)濾，減壓濃縮，殘余物通過(guò)硅膠柱柱色譜(Teledyne Isco Si；預(yù)填充40g)，用0-50% EtOAc/己烷洗脫純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 463.98 (M+H)。

步驟5. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(3-氯-6-氰基-2-氟苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例29和30) 將mCPBA(47mg，0.28mmol)加入到4-(2-(5-(3-氯-6-氰基-2-氟苯基)吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸(6-F，51mg，0.11mmol)在CH₂Cl₂(2ml)中的混合物中，然后在室溫下攪拌2h。然后，減壓除去溶劑，殘余物通過(guò)硅膠柱色譜(Teledyne Isco Si；預(yù)填充24g)，用0-10% MeOH/CH₂Cl₂洗脫純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 479.95 (M+H)。

外消旋體6-F用以下條件分離：柱IA(30X250mm)，洗脫劑80% 2:1 MeOH:MeCN/CO2，70ml/min，100bar，MeOH/CH2Cl2/NH4OH中10mg/ml，35℃，254nm，得到2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(3-氯-6-氰基-2-氟苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例29，快速洗脫的異構(gòu)體)和2-(1-((4-羧基苯基)-氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(3-氯-6-氰基-2-氟苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例30，緩慢洗脫的異構(gòu)體)。

實(shí)施例31 & 32

2-(1-((4-羧基-2-氯苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例31和32)

步驟1. 2-(5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸乙酯(7-B) 在13℃下向圓底燒瓶中加入7-A(2.7g，9.06mmol)、K₃PO₄(5.77g，27.2mmol)、(4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(3.52g，9.96mmol)、THF(40mL)、水(8mL)和Pd(dppf)Cl₂(0.295g，0.453mmol)。將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌2h。過(guò)濾混合物，并濃縮濾液。殘余物用水(60mL)稀釋?zhuān)⒂肊tOAc(20mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，40g Agela flash柱，0-20% EtOAc/PE，40min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (400 MHz，CDCl₃)：δ8.56 (d，J=1.5 Hz，1 H)，8.03 (d，J=8.6 Hz，1 H)，7.65 (dd，J=8.1，2.1 Hz，1 H)，7.47 (d，J=8.2 Hz，1 H)，7.34 (dd，J=8.8，2.2 Hz，1 H)，7.17 (d，J=2.4 Hz，1 H)，6.25 (br. s.，1 H)，4.21 (dd，J=9.8，7.2 Hz，2 H)，4.00 (t，J=7.6 Hz，1 H)，2.01 - 2.09 (m，1 H)，1.85 - 1.93 (m，1 H)，1.44 (s，9 H)，1.26 (t，J=7.1 Hz，3 H)，0.66 - 0.74 (m，1 H)，0.43 (td，J=8.5，4.1 Hz，2 H)，0.10 - 0.17 (m，1 H)，-0.03 - 0.07 (m，1 H)。MS (ESI) m/z 445.2 (M+H)。

步驟2. 2-(5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸(7-C) 向圓底燒瓶中加入7-B(2g，4.49mmol)、乙醇(40mL)、水(4mL)和氫氧化鋰水合物(0.207g，4.94mmol)。將反應(yīng)混合物在15℃下攪拌18h。將反應(yīng)混合物在35℃下攪拌24h。LCMS顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物濃縮，用水(20mL)稀釋并用飽和檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至pH 4-5?；旌衔镉肈CM(15mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。MS (ESI) m/z 417.2 (M+H)。

步驟3. 4-(2-(5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)-3-氯苯甲酸甲酯(7-E) 在15℃下向圓底燒瓶中加入7-C(15mL，1.440mmol)的粗溶液、7-D(267mg，1.440mmol)、HATU(657mg，1.728mmol)和Et₃N(0.602mL，4.32mmol)。將反應(yīng)混合物在15℃下攪拌48h。將混合物濃縮，殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，20g Agela flash柱，0-20% EtOAc/PE，40min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (400 MHz，CDCl₃)：δ10.78 (s，1 H)，8.68 (s，1 H)，8.58 (d，J=8.8 Hz，1 H)，8.05 (s，1 H)，7.93 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.69 - 7.75 (m，1 H)，7.44 (d，J=7.7 Hz，1 H)，7.37 (dd，J=8.9，2.3 Hz，1 H)，7.21 (d，J=2.2 Hz，1 H)，6.19 (br. s.，1 H)，3.97 (t，J=7.5 Hz，1 H)，3.90 (s，3 H)，2.06 - 2.15 (m，2 H)，1.43 (s，10 H)，0.70 (br. s.，1 H)，0.34 - 0.52 (m，2 H)，0.09 - 0.16 (m，1 H)，-0.08 - 0.01 (m，1 H)。MS (ESI) m/z 584.2 (M+H)。

步驟4. 5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-2-(1-((2-氯-4-(甲氧基羰基)苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)吡啶1-氧化物(7-F) 在15℃下向圓底燒瓶中加入7-E(500mg，0.855mmol)、DCM(10mL)和3-氯過(guò)氧苯甲酸(227mg，1.027mmol)。將反應(yīng)混合物在15℃下攪拌18h?；旌衔镉蔑柡蚇a₂SO₃溶液(3mL)淬滅，并用DCM(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用飽和NaHCO₃(10mL×3)溶液洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，20g Agela flash柱，0-25% EtOAc/PE，40min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (400 MHz，CDCl₃)：δ10.74 (s，1 H)，8.49 (d，J=8.6 Hz，1 H)，8.40 (s，1 H)，8.05 (s，1 H)，7.90 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.48 (d，J=8.2 Hz，1 H)，7.34 - 7.42 (m，2 H)，7.19 (d，J=2.2 Hz，1 H)，6.19 (s，1 H)，4.92 (dd，J=8.9，5.8 Hz，1 H)，3.89 (s，3 H)，2.39 - 2.50 (m，1 H)，1.65 - 1.74 (m，1 H)，1.40 (s，9 H)，0.84 (br. s.，1 H)，0.52 (d，J=7.9 Hz，2 H)，0.12 - 0.29 (m，2 H)。MS (ESI) m/z 600.3 (M+H)。

步驟5. 5-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-2-(1-((4-羧基-2-氯苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)吡啶1-氧化物(7-G) 在15℃下向圓底燒瓶中加入7-F(440mg，0.733mmol)、MeOH(10mL)、DCM(2mL)、水(2mL)和氫氧化鋰水合物(30.7mg，0.733mmol)。將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌18h。將混合物濃縮，用飽和檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至pH 4-5，并用DCM(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。

¹H NMR (400 MHz，CDCl₃)：δ 9.93 (br. s.，1 H)，8.48 (s，1 H)，8.32 (d，J=8.6 Hz，1 H)，7.82 - 7.91 (m，2 H)，7.71 (d，J=8.8 Hz，1 H)，7.55 - 7.60 (m，1 H)，7.48 (d，J=8.4 Hz，1 H)，7.38 (dd，J=8.8，2.2 Hz，1 H)，7.23 (d，J=2.2 Hz，1 H)，6.64 (br. s.，1 H)，4.89 (dd，J=8.7，6.1 Hz，1 H)，2.37 - 2.46 (m，1 H)，1.72 - 1.81 (m，1 H)，1.39 (s，10 H)，0.83 (br. s.，1 H)，0.53 (d，J=7.9 Hz，2 H)，0.21 (d，J=19.4 Hz，2 H)。MS (ESI) m/z 586.0 (M+H)。

步驟6. 5-(2-氨基-5-氯苯基)-2-(1-((4-羧基-2-氯苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)吡啶1-氧化物(7-H) 在15℃下向圓底燒瓶中加入7-G(450mg，0.691mmol)、DCM(6mL)和TFA(3mL)。將反應(yīng)混合物在15℃下攪拌2h。將反應(yīng)混合物濃縮，得到標(biāo)題化合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。MS (ESI) m/z 486.2 (M+H)。

步驟7. 2-(1-((4-羧基-2-氯苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(7-I) 向圓底燒瓶中加入7-H(180mg，0.370mmol)、乙酸(5mL)、三甲氧基甲烷(786mg，7.40mmol)和疊氮化鈉(481mg，7.40mmol)。將反應(yīng)混合物在40℃下攪拌18h。在0℃下將反應(yīng)混合物用飽和亞硝酸鈉溶液(6mL)淬滅，并用EtOAc(15mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)制備型HPLC(TFA條件)純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 539.1 (M+H)。

步驟8. 2-(1-((4-羧基-2-氯苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例31和32) 7-I(100mg，0.185mmol)通過(guò)SFC(條件：儀器SFC-80-(8)，AD(250mm*30mm，10um)，堿-IPA，開(kāi)始B 55%，流速(mL/min) 80)純化，得到2-(1-((4-羧基-2-氯苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例31，第一個(gè)峰)和2-(1-((4-羧基-2-氯苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物 (實(shí)施例32，第二個(gè)峰)。

實(shí)施例31：(400 MHz，CD₃OD)：δ 9.24 (s，1 H)，8.20 (d，J=1.3 Hz，1 H)，8.04 (d，J=8.6 Hz，1 H)，7.88 (s，1 H)，7.75 (dd，J=8.6，1.5 Hz，1 H)，7.60 - 7.70 (m，2 H)，7.54 - 7.59 (m，1 H)，7.43 (d，J=8.4 Hz，1 H)，7.08 (dd，J=8.3，1.4 Hz，1 H)，4.61 (dd，J=8.6，6.6 Hz，1 H)，1.98 - 2.07 (m，1 H)，1.64 - 1.73 (m，1 H)，0.64 - 0.73 (m，1 H)，0.34 (d，J=8.16 Hz，2 H)，-0.04 - 0.07 (m，2 H)。MS (ESI) m/z 539.0 (M+H)。

實(shí)施例32：(400 MHz，CD₃OD)：δ 9.38 (s，1 H)，8.34 (d，J=1.5 Hz，1 H)，8.18 (d，J=8.6 Hz，1 H)，8.02 (d，J=1.8 Hz，1 H)，7.89 (dd，J=8.6，2.0 Hz，1 H)，7.75 - 7.84 (m，2 H)，7.68 - 7.74 (m，1 H)，7.57 (d，J=8.4 Hz，1 H)，7.23 (dd，J=8.2，1.5 Hz，1 H)，4.75 (dd，J=8.6，6.4 Hz，1 H)，2.16 (dd，J=14.7，7.6 Hz，1 H)，1.79 - 1.87 (m，1 H)，0.77 - 0.87 (m，1 H)，0.44 - 0.54 (m，2 H)，0.11 - 0.24 (m，2 H)。MS (ESI) m/z 539.1 (M+H)。

通過(guò)使用與上述那些類(lèi)似的程序和合適的原料，合成以下化合物并通過(guò)LCMS表征。

實(shí)施例53 & 54

2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例53和54)

步驟1. 2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸(8-B) 在10℃下向圓底燒瓶中加入2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酸乙酯(2g ，6.7mmol)、MeOH(20mL)、水(2mL)和氫氧化鈉(0.40g，10mmol)。將反應(yīng)混合物在10℃下攪拌18h。將反應(yīng)混合物濃縮，用水(20mL)稀釋?zhuān)⒒旌衔镉蔑柡蜋幟仕崛芤赫{(diào)節(jié)至pH 4-5。混合物用DCM(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，并將濾液不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。MS (ESI) m/z 270.0 (M+H)。

步驟2. 4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸乙酯(8-C) 在12℃下向圓底燒瓶中加入8-B(30ml，6.0mmol)、HATU(2.75g，7.2mmol)、4-氨基苯甲酸乙酯(1.0g，6.0mmol)和三乙胺(2.5mL，18mmol)。將反應(yīng)混合物在12℃下攪拌18h。將混合物濃縮，殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，40g Agela flash柱，0-25% EtOAc/PE，40min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 9.60 (s，1 H)，8.60 (d，J=2.3 Hz，1 H)，7.89 (d，J=8.8 Hz，2 H)，7.72 (dd，J=8.3，2.26 Hz，1 H)，7.51 (d，J=8.5 Hz，2 H)，7.13 - 7.18 (m，1 H)，4.25 (q，J=7.2 Hz，2 H)，3.73 (dd，J=8.3，7.0 Hz，1 H)，1.88 (dt，J=18.2，7.3 Hz，2 H)，1.28 (t，J=7.2 Hz，3 H)，0.45 - 0.57 (m，1 H)，0.23 - 0.37 (m，2 H)，-0.05 - 0.04 (m，1 H)，-0.20 - -0.11 (m，1 H)。MS (ESI) m/z 417.1 (M+H)。

步驟3. 5-溴-2-(3-環(huán)丙基-1-((4-(乙氧基羰基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)吡啶1-氧化物(8-D) 在12℃下向圓底燒瓶中加入8-C(300mg，0.719mmol)、DCM(6mL)和3-氯過(guò)氧苯甲酸(207mg，0.935mmol)。將反應(yīng)混合物在12℃下攪拌18h?；旌衔镉蔑柡蚇a₂SO₃溶液(3mL)淬滅，用水(15mL)稀釋?zhuān)⒂肈CM(10mL×3)萃取混合物。合并的有機(jī)層用飽和NaHCO₃(10 mL×3)溶液洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)正相色譜(ISCO，SiO₂，20g Agela flash柱，0-25% EtOAc/PE，40min，干載)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 10.32 (br. s.，1 H)，8.30 (d，J=1.8 Hz，1 H)，7.76 (d，J=8.8 Hz，2 H)，7.39 (d，J=8.5 Hz，2 H)，7.31 (dd，J=8.5，1.8 Hz，1 H)，7.06 (s，1 H)，4.52 (dd，J=8.8，6.3 Hz，1 H)，4.14 (q，J=7.1 Hz，2 H)，2.12 - 2.22 (m，1 H)，1.43 (d，J=6.8 Hz，1 H)，1.17 (t，J=7.0 Hz，3 H)，0.57 (d，J=7.3 Hz，1 H)，0.24 - 0.31 (m，2 H)，-0.01 (d，J=5.0 Hz，1 H)，-0.10 - -0.04 (m，1 H)。MS (ESI) m/z 435.0 (M+H)。

步驟4. 5-(5-氯-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)-2-(3-環(huán)丙基-1-((4-(乙氧基羰基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)吡啶1-氧化物(8-F) 在15℃下向圓底燒瓶中加入8-D(60mg，0.138mmol)、1-(4-氯-2-(三甲基甲錫烷基)苯基)-1H-1,2,3-三唑(47.4mg，0.138mmol)、甲苯(2mL)和Pd(Ph₃P)₄(16.00mg，0.014mmol)。將反應(yīng)混合物在110℃下攪拌18h，并將混合物在140℃下攪拌5h。將混合物過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)制備型TLC(SiO₂，PE:EtOAc=1:1)純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 532.3 (M+H)。

步驟5. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(8-G)

在13℃下向圓底燒瓶中加入8-F(60mg，0.068mmol)、MeOH(3mL)、水(1mL)和氫氧化鈉(5.41mg，0.135mmol)。將反應(yīng)混合物在13℃下攪拌18h。將混合物濃縮，并將殘余物通過(guò)制備型HPLC(TFA緩沖液)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ 7.96 - 8.09 (m，2 H)，7.80 (d，J=8.4 Hz，2 H)，7.40 - 7.65 (m，7 H)，7.06 (d，J=8.5 Hz，1 H)，4.41 - 4.51 (m，1 H)，1.68 - 1.86 (m，2 H)，0.68 (br. s.，1 H)，0.32 (d，J=7.5 Hz，2 H)，0.00 (d，J=5.1 Hz，2 H)。MS (ESI) m/z504.2 (M+H)。

步驟6. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例53和54) 外消旋化合物2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)吡啶1-氧化物(25mg，0.050mmol)通過(guò)SFC在Chiralpak OD柱上，用50:50的超臨界CO₂/MeOH(0.1%NH₃H₂O)以50mL/min洗脫分離，得到實(shí)施例53(第一個(gè)峰)和實(shí)施例54(第二個(gè)峰)。

實(shí)施例53：¹H NMR (CD₃OD，400MHz)：δ 8.11 - 8.23 (m，2 H)，7.96 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.63 - 7.82 (m，6 H)，7.58 (d，J=8.4 Hz，1 H)，7.22 (d，J=8.2 Hz，1 H)，4.58 - 4.65 (m，1 H)，1.87 - 2.01 (m，2 H)，0.83 (br. s.，1 H)，0.48 (d，J=7.7 Hz，2 H)，0.16 (d，J=5.1 Hz，2 H)。MS (ESI) m/z 504.1 (M+H)。

實(shí)施例54：¹H NMR (CD₃OD，400MHz)：δ 8.15 (d，J=19.6 Hz，2 H)，7.94 (d，J=8.2 Hz，2 H)，7.61 - 7.79 (m，6 H)，7.57 (d，J=8.6 Hz，1 H)，7.20 (d，J=7.4 Hz，1 H)，4.60 (dd，J=8.6，6.3 Hz，1 H)，1.85 - 1.98 (m，2 H)，0.82 (d，J=7.0 Hz，1 H)，0.46 (d，J=7.4 Hz，2 H)，0.10 - 0.19 (m，2 H)。MS (ESI) m/z 504.1 (M+H)。

實(shí)施例55

2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(吡啶-2-基)苯基)吡啶1-氧化物

步驟1. 4-(3-環(huán)丙基-2-(5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)吡啶-2-基)丙酰胺基)苯甲酸乙酯 在15℃下向圓底燒瓶中加入4-(2-(5-溴吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸乙酯(100mg，0.240mmol)、乙酸鉀(70.6mg，0.719mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-聯(lián)(1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷)(91mg，0.359mmol)、二噁烷(2mL)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(35.1mg，0.048mmol)。將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌18h。反應(yīng)混合物不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。MS (ESI) m/z 383.2 (M+H)。

步驟2. 4-(2-(5-(2-溴-5-氯苯基)吡啶-2-基)-3-環(huán)丙基丙酰胺基)苯甲酸乙酯(9-B) 在13℃下向圓底燒瓶中加入來(lái)自步驟1的9-A、1-溴-4-氯-2-碘苯(66.0mg，0.208mmol)、K₂CO₃ (43.1mg，0.312mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(15.22mg，0.021mmol)。將反應(yīng)混合物在50℃下攪拌18h。將混合物過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)制備型TLC(SiO₂，PE:EtOAc=2:1)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ10.21 (s，1 H)，8.71 (d，J=2.0 Hz，1 H)，8.06 (d，J=8.8 Hz，2 H)，7.76 - 7.88 (m，2 H)，7.71 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.43 - 7.50 (m，2 H)，7.33 (d，J=8.2 Hz，1 H)，4.41 (q，J=7.1 Hz，2 H)，3.98 (t，J=7.5 Hz，1 H)，2.03 - 2.20 (m，2 H)，1.44 (t，J=7.1 Hz，2 H)，0.69 - 0.81 (m，1 H)，0.42 - 0.56 (m，2 H)，0.19 (dd，J=9.2，4.5 Hz，1 H)，-0.02 - 0.06 (m，1 H)。MS (ESI) m/z 529.2 (M+H)。

步驟3. 5-(2-溴-5-氯苯基)-2-(3-環(huán)丙基-1-((4-(乙氧基羰基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)吡啶1-氧化物(9-C) 在15℃下向圓底燒瓶中加入9-B(80mg，0.129mmol)、DCM(4mL)和3-氯過(guò)氧苯甲酸(42.8mg，0.193mmol)。將反應(yīng)混合物在15℃下攪拌18h?；旌衔镉蔑柡蚇a₂SO₃溶液(3mL)淬滅，用水(10mL)稀釋?zhuān)⒂肈CM(10mL×3)萃取。合并的有機(jī)層用飽和NaHCO₃ (10mL×3)溶液洗滌，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步驟。

¹H NMR (CDCl₃，400MHz)：δ10.86 (br. s.，1 H)，8.33 (s，1 H)，7.91 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.66 (d，J=1.5 Hz，1 H)，7.58 (d，J=8.6 Hz，2 H)，7.35 - 7.39 (m，2 H)，7.17 - 7.20 (m，2 H)，4.74 - 4.83 (m，1 H)，4.27 (q，J=7.1 Hz，2 H)，2.36 - 2.47 (m，1 H)，1.56 - 1.60 (m，1 H)，1.31 (t，J=7.2 Hz，3 H)，0.80 (d，J=10.1 Hz，1 H)，0.44 (d，J=7.1 Hz，2 H)，0.04 - 0.23 (m，2 H)。MS (ESI) m/z 545.2 (M+H)。

步驟4. 5-(5-氯-2-(吡啶-2-基)苯基)-2-(3-環(huán)丙基-1-((4-(乙氧基羰基)苯基) 氨基)-1-氧代丙-2-基)吡啶1-氧化物(9-D) 向微波管中加入9-C(35mg，0.064mmol)、2-(三丁基甲錫烷基)吡啶(28.4mg，0.077mmol)、甲苯(2mL)和Pd(PPh₃)₄(14.87mg，0.013mmol)。將反應(yīng)混合物在微波下在140℃攪拌40min。將混合物過(guò)濾并濃縮。殘余物通過(guò)制備型TLC(SiO₂，PE:EtOAc=1:2)純化，得到標(biāo)題化合物。MS (ESI) m/z 542.3 (M+H)。

步驟5. 2-(1-((4-羧基苯基)氨基)-3-環(huán)丙基-1-氧代丙-2-基)-5-(5-氯-2-(吡啶-2-基)苯基)吡啶1-氧化物(實(shí)施例55) 在15℃下向圓底燒瓶中加入9-D(15mg，0.028mmol)、MeOH(3mL)、水(1mL)和氫氧化鈉(2.214mg，0.055mmol)。將反應(yīng)混合物在15℃下攪拌18h。LCMS顯示反應(yīng)完成。將混合物濃縮，并將殘余物通過(guò)制備型HPLC(TFA緩沖液)純化，得到標(biāo)題化合物。

¹H NMR (CD₃OD，400MHz)：δ 8.44 (d，J=4.7 Hz，1 H)，8.04 (s，1 H)，7.83 (d，J=8.6 Hz，3 H)，7.51 - 7.63 (m，4 H)，7.35 - 7.48 (m，4 H)，7.14 (d，J=7.4 Hz，1 H)，4.44 - 4.51 (m，1 H)，1.74 - 1.86 (m，2 H)，0.70 (br. s.，1 H)，0.33 (dt，J=7.2，3.8 Hz，2 H)，-0.03 - 0.07 (m，2 H)。MS (ESI) m/z 514.1 (M+H)。

通過(guò)使用上述方法和合適的原料，合成以下化合物。這些化合物通過(guò)LC/MS表征。

因子X(jué)Ia測(cè)定

本發(fā)明化合物作為凝血因子X(jué)Ia抑制劑的有效性可以使用相關(guān)的純化絲氨酸蛋白酶和合適的合成底物來(lái)測(cè)定。在不存在和存在本發(fā)明化合物的兩種情況下測(cè)量相關(guān)絲氨酸蛋白酶對(duì)發(fā)色或熒光底物的水解速率。測(cè)定在室溫或37℃下進(jìn)行。底物的水解導(dǎo)致氨基三氟甲基香豆素(AFC)的釋放，通過(guò)在405nm激發(fā)下測(cè)量在510nm處的發(fā)射增加，通過(guò)熒光分光光度法監(jiān)測(cè)。在抑制劑存在下熒光變化速率的降低指示酶抑制。這樣的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。該測(cè)定的結(jié)果表示為抑制常數(shù)K_i。

在pH 7.4的含有150mM NaCl、5mM CaCl₂和0.1% PEG 8000(聚乙二醇；JT Baker或Fisher Scientific)的50mM HEPES緩沖液中進(jìn)行因子X(jué)Ia測(cè)定。使用終濃度為40pM的純化人因子X(jué)Ia(Sekisui Diagnostics)和濃度為100μM的合成底物Z-Gly-Pro-Arg-AFC，TFA鹽(Sigma #C0980)進(jìn)行測(cè)定。

通過(guò)將底物儲(chǔ)液稀釋至含有酶或用抑制劑平衡的酶的溶液中至少十倍至終濃度≤0.1 Km進(jìn)行活性測(cè)定。在對(duì)照實(shí)驗(yàn)中測(cè)定在酶和抑制劑之間實(shí)現(xiàn)平衡所需的時(shí)間。測(cè)量在不存在抑制劑(Vo)或存在抑制劑(Vi)時(shí)產(chǎn)物形成的初速度。假定為競(jìng)爭(zhēng)性抑制，并且相比Km/[S]、[I]/e和[I]/e (其中[S]、[I]和e分別代表底物、抑制劑和酶的總濃度)，個(gè)體可忽略不計(jì)，抑制劑從酶解離的平衡常數(shù)(Ki)可以從Vo/Vi對(duì)[I]的依賴(lài)性獲得，如下式所示。

Vo/Vi = 1 + [I]/Ki

該測(cè)定顯示的活性表明本發(fā)明化合物可以治療上用于治療或預(yù)防患有不穩(wěn)定型心絞痛、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、難治性心絞痛、心肌梗死、短暫性腦缺血發(fā)作、心房顫動(dòng)、中風(fēng)例如血栓性中風(fēng)或栓塞性中風(fēng)、靜脈血栓形成、冠狀動(dòng)脈和腦動(dòng)脈血栓形成、腦和肺栓塞、動(dòng)脈粥樣硬化、深靜脈血栓形成、彌散性血管內(nèi)凝血、以及再通血管的再閉塞或再狹窄的患者的各種心血管和/或腦血管血栓栓塞性病狀。

激肽釋放酶測(cè)定

本發(fā)明化合物作為激肽釋放酶抑制劑的有效性可以使用相關(guān)的純化絲氨酸蛋白酶和合適的合成底物來(lái)測(cè)定。在不存在和存在本發(fā)明化合物的兩種情況下測(cè)量相關(guān)絲氨酸蛋白酶對(duì)發(fā)色或熒光底物的水解速率。測(cè)定在室溫或37℃下進(jìn)行。底物的水解導(dǎo)致氨基三氟甲基香豆素(AFC)的釋放，通過(guò)在405nm激發(fā)下測(cè)量在510nm處的發(fā)射增加，通過(guò)熒光分光光度法監(jiān)測(cè)。在抑制劑存在下熒光變化速率的降低指示酶抑制。這樣的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。該測(cè)定的結(jié)果表示為抑制常數(shù)K_i。

在pH 7.4的含有150mM NaCl、5mM CaCl₂和0.1% PEG 8000(聚乙二醇；Fisher Scientific)的50mM HEPES緩沖液中進(jìn)行激肽釋放酶測(cè)定。使用終濃度為0.5nM的純化人血漿激肽釋放酶(Enzyme Research Laboratories)和濃度為100mM的合成底物乙?；?K-P-R-AFC(Sigma # C6608)進(jìn)行測(cè)定。

通過(guò)將底物儲(chǔ)液稀釋至含有酶或用抑制劑平衡的酶的溶液中至少十倍至終濃度≤0.2 Km進(jìn)行活性測(cè)定。在對(duì)照實(shí)驗(yàn)中測(cè)定在酶和抑制劑之間實(shí)現(xiàn)平衡所需的時(shí)間。在線性進(jìn)展曲線條件下進(jìn)行反應(yīng)，并在405 Ex/510 Em nm下測(cè)量熒光增加。將值轉(zhuǎn)化為對(duì)照反應(yīng)的抑制百分比(減去100%抑制值后)。IC₅₀通過(guò)來(lái)自四參數(shù)對(duì)數(shù)曲線擬合的拐點(diǎn)確定。使用Cheng Prusoff方程，Ki = IC₅₀/(1+([S]/Km))計(jì)算Ki。

該測(cè)定顯示的活性表明本發(fā)明化合物可以治療上用于治療或預(yù)防患有不穩(wěn)定型心絞痛、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、難治性心絞痛、心肌梗死、短暫性腦缺血發(fā)作、心房顫動(dòng)、中風(fēng)例如血栓性中風(fēng)或栓塞性中風(fēng)、靜脈血栓形成、冠狀動(dòng)脈和腦動(dòng)脈血栓形成、腦和肺栓塞、動(dòng)脈粥樣硬化、深靜脈血栓形成、彌散性血管內(nèi)凝血、以及再通血管的再閉塞或再狹窄的患者的各種心血管和/或腦血管血栓栓塞性病狀。

所選化合物的因子X(jué)Ia(FXIa)和血漿激肽釋放酶(P. KLK)數(shù)據(jù)如下：

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