本申請(qǐng)要求于2014年10月16日提交的美國專利申請(qǐng)?zhí)?2/064,948和2014年10月17日提交的美國專利申請(qǐng)?zhí)?2/065,590的權(quán)益和優(yōu)先權(quán)，將其各自的內(nèi)容通過引用以其全文結(jié)合在此。
背景技術(shù)：
：疾病相關(guān)的染色質(zhì)修飾酶(例如，EZH2)在如增生性病癥、代謝性病癥以及血液病癥的疾病中發(fā)揮作用。因此，存在對(duì)開發(fā)能夠調(diào)節(jié)EZH2的活性的小分子的需要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了在有需要的細(xì)胞或受試者中通過使該細(xì)胞接觸或向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑來治療或減輕表征為異常、誤調(diào)或增加的Zeste同源物增強(qiáng)子2(EZH2)活性和/或表達(dá)的病癥的癥狀的方法，該病癥例如免疫逃逸、癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙、降低的免疫應(yīng)答、減弱的炎癥、減少的主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)、或癌癥。在某一方面中，該方法涉及在癌細(xì)胞中抑制免疫逃逸，該方法包括使細(xì)胞與治療有效量的EZH2抑制劑接觸的步驟。在某一方面中，該方法涉及在有需要的受試者中治療和/或矯正癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙，該方法包括向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑的步驟。在某一方面中，該方法涉及在有需要的受試者中加強(qiáng)、增加或誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，該方法包括向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑的步驟。在某一方面中，該方法涉及在癌細(xì)胞中增加主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)，該方法包括使該癌細(xì)胞與治療有效量的EZH2抑制劑接觸的步驟。在某一方面中，該方法涉及在有需要的受試者中增強(qiáng)炎癥，該方法包括向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑的步驟。在某一方面中，該方法涉及在有需要的受試者中治療癌癥或細(xì)胞增殖性病癥，該方法包括向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑的步驟。在某一方面中，該方法涉及在有需要的受試者中測(cè)定包括EZH2抑制劑的治療的有效性的可能性，該方法包括以下步驟：(1)從該受試者獲得生物學(xué)樣品；和(2)分析與對(duì)照樣品相比時(shí)該生物學(xué)樣品中主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)的降低。在生物學(xué)樣品與對(duì)照樣品相比具有降低的MHC表達(dá)時(shí)，包括EZH2抑制劑的治療更可能在受試者中是有效的。在某一方面中，該方法涉及在有需要的受試者中測(cè)定包括EZH2抑制劑的治療的有效性的可能性，該方法包括分析與對(duì)照樣品相比時(shí)從受試者獲得的生物學(xué)樣品在樣品中主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)的降低。如果生物學(xué)樣品與對(duì)照樣品相比時(shí)具有降低的MHC表達(dá)，那么包括EZH2抑制劑的治療更可能在受試者中是有效的。在某一方面中，該方法涉及在有需要的受試者中篩選包括EZH2抑制劑的治療的有效性，該方法包括(1)從受試者獲得第一生物學(xué)樣品和第二生物學(xué)樣品；(2)使第二生物學(xué)樣品與EZH2抑制劑接觸；(3)分析第一生物學(xué)樣品和第二生物學(xué)樣品中主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)；并且(4)比較第一生物學(xué)樣品中的MHC表達(dá)與第二生物學(xué)樣品中的MHC表達(dá)。如果與第一生物學(xué)樣品中的表達(dá)相比時(shí)，第二生物學(xué)樣品具有增加的MHC表達(dá)，那么包括EZH2抑制劑的治療更可能在受試者中是有效的。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者包括異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者包括染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，易位導(dǎo)致SS18-SSX融合基因。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者具有降低的INI1(本文中也稱為BAF47、SNF5或SMARCB1)的功能或表達(dá)。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者具有降低的INI1的功能和表達(dá)。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，EZH2抑制劑是具有以下化學(xué)式的化合物A(本文中也稱為E7438或EPZ-6438或他折司他(tazemetostat))：及其藥學(xué)上可接受的鹽或其立體異構(gòu)體。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，EZH2抑制劑是以下項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)：及其藥學(xué)上可接受的鹽或其立體異構(gòu)體。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括給予化學(xué)治療化合物，例如PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，癌細(xì)胞在受試者(例如人類)體內(nèi)。在上文多個(gè)方面的實(shí)施例中，免疫逃逸、癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙、需要加強(qiáng)的免疫應(yīng)答、炎癥或癌癥表征為與非癌細(xì)胞相比時(shí)癌細(xì)胞中降低的以下項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)的表達(dá)：MHC、β2微球蛋白、腫瘤壞死因子(TNF)受體、低分子質(zhì)量多肽2(LMP2)、低分子質(zhì)量多肽7(LMP7)、抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)和TAP相關(guān)糖蛋白(泰帕森(tapasin))。MHC可為人類白細(xì)胞抗原(HLA)，例如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DMα、HLA-DMβ、HLA-DOα、HLA-DOβ1、HLA-DPα1、HLA-DPβ1、HLA-DRα、HLA-DRβ1、HLA-DRβ3.、HLA-DRβ4、HLA-E、HLA-F、HLA-G、HLA-K或HLA-L。除非另有定義，否則本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員一般所理解的相同的含義。在說明書中，除非上下文明確指示其他情況，否則單數(shù)形式也包含復(fù)數(shù)含義。除非上下文明確陳述或顯而易見，否則如本文中所用術(shù)語“一(a)”、“一個(gè)(an)”和“該(the)”應(yīng)理解為單數(shù)或復(fù)數(shù)。除非上下文明確陳述或顯而易見，否則如本文所用術(shù)語“或”應(yīng)理解為是包含性的。除非上下文明確陳述或顯而易見，否則如本文所用術(shù)語“約”應(yīng)理解為在本領(lǐng)域的普通公差的范圍內(nèi)，例如在均值的2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差內(nèi)。約可理解為在所述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％內(nèi)。除非上下文另外闡明，否則本文中提供的所有數(shù)值都由術(shù)語“約”修飾。盡管在本發(fā)明的實(shí)踐或測(cè)試中可使用與本文所述的方法和材料相似或等效的方法和材料，但下文闡述適宜的方法和材料。本文中所提到的所有公開案、專利申請(qǐng)、專利和其他參考文獻(xiàn)都是通過引用結(jié)合在此。不承認(rèn)本文中引用的參考文獻(xiàn)構(gòu)成所要求保護(hù)的發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。如果出現(xiàn)沖突，將以包含定義在內(nèi)的本說明書為準(zhǔn)。另外，材料、方法和實(shí)例僅具有說明性，且不意在是限制性的。上文多個(gè)方面和實(shí)施例中的任一者可與任何其他方面或?qū)嵤├M合。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)從以下詳細(xì)說明和權(quán)利要求書將是清楚的。附圖說明圖1是細(xì)胞裂解產(chǎn)物的蛋白質(zhì)印跡(westernblot)，其證明HS-SY-II細(xì)胞系中的SS18-SSX1表達(dá)和INI1(本文中也稱為BAF47、SNF5或SMARCB1)下調(diào)。圖2A是經(jīng)分離組蛋白的蛋白質(zhì)印跡，其顯示多種細(xì)胞系中的H3K27三甲基化(H3K27me3)和H3K27二甲基化(H3K27me2)水平。圖2B至2D是一系列圖式，其顯示多種細(xì)胞系中的H3K27me3/總H3(B)、H3K27me2/總H3(C)或H3K27me3/H3K27me2(D)定量比率。這些定量數(shù)據(jù)來源于通過蛋白質(zhì)印跡分析獲得的蛋白質(zhì)條帶的計(jì)算。圖3A至3D是一系列圖式，其顯示HS-SY-II細(xì)胞對(duì)EZH2抑制劑是高度敏感的，而SW982細(xì)胞并非如此。用化合物E處理圖3A中所示的細(xì)胞系HS-SY-II和圖3B中所示的細(xì)胞系SW982。用化合物A(本文中也稱為E7438或EPZ-6438)處理圖3C中所示的細(xì)胞系HS-SY-II和圖3D中所示的細(xì)胞系SW982。用化合物(化合物E或化合物A)以指示濃度將每一類型的細(xì)胞預(yù)處理7天，并將所述細(xì)胞重新鋪板并再處理7天。通過CellTiter-發(fā)光細(xì)胞活力分析測(cè)定細(xì)胞活力。圖4A至4F證明，INI1水平的降低在軟組織肉瘤細(xì)胞系中賦予對(duì)EZH2抑制劑(EZH2i)的敏感性。(A)是細(xì)胞裂解產(chǎn)物的蛋白質(zhì)印跡，其顯示不同腫瘤細(xì)胞系中的INI1表達(dá)。軟骨肉瘤的腫瘤細(xì)胞系顯示INI1的下調(diào)(例如在細(xì)胞系b和c中)。(B)和(C)是證明細(xì)胞系b(圖表B)和細(xì)胞系c(圖表C)對(duì)EZH2抑制劑敏感的圖表。(D)是細(xì)胞裂解產(chǎn)物的蛋白質(zhì)印跡，其顯示不同細(xì)胞系中的INI1和SS18表達(dá)。(E)是顯示SSX-SS18陽性細(xì)胞對(duì)EZH2抑制劑敏感的圖表。(F)是顯示SSX-SS18陰性細(xì)胞對(duì)EZH2抑制劑不敏感的圖表。圖5A和5B是一系列圖式，其顯示HS-SY-II細(xì)胞對(duì)化合物A是高度敏感的(圖5A)，而SW982細(xì)胞并非如此(圖5B)。用化合物A以指示濃度處理每個(gè)細(xì)胞類型。在第7天將細(xì)胞重新鋪板并再處理7天。通過CellTiter-發(fā)光細(xì)胞活力分析測(cè)定細(xì)胞活力。圖6A顯示在HS-SY-II和SW982細(xì)胞中在用化合物A處理后，降低的H3K27me3/總H3的比率(相對(duì)于對(duì)照的比率)。用化合物A將細(xì)胞處理96小時(shí)并提取組蛋白。通過酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)分析組蛋白標(biāo)記變化。組蛋白標(biāo)記變化在HS-SY-II與SW982之間相當(dāng)，表明這些變化與SS18-SSX融合蛋白的存在無關(guān)。圖6B顯示將H3K27me3/總H3的比率抑制50％所需的化合物濃度(IC50)。圖7A和7B分別顯示HS-SY-II異種移植模型中的藥代動(dòng)力學(xué)(PK)值和藥效動(dòng)力學(xué)(PD)變化。圖7A顯示化合物A的血漿濃度。此處，化合物A是每天兩次經(jīng)口給予小鼠7天。在最后一次劑量之前大約5分鐘和之后3小時(shí)從用化合物A處理的小鼠收集外周血樣品。對(duì)化合物A的血漿濃度進(jìn)行分析。將這些濃度繪圖(n＝5)。每個(gè)條形代表每組中血漿濃度的均值。圖7B顯示在小鼠中化合物A對(duì)HS-SY-II異種移植物中的H3K27me3的抑制性效應(yīng)。此處，化合物A是每天兩次經(jīng)口給予小鼠7天。將腫瘤中的H3K27me3繪圖(n＝5)。每個(gè)條形代表每組中的三甲基化水平的均值±SEM。下表2和3提供關(guān)于圖7B中所示數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。這些統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的結(jié)果證實(shí)了劑量依賴性變化。圖8顯示在體外實(shí)驗(yàn)中，在HS-SY-II和SW982中，在化合物A處理后，推定PD標(biāo)記物的表達(dá)變化。此處，用化合物A或EPZ-011989(其也是EZH2抑制劑并且在本文中還稱為化合物C)處理每個(gè)細(xì)胞類型；顯示濃度和時(shí)期(天數(shù))。通過RT-PCR分析基因表達(dá)變化。將基因表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化為GAPDH水平。顯示作為相對(duì)于0μM處理對(duì)照的比率的條形。下表4提供關(guān)于圖8中所示數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。星號(hào)意指與0μM處理組的水平相比的顯著變化。圖9顯示在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，在HS-SY-II中，在化合物A處理后，推定PD標(biāo)記物的表達(dá)變化。此處，化合物A是每天兩次經(jīng)口給予小鼠7天。在最后一次劑量后大約3小時(shí)收集腫瘤樣品。通過RT-PCR分析基因表達(dá)變化。將基因表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化為GAPDH水平。顯示作為相對(duì)于運(yùn)載體組數(shù)據(jù)的比率的條形。圖10A至10C顯示負(fù)載HS-SY-II異種移植物的無胸腺裸鼠的腫瘤體積均值，所述裸鼠已被以指示劑量給予運(yùn)載體(經(jīng)口或iv(靜脈內(nèi)))、化合物A(經(jīng)口)、多柔比星(iv)或化合物A/多柔比星組合，持續(xù)28天。一周兩次測(cè)量腫瘤體積。進(jìn)行兩次獨(dú)立研究。圖10A和10B顯示第一次研究的結(jié)果，圖10C顯示第二次研究的結(jié)果。來自第二次研究的動(dòng)物的腫瘤是在第28天(最后一次劑量之后3h)收獲，并經(jīng)歷通過ELISA進(jìn)行的H3K27me3分析(圖10D)或針對(duì)增殖標(biāo)記物Ki67的免疫組織化學(xué)(IHC)分析(圖10E)。圖11A至11D顯示負(fù)載滑膜肉瘤腫瘤的兩種不同患者來源異種移植物(PDX)的無胸腺裸鼠的腫瘤體積均值和存活百分比，并且所述裸鼠被以指示劑量給予運(yùn)載體(經(jīng)口)、化合物A(經(jīng)口)或多柔比星(iv)，持續(xù)35天。圖11A和11B顯示來自負(fù)載來自患有高級(jí)紡錘體細(xì)胞肉瘤的57歲男性的PDX的小鼠的數(shù)據(jù)(CTG-0771)。圖11C和11D顯示來自負(fù)載來自16歲女性的PDX的小鼠的數(shù)據(jù)(CTG-0331)。一周兩次測(cè)量腫瘤體積。在第35天停止給藥并一周兩次通過腫瘤測(cè)量觀察動(dòng)物直到第60天為止。在給定動(dòng)物的腫瘤體積超過2000mm3時(shí)，將小鼠安樂死(在卡普蘭-邁耶曲線(Kaplan-Meyerplot)中分析)。圖12A和12B顯示來自多個(gè)小鼠亞組的滑膜肉瘤PDX腫瘤的陣列數(shù)據(jù)，所述腫瘤是在第35天收獲并通過RNA-seq分析加以分析。圖12A是來自負(fù)載來自57歲男性的PDX的小鼠的數(shù)據(jù)；圖12B是來自負(fù)載來自16歲女性的PDX的小鼠的數(shù)據(jù)。顯示在來自經(jīng)運(yùn)載體或400mg/kg化合物ABID處理的小鼠的腫瘤中HLA基因的表達(dá)。在該圖中，藍(lán)色是低表達(dá)并且紅色是高表達(dá)。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供了在有需要的細(xì)胞或受試者中通過使該細(xì)胞接觸或向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑來治療或減輕表征為異常、誤調(diào)或增加的Zeste同源物增強(qiáng)子2(EZH2)活性或表達(dá)的病癥的癥狀的方法，該病癥例如免疫逃逸、癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙、降低的免疫應(yīng)答、減弱的炎癥、減少的主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)、或癌癥。EZH2是多梳抑制復(fù)合體2(PRC2)的酶亞單元，該復(fù)合體催化組蛋白3賴氨酸27(H3K27)的甲基化。組蛋白3賴氨酸27(H3K27)甲基化是有原因地與多種血液學(xué)和一種或多種實(shí)體人類癌癥相關(guān)的轉(zhuǎn)錄抑制表觀遺傳標(biāo)記。在人類癌癥中已報(bào)道若干種導(dǎo)致H3K27的超三甲基化狀態(tài)的分子機(jī)制。本發(fā)明部分基于以下發(fā)現(xiàn)：EZH2抑制劑可有效治療免疫逃逸、或表征為或由以下誘導(dǎo)的病癥：癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙、降低的免疫應(yīng)答、減弱的炎癥、降低的MHC表達(dá)。在某些實(shí)施例中，具有異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性的細(xì)胞、受試者、腫瘤或腫瘤細(xì)胞對(duì)本發(fā)明的EZH2抑制劑是敏感的。人類滑膜肉瘤占所有軟組織惡性腫瘤的8％-10％并且最常發(fā)生于年輕成人的四肢。復(fù)發(fā)性染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)將18號(hào)染色體上的SS18基因與X染色體上的三個(gè)密切相關(guān)基因SSX1、SSX2和極少地SSX4中的一個(gè)融合，得到框內(nèi)融合蛋白，其中SS18的八個(gè)C-末端氨基酸被來自SSXC末端的78個(gè)氨基酸替代。這導(dǎo)致致癌的SS18-SSX融合蛋白的表達(dá)，該融合蛋白結(jié)合到SWI/SNF復(fù)合體，該復(fù)合體逐出野生型SS18和腫瘤抑制物INI1二者，該二者隨后被降解。這導(dǎo)致異?；虮磉_(dá)并最終導(dǎo)致癌癥的發(fā)展。本發(fā)明提供在癌細(xì)胞中抑制免疫逃逸的方法，該方法包括使細(xì)胞與治療有效量的EZH2抑制劑接觸的步驟。本發(fā)明還可提供在有需要的受試者中治療或矯正癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙的方法，該方法包括向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑的步驟。本發(fā)明還可提供在有需要的受試者中加強(qiáng)、增加或誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，該方法包括向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑的步驟。本發(fā)明還可提供在癌細(xì)胞中增加主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)或活性的方法，該方法包括使該癌細(xì)胞與治療有效量的EZH2抑制劑接觸的步驟。本發(fā)明還可提供在有需要的受試者中增強(qiáng)炎癥的方法，該方法包括向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑的步驟。本發(fā)明還可提供在有需要的受試者中治療癌癥或細(xì)胞增殖性病癥的方法，該方法包括向該受試者給予治療有效量的EZH2抑制劑的步驟。本發(fā)明還可提供在有需要的受試者中測(cè)定包括EZH2抑制劑的治療的有效性的可能性的方法，該方法包括以下步驟：(1)從該受試者獲得生物學(xué)樣品；和(2)分析與對(duì)照樣品相比時(shí)該生物學(xué)樣品中主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)的降低。在生物學(xué)樣品與對(duì)照樣品相比具有降低的MHC表達(dá)時(shí)，包括EZH2抑制劑的治療更可能在受試者中是有效的。本發(fā)明還可提供在有需要的受試者中測(cè)定包括EZH2抑制劑的治療的有效性的可能性的方法，該方法包括分析與對(duì)照樣品相比時(shí)從受試者獲得的生物學(xué)樣品在樣品中主要組織相容性復(fù)合物(MHC)表達(dá)的降低。如果生物學(xué)樣品與對(duì)照樣品相比時(shí)具有降低的MHC表達(dá)，那么包括EZH2抑制劑的治療更可能在受試者中是有效的。本發(fā)明還可提供在有需要的受試者中篩選包括EZH2抑制劑的治療的有效性的方法，該方法包括(1)從受試者獲得第一生物學(xué)樣品和第二生物學(xué)樣品；(2)使第二生物學(xué)樣品與EZH2抑制劑接觸；(3)分析第一生物學(xué)樣品和第二生物學(xué)樣品中主要組織相容性復(fù)合物(MHC)的表達(dá)；并且(4)比較第一生物學(xué)樣品中的MHC表達(dá)與第二生物學(xué)樣品中的MHC表達(dá)。如果與第一生物學(xué)樣品中的表達(dá)相比時(shí)，第二生物學(xué)樣品具有增加的MHC表達(dá)，那么包括EZH2抑制劑的治療更可能在受試者中是有效的。在本發(fā)明的實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者包括異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性。在本發(fā)明的實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者包括染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)。在本發(fā)明的實(shí)施例中，易位導(dǎo)致SS18-SSX融合基因。在本發(fā)明的實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者具有降低的INI1(本文中也稱為BAF47、SNF5或SMARCB1)的功能或表達(dá)。在本發(fā)明的實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者具有降低的INI1的功能和表達(dá)。在某些實(shí)施例中，細(xì)胞或受試者被視為或確定為INI1陰性或INI1缺陷。在本發(fā)明的實(shí)施例中，EZH2抑制劑是具有以下化學(xué)式的化合物A：及其藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明的實(shí)施例中，EZH2抑制劑是以下項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)：及其藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明的實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括給予化學(xué)治療化合物，例如PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑。在本發(fā)明的實(shí)施例中，癌細(xì)胞在受試者(例如人類)體內(nèi)。在本發(fā)明的實(shí)施例中，免疫逃逸、癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙、需要加強(qiáng)的免疫應(yīng)答、炎癥或癌癥表征為與非癌細(xì)胞相比時(shí)癌細(xì)胞中降低的以下項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)的表達(dá)：MHC、β2微球蛋白、腫瘤壞死因子(TNF)受體、低分子質(zhì)量多肽2(LMP2)、低分子質(zhì)量多肽7(LMP7)、抗原加工相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(TAP)和TAP相關(guān)糖蛋白(泰帕森)。MHC可為人類白細(xì)胞抗原(HLA)，例如HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DMα、HLA-DMβ、HLA-DOα、HLA-DOβ1、HLA-DPα1、HLA-DPβ1、HLA-DRα、HLA-DRβ1、HLA-DRβ3.、HLA-DRβ4、HLA-E、HLA-F、HLA-G、HLA-K或HLA-L。因此，本發(fā)明可提供在有需要的細(xì)胞或受試者中通過使細(xì)胞接觸或向受試者給予治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物，來治療免疫逃逸、癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙、降低的免疫應(yīng)答、減弱的炎癥、降低的MHC表達(dá)的方法。本發(fā)明還可進(jìn)一步提供本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物的用途，其用于制備可用于治療免疫逃逸、癌細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫功能障礙、降低的免疫應(yīng)答、減弱的炎癥、降低的MHC表達(dá)的藥劑。在實(shí)施例中，病癥表征為異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性或表達(dá)。本文中所用的“異常的EZH2活性”是指細(xì)胞中EZH2的錯(cuò)誤定位或EZH2與蛋白質(zhì)復(fù)合體/在蛋白質(zhì)復(fù)合體內(nèi)的錯(cuò)誤締合。在實(shí)施例中，異常的EZH2活性是由于INI1的調(diào)節(jié)功能喪失所致，所述調(diào)節(jié)功能喪失又可因多種遺傳變化而發(fā)生，一些所述遺傳變化的實(shí)例在本文中加以更詳細(xì)地討論。在某些實(shí)施例中，異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性或表達(dá)與增加的H3K27三甲基化相關(guān)或?qū)е略黾拥腍3K27三甲基化。在實(shí)施例中，病癥表征為染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)。這種易位導(dǎo)致SS18-SSX融合基因。在實(shí)施例中，需要治療的受試者具有異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性。在實(shí)施例中，需要治療的受試者具有降低的INI1的功能或表達(dá)或功能和表達(dá)二者。在實(shí)施例中，受試者不具有可檢測(cè)的INI1的功能或表達(dá)或功能和表達(dá)二者。在本發(fā)明的實(shí)施例中，滑膜肉瘤表征為SSX1融合。在另一實(shí)施例中，滑膜肉瘤表征為SSX2融合。在實(shí)施例中，滑膜肉瘤表征為SSX4融合。在實(shí)施例中，需要治療的受試者、治療方案、給藥的劑量和頻率是根據(jù)所檢測(cè)到的SSX融合的類型來選擇。在實(shí)施例中，待給予的EZH2抑制劑還根據(jù)與癌癥相關(guān)的SSX融合來選擇。本發(fā)明還可提供在有需要的受試者中通過向受試者給予治療有效量的本文所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物治療癌癥的方法，其中需要治療的受試者具有染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)或SS18-SSX融合基因。本發(fā)明進(jìn)一步提供本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物的用途，其用于制備可用于治療癌癥的藥劑。在實(shí)施例中，該方法包括在給藥步驟之前測(cè)定來自受試者的樣品中染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)或SS18-SSX融合基因的存在的步驟。測(cè)定樣品中染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)的存在可用任何本領(lǐng)域已知方法來進(jìn)行。例如，其可通過用于SS18-SSX轉(zhuǎn)錄物的核型分析和RT-PCR；或通過FISH(熒光原位雜交)來測(cè)定。SS18-SSX融合基因可通過任何本領(lǐng)域已知方法來檢測(cè)。例如，其可通過RT-PCT、免疫組織染色分析或熒光原位雜交(FISH)來檢測(cè)。待治療的癌癥可以通過DNA細(xì)胞計(jì)量術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)或圖像細(xì)胞儀來評(píng)估。待治療的癌癥可分型為具有10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、或90％的在細(xì)胞分裂的合成階段(如在細(xì)胞分裂的S期)的細(xì)胞。待治療的癌癥可以分型為具有低S期分?jǐn)?shù)或高S期分?jǐn)?shù)。在本發(fā)明的方面中，滑膜肉瘤是單相滑膜肉瘤。在本發(fā)明的其他方面中，滑膜肉瘤是雙相滑膜肉瘤。本發(fā)明還提供包括以下步驟的方法：在來自受試者的樣品中檢測(cè)染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)或SS18-SSX融合基因的存在，以及通過給予治療有效量的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物來治療受試者。本發(fā)明進(jìn)一步提供包括選擇治療方案的方法，所述治療方案包括向候選受試者給予治療有效量的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。治療方案還可包括手術(shù)、化學(xué)療法、放射療法、免疫療法或其任何組合。在實(shí)施例中，本發(fā)明的方法包括將治療有效量的EZH2抑制劑給予受試者、手術(shù)、化學(xué)療法、放射療法、針刺、免疫療法或其任何組合?？稍诨と饬?、尤其在晚期或轉(zhuǎn)移疾病的治療中推薦化學(xué)療法(通常是多柔比星和/或異環(huán)磷酰胺)。本發(fā)明進(jìn)一步提供在有需要的受試者中通過向受試者給予治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物來治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的癌癥或細(xì)胞增殖性病癥的方法。例如，癌癥是滑膜肉瘤。例如，癌癥是上皮樣肉瘤、骨外粘液樣軟骨肉瘤、惡性橫紋肌樣瘤或非典型脊索瘤。例如，本文中可使用的EZH2抑制劑包括化合物A、B、C、D或E?；衔顰在本文中還稱為E7438或EPZ-6438。如本文所用的“有需要的受試者”是患有與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的癌癥的受試者或患有由染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)介導(dǎo)的癌癥的受試者。例如，有需要的受試者患有滑膜肉瘤。在實(shí)施例中，有需要的受試者具有至少一次用于治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的病癥的先前治療。在實(shí)施例中，受試者患有在最近期治療時(shí)難治性癌癥。“難治性癌癥”意指對(duì)治療無反應(yīng)的本文所述的任何癌癥，包括滑膜肉瘤。該癌癥可以在治療開始時(shí)就有抗性，或在治療期間變得有抗性。難治性癌癥也稱為抗性癌癥。在實(shí)施例中，有需要的受試者具有在最近期治療緩解后的癌癥復(fù)發(fā)。在實(shí)施例中，受試者接受用于該受試者所患滑膜肉瘤的所有已知有效療法并且無效。在實(shí)施例中，受試者同時(shí)使用用于治療由染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)介導(dǎo)的癌癥(例如滑膜肉瘤)的另一種療法治療。“受試者”包括哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物可為例如任何哺乳動(dòng)物，例如人類、靈長(zhǎng)類、小鼠、大鼠、犬、貓、牛、馬、山羊、駱駝、綿羊或豬。優(yōu)選地，該哺乳動(dòng)物是人類。在實(shí)施例中，受試者具有增加的組蛋白H3的Lys27的三甲基化水平(H3-K27me3)。在實(shí)施例中，異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性或染色體易位t(x；18)(p11.2；q11.2)與增加的H3-K27me的三甲基化水平相關(guān)。如本文所用“來自受試者的樣品”是指從受試者獲得或衍生的任何含有細(xì)胞或細(xì)胞組分的適宜樣品。例如，在實(shí)施例中，樣品包括癌細(xì)胞。在實(shí)施例中，樣品是從例如軟組織(例如關(guān)節(jié))獲得的活檢樣品。在實(shí)施例中，樣品是從并非軟組織或除了軟組織以外的組織獲得的活檢樣品。例如，在實(shí)施例中，樣品是來自癌癥、例如由癌細(xì)胞組成的腫瘤的活檢物。可根據(jù)本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟悉的方法將樣品中的細(xì)胞與樣品中的其他組分分離。例如，在實(shí)施例中，樣品是組織、器官或體液，例如全血、血漿、血清、尿液、唾液、生殖道分泌物、腦脊液、汗液或排泄物。如本文所用“單一療法”是指向有需要的受試者給予單一活性或治療性化合物。優(yōu)選地，單一療法將涉及給予治療有效量的單一活性化合物。例如，使用一種本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物的癌癥單一療法用于需要治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的癌癥的受試者。在一個(gè)方面中，單一活性化合物是本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物。在某一實(shí)施例中，單一活性化合物是他折司他。如本文所用“治療”(“treating”或“treat”)描述出于對(duì)抗與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的疾病、病狀或病癥的目的對(duì)患者的管理和護(hù)理，并且包括給予本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物，以減輕該疾病、病狀或病癥的癥狀或并發(fā)癥或消除該疾病、病狀或病癥。本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物還可用于預(yù)防與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的疾病、病狀或病癥。本文使用的“預(yù)防”(“preventing”或“prevent”)描述了減少或消除疾病、病癥或失調(diào)的癥狀或并發(fā)癥的發(fā)作。本文使用的“減輕”一詞是指用來描述一個(gè)過程，其中疾病的體征或癥狀的嚴(yán)重性降低。重要的是，體征或癥狀可以減輕而不被消除。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，給予本發(fā)明的藥物組合物導(dǎo)致體征或癥狀的消除，然而，不需要消除。有效劑量預(yù)期降低體征或癥狀的嚴(yán)重性。例如，可能發(fā)生在多個(gè)位置的病癥如癌癥的體征或癥狀得以減輕的條件是該癌癥的嚴(yán)重性在多個(gè)位置中的至少一個(gè)內(nèi)下降了。本文使用的“癥狀”一詞被定義為疾病、病、損傷或某些在體內(nèi)不正常的指示。癥狀被經(jīng)歷該癥狀的個(gè)人感覺到或注意到，但可能不容易被其他人注意。其他人被定義為非醫(yī)護(hù)人員。本文所用的“體征”一詞也被定義為某些在體內(nèi)不正常的指示。但體征被定義為可以由醫(yī)生、護(hù)士和其他衛(wèi)生保健專業(yè)人士可以看出的事物。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致腫瘤的尺寸或體積減小、或腫瘤生長(zhǎng)或再生長(zhǎng)的降低、或上述的任一組合。腫瘤尺寸或體積的減小也可稱為“腫瘤消退”。優(yōu)選地，在治療后，腫瘤尺寸相對(duì)于治療前的腫瘤尺寸減小5％或更多；更優(yōu)選地，腫瘤尺寸減小10％或更多；更優(yōu)選地，減小20％或更多；更優(yōu)選地，減小30％或更多；更優(yōu)選地，減小40％或更多；甚至更優(yōu)選地，減小50％或更多；并且最優(yōu)選地，減小多于75％或更多。腫瘤的尺寸或體積可以通過任何可重復(fù)的測(cè)量方式來測(cè)量。腫瘤的尺寸或體積可作為腫瘤的直徑來測(cè)量。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性或表達(dá)相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致腫瘤數(shù)減少。優(yōu)選地，在治療后，腫瘤數(shù)相對(duì)于治療前的數(shù)目減小5％或更多；更優(yōu)選地，腫瘤數(shù)減少10％或更多；更優(yōu)選地，減少20％或更多；更優(yōu)選地，減少30％或更多；更優(yōu)選地，減少40％或更多；甚至更優(yōu)選地，減小50％或更多；并且最優(yōu)選地，減少多于75％。腫瘤數(shù)可通過任何可重復(fù)測(cè)量方式來測(cè)量。腫瘤數(shù)可以通過計(jì)數(shù)肉眼或在指定的放大率下可見的腫瘤來測(cè)量。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致與未經(jīng)治療受試者或僅接受載體的受試者的群體相比，接受治療的受試者群體的平均存活時(shí)間延長(zhǎng)或死亡率降低或兩種情況都發(fā)生。在某一實(shí)施例中，接受治療的受試者群體接受使用并非本發(fā)明化合物的藥物或藥物組合的療法。優(yōu)選地，平均存活時(shí)間延長(zhǎng)超過10天、20天或30天；更優(yōu)選地，延長(zhǎng)超過60天；更優(yōu)選地，延長(zhǎng)超過90天；并且最優(yōu)選地，延長(zhǎng)超過120天。群體的平均存活時(shí)間的延長(zhǎng)可以通過任何可重復(fù)的方式來測(cè)量。群體的平均存活時(shí)間的延長(zhǎng)可以例如通過使用活性化合物治療開始后計(jì)算群體的平均存活長(zhǎng)度來測(cè)量。群體的平均存活時(shí)間的延長(zhǎng)可以例如通過使用活性化合物治療第一輪完成后計(jì)算群體的平均存活長(zhǎng)度來測(cè)量。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致與僅接受載體的群體相比，接受治療的受試者群體的死亡率降低。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致與未經(jīng)治療的群體相比，接受治療的受試者群體的死亡率降低。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致與接受使用并非本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物的藥物的單一療法的群體相比，接受治療的受試者群體的死亡率降低。優(yōu)選地，死亡率降低超過2％；更優(yōu)選地，降低超過5％；更優(yōu)選地，降低超過10％；并且最優(yōu)選地，降低超過25％。接受治療的受試者群體的死亡率的降低可以通過任何可重復(fù)的方式來測(cè)量。群體的死亡率的降低可以例如通過使用活性化合物治療開始后計(jì)算每個(gè)單位時(shí)間內(nèi)群體的疾病相關(guān)死亡的平均數(shù)量來測(cè)量。群體的死亡率的降低可以例如通過使用活性化合物治療第一輪完成后計(jì)算每個(gè)單位時(shí)間內(nèi)群體的疾病相關(guān)死亡的平均數(shù)量來測(cè)量。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)速率降低。優(yōu)選地，在治療后，腫瘤生長(zhǎng)速率相對(duì)于治療之前的數(shù)值降低至少5％；更優(yōu)選地，腫瘤生長(zhǎng)速率降低至少10％；更優(yōu)選地，降低至少20％；更優(yōu)選地，降低至少30％；更優(yōu)選地，降低至少40％；更優(yōu)選地，降低至少50％；甚至更優(yōu)選地，降低至少50％；并且最優(yōu)選地，降低至少75％。腫瘤生長(zhǎng)率可通過任何可重復(fù)測(cè)量方式來測(cè)量。腫瘤生長(zhǎng)率可以根據(jù)每個(gè)單位時(shí)間內(nèi)腫瘤直徑的變化來測(cè)量。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致腫瘤再生長(zhǎng)的降低。優(yōu)選地，在治療后，腫瘤再生長(zhǎng)低于5％；更優(yōu)選地，腫瘤再生長(zhǎng)低于10％；更優(yōu)選地，低于20％；更優(yōu)選地，低于30％；更優(yōu)選地，低于40％；更優(yōu)選地，低于50％；甚至更優(yōu)選地，低于50％；并且最優(yōu)選地，低于75％。腫瘤再生長(zhǎng)可通過任何可重復(fù)測(cè)量方式來測(cè)量。腫瘤再生長(zhǎng)例如是通過測(cè)量治療后的居前腫瘤收縮后腫瘤直徑的增加來測(cè)量。治療停止后腫瘤復(fù)發(fā)的失敗表示腫瘤再生長(zhǎng)的降低。用本文所述方法治療或預(yù)防與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥可導(dǎo)致具有異常外觀或形態(tài)的細(xì)胞的數(shù)目或比例下降。優(yōu)選地，在治療后，具有異常形態(tài)的細(xì)胞數(shù)相對(duì)于其在治療之前的數(shù)目減少至少5％；更優(yōu)選地，減少至少10％；更優(yōu)選地，減少至少20％；更優(yōu)選地，減少至少30％；更優(yōu)選地，減少至少40％；更優(yōu)選地，減少至少50％；甚至更優(yōu)選地，減少至少50％；并且最優(yōu)選地，減少至少75％。異常細(xì)胞的外觀或形態(tài)可通過任何可重復(fù)測(cè)量方式來測(cè)量。異常細(xì)胞形態(tài)可通過顯微鏡檢查，例如使用倒置的組織培養(yǎng)顯微鏡來測(cè)量。異常細(xì)胞形態(tài)可以采取核多形性的形式。用本文所述化合物治療與異常、誤調(diào)或增加的EZH2活性相關(guān)的一種或多種癌癥或一種或多種細(xì)胞增殖性病癥可導(dǎo)致細(xì)胞死亡，并且優(yōu)選地，細(xì)胞死亡導(dǎo)致群體中的細(xì)胞數(shù)減少至少10％。更優(yōu)選地，細(xì)胞死亡意指減少至少20％；更優(yōu)選地，減少至少30％；更優(yōu)選地，減少至少40％；更優(yōu)選地，減少至少50％；最優(yōu)選地，減少至少75％。群體中細(xì)胞數(shù)可以通過任何可重復(fù)的方式來測(cè)量。群體中細(xì)胞數(shù)可以通過熒光激活細(xì)胞分選(FACS)、免疫熒光顯微鏡和光學(xué)顯微鏡來測(cè)量。測(cè)量細(xì)胞死亡的方法示于李(Li)等人，美國國家科學(xué)院院刊(ProcNatlAcadSciUSA.)100(5):2674-8,2003中。在某一方面中，細(xì)胞死亡是通過細(xì)胞凋亡來進(jìn)行。如本文所用術(shù)語“選擇性地”意味著傾向于在一個(gè)群體中的發(fā)生頻率高于在另一個(gè)群體中。所比較群體可為細(xì)胞群體。優(yōu)選地，本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物選擇性地作用于癌癥或癌前細(xì)胞，但不作用于正常細(xì)胞。優(yōu)選地，本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物選擇性地作用以調(diào)節(jié)一個(gè)分子靶(例如，靶蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶)，但不顯著調(diào)節(jié)另一分子靶(例如，非靶蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶)。本發(fā)明還提供選擇性的抑制酶例如EZH2的活性的方法。優(yōu)選地，如果事件在群體A中的發(fā)生頻率大于在群體B中發(fā)生頻率的兩倍，那么相對(duì)于群體B，該事件選擇性地發(fā)生于群體A中。如果事件在群體A中的發(fā)生頻率大于5倍，那么該事件選擇性地發(fā)生。如果事件在群體A中的發(fā)生頻率大于群體B的10倍；更優(yōu)選地，大于50倍；甚至更優(yōu)選地，大于100倍；并且最優(yōu)選地，在群體A中的頻率大于1000倍，那么該事件選擇性地發(fā)生。例如，如果細(xì)胞死亡在癌細(xì)胞中的發(fā)生頻率大于正常細(xì)胞的兩倍，那么將認(rèn)為細(xì)胞死亡在癌細(xì)胞中選擇性地發(fā)生。將本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物給予有需要的細(xì)胞或受試者可導(dǎo)致對(duì)EZH2活性的調(diào)節(jié)(即抑制)。將本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物給予有需要的細(xì)胞或受試者導(dǎo)致對(duì)EZH2的調(diào)節(jié)(即抑制)。激活是指放置物質(zhì)組合物(例如蛋白質(zhì)或核酸)進(jìn)入適合執(zhí)行期望的生物學(xué)功能的狀態(tài)。能被激活的物質(zhì)組合物也有非激活的狀態(tài)。激活的物質(zhì)組合物可以具有抑制或刺激的生物學(xué)功能或兩者。提高是指物質(zhì)組合物(例如蛋白質(zhì)或核酸)的期望的生物學(xué)活性的增加。提高可以通過物質(zhì)組合物的濃度增加而發(fā)生?？捎糜诒疚乃鋈魏畏椒ㄖ械幕衔?即EZH2抑制劑)可具有以下化學(xué)式I：或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物；其中R701是H、F、OR707、NHR707、-(C≡C)-(CH2)n7-R708、苯基、5元或6元雜芳基、C3-8環(huán)烷基或含有1-3個(gè)雜原子的4-7元雜環(huán)烷基，其中苯基、5元或6元雜芳基、C3-8環(huán)烷基或4-7元雜環(huán)烷基各自獨(dú)立地任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：鹵素、C1-3烷基、OH、O-C1-6烷基、NH-C1-6烷基和經(jīng)C3-8環(huán)烷基或含有1-3個(gè)雜原子的4-7元雜環(huán)烷基取代的C1-3烷基，其中O-C1-6烷基和NH-C1-6烷基各自任選地經(jīng)羥基、O-C1-3烷基或NH-C1-3烷基取代，O-C1-3烷基和NH-C1-3烷基各自任選地經(jīng)O-C1-3烷基或NH-C1-3烷基進(jìn)一步取代；R702和R703各自獨(dú)立地是H、鹵素、C1-4烷基、C1-6烷氧基或C6-C10芳氧基，所述基團(tuán)各自任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)鹵素取代；R704和R705各自獨(dú)立地是C1-4烷基；R706是經(jīng)N(C1-4烷基)2取代的環(huán)己基，其中一個(gè)或兩個(gè)C1-4烷基經(jīng)C1-6烷氧基取代；或R706是四氫吡喃基；R707是任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代的C1-4烷基：羥基、C1-4烷氧基、氨基、單-或二-C1-4烷基氨基、C3-8環(huán)烷基和含有1-3個(gè)雜原子的4-7元雜環(huán)烷基，其中C3-8環(huán)烷基或4-7元雜環(huán)烷基各自獨(dú)立地進(jìn)一步任選地經(jīng)C1-3烷基取代；R708是任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自以下的基團(tuán)取代的C1-4烷基：OH、鹵素和C1-4烷氧基、含有1-3個(gè)雜原子的4-7元雜環(huán)烷基或O-C1-6烷基，其中4-7元雜環(huán)烷基可任選地進(jìn)一步經(jīng)OH或C1-6烷基取代；并且n7是0、1或2。例如，R706是由N(C1-4烷基)2取代的環(huán)己基，其中一個(gè)C1-4烷基未經(jīng)取代且另一個(gè)經(jīng)甲氧基取代。例如，R706是例如，化合物具有以下化學(xué)式II：例如，R702是甲基或異丙基并且R703是甲基或甲氧基。例如，R704是甲基。例如，R701是OR707并且R707是任選地經(jīng)OCH3或嗎啉取代的C1-3烷基。例如，R701是H或F。例如，R701是四氫吡喃基、苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基或吡唑基，所述基團(tuán)各自任選地經(jīng)以下基團(tuán)取代：甲基、甲氧基、經(jīng)嗎啉取代的乙基或-OCH2CH2OCH3。例如，R708是嗎啉、哌啶、哌嗪、吡咯烷、二氮雜環(huán)庚烷或氮雜環(huán)丁烷，所述基團(tuán)各自任選地經(jīng)以下基團(tuán)取代：OH或C1-6烷基。例如，R708是嗎啉例如，R708是經(jīng)C1-6烷基取代的哌嗪。例如，R708是甲基、叔丁基或C(CH3)2OH。可用于本文所述任何方法中的化合物(即EZH2抑制劑)可具有以下化學(xué)式III：或其藥學(xué)上可接受的鹽。在此化學(xué)式中：R801是C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8環(huán)烷基、含有1-3個(gè)雜原子的4-7元雜環(huán)烷基、苯基或5元或6元雜芳基，所述基團(tuán)各自經(jīng)O-C1-6烷基-Rx或NH-C1-6烷基-Rx取代，其中Rx是羥基、O-C1-3烷基或NH-C1-3烷基，并且除了Rx是羥基時(shí)，Rx任選地進(jìn)一步經(jīng)O-C1-3烷基或NH-C1-3烷基取代；或R801是經(jīng)-Q2-T2取代的苯基，其中Q2是鍵或任選地經(jīng)鹵素、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C3烷基接頭，并且T2是任選經(jīng)取代的4元至12元雜環(huán)烷基；并且R801任選地經(jīng)進(jìn)一步取代；R802和R803各自獨(dú)立地是H、鹵素、C1-4烷基、C1-6烷氧基或C6-C10芳氧基，所述基團(tuán)各自任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)鹵素取代；R804和R805各自獨(dú)立地是C1-4烷基；并且R806是-Qx-Tx，其中Qx是鍵或C1-4烷基接頭，Tx是H、任選經(jīng)取代的C1-4烷基、任選經(jīng)取代的C3-C8環(huán)烷基或任選經(jīng)取代的4元至14元雜環(huán)烷基。例如，Qx和Q2各自獨(dú)立地是鍵或甲基接頭，并且Tx和T2各自獨(dú)立地是四氫吡喃基、經(jīng)1、2或3個(gè)C1-4烷基取代的哌啶基或經(jīng)N(C1-4烷基)2取代的環(huán)己基，其中一個(gè)或兩個(gè)C1-4烷基任選地經(jīng)C1-6烷氧基取代；例如，R806是經(jīng)N(C1-4烷基)2取代的環(huán)己基或R806是四氫吡喃基。例如，R806是例如，R801是經(jīng)O-C1-6烷基-Rx取代的苯基或5元或6元雜芳基，或R801是經(jīng)CH2-四氫吡喃基取代的苯基。例如，本發(fā)明化合物具有以下化學(xué)式IVa或IVb：其中Z’是CH或N，并且R807是C2-3烷基-Rx。例如，R807是-CH2CH2OH、-CH2CH2OCH3或-CH2CH2OCH2CH2OCH3。例如，R802是甲基或異丙基并且R803是甲基或甲氧基。例如，R804是甲基。本發(fā)明化合物可具有以下化學(xué)式(V)：或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯。在此化學(xué)式中：R2、R4和R12各自獨(dú)立地是C1-6烷基；R6是C6-C10芳基或5元或6元雜芳基，所述基團(tuán)各自任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q2-T2取代，其中Q2是鍵或任選地經(jīng)鹵素、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C3烷基接頭，并且T2是H、鹵素、氰基、-ORa、-NRaRb、-(NRaRbRc)+A–、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-NRbC(O)ORa、-S(O)2Ra、-S(O)2NRaRb或RS2，其中Ra、Rb和Rc各自獨(dú)立地是H或RS3，A–是藥學(xué)上可接受的陰離子，RS2和RS3各自獨(dú)立地是C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基或5元或6元雜芳基，或Ra和Rb與其所附接的N原子一起形成具有0或1個(gè)額外雜原子的4至12元雜環(huán)烷基環(huán)，并且RS2、RS3和由Ra和Rb形成的4至12元雜環(huán)烷基環(huán)任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q3-T3取代，其中Q3是鍵或各自任選地經(jīng)鹵素、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C3烷基接頭，并且T3選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：鹵素、氰基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基、5元或6元雜芳基、ORd、COORd、-S(O)2Rd、-NRdRe和-C(O)NRdRe，Rd和Re各自獨(dú)立地是H或C1-C6烷基或-Q3-T3是氧代基；或任兩個(gè)相鄰-Q2-T2與其所附接的原子一起形成任選地含有1-4個(gè)選自N、O和S的雜原子并且任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自由以下組成的組的取代基取代的5元或6元環(huán)：鹵素、羥基、COOH、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基和5元或6元雜芳基；R7是-Q4-T4，其中Q4是鍵、C1-C4烷基接頭或C2-C4烯基接頭，每一接頭任選地經(jīng)鹵素、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代，并且T4是H、鹵素、氰基、NRfRg、-ORf、-C(O)Rf、-C(O)ORf、-C(O)NRfRg、-C(O)NRfORg、-NRfC(O)Rg、-S(O)2Rf、或RS4，其中Rf和Rg各自獨(dú)立地是H或RS5，RS4和RS5各自獨(dú)立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基或5元或6元雜芳基，并且RS4和RS5各自任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q5-T5取代，其中Q5是鍵、C(O)、C(O)NRk、NRkC(O)、S(O)2或C1-C3烷基接頭，Rk是H或C1-C6烷基，并且T5是H、鹵素、C1-C6烷基、羥基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基、5元或6元雜芳基或S(O)qRq，其中q是0、1或2并且Rq是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基或5元或6元雜芳基，并且除了T5是H、鹵素、羥基或氰基時(shí)，T5任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自由以下組成的組的取代基取代：鹵素、C1-C6烷基、羥基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基和5元或6元雜芳基；或-Q5-T5是氧代基；并且R8是H、鹵素、羥基、COOH、氰基、RS6、ORS6或COORS6，其中RS6是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基、4至12元雜環(huán)烷基、氨基、單-C1-C6烷基氨基或二-C1-C6烷基氨基，并且RS6任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自由以下組成的組的取代基取代：鹵素、羥基、COOH、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基和二-C1-C6烷基氨基；或R7和R8與其所附接的N原子一起形成具有0至2個(gè)額外雜原子的4至11元雜環(huán)烷基環(huán)，并且由R7和R8形成的4至11元雜環(huán)烷基環(huán)任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q6-T6取代，其中Q6是鍵、C(O)、C(O)NRm、NRmC(O)、S(O)2或C1-C3烷基接頭，Rm是H或C1-C6烷基，并且T6是H、鹵素、C1-C6烷基、羥基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基、5元或6元雜芳基或S(O)pRp，其中p是0、1或2并且Rp是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基或5元或6元雜芳基，并且除了T6是H、鹵素、羥基或氰基時(shí)，T6任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自由以下組成的組的取代基取代：鹵素、C1-C6烷基、羥基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基和5元或6元雜芳基；或-Q6-T6是氧代基。例如，R6是C6-C10芳基或5元或6元雜芳基，所述基團(tuán)各自任選地獨(dú)立地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q2-T2取代，其中Q2是鍵或C1-C3烷基接頭，并且T2是H、鹵素、氰基、-ORa、-NRaRb、-(NRaRbRc)+A–、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-S(O)2Ra或RS2，其中Ra和Rb各自獨(dú)立地是H或RS3，RS2和RS3各自獨(dú)立地是C1-C6烷基，或Ra和Rb與其所附接的N原子一起形成具有0或1個(gè)額外雜原子的4至7元雜環(huán)烷基環(huán)，并且RS2、RS3和由Ra和Rb形成的4至7元雜環(huán)烷基環(huán)各自任選地獨(dú)立地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q3-T3取代，其中Q3是鍵或C1-C3烷基接頭并且T3選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：鹵素、C1-C6烷基、4至7元雜環(huán)烷基、ORd、-S(O)2Rd和-NRdRe，Rd和Re各自獨(dú)立地是H或C1-C6烷基或-Q3-T3是氧代基；或任兩個(gè)相鄰-Q2-T2與其所附接的原子一起形成任選地含有1-4個(gè)選自N、O和S的雜原子的5元或6元環(huán)。例如，本發(fā)明化合物具有以下化學(xué)式(VI)：或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中Q2是鍵或甲基接頭，T2是H、鹵素、-ORa、-NRaRb、-(NRaRbRc)+A–或-S(O)2NRaRb，R7是哌啶基、四氫吡喃、環(huán)戊基或環(huán)己基(所述基團(tuán)各自任選地經(jīng)一個(gè)-Q5-T5取代)，并且R8是乙基。本發(fā)明的化合物可具有以下化學(xué)式(VIa)：其中Ra和Rb各自獨(dú)立地是H或RS3，RS3是C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基或5元或6元雜芳基，或Ra和Rb與其所附接的N原子一起形成具有0或1個(gè)額外雜原子的4至12元雜環(huán)烷基環(huán)，并且RS3和由Ra和Rb形成的4至12元雜環(huán)烷基環(huán)各自任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q3-T3取代，其中Q3是鍵或各自任選地經(jīng)鹵素、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代的C1-C3烷基接頭，并且T3選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：鹵素、氰基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至12元雜環(huán)烷基、5元或6元雜芳基、ORd、COORd、-S(O)2Rd、-NRdRe和-C(O)NRdRe，Rd和Re各自獨(dú)立地是H或C1-C6烷基，或-Q3-T3是氧代基；R7是-Q4-T4，其中Q4是鍵、C1-C4烷基接頭或C2-C4烯基接頭，每一接頭任選地經(jīng)鹵素、氰基、羥基或C1-C6烷氧基取代，并且T4是H、鹵素、氰基、NRfRg、-ORf、-C(O)Rf、-C(O)ORf、-C(O)NRfRg、-C(O)NRfORg、-NRfC(O)Rg、-S(O)2Rf或RS4，其中Rf和Rg各自獨(dú)立地是H或RS5，RS4和RS5各自獨(dú)立地是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至7元雜環(huán)烷基或5元或6元雜芳基，并且RS4和RS5各自任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q5-T5取代，其中Q5是鍵、C(O)、C(O)NRk、NRkC(O)、S(O)2或C1-C3烷基接頭，Rk是H或C1-C6烷基，并且T5是H、鹵素、C1-C6烷基、羥基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至7元雜環(huán)烷基、5元或6元雜芳基或S(O)qRq，其中q是0、1或2并且Rq是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至7元雜環(huán)烷基或5元或6元雜芳基，并且除了T5是H、鹵素、羥基或氰基時(shí)，T5任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自由以下組成的組的取代基取代：鹵素、C1-C6烷基、羥基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至7元雜環(huán)烷基和5元或6元雜芳基；或-Q5-T5是氧代基；其條件是R7不是H；并且R8是H、鹵素、羥基、COOH、氰基、RS6、ORS6或COORS6，其中RS6是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、氨基、單-C1-C6烷基氨基或二-C1-C6烷基氨基，并且RS6任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自由以下組成的組的取代基取代：鹵素、羥基、COOH、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基和二-C1-C6烷基氨基；或R7和R8與其所附接的N原子一起形成具有0至2個(gè)額外雜原子并且任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q6-T6取代的4至11元雜環(huán)烷基環(huán)，其中Q6是鍵、C(O)、C(O)NRm、NRmC(O)、S(O)2或C1-C3烷基接頭，Rm是H或C1-C6烷基，并且T6是H、鹵素、C1-C6烷基、羥基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至7元雜環(huán)烷基、5元或6元雜芳基或S(O)pRp，其中p是0、1或2并且Rp是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至7元雜環(huán)烷基或5元或6元雜芳基，并且除了T6是H、鹵素、羥基或氰基時(shí)，T6任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自由以下組成的組的取代基取代：鹵素、C1-C6烷基、羥基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、C3-C8環(huán)烷基、C6-C10芳基、4至7元雜環(huán)烷基和5元或6元雜芳基；或-Q6-T6是氧代基。例如，Ra和Rb與其所附接的N原子一起形成具有0或1個(gè)除N原子以外的額外雜原子的4至7元雜環(huán)烷基環(huán)并且該環(huán)任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q3-T3取代，其中雜環(huán)烷基是氮雜環(huán)丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、異噁唑烷基、三唑烷基、哌啶基、1,2,3,6-四氫吡啶基、哌嗪基或嗎啉基。例如，R7是C3-C8環(huán)烷基或4至7元雜環(huán)烷基，所述基團(tuán)各自任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q5-T5取代。例如，R7是哌啶基、四氫吡喃、四氫-2H-噻喃基、環(huán)戊基、環(huán)己基、吡咯烷基或環(huán)庚基，所述基團(tuán)各自任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)-Q5-T5取代。例如，R8是H或任選地經(jīng)一個(gè)或多個(gè)選自由以下組成的組的取代基取代的C1-C6烷基：鹵素、羥基、COOH、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基和二-C1-C6烷基氨基。在實(shí)施例中，可用于本文所呈現(xiàn)的任何方法中的化合物是：(化合物A，在本文中還稱為E7438或EPZ-6438)或其藥學(xué)上可接受的鹽。在實(shí)施例中，可用于本文所呈現(xiàn)的任何方法中的化合物是：及其藥學(xué)上可接受的鹽?；蛘?，EZH2抑制劑選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：化合物B和C、所述化合物的立體異構(gòu)體和所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。在實(shí)施例中，可用于本文所呈現(xiàn)的任何方法中的化合物是化合物F：或其藥學(xué)上可接受的鹽。在實(shí)施例中，適用于本發(fā)明方法中的化合物包括具有化學(xué)式(VII)化合物：其中，V1是N或CR7，V2是N或CR2，其條件是在V1是N時(shí)，V2是N，X和Z獨(dú)立地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：氫、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C3-C8)環(huán)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C3-C8)環(huán)烷基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C5-C8)環(huán)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C5-C8)環(huán)烯基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、(C6-C10)二環(huán)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜環(huán)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜環(huán)烷基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的芳基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的芳基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜芳基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜芳基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、鹵素、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-CONRaNRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb、-NRaNRaC(O)ORa、-ORa、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb；Y是H或鹵素；R1是(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C3-C8)環(huán)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C3-C8)環(huán)烷基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C5-C8)環(huán)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C5-C8)環(huán)烯基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C6-C10)二環(huán)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜環(huán)烷基或-(C2-C8)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜環(huán)烷基-(C1-C8)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的芳基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的芳基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜芳基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜芳基-(C1-C8)烷基或-(C2-C8)烯基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-CONRaNRaRb；R2是氫、(C1-C8)烷基、三氟甲基、烷氧基或鹵素，其中所述(C1-C8)烷基任選地經(jīng)一個(gè)或兩個(gè)選自氨基和(C1-C3)烷基氨基的基團(tuán)取代；R7是氫、(C1-C3)烷基或烷氧基；R3是氫、(C1-C8)烷基、氰基、三氟甲基、-NRaRb或鹵素；R6選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：氫、鹵素、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C3-C8)環(huán)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C3-C8)環(huán)烷基-(C1-C8)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C5-C8)環(huán)烯基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的(C5-C8)環(huán)烯基-(C1-C8)烷基、(C6-C10)二環(huán)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜環(huán)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜環(huán)烷基-(C1-C8)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的芳基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的芳基-(C1-C8)烷基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜芳基、未經(jīng)取代或經(jīng)取代的雜芳基-(C1-C8)烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-CONRaNRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb、-NRaNRaC(O)ORa、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb；其中任何(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、二環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自由以下組成的組的基團(tuán)取代：-O(C1-C6)烷基(Rc)1-2、-S(C1-C6)烷基(Rc)1-2、-(C1-C6)烷基(Rc)1-2、-(C1-C8)烷基-雜環(huán)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基-雜環(huán)烷基、鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、OC(O)NRaRb、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基(C1-C4)烷基和雜芳基(C1-C4)烷基；其中所述芳基、雜芳基、芳基(C1-C4)烷基或雜芳基(C1-C4)烷基的任何芳基或雜芳基部分任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自由以下組成的組的基團(tuán)取代：鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SRa、-SORa.、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb；Ra和Rb各自獨(dú)立地是氫、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C6-C10)二環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，其中所述(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、二環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：鹵素、羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基和SO2N((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)；或Ra和Rb與其所附接的氮一起代表任選地含有選自氧、氮和硫的額外雜原子的5-8元飽和或不飽和環(huán)，其中所述環(huán)任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵代烷基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、羥基、氧代基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基，其中所述環(huán)任選地稠合到(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基環(huán)；或Ra和Rb與其所附接的氮一起代表6元至10元橋接二環(huán)系統(tǒng)，該系統(tǒng)任選地稠合到(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基環(huán)；Rc各自獨(dú)立地是(C1-C4)烷基氨基、-NRaSO2Rb、-SORa.、-SO2Ra、-NRaC(O)ORa、-NRaRb或-CO2Ra；或其鹽。由具有化學(xué)式(I)的一般結(jié)構(gòu)涵蓋的化合物的亞組表示如下：具有化學(xué)式(VII)的亞組AX和Z選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-NRaRb和-ORa；Y是H或F；R1選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基和雜芳基；R2是氫、(C1-C8)烷基、三氟甲基、烷氧基或鹵素，其中所述(C1-C8)烷基任選地經(jīng)一個(gè)或兩個(gè)選自氨基和(C1-C3)烷基氨基的基團(tuán)取代；R7是氫、(C1-C3)烷基或烷氧基；R3選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：氫、(C1-C8)烷基、氰基、三氟甲基、-NRaRb和鹵素；R6選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：氫、鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、芳基、雜芳基、?；被?、(C2-C8)炔基、芳基炔基、雜芳基炔基、-SO2Ra、-SO2NRaRb和-NRaSO2Rb；其中任何(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C2-C8)炔基、芳基炔基、雜芳基炔基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：-O(C1-C6)烷基(Rc)1-2、-S(C1-C6)烷基(Rc)1-2、-(C1-C6)烷基(Rc)1-2、-(C1-C8)烷基-雜環(huán)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基-雜環(huán)烷基、鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基(C1-C4)烷基和雜芳基(C1-C4)烷基；Ra和Rb各自獨(dú)立地是氫、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C6-C10)二環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，其中所述(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、二環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：鹵素、羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基和-SO2N((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)；或Ra和Rb與其所附接的氮一起代表任選地含有選自氧、氮和硫的額外雜原子的5-8元飽和或不飽和環(huán)，其中所述環(huán)任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵代烷基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、羥基、氧代基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基，其中所述環(huán)任選地稠合到(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基環(huán)；或Ra和Rb與其所附接的氮一起代表任選地稠合到(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基環(huán)的6元至10元橋接二環(huán)系統(tǒng)。這個(gè)特定亞組A中的芳基或雜芳基獨(dú)立地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、噻唑、咪唑、吡唑、噁二唑、噻二唑、三唑、四唑、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并噻唑、苯基、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、四嗪、喹啉、噌啉、喹唑啉、喹噁啉和萘啶或如下另一芳基或雜芳基：其中在(1)中，A是O、NH或S；B是CH或N，并且C是氫或C1-C8烷基；或其中在(2)中，D是任選地由氫或C1-C8烷基取代的N或C；或其中在(3)中，E是NH或CH2；F是O或CO；并且G是NH或CH2；或其中在(4)中，J是O、S或CO；或其中在(5)中，Q是CH或N；M是CH或N；并且L/(5)是氫、鹵素、氨基、氰基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-CONRaNRaRb、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb或-ORa，其中任何(C1-C8)烷基或(C3-C8)環(huán)烷基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、和-OC(O)NRaRb；其中Ra和Rb如上文所定義；或其中在(6)中，L/(6)是NH或CH2；或其中在7中，M/(7)是氫、鹵素、氨基、氰基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-CONRaNRaRb、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb或-ORa，其中任何(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基或雜環(huán)烷基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb；其中Ra和Rb如上文所定義；或其中在(8)中，P是CH2、NH、O或S；Q/(8)是CH或N；并且n是0-2；或其中在(9)中，S/(9)和T/(9)是C，或S/(9)是C并且T/(9)是N，或S/(9)是N并且T/(9)是C；R是氫、氨基、甲基、三氟甲基或鹵素；U是氫、鹵素、氨基、氰基、硝基、三氟甲基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-ORa或4-(1H-吡唑-4-基)，其中任何(C1-C8)烷基或(C3-C8)環(huán)烷基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra,-CONRaRb、-SRa、SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb；其中Ra和Rb如上文所定義。具有化學(xué)式(VII)的亞組BX和Z獨(dú)立地選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、-NRaRb和-ORa；Y是H；R1是(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基或雜環(huán)烷基；R2是氫、(C1-C3)烷基或鹵素，其中所述(C1-C3)烷基任選地經(jīng)一個(gè)至兩個(gè)選自氨基和(C1-C3)烷基氨基的基團(tuán)取代；R7是氫、(C1-C3)烷基或烷氧基；R3是氫、(C1-C8)烷基或鹵素；R6是氫、鹵素、氰基、三氟甲基、氨基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、芳基、雜芳基、?；被?；(C2-C8)炔基、芳基炔基、雜芳基炔基、-SO2Ra、-SO2NRaRb或-NRaSO2Rb；其中任何(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C2-C8)炔基、芳基炔基或雜芳基炔基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：鹵素、(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb、雜環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基(C1-C4)烷基和雜芳基(C1-C4)烷基；Ra和Rb各自獨(dú)立地是氫、(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C6-C10)二環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，其中所述(C1-C8)烷基、(C2-C8)烯基、(C2-C8)炔基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、二環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：鹵素、羥基、(C1-C4)烷氧基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、-CO2H、-CO2(C1-C4)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C4)烷基、-CON((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)、-SO2(C1-C4)烷基、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4)烷基和-SO2N((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)；或Ra和Rb與其所附接的氮一起代表任選地含有選自氧、氮和硫的額外雜原子的5-8元飽和或不飽和環(huán)，其中所述環(huán)任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵代烷基、氨基、(C1-C4)烷基氨基、((C1-C4)烷基)((C1-C4)烷基)氨基、羥基、氧代基、(C1-C4)烷氧基和(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基，其中所述環(huán)任選地稠合到(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基環(huán)；或Ra和Rb與其所附接的氮一起代表任選地稠合到(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基環(huán)的6元至10元橋接二環(huán)系統(tǒng)。這個(gè)定義中的芳基和雜芳基選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：呋喃、噻吩、吡咯、噁唑、噻唑、咪唑、吡唑、噁二唑、噻二唑、三唑、四唑、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并噻唑、苯基、吡啶、噠嗪、嘧啶、吡嗪、三嗪、四嗪、喹啉、噌啉、喹唑啉、喹噁啉和萘啶，或如下另一芳基或雜芳基的化合物：其中在(1)中，A是O、NH或S；B是CH或N，并且C是氫或C1-C8烷基；或其中在(2)中，D是任選地由氫或C1-C8烷基取代的N或C；或其中在(3)中，E是NH或CH2；F是O或CO；并且G是NH或CH2；或其中在(4)中，J是O、S或CO；或其中在(5)中，Q是CH或N；M是CH或N；并且L/(5)是氫、鹵素、氨基、氰基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-CONRaNRaRb、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb或-ORa，其中任何(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基任選地由1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb，其中Ra和Rb如上文所定義；或其中在(6)中，L/(6)是NH或CH2；或其中在(7)中，M/(7)是氫、鹵素、氨基、氰基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-CONRaNRaRb、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-NRaNRaC(O)NRaRb或-ORa，其中任何(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、雜環(huán)烷基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SRa、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra、-OC(O)NRaRb；其中Ra和Rb如上文所定義；或其中在(8)中，P是CH2、NH、O或S；Q/(8)是CH或N；并且n是0-2；或其中在(9)中，S/(9)和T/(9)是C，或S/(9)是C并且T/(9)是N，或S/(9)是N并且T/(9)是C；R是氫、氨基、甲基、三氟甲基、鹵素；U是氫、鹵素、氨基、氰基、硝基、三氟甲基、(C1-C8)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SO2Ra、-SO2NRaRb、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-NRaNRaRb、-NRaNRaC(O)Rb、-ORa或4-(1H-吡唑-4-基)，其中任何(C1-C8)烷基或(C3-C8)環(huán)烷基任選地經(jīng)1、2或3個(gè)獨(dú)立選自以下的基團(tuán)取代：(C1-C6)烷基、(C3-C8)環(huán)烷基、(C5-C8)環(huán)烯基、(C1-C6)鹵代烷基、氰基、-CORa、-CO2Ra、-CONRaRb、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRaRb、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-NRaC(O)NRaRb、-NRaC(O)ORa、-NRaSO2Rb、-NRaSO2NRaRb、-ORa、-OC(O)Ra和-OC(O)NRaRb，其中Ra和Rb如上文所定義。在實(shí)施例中，EZH2抑制劑是化合物G或GSK-126：或其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。在某些實(shí)施例中，可用于本文所呈現(xiàn)任何方法中的EZH2抑制劑是化合物H：或其立體異構(gòu)體或其藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物。在某些實(shí)施例中，可用于本文所呈現(xiàn)任何方法中的EZH2抑制劑是化合物Ga-Gc中的任一個(gè)：或其立體異構(gòu)體、藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。在某些實(shí)施例中，可用于本文所呈現(xiàn)任何方法中的EZH2抑制劑是CPI-1205或GSK343。在一個(gè)實(shí)施例中，本文所披露的化合物(例如，EZH2抑制劑)是化合物自身，即游離堿或“裸”分子。在另一實(shí)施例中，化合物是其鹽，例如裸分子的單-HCl或三-HCl鹽、單-HBr或三-HBr鹽。本文中所述的化合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的任何方法來合成。例如，具有化學(xué)式(VII)的化合物可根據(jù)以下文獻(xiàn)中描述的方法來合成：WO2011/140325；WO2011/140324；和WO2012/005805，將其各自通過引用以其全文結(jié)合在此。如本文所用“烷基”、“C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基”或“C1-C6烷基”旨在包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直鏈(線性)飽和脂肪族烴基和C3、C4、C5或C6支鏈飽和脂肪族烴基。例如，C1-C6烷基旨在包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基。烷基的實(shí)例包括具有一至六個(gè)碳原子的部分，例如，但不限于，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基或正己基。在實(shí)施例中，直鏈或支鏈烷基具有六個(gè)或更少碳原子(例如，對(duì)于直鏈為C1-C6，對(duì)于支鏈為C3-C6)，并且在另一實(shí)施例中，直鏈或支鏈烷基具有四個(gè)或更少碳原子。如本文所用術(shù)語“環(huán)烷基”是指具有3至30個(gè)碳原子(例如，C3-C10)的飽和或不飽和非芳香族烴單環(huán)或多環(huán)(例如，稠合環(huán)、橋接環(huán)或螺環(huán))系統(tǒng)。環(huán)烷基的實(shí)例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基和金剛烷基。除非另外指定，否則術(shù)語“雜環(huán)烷基”是指具有一個(gè)或多個(gè)雜原子(例如O、N、S或Se)的飽和或不飽和非芳香族3-8元單環(huán)、7-12元二環(huán)(稠合環(huán)、橋接環(huán)或螺環(huán))或11-14元三環(huán)系統(tǒng)(稠合環(huán)、橋接環(huán)或螺環(huán))。雜環(huán)烷基的實(shí)例包括但不限于哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、二噁烷基、四氫呋喃基、異吲哚啉基、二氫吲哚基、咪唑烷基、吡唑烷基、噁唑烷基、異噁唑烷基、三唑烷基、四氫呋喃基、氧雜環(huán)丙烷基、氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁基、硫雜環(huán)丁基、1,2,3,6-四氫吡啶基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、吡喃基、嗎啉基、1,4-二氮雜環(huán)庚烷基、1,4-氧雜氮雜環(huán)庚烷基、2-氧雜-5-氮雜二環(huán)[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮雜二環(huán)[2.2.1]庚烷基、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷基、1,4-二氮雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷基等。術(shù)語“任選地經(jīng)取代的烷基”是指未經(jīng)取代的烷基或具有指定取代基替代烴主鏈的一個(gè)或多個(gè)碳上的一個(gè)或多個(gè)氫原子的烷基。所述取代基可包括例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸基、次膦酸基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺?；⒒撬峄?、氨磺?；⒒酋０坊?、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基或芳香族或雜芳香族部分?！胺蓟榛被颉胺纪榛辈糠质墙?jīng)芳基取代的烷基(例如，苯基甲基(芐基))?！巴榛蓟辈糠质墙?jīng)烷基取代的芳基(例如，甲基苯基)。如本文所用“烷基接頭”旨在包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直鏈(線性)飽和二價(jià)脂肪族烴基和C3、C4、C5或C6支鏈飽和脂肪族烴基。例如，C1-C6烷基接頭旨在包括C1、C2、C3、C4、C5和C6烷基接頭基團(tuán)。烷基接頭的實(shí)例包括具有一至六個(gè)碳原子的部分，例如但不限于甲基(-CH2-)、乙基(-CH2CH2-)、正丙基(-CH2CH2CH2-)、異丙基(-CHCH3CH2-)、正丁基(-CH2CH2CH2CH2-)、仲丁基(-CHCH3CH2CH2-)、異丁基(-C(CH3)2CH2-)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)、仲戊基(-CHCH3CH2CH2CH2-)或正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)。“烯基”包括在長(zhǎng)度和可能的取代方面與上述烷基相似但含有至少一個(gè)雙鍵的不飽和脂肪族基團(tuán)。例如，術(shù)語“烯基”包括直鏈烯基(例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基)和支鏈烯基。在實(shí)施例中，直鏈或支鏈烯基在其主鏈中具有六個(gè)或更少碳原子(例如，對(duì)于直鏈為C2-C6，對(duì)于支鏈為C3-C6)。術(shù)語“C2-C6”包括含有兩個(gè)至六個(gè)碳原子的烯基。術(shù)語“C3-C6”包括含有三個(gè)至六個(gè)碳原子的烯基。術(shù)語“任選地經(jīng)取代的烯基”是指未經(jīng)取代的烯基或具有指定取代基替代一個(gè)或多個(gè)烴主鏈碳原子上的一個(gè)或多個(gè)氫原子的烯基。所述取代基可包括例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸基、次膦酸基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、?；被?包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺?；⒒撬峄?、氨磺酰基、磺酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、雜環(huán)基、烷基芳基或芳香族或雜芳香族部分?！叭不卑ㄔ陂L(zhǎng)度和可能的取代方面與上述烷基相似但含有至少一個(gè)三鍵的不飽和脂肪族基團(tuán)。例如，“炔基”包括直鏈炔基(例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基)和支鏈炔基。在實(shí)施例中，直鏈或支鏈炔基在其主鏈中具有六個(gè)或更少碳原子(例如，對(duì)于直鏈為C2-C6，對(duì)于支鏈為C3-C6)。術(shù)語“C2-C6”包括含有二個(gè)至六個(gè)碳原子的炔基。術(shù)語“C3-C6”包括含有三個(gè)至六個(gè)碳原子的炔基。術(shù)語“任選地經(jīng)取代的炔基”是指未經(jīng)取代的炔基或具有指定取代基替代一個(gè)或多個(gè)烴主鏈碳原子上的一個(gè)或多個(gè)氫原子的炔基。所述取代基可包括例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸基、次膦酸基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺酰基、磺酸基、氨磺?；⒒酋０坊?、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基或芳香族或雜芳香族部分。其他任選經(jīng)取代的部分(例如任選經(jīng)取代的環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基)包括未經(jīng)取代的部分和具有指定取代基中的一個(gè)或多個(gè)的部分二者。例如，經(jīng)取代的雜環(huán)烷基包括經(jīng)一個(gè)或多個(gè)烷基取代的雜環(huán)烷基，例如2,2,6,6-四甲基-哌啶基和2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氫吡啶基。“芳基”包括具有芳香性的基團(tuán)，包括具有至少一個(gè)芳香族環(huán)的“共軛的”或多環(huán)系統(tǒng)并且在環(huán)結(jié)構(gòu)中不含任何雜原子。實(shí)例包括苯基、芐基、1,2,3,4-四氫萘基等?！半s芳基”是如上文所定義的芳基，但在環(huán)結(jié)構(gòu)中具有一至四個(gè)雜原子，并且還可稱為“芳基雜環(huán)”或“雜芳香族基團(tuán)”。如本文所用術(shù)語“雜芳基”旨在包括由碳原子以及一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自由氮、氧和硫組成的組的雜原子(例如1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6個(gè)雜原子，或例如1、2、3、4、5或6個(gè)雜原子)組成的穩(wěn)定的5元、6元或7元單環(huán)或7元、8元、9元、10元、11元或12元二環(huán)芳香族雜環(huán)。氮原子可經(jīng)取代或未經(jīng)取代(即，N或NR，其中R是H或如所定義的其他取代基)。氮和硫雜原子可任選地發(fā)生氧化(即，N→O和S(O)p，其中p＝1或2)。應(yīng)注意，芳香族雜環(huán)中S和O原子的總數(shù)不大于1。雜芳基的實(shí)例包括吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、異噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、噁唑、異噁唑、吡啶、吡嗪、噠嗪、嘧啶等。另外，術(shù)語“芳基”和“雜芳基”包括多環(huán)芳基和雜芳基，例如三環(huán)、二環(huán)，例如萘、苯并噁唑、苯并二噁唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亞甲基二氧苯基、喹啉、異喹啉、萘啶、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、脫氮雜嘌呤、中氮茚。在多環(huán)芳香族環(huán)的情況中，僅需要環(huán)中的一個(gè)是芳香族(例如，2,3-二氫吲哚)，但所有環(huán)都可以是芳香族(例如，喹啉)。第二環(huán)也可以是稠合或橋接的。環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基環(huán)可在一個(gè)或多個(gè)環(huán)位置經(jīng)如上文所述的所述取代基取代(例如，成環(huán)碳或雜原子，例如N)，所述取代基例如烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷氧基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸根、烷基羰基、烷基氨基羰基、芳烷基氨基羰基、烯基氨基羰基、烷基羰基、芳基羰基、芳烷基羰基、烯基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基硫代羰基、磷酸根、膦酸基、次膦酸基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、?；被?包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺?；?、磺酸基、氨磺?；?、磺酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基或芳香族或雜芳香族部分。芳基和雜芳基也可以與不是芳香族的脂環(huán)族環(huán)或雜環(huán)稠合或橋接，以形成多環(huán)系統(tǒng)(例如，四氫萘、亞甲基二氧苯基)。如本文所用“碳環(huán)”(“carbocycle”或“carbocyclicring”)旨在包括任何具有指定碳數(shù)目的穩(wěn)定單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，其中任一個(gè)可為飽和、不飽和或芳香族的。碳環(huán)包括環(huán)烷基和芳基。例如，C3-C14碳環(huán)旨在包括具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個(gè)碳原子的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)。碳環(huán)的實(shí)例包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)丁烯基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)庚烯基、環(huán)庚基、環(huán)庚烯基、金剛烷基、環(huán)辛基、環(huán)辛烯基、環(huán)辛二烯基、芴基、苯基、萘基、茚滿基、金剛烷基和四氫萘基。橋接環(huán)也包括在碳環(huán)的定義中，包括例如[3.3.0]二環(huán)辛烷、[4.3.0]二環(huán)壬烷、[4.4.0]二環(huán)癸烷和[2.2.2]二環(huán)辛烷。在一個(gè)或多個(gè)碳原子連接兩個(gè)非相鄰碳原子時(shí)出現(xiàn)橋接環(huán)。在一個(gè)實(shí)施例中，橋環(huán)具有一個(gè)或兩個(gè)碳原子。應(yīng)注意，橋總是將單環(huán)轉(zhuǎn)化為三環(huán)。在環(huán)發(fā)生橋接時(shí)，針對(duì)該環(huán)所列舉的取代基也可存在于橋上。還包括稠合(例如，萘基、四氫萘基)環(huán)和螺環(huán)。如本文所用“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”包括含有至少一個(gè)環(huán)雜原子(例如，N、O或S)的任何環(huán)結(jié)構(gòu)(飽和、不飽和或芳香族)。雜環(huán)包括雜環(huán)烷基和雜芳基。雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于嗎啉、吡咯烷、四氫噻吩、哌啶、哌嗪、氧雜環(huán)丁烷、吡喃、四氫吡喃、氮雜環(huán)丁烷和四氫呋喃。雜環(huán)基的實(shí)例包括但不限于吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并苯硫基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色烷基、色烯基、噌啉基、十氫喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氫氟[2,3-b]四氫呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氫吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛紅?；?、異苯并呋喃基、異色烷基、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、亞甲基二氧苯基、嗎啉基、萘啶基、八氫異喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噁二唑5(4H)-酮、噁唑烷基、噁唑基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁噻嗯基(phenoxathinyl)、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹噁啉基、奎寧環(huán)基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫噸基。如本文所用術(shù)語“經(jīng)取代”意味著指定原子上的任何一個(gè)或多個(gè)氫經(jīng)所選擇的所指示基團(tuán)替代，其條件是不超過指定原子的正常化合價(jià)，并且該取代得到穩(wěn)定化合物。在取代基是氧代基或酮基(即，＝O)時(shí)，則該原子上的2個(gè)氫原子被替代。酮基取代基不存在于芳香族部分上。如本文所用環(huán)雙鍵是在兩個(gè)相鄰環(huán)原子之間形成的雙鍵(例如，C＝C、C＝N或N＝N)。“穩(wěn)定化合物”和“穩(wěn)定結(jié)構(gòu)”意欲指示足夠穩(wěn)健而可在從反應(yīng)混合物分離至可用純度、并且配制為有效治療劑后幸存的化合物。在與一取代基的鍵顯示與連接環(huán)中兩個(gè)原子的鍵交叉時(shí)，則這種取代基可鍵合到環(huán)中的任何原子上。在列示取代基但不指明這種取代基通過哪個(gè)原子鍵合到給定化學(xué)式的化合物的剩余部分時(shí)，則所述取代基可通過這種化學(xué)式中的任何原子鍵合。取代基或變量的組合是允許的(或二者都有)，但僅在此類組合得到穩(wěn)定化合物時(shí)允許。在任何變量(例如，R1)在化合物的任何成分或化學(xué)式中出現(xiàn)多于一次時(shí)，其在每次出現(xiàn)時(shí)的定義與其在其他每次出現(xiàn)時(shí)的定義無關(guān)。因此，例如，如果顯示一基團(tuán)經(jīng)0-2個(gè)R1部分取代，則該基團(tuán)可任選地經(jīng)多至兩個(gè)R1部分取代，并且R1在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自R1的定義。同樣，取代基或變量的組合是允許的(或二者都有)，但僅在此類組合得到穩(wěn)定化合物時(shí)允許。術(shù)語“羥基”(“hydroxy”或“hydroxyl”)包括具有-OH或-O-的基團(tuán)。如本文所用“鹵代”或“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。術(shù)語“全鹵化”通常是指其中所有氫原子都由鹵素原子替代的部分。術(shù)語“鹵代烷基”或“鹵代烷氧基”是指經(jīng)一個(gè)或多個(gè)鹵素原子取代的烷基或烷氧基。術(shù)語“羰基”包括含有以雙鍵連接到氧原子的碳的化合物和部分。含有羰基的部分的實(shí)例包括但不限于醛、酮、羧酸、酰胺、酯、酸酐等。術(shù)語“羧基”是指-COOH或其C1-C6烷基酯?！磅；卑ê絮；?R-C(O)-)或羰基的部分?！敖?jīng)取代的酰基”包括其中氫原子中的一個(gè)或多個(gè)由例如以下基團(tuán)替代的?；和榛⑷不?、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸基、次膦酸基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、?；被?包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺酰基、磺酸基、氨磺?；?、磺酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基或芳香族或雜芳香族部分?！胺减；卑ň哂薪Y(jié)合到羰基的芳基或雜芳香族部分的部分。芳酰基的實(shí)例包括苯基羧基、萘基羧基等?！巴檠趸榛?、“烷基氨基烷基”和“硫代烷氧基烷基”包括如上文所述的烷基，其中氧、氮或硫原子替代一個(gè)或多個(gè)烴主鏈碳原子。術(shù)語“烷氧基”(“alkoxy”或“alkoxyl”)包括共價(jià)連接到氧原子的經(jīng)取代和未經(jīng)取代的烷基、烯基和炔基。烷氧基或烷氧基團(tuán)的實(shí)例包括但不限于甲氧基、乙氧基、異丙氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基。經(jīng)取代烷氧基的實(shí)例包括鹵化烷氧基。烷氧基可經(jīng)例如以下的基團(tuán)取代：烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸根、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸根、膦酸基、次膦酸基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、?；被?包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺?；?、磺酸基、氨磺?；?、磺酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基或芳香族或雜芳香族部分。鹵素取代的烷氧基的實(shí)例包括但不限于氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、氯甲氧基、二氯甲氧基和三氯甲氧基。術(shù)語“醚”或“烷氧基”包括含有鍵合到兩個(gè)碳原子或雜原子的氧的化合物或部分。例如，該術(shù)語包括“烷氧基烷基”，其是指共價(jià)鍵合到與烷基共價(jià)鍵合的氧原子的烷基、烯基或炔基。術(shù)語“酯”包括含有結(jié)合到與羰基碳鍵合的氧原子的碳或雜原子的化合物或部分。術(shù)語“酯”包括烷氧基羧基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、丁氧基羰基、戊氧基羰基等。術(shù)語“硫代烷基”包括含有與硫原子連接的烷基的化合物或部分。硫代烷基可經(jīng)例如以下的基團(tuán)取代：烷基、烯基、炔基、鹵素、羥基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸根、羧酸、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、?；被?包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?、脒基、亞氨基、巰基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸根、硫酸根、烷基亞磺酰基、磺酸基、氨磺?；?、磺酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、疊氮基、雜環(huán)基、烷基芳基或芳香族或雜芳香族部分。術(shù)語“硫代羰基”或“硫代羧基”包括含有以雙鍵連接到硫原子的碳的化合物和部分。術(shù)語“硫醚”包括含有鍵合到兩個(gè)碳原子或雜原子的硫原子的部分。硫醚的實(shí)例包括但不限于烷硫代烷基、烷硫代烯基和烷硫代炔基。術(shù)語“烷硫代烷基”包括具有鍵合到與烷基鍵合的硫原子的烷基、烯基或炔基的部分。類似地，術(shù)語“烷硫代烯基”是指其中烷基、烯基或炔基鍵合到與烯基共價(jià)鍵合的硫原子的部分；并且“烷硫代炔基”是指其中烷基、烯基或炔基鍵合到與炔基共價(jià)鍵合的硫原子的部分。如本文所用“胺”或“氨基”是指未經(jīng)取代或經(jīng)取代的-NH2?！巴榛被卑ㄆ渲?NH2氮結(jié)合到至少一個(gè)烷基的化合物的基團(tuán)。烷基氨基的實(shí)例包括芐基氨基、甲基氨基、乙基氨基、苯乙基氨基等?！岸榛被卑ㄆ渲?NH2的氮結(jié)合到至少兩個(gè)其他烷基的基團(tuán)。二烷基氨基的實(shí)例包括但不限于二甲基氨基和二乙基氨基。“芳基氨基”和“二芳基氨基”包括其中氮分別結(jié)合到至少一個(gè)或兩個(gè)芳基的基團(tuán)?！鞍被蓟焙汀鞍被佳趸笔侵附?jīng)氨基取代的芳基和芳氧基。“烷基芳基氨基”、“烷基氨基芳基”或“芳基氨基烷基”是指結(jié)合到至少一個(gè)烷基和至少一個(gè)芳基的氨基?！巴榘被榛笔侵附Y(jié)合到還與烷基結(jié)合的氮原子的烷基、烯基或炔基?！磅；被卑ㄆ渲械Y(jié)合到?；幕鶊F(tuán)。?；被膶?shí)例包括但不限于烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲?；碗寤?。術(shù)語“酰胺”或“氨基羧基”包括含有結(jié)合到羰基或硫代羰基的碳上的氮原子的化合物或部分。該術(shù)語包括“烷氨基羧基”，其包括結(jié)合到與羰基或硫代羰基的碳結(jié)合的氨基上的烷基、烯基或炔基。其還包括“芳基氨基羧基”，其包括結(jié)合到與羰基或硫代羰基的碳結(jié)合的氨基上的芳基或雜芳基部分。術(shù)語“烷基氨基羧基”、“烯基氨基羧基”、“炔基氨基羧基”和“芳基氨基羧基”包括其中烷基、烯基、炔基和芳基部分分別結(jié)合到氮原子的部分，該氮原子又結(jié)合到羰基碳。酰胺可經(jīng)例如以下的取代基取代：直鏈烷基、支鏈烷基、環(huán)烷基、芳基、雜芳基或雜環(huán)。酰胺基團(tuán)上的取代基可進(jìn)一步經(jīng)取代。在本說明書中，為方便起見，在一些情形中，化合物的結(jié)構(gòu)式代表某一異構(gòu)體，但本發(fā)明包括所有異構(gòu)體，例如幾何異構(gòu)體、基于不對(duì)稱碳的光學(xué)異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體等，應(yīng)理解，并非所有異構(gòu)體都可具有相同活性水平。另外，由化學(xué)式代表的化合物可存在晶體多晶型物。應(yīng)注意，任何晶形、晶形混合物或其無水物或水合物包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)?！爱悩?gòu)現(xiàn)象”意指具有相同分子式但其原子的鍵合順序或其原子的空間排列不同的化合物。原子空間排列不同的異構(gòu)體稱為“立體異構(gòu)體”。并非彼此的鏡像的立體異構(gòu)體稱為“非對(duì)映異構(gòu)體”，并且是彼此的不可重疊的鏡像的立體異構(gòu)體稱為“對(duì)映異構(gòu)體”或有時(shí)稱為光學(xué)異構(gòu)體。含有等量的具有相反手性的單獨(dú)對(duì)映異構(gòu)形式的混合物稱為“外消旋混合物”。鍵合到四個(gè)不相同取代基的碳原子稱為“手性中心”。“手性異構(gòu)體”意指具有至少一個(gè)手性中心的化合物。具有多于一個(gè)手性中心的化合物可作為單獨(dú)非對(duì)映異構(gòu)體或作為非對(duì)映異構(gòu)體的混合物存在，稱為“非對(duì)映異構(gòu)混合物”。在存在一個(gè)手性中心時(shí)，立體異構(gòu)體可通過該手性中心的絕對(duì)構(gòu)型(R或S)來表征。絕對(duì)構(gòu)型是指附接到手性中心的取代基的空間排列。所考慮的附接到手性中心的取代基是根據(jù)卡恩(Cahn)、英戈?duì)柕?Ingold)和普雷洛格(Prelog)的序列規(guī)則(SequenceRule)來排列(卡恩等人，應(yīng)用化學(xué)國際版(Angew.Chem.Inter.Edit.)1966,5,385；勘誤表511；卡恩等人，應(yīng)用化學(xué)(Angew.Chem.)1966,78,413；卡恩和英戈?duì)柕?化學(xué)學(xué)會(huì)雜志(J.Chem.Soc.)1951(倫敦),612；卡恩等人,實(shí)驗(yàn)(Experientia)1956,12,81；卡恩，化學(xué)教育雜志(J.Chem.Educ.)1964,41,116)。“幾何異構(gòu)體”意指因圍繞雙鍵或環(huán)烷基接頭(例如，1,3-環(huán)丁基)的旋轉(zhuǎn)受阻而存在的非對(duì)映異構(gòu)體。這些構(gòu)型的名稱是通過前綴順式和反式或Z和E來區(qū)分，這些前綴指示根據(jù)卡恩-英戈?duì)柕?普雷洛格規(guī)則，基團(tuán)位于分子中雙鍵的同側(cè)或?qū)?cè)。應(yīng)理解，本發(fā)明的化合物可描述為不同手性異構(gòu)體或幾何異構(gòu)體。還應(yīng)理解，在化合物具有手性異構(gòu)或幾何異構(gòu)形式時(shí)，所有異構(gòu)形式旨在包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)，并且化合物的命名不排除任何異構(gòu)形式，應(yīng)理解，并非所有異構(gòu)體都可具有相同活性水平。另外，本發(fā)明中討論的結(jié)構(gòu)和其他化合物包括所有阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，應(yīng)理解，并非所有阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體都可具有相同活性水平?！白柁D(zhuǎn)異構(gòu)體”是其中兩個(gè)異構(gòu)體的原子空間排列不同的立體異構(gòu)體類型。阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體是因大基團(tuán)圍繞中心鍵的旋轉(zhuǎn)受阻引起的旋轉(zhuǎn)受限而存在。所述阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體通常作為混合物存在，但由于色譜技術(shù)的最新發(fā)展，已可能在所選情形中分離兩種阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物。“互變異構(gòu)體”是兩種或更多種結(jié)構(gòu)異構(gòu)體中的一種，所述異構(gòu)體存在于平衡中并且易于從一種異構(gòu)形式轉(zhuǎn)化到另一種異構(gòu)形式。這種轉(zhuǎn)化導(dǎo)致氫原子的形式遷移，并且伴隨相鄰共軛雙鍵的轉(zhuǎn)換?；プ儺悩?gòu)體作為溶液中互變異構(gòu)體組的混合物而存在。在可能發(fā)生互變異構(gòu)的溶液中，互變異構(gòu)體將達(dá)到化學(xué)平衡?；プ儺悩?gòu)體的確切比率取決于若干種因素，包括溫度、溶劑和pH?；プ儺悩?gòu)體可通過互變異構(gòu)相互轉(zhuǎn)化的概念稱為互變異構(gòu)現(xiàn)象。在可能的多種類型的互變異構(gòu)現(xiàn)象中，有兩種類型常被觀察到。在酮-烯醇互變異構(gòu)現(xiàn)象中，電子和氫原子發(fā)生同時(shí)轉(zhuǎn)移。環(huán)-鏈互變異構(gòu)現(xiàn)象由于糖鏈分子中的醛基(-CHO)與同一分子中的一個(gè)羥基(-OH)反應(yīng)使其形成如葡萄糖所展現(xiàn)的環(huán)狀(環(huán)形狀)形式而發(fā)生。常見互變異構(gòu)對(duì)為：雜環(huán)中(例如，在核堿基中，例如鳥嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶)的酮-烯醇、酰胺-腈、內(nèi)酰胺-內(nèi)酰亞胺、酰胺-亞胺酸互變異構(gòu)現(xiàn)象、亞胺-烯胺和烯胺-烯胺。酮-烯醇平衡的實(shí)例在吡啶-2(1H)-酮與相應(yīng)吡啶-2-醇之間，如下文所顯示。在本文所述的化合物中，每次出現(xiàn)的應(yīng)視為應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的這些化合物可以被描繪為不同互變異構(gòu)體。還應(yīng)理解，在化合物具有互變異構(gòu)形式時(shí)，所有互變異構(gòu)形式都旨在包括于本發(fā)明的范圍內(nèi)，并且化合物的命名不排除任何互變異構(gòu)體形式。應(yīng)理解，某些互變異構(gòu)體的活性水平可高于其他互變異構(gòu)體。術(shù)語“晶體多晶型物”、“多晶型物”或“晶形”意指其中化合物(或其鹽或溶劑合物)可以不同晶體堆積排列結(jié)晶的晶體結(jié)構(gòu)，所有這些晶體結(jié)構(gòu)都具有相同元素組成。不同晶形通常具有不同X射線衍射圖案、紅外光譜、熔點(diǎn)、密度、硬度、晶體形狀、光學(xué)和電學(xué)特性、穩(wěn)定性和溶解性。重結(jié)晶溶劑、結(jié)晶速率、儲(chǔ)存溫度和其他因素可使一種晶形占優(yōu)勢(shì)?；衔锏木w多晶型物可通過在不同條件下結(jié)晶來制備。本文所披露的任何式的化合物包括化合物自身，以及其鹽或其溶劑合物(若適用)。例如，鹽可在陰離子與芳基-或雜芳基-取代的苯化合物上的帶正電基團(tuán)(例如，氨基)之間形成。適宜陰離子包括氯離子、溴離子、碘離子、硫酸根、硫酸氫根、氨基磺酸根、硝酸根、磷酸根、檸檬酸根、甲磺酸根、三氟乙酸根、谷氨酸根、葡糖醛酸根、戊二酸根、蘋果酸根、馬來酸根、琥珀酸根、延胡索酸根、酒石酸根、甲苯磺酸根、水楊酸根、乳酸根、萘磺酸根和乙酸根(例如，三氟乙酸根)。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的陰離子”是指適于形成藥學(xué)上可接受的鹽的陰離子。同樣，鹽也可在陽離子與芳基-或雜芳基-取代的苯化合物上的帶負(fù)電基團(tuán)(例如，羧酸根)之間形成。適宜陽離子包括鈉離子、鉀離子、鎂離子、鈣離子和銨陽離子，例如四甲基銨離子。芳基-或雜芳基-取代的苯化合物還包括那些含有季氮原子的鹽。另外，本發(fā)明化合物(例如化合物的鹽)可以水合或非水合(無水)形式或作為與其他溶劑分子的溶劑合物而存在。水合物的非限制性實(shí)例包括一水合物、二水合物等。溶劑合物的非限制性實(shí)例包括乙醇溶劑合物、丙酮溶劑合物等?！叭軇┖衔铩币庵负谢瘜W(xué)計(jì)量量或非化學(xué)計(jì)量量的溶劑的溶劑加成形式。一些化合物傾向于以結(jié)晶固態(tài)捕獲固定摩爾比率的溶劑分子，從而形成溶劑合物。如果溶劑是水，那么所形成的溶劑合物是水合物；并且如果溶劑是醇，那么所形成的溶劑合物是醇合物。水合物是通過一個(gè)或多個(gè)水分子與該物質(zhì)的一個(gè)分子組合形成，其中水保留其作為H2O的分子狀態(tài)。術(shù)語“生物電子等排體”是指通過原子或原子團(tuán)由大概相似的另一原子或原子團(tuán)交換所得的化合物。生物電子等排置換的目標(biāo)是產(chǎn)生具有與母體化合物相似的生物學(xué)特性的新化合物。生物電子等排置換可基于物理化學(xué)或拓?fù)鋵W(xué)。羧酸生物電子等排體的實(shí)例包括但不限于?；酋啺?、四唑、磺酸酯和膦酸酯。例如，參見帕塔尼(Patani)和拉夫爾(LaVoie)，化學(xué)評(píng)論(Chem.Rev.)96,3147-3176,1996。本發(fā)明旨在包括本發(fā)明化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括那些原子數(shù)相同但質(zhì)量數(shù)不同的原子。借助一般實(shí)例且不受限制的，氫同位素包括氚和氘，并且碳同位素包括C-13和C-14。本發(fā)明提供合成本文所披露的任何化學(xué)式的化合物的方法。本發(fā)明還提供根據(jù)下文如實(shí)例中所示的方案合成本發(fā)明所披露的多種化合物的詳細(xì)方法。在通篇說明中，如果組合物被描述為具有、包括或包括特定組分，那么預(yù)期組合物也基本上由所列舉組分組成，或由所列舉組分組成。類似地，如果方法或工藝被描述為具有、包含或包括特定工藝步驟，那么這些工藝也基本上由所列舉工藝步驟組成，或由所列舉工藝步驟組成。另外，應(yīng)理解，只要本發(fā)明保持可操作，步驟的順序或進(jìn)行某些動(dòng)作的順序是不重要的。此外，兩個(gè)或更多個(gè)步驟或動(dòng)作可同時(shí)進(jìn)行。本發(fā)明的合成工藝可容忍眾多種官能團(tuán)，因此可使用多種經(jīng)取代的起始物質(zhì)。所述工藝通常在整體工藝結(jié)束時(shí)或接近結(jié)束時(shí)提供所需最終化合物，但在某些情況下可能需要將所述化合物進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物。本發(fā)明化合物可以多種方式使用可商購的起始物質(zhì)、文獻(xiàn)中已知的化合物或來自易于制備的中間體的化合物，通過采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的或熟練技術(shù)人員可根據(jù)本文中的傳授內(nèi)容了解的標(biāo)準(zhǔn)合成方法和程序來制備。用于有機(jī)分子制備和官能團(tuán)轉(zhuǎn)換和操作的標(biāo)準(zhǔn)合成方法和程序可從本領(lǐng)域的相關(guān)科學(xué)文獻(xiàn)或從標(biāo)準(zhǔn)教材中獲得。盡管不限于任何一種或若干種來源，但例如以下的經(jīng)典文件是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的有用并且公認(rèn)的有機(jī)合成的參考教材：史密斯,M.B.(Smith,M.B.)、馬奇,J.(March,J.)，馬奇高級(jí)有機(jī)化學(xué)：反應(yīng)、機(jī)制和結(jié)構(gòu)(March’sAdvancedOrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure)，第5版，約翰威利父子公司(JohnWiley&Sons)：紐約,2001；格林,T.W.(Greene,T.W.)、伍茲,P.G.M.(Wuts,P.G.M.)，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis)，第3版，約翰威利父子公司：紐約，1999；R.拉洛克(R.Larock)，綜合有機(jī)轉(zhuǎn)換(ComprehensiveOrganicTransformations)，VCH出版社(VCHPublishers)(1989)；L.費(fèi)瑟(L.Fieser)和M.費(fèi)瑟(M.Fieser)，費(fèi)瑟與費(fèi)瑟的有機(jī)合成試劑(FieserandFieser’sReagentsforOrganicSynthesis)，約翰威利父子公司(1994)；和L.帕奎特(L.Paquette)編輯，有機(jī)合成試劑百科全書(EncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesis)，約翰威利父子公司(1995)，將這些文獻(xiàn)是通過引用結(jié)合在此。下文關(guān)于合成方法的說明設(shè)計(jì)為闡釋但不限制制備本發(fā)明化合物的一般程序。本發(fā)明的化合物可方便地通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的多種方法來制備。具有本文所披露的任何化學(xué)式的本發(fā)明化合物可根據(jù)下文方案1-10中說明的程序從可商購起始物質(zhì)或可使用文獻(xiàn)程序制備的起始物質(zhì)來制備。除非另外指明，否則方案1-10中的Z和R基團(tuán)(例如R2、R3、R4、R6、R7、R8和R12)如本文所披露的任何化學(xué)式中所定義。本領(lǐng)域技術(shù)人員將注意到，在本文所述的反應(yīng)順序和合成方案期間，某些步驟的順序可變，例如保護(hù)基團(tuán)的引入和去除。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，某些基團(tuán)可能需要通過使用保護(hù)基團(tuán)來保護(hù)以抵抗反應(yīng)條件。保護(hù)基團(tuán)還可用于區(qū)分分子中的相似官能團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)的清單以及如何引入和去除這些基團(tuán)可參見格林,T.W.、伍茲,P.G.M.，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)，第3版，約翰威利父子公司：紐約，1999。優(yōu)選的保護(hù)基團(tuán)包括但不限于：對(duì)于羥基部分：TBS、芐基、THP、Ac對(duì)于羧酸：芐基酯、甲基酯、乙基酯、烯丙基酯對(duì)于胺：Cbz、BOC、DMB對(duì)于二醇：Ac(x2)TBS(x2)，或在一起使用時(shí)，縮丙酮對(duì)于硫醇：Ac對(duì)于苯并咪唑：SEM、芐基、PMB、DMB對(duì)于醛：二-烷基乙縮醛，例如二甲氧基乙縮醛或二乙基乙酰基。在本文所述的反應(yīng)方案中，可產(chǎn)生多種立體異構(gòu)體。在未指示具體立體異構(gòu)體時(shí)，其理解為意味著可從反應(yīng)產(chǎn)生所有可能的立體異構(gòu)體。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，可使反應(yīng)最優(yōu)化以優(yōu)先得到一種異構(gòu)體，或可設(shè)計(jì)新方案以產(chǎn)生單一異構(gòu)體。如果產(chǎn)生混合物，那么可使用例如以下技術(shù)來分離異構(gòu)體：制備型薄層色譜、制備型HPLC、制備型手性HPLC或制備型SFC。以下縮寫在本說明書通篇中使用并且定義如下：Ac乙酰基AcOH乙酸aq.水性BID或b.i.d.每日兩次(一天兩次)BOC叔丁氧基羰基Cbz芐氧基羰基CDCl3氘化氯仿CH2Cl2二氯甲烷DCM二氯甲烷DMB2,4-二甲氧基芐基DMFN,N-二甲基甲酰胺DMSO二甲亞砜EA或EtOAc乙酸乙酯EDC或EDCIN-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺ESI-電噴霧負(fù)離子模式ESI+電噴霧正離子模式EtOH乙醇h小時(shí)H2O水HOBt1-羥基苯并三唑HCl氯化氫或鹽酸HPLC高效液相色譜K2CO3碳酸鉀LC/MS或LC-MS液相色譜質(zhì)譜M摩爾濃度MeCN乙腈min分鐘Na2CO3碳酸鈉Na2SO4硫酸鈉NaHCO3碳酸氫鈉NaHMDs六甲基二硅氮烷鈉NaOH氫氧化鈉NaHCO3碳酸氫鈉Na2SO4硫酸鈉NMR核磁共振Pd(OH)2二氫氧化鈀PMB對(duì)甲氧基芐基p.o.經(jīng)口(口服給藥)ppm百萬分率prepHPLC制備型高效液相色譜PYBOP(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽Rt或RT室溫TBME叔丁基甲基醚TFA三氟乙酸THF四氫呋喃THP四氫吡喃有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物對(duì)正常細(xì)胞無顯著細(xì)胞毒性。如果給予治療有效量的化合物不會(huì)引起正常細(xì)胞大于10％的細(xì)胞死亡，那么治療有效量的化合物對(duì)正常細(xì)胞沒有顯著的細(xì)胞毒性。如果給予治療有效量的化合物不會(huì)引起正常細(xì)胞大于10％的細(xì)胞死亡，那么治療有效量的化合物不會(huì)顯著地影響正常細(xì)胞的活力。在某一方面中，細(xì)胞死亡是通過細(xì)胞凋亡來進(jìn)行。使細(xì)胞與本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物接觸可在癌細(xì)胞中選擇性地誘導(dǎo)或激活細(xì)胞死亡。向有需要的受試者給予本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物可在癌細(xì)胞中選擇性地誘導(dǎo)或激活細(xì)胞死亡。使細(xì)胞與本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物接觸可在一種或多種受細(xì)胞增殖性病癥影響的細(xì)胞中選擇性地誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。優(yōu)選地，向有需要的受試者給予本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物在一種或多種受細(xì)胞增殖性病癥影響的細(xì)胞中選擇性地誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。關(guān)于本文中所討論的已知技術(shù)或等效技術(shù)的詳細(xì)說明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可參考一般參考文獻(xiàn)。這些文獻(xiàn)包括奧蘇貝爾(Ausubel)等人,當(dāng)前分子生物學(xué)方案(CurrentProtocolsinMolecularBiology)，約翰威利父子公司(2005)；薩布魯克(Sambrook)等人,分子克隆，實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(MolecularCloning,ALaboratoryManual)(第3版)，冷泉港出版社(ColdSpringHarborPress)，冷泉港，紐約(2000)；克里根(Coligan)等人,當(dāng)前免疫學(xué)方案(CurrentProtocolsinImmunology),約翰威利父子公司,紐約；恩納(Enna)等人,當(dāng)前藥理學(xué)方案(CurrentProtocolsinPharmacology),約翰威利父子公司,紐約；芬戈?duì)?Fingl)等人,治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)(ThePharmacologicalBasisofTherapeutics)(1975),雷明頓制藥科學(xué)(Remington'sPharmaceuticalSciences),麥克出版公司(MackPublishingCo.)，伊斯頓，賓夕法尼亞州，第18版(1990)。當(dāng)然，在制備或使用本發(fā)明的方面中可參考這些文獻(xiàn)。本發(fā)明還可提供藥物組合物，其包括本發(fā)明的化合物(例如化合物A、B、C或D)與至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體的組合。“藥物組合物”是呈適合給予受試者的形式的含有本發(fā)明化合物的配制品。在一個(gè)實(shí)施例中，藥物組合物呈整塊或呈單位劑型。單位劑型是多種形式中的任一種，包括例如膠囊、IV袋、片劑、氣溶膠吸入器上的單泵或小瓶。單位劑量組合物中活性成分的量是有效量并且根據(jù)所涉及的具體治療而變化。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)了解，有時(shí)候有必要根據(jù)患者的年齡和病狀對(duì)劑量進(jìn)行常規(guī)變化。劑量還將取決于給藥途徑。考慮多種途徑，包括經(jīng)口、肺、直腸、腸胃外、經(jīng)皮、皮下、靜脈注射、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)、吸入、頰、舌下、胸膜腔內(nèi)、鞘內(nèi)、鼻內(nèi)等。用于局部或經(jīng)皮給予本發(fā)明的化合物的劑型包括粉劑、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠、溶液、貼劑以及吸入劑。在一個(gè)實(shí)施例中，活性成分在無菌條件下與藥學(xué)上可接受的載體，以及與任何需要的防腐劑、緩沖劑或推進(jìn)劑混合。如本文所用詞組“藥學(xué)上可接受的”是指在合理醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)適用于與人類和動(dòng)物的組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應(yīng)或其他問題或并發(fā)癥，與合理益處/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的那些化合物、材料、組合物、載體或劑型?！八帉W(xué)上可接受的賦形劑”意指用于制備藥物組合物的賦形劑，它們通常是安全的、無毒性的并且不是生物學(xué)上或其他方面不期望的，并且包括獸醫(yī)使用以及人類藥學(xué)使用可接受的賦形劑。本說明書和權(quán)利要求使用的“藥學(xué)上可接受的賦形劑””包括一種和多于一種這樣的賦形劑。本發(fā)明的藥物組合物被配制成與其預(yù)期的給予途徑相容。給藥途徑的實(shí)例包括包括(例如)腸胃外、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、口腔(例如，吸入)、經(jīng)皮(局部)、和經(jīng)粘膜給藥。用于腸胃外、真皮內(nèi)或皮下施用的溶液或懸浮液可包括以下組分：無菌稀釋劑，例如注射用水、鹽水溶液、不揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗細(xì)菌劑，例如芐基醇或?qū)αu苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，及用于調(diào)節(jié)張力的試劑，例如氯化鈉或右旋糖?？梢杂盟峄驂A如鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。腸胃外制劑可以被封裝在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。本發(fā)明的化合物或藥物組合物可以當(dāng)前用于化學(xué)治療性治療的多種熟知方法給予受試者。例如，對(duì)于一種或多種癌癥的治療，可將本發(fā)明的化合物直接注射至腫瘤中，注射至血流或體腔中，或經(jīng)口服用，或用貼劑通過皮膚施用。所選劑量應(yīng)足以構(gòu)造有效治療，但未高至可引起不可接受的副作用。疾病病狀狀態(tài)(例如，癌癥、癌前病變等)和患者的健康狀況在治療期間和治療后的合理期限內(nèi)應(yīng)優(yōu)選地被密切監(jiān)測(cè)。本文使用的術(shù)語“治療有效量”是指藥學(xué)試劑用以治療、改善或預(yù)防所鑒別疾病或病狀或展現(xiàn)可檢測(cè)的治療或抑制作用的量。該作用可以通過本領(lǐng)域已知的任何測(cè)定方法來檢測(cè)。用于受試者的精確有效量取決于受試者的體重、身材和健康狀況；病狀的性質(zhì)和程度；以及所選用于給予的治療劑。治療有效量對(duì)于給定的情況下可通過臨床醫(yī)師的技術(shù)和判斷范圍內(nèi)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)來確定。在一個(gè)優(yōu)選方面中，待治療的疾病或病狀是癌癥。在另一個(gè)方面中，待治療的疾病或病狀是細(xì)胞增殖性病癥。對(duì)于任何化合物，最初治療有效量可以在細(xì)胞培養(yǎng)分析(如腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)分析)中或者在動(dòng)物模型(通常大鼠、小鼠、兔、狗、或豬)中估算。動(dòng)物模型還可以用于確定給藥的適當(dāng)濃度范圍和途徑。然后這類信息可以用于確定對(duì)于在人中給藥的適用劑量和途徑。在本發(fā)明的實(shí)施例中，EZH2抑制劑是以100-1600mg/kg的劑量給予。在實(shí)施例中，劑量為100mg/kg、或200mg/kg、或400mg/kg、或800mg/kg或1600mg/kg。在某些實(shí)施例中，劑量是一天一次或一天兩次給予。在實(shí)施例中，EZH2抑制劑是化合物A并且劑量是一天兩次的100mg/kg、或200mg/kg、或400mg/kg、或800mg/kg或1600mg/kg。在優(yōu)選實(shí)施例中，EZH2抑制劑是化合物A并且劑量為800mg/kg一天兩次。調(diào)整劑量和給藥以提供一種或多種活性藥劑的足夠水平或維持期望的效果?？煽紤]的因素包括疾病狀態(tài)的嚴(yán)重性、受試者的一般健康狀況、受試者的年齡、體重和性別、飲食、給藥的時(shí)間和頻率、一種或多種藥物相互作用、反應(yīng)敏感性以及對(duì)療法的耐受性/反應(yīng)。長(zhǎng)效藥物組合物可根據(jù)特定配制品的半衰期和清除率每3至4天、每周、或每?jī)芍芤淮谓o予。包括本發(fā)明的活性化合物的藥物組合物可以通過本領(lǐng)域公知的方法制備，例如通過常規(guī)混合、溶解、制粒、制糖衣、磨粉、乳化、膠囊化、包埋、或凍干工藝的方式。藥物組合物可以常規(guī)方式使用一種或多種有助于將活性化合物加工為可在藥學(xué)上使用的制劑的藥學(xué)上可接受的載體(包括賦形劑或助劑(或二者))來配制。當(dāng)然，合適的配制品取決于所選擇的給藥途徑。適合于可注射使用的藥物組合物包括無菌水溶液(在水溶性的情況下)或分散液以及用于臨時(shí)制備無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。對(duì)于靜脈內(nèi)給藥，適合的載體包括生理鹽水、抑菌水、克列莫佛(Cremophor)ELTM(BASF，新澤西州派西派尼市(Parsippany，NJ))或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。在所有情況下，該組合物必須是無菌的并且必須具有達(dá)到容易注射的程度的流動(dòng)性。它在制備和存儲(chǔ)的條件下必須是穩(wěn)定的并且必須抗微生物(如細(xì)菌和真菌)的污染作用而保存。該載體可以是包含以下物質(zhì)的溶劑或分散介質(zhì)：例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)，以及其適合的混合物。恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性可例如通過使用例如卵磷脂的包衣來維持，在分散液的情況下通過維持所需粒徑來維持，以及通過使用表面活性劑來維持。防止微生物的作用可以通過不同的抗細(xì)菌以及抗真菌劑，例如對(duì)羥苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等來實(shí)現(xiàn)。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑(例如糖)、多元醇(例如甘露醇和山梨糖醇)、和氯化鈉?？赏ㄟ^在組合物中包括延遲吸收的試劑(例如單硬脂酸鋁和明膠)來實(shí)現(xiàn)可注射組合物的延長(zhǎng)吸收。按照需要，可以通過將活性化合物以需要的量加入具有以上列舉的組分中的一種或多種組合的適當(dāng)溶劑中，隨后進(jìn)行無菌過濾來制備無菌注射液。通常，通過將活性化合物加入無菌載體中來制備分散液，該無菌載體包含基礎(chǔ)分散介質(zhì)以及來自以上列舉的其他所需成分。在用于制備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，制備方法為真空干燥和冷凍干燥，其產(chǎn)生活性成分的粉末以及來自其先前經(jīng)無菌過濾溶液的任何其他所需成分。口服組合物通常包括惰性稀釋劑或可食用的藥學(xué)上可接受的載體。它們可以被封裝在明膠膠囊中或被壓成片劑。出于口服治療性給藥的目的，可以將活性化合物隨賦形劑一起加入并且以片劑、錠劑或膠囊劑的形式使用?？梢允褂糜靡钥谇磺逑吹牧黧w載體來制備口服組合物，其中流體載體中的化合物經(jīng)口服、漱、咳出或咽下?？砂ㄋ帉W(xué)上相容的粘合劑或佐劑物質(zhì)或二者作為組合物的部分。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可含有以下成分中的任一者或具有類似性質(zhì)的化合物：粘合劑，例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如海藻酸、普拉莫膠(Primogel)或玉米淀粉；潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂或氫化植物油；助流劑，例如膠體二氧化硅；甜味劑，例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙味劑。對(duì)于通過吸入給藥，化合物從加壓容器或分配器(其中包含合適的推進(jìn)劑，例如氣體(如二氧化碳))、或噴霧器以氣溶膠噴霧形式遞送。系統(tǒng)給藥也可以通過經(jīng)粘膜或經(jīng)皮的方式。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮給藥，在該配制品中使用適合有待滲透的障礙的滲透劑。這樣的滲透劑通常是本
技術(shù)領(lǐng)域：
所熟知的，并且對(duì)于經(jīng)粘膜給藥包括，例如洗滌劑、膽汁鹽和夫西地酸衍生物。經(jīng)粘膜給藥可以通過使用鼻噴霧劑或栓劑來實(shí)現(xiàn)。對(duì)于經(jīng)皮給藥，如本領(lǐng)域中公知的，將活性化合物配制成軟膏劑、油膏劑、凝膠劑、或乳膏。將這些活性化合物與保護(hù)這些化合物免于從體內(nèi)快速消除的藥學(xué)上可接受的載體一起制備，如控制釋放配制品，包括植入物和微囊化的遞送系統(tǒng)?？梢允褂每缮锝到?、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐類、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯類、以及聚乳酸。用于制備此類配制品的方法對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言應(yīng)是清楚的。材料也可以從Alza公司和Nova制藥公司購買得到從，脂質(zhì)體懸浮液(包括靶向受感染細(xì)胞的具有針對(duì)病毒抗原的單克隆抗體的脂質(zhì)體)也可以用作藥學(xué)上可接受的載體。這些可以根據(jù)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的方法制備，如例如描述在美國專利號(hào)4,522,811)中的。特別有利的是以單位劑型配制口服或腸胃外組合物以便給藥和劑量統(tǒng)一。如本文所用的單位劑型是指適合作為用于待治療受試者的單一劑量的物理離散單位；每一單位含有經(jīng)計(jì)算以產(chǎn)生所需治療效應(yīng)的預(yù)定量的活性化合物與所需藥物載體的結(jié)合。對(duì)于本發(fā)明的單位劑型的規(guī)格被指示為并且直接取決于活性化合物的獨(dú)特特征和有待實(shí)現(xiàn)的特定治療效果。在治療性應(yīng)用中，在影響所選劑量的因素中，根據(jù)本發(fā)明使用的藥物組合物的劑量尤其根據(jù)藥劑、接受患者的年齡、體重和臨床病狀以及給予治療的臨床醫(yī)師或執(zhí)業(yè)醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)和判斷而變化。通常，劑量應(yīng)足以導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)的減慢、和優(yōu)選是消退，并且還優(yōu)選是使腫瘤完全消退。劑量的范圍可以是從每天大約0.01mg/kg至每天大約5000mg/kg。在優(yōu)選方面中，劑量的范圍可以是從每天大約1mg/kg至每天大約1000mg/kg。在某一方面中，劑量范圍將為約0.1mg/天至約50g/天；約0.1mg/天至約25g/天；約0.1mg/天至約10g/天；約0.1mg至約3g/天；或約0.1mg至約1g/天，呈單一、分開或連續(xù)劑量(該劑量可針對(duì)患者的體重(kg)、體表面積(m2)和年齡(歲)來調(diào)整)。藥劑的有效量是它提供了由臨床醫(yī)生或其他合格的觀察者注意到的一個(gè)客觀可識(shí)別的改進(jìn)。例如，患者腫瘤的消退可以參考腫瘤的直徑來測(cè)量。腫瘤直徑的減少表示消退。治療停止后腫瘤復(fù)發(fā)失敗也表示消退。本文使用的術(shù)語“劑量有效的方式”是指活性化合物在受試者或細(xì)胞中產(chǎn)生期望的生物效應(yīng)的量。藥物組合物可以與給藥的說明書一起包括在容器、包裝、或分配器中。本發(fā)明的化合物能進(jìn)一步形成鹽。如本文所用“藥學(xué)上可接受的鹽”是指本發(fā)明的化合物的鹽，其中母體化合物通過制造其酸性鹽或堿性鹽而改性。藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括但不限于堿性殘基(如胺)的礦物鹽或有機(jī)酸鹽、酸性殘基(如羧酸等)的堿鹽或有機(jī)鹽。藥學(xué)上可接受的鹽包括例如從無毒的無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的母體化合物的常規(guī)的無毒鹽或季銨鹽。例如，這樣的常規(guī)無毒鹽包括但不限于來自于無機(jī)酸和有機(jī)酸的那些，所述無機(jī)酸和有機(jī)酸選自以下項(xiàng)：2-乙酰氧基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、重碳酸、碳酸、檸檬酸、依地、乙烷二磺酸、1,2-乙烷磺酸、富馬酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙二醇阿散酸、間苯二酚酸、水巴米克酸(hydrabamic)、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸、羥基馬來酸、羥萘甲酸、羥乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、萘磺酸、硝酸、草酸、撲酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、聚半乳糖醛酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、亞醋酸、琥珀酸、氨基磺酸、對(duì)氨基苯磺酸、硫酸、鞣酸、酒石酸、甲苯磺酸，和通常出現(xiàn)的氨基酸，例如，甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。藥學(xué)上可接受的鹽的其他實(shí)例包括己酸、環(huán)戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羥基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基二環(huán)-[2,2,2]-辛-2-烯-1-甲酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、粘康酸等。本發(fā)明還涵蓋在以下發(fā)生時(shí)形成的鹽：母體化合物中存在的酸性質(zhì)子被金屬離子(例如堿金屬離子、堿土金屬離子或銨離子)替代；或與有機(jī)堿(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡萄糖胺等)配位。化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物或多晶型物是經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)皮、經(jīng)肺、以吸入方式、經(jīng)頰、舌下、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、經(jīng)直腸、胸膜內(nèi)、鞘內(nèi)和腸胃外給予。在一個(gè)實(shí)施例中，該化合物是口服給藥。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到某些給藥途徑的優(yōu)點(diǎn)。利用這些化合物的劑量方案是根據(jù)多種因素來選擇，包括患者的類型、物種、年齡、體重、性別和醫(yī)學(xué)病狀；待治療病狀的嚴(yán)重性；給予途徑；患者的腎功能和肝功能；以及所采用的具體化合物或其鹽。一個(gè)普通技術(shù)的醫(yī)師或獸醫(yī)可以容易地確定并開出所需藥物的有效量以預(yù)防、對(duì)抗病狀、或阻止病狀的進(jìn)展。本發(fā)明披露的化合物的配制和給藥技術(shù)可見于雷明頓：藥學(xué)科學(xué)與實(shí)踐(Remington:theScienceandPracticeofPharmacy)，第19版，麥克出版公司，伊斯頓，賓夕法尼亞州(1995)。在一個(gè)實(shí)施例中，本文所述的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑組合用于藥物制備中。合適的藥學(xué)上可接受的載體包括惰性固體填充劑或稀釋劑和無菌水溶液或有機(jī)溶液。這些化合物將以足以提供在本文所述范圍內(nèi)的所需劑量的量存在于這樣的藥物組合物中。除非另行說明，本文所用的所有百分比和比率均以重量計(jì)。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)勢(shì)將從不同實(shí)例變得清楚。所提供的實(shí)例說明在實(shí)施本發(fā)明中有用的不同組分和方法。所述實(shí)例不限制要求保護(hù)的發(fā)明?；诒九?，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以識(shí)別和使用對(duì)實(shí)施本發(fā)明有用的其他組分和方法。在本文所述的合成方案中，為簡(jiǎn)單起見，可以一種特定構(gòu)型繪制化合物。所述特定構(gòu)型不應(yīng)視為將本發(fā)明限制于一種或另一種異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體或立體異構(gòu)體，所述特定構(gòu)型也不排除異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物。適于本發(fā)明方法的另外的化合物、以及藥物組合物和其用途闡述于WO12/142504和WO12/142513中，將各自的內(nèi)容通過引用以其全文特此結(jié)合。組蛋白的翻譯后修飾和ATP依賴性染色質(zhì)重塑是調(diào)節(jié)正常基因表達(dá)的保真度的決定性過程。這些過程中所涉及的蛋白質(zhì)(例如PRC2和SWI/SNF復(fù)合體)在癌癥中通常發(fā)生遺傳改變。重要地，這兩種復(fù)合體通常彼此競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至并影響染色質(zhì)；遺傳變化可使這種拮抗失衡。例如，INI1是SWI/SNF復(fù)合體的亞單元，所述亞單元在幾乎所有橫紋肌樣瘤中喪失，從而產(chǎn)生對(duì)PRC2-EZH2甲基轉(zhuǎn)移酶的致癌依賴性，并且橫紋肌樣瘤模型對(duì)EZH2小分子抑制劑是敏感的。在滑膜肉瘤(另一種INI1缺陷腫瘤類型)中，復(fù)發(fā)性染色體易位將18號(hào)染色體上的SS18基因(SWI/SNF染色質(zhì)重塑復(fù)合體的亞單元)融合至X染色體上的三個(gè)相關(guān)基因(SSX1、SSX2和罕見地SSX4)中的一個(gè)。這導(dǎo)致致癌的SS18-SSX融合蛋白的表達(dá)，該融合蛋白結(jié)合到SWI/SNF復(fù)合體，該復(fù)合體逐出野生型SS18和腫瘤抑制物INI1二者，該二者隨后被降解。這導(dǎo)致異?；虮磉_(dá)并最終導(dǎo)致癌癥的發(fā)展。本文中所述數(shù)據(jù)顯示，化合物A(本文中也稱為E7438或EPZ-6438)是EZH2酶活性的早期臨床階段的選擇性口服生物可用的小分子抑制劑，該化合物A在滑膜肉瘤的臨床前模型中既作為單一藥劑又與化學(xué)療法組合地誘導(dǎo)抗增殖活性。在體外，該化合物在滑膜肉瘤細(xì)胞系(其為SS18-SSX1融合陽性)中特異性地誘導(dǎo)劑量依賴性細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和細(xì)胞死亡。對(duì)負(fù)載任一細(xì)胞系異種移植或兩種患者來源的異種移植(PDX)模型的小鼠的處理導(dǎo)致劑量依賴性腫瘤生長(zhǎng)抑制以及對(duì)EZH2特異性底物(即組蛋白H3上的賴氨酸27)的三甲基化水平的相關(guān)抑制。這些數(shù)據(jù)證實(shí)了在異種移植模型中SS18-SSX1陽性滑膜肉瘤對(duì)EZH2酶活性的依賴性，并且用適當(dāng)生物標(biāo)記物表明靶向EZH2的藥物在這些一種或多種遺傳限定癌癥中的潛在效用。在本說明書中所引用的所有公開以及專利文件都通過引用以其全部?jī)?nèi)容結(jié)合在此，就像這樣的公開或文件被確切地并且個(gè)別地指出通過引用被結(jié)合一樣。公開和專利文件的引用不旨在為承認(rèn)任何這些是相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)，也不構(gòu)成對(duì)關(guān)于相同內(nèi)容或日期的任何承認(rèn)。本發(fā)明現(xiàn)在已經(jīng)通過書面描述的方式進(jìn)行了描述，本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到本發(fā)明可以以各種實(shí)施例的方式來實(shí)施，并且在前面的描述和下面的實(shí)例是為了說明的目的，而不是限制后面的權(quán)利要求。實(shí)例實(shí)例1：各種細(xì)胞系中的EZH2、INI1、SS18-SSX1和加樣對(duì)照β-肌動(dòng)蛋白的蛋白質(zhì)水平用含有1×蛋白酶抑制劑混合劑(賽默飛世爾科技(ThermoScientific)，羅克福德，伊利諾伊州)的1×細(xì)胞裂解緩沖液(9803號(hào)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù)(CellSignalingTechnology)，丹弗斯，馬薩諸塞州)裂解HS-SY-II和SW982人類滑膜肉瘤細(xì)胞、RD人類橫紋肌肉瘤細(xì)胞、G401人類橫紋肌樣瘤細(xì)胞和HEK293人類胚腎細(xì)胞。將樣品超聲波處理并通過在4℃下以10,000×g離心10分鐘來澄清。通過使用BCA蛋白質(zhì)分析試劑盒(賽默飛世爾科技)測(cè)定裂解產(chǎn)物的蛋白質(zhì)含量。通過混合2×加樣緩沖液(用于TrisSDS的β-ME樣品處理，科斯莫生物，東京，日本)和水與細(xì)胞裂解產(chǎn)物來制備樣品溶液，并在95℃下孵育5分鐘。如下進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。將樣品溶液在還原性條件下在2％-15％梯度聚丙烯酰胺凝膠(對(duì)于SS18和EZH2)或4％-20％梯度聚丙烯酰胺凝膠(對(duì)于INI1和β-肌動(dòng)蛋白)上分離，并將其轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜(GE醫(yī)療，沃基肖，威斯康辛州)上。將印跡用以下封閉溶液在室溫下封閉1小時(shí)：1×封閉Ace溶液(雪印，札幌，日本)用于EZH2、INI1和SS18，并且含有0.5％Tween20和5％脫脂乳的TBS用于β-肌動(dòng)蛋白。用以下稀釋條件將印跡與一級(jí)抗體一起在4℃下孵育過夜：EZH2抗體(07-689，密理博(Millipore)，比爾里卡，馬薩諸塞州)，1:1000稀釋度，在含有0.5％Tween20和0.1×封閉Ace溶液的TBS中；INI1抗體(8745號(hào)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))，1:1000稀釋度，在含有0.5％Tween20和0.1×封閉Ace溶液的TBS中；SS18抗體(sc-365170，圣克魯茲，圣克魯茲，加利福尼亞州)，1:500稀釋度，在含有0.5％Tween20和0.1×封閉Ace溶液的TBS中；和β-肌動(dòng)蛋白抗體(A5441，西格瑪-奧德里奇(Sigma-Aldrich)，圣路易斯，密蘇里州)，1:2000稀釋度，在含有0.5％Tween20和5％脫脂乳的TBS中。在用含有0.5％Tween20的TBS洗滌后，用以下稀釋條件將印跡與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔IgG(細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))或抗小鼠IgG(細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))在室溫下進(jìn)一步一起孵育60分鐘：在含有0.5％Tween20和0.1×封閉Ace溶液的TBS中的1:1000稀釋度的抗兔IgG用于EZH2、INI1和SS18，并且在含有0.5％Tween20和5％脫脂乳的TBS中的1:2000稀釋度的抗小鼠IgG用于β-肌動(dòng)蛋白。在通過含有0.5％Tween20的TBS充分洗滌后，用西方穩(wěn)定素(ImmobilonWestern)化學(xué)發(fā)光HRP底物(密理博)將印跡顯影。用發(fā)光圖像分析儀LAS-3000(富士膠片(FujiFilm)，東京，日本)通過化學(xué)發(fā)光使免疫反應(yīng)性條帶可視化。蛋白質(zhì)印跡的代表性圖像顯示于圖1中。在HS-SY-II細(xì)胞中證實(shí)SS18-SSX1表達(dá)。在該細(xì)胞系中還觀察到INI1下調(diào)。另一方面，另一滑膜肉瘤系SW982不表達(dá)該融合蛋白并且具有與RD和HEK293細(xì)胞相當(dāng)?shù)腎NI1表達(dá)。實(shí)例2：各種細(xì)胞系中H3K27的三甲基化和二甲基化水平將HS-SY-II和SW982人類滑膜肉瘤細(xì)胞、RD人類橫紋肌肉瘤細(xì)胞、G401人類橫紋肌樣瘤細(xì)胞、WSU-DLCL2和OCI-LY19人類彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞和HEK293人類胚腎細(xì)胞懸浮于500μL裂解緩沖液(10mmol/LMgCl2、10mmol/LTris-HCl、25mmol/LKCl、1％TritonX-100、8.6％蔗糖和1×蛋白酶抑制劑混合劑)中。在冰上孵育5分鐘后，通過在4℃下以600×g離心5分鐘收集細(xì)胞核并用冰冷PBS洗滌一次。在4℃下以600×g離心5分鐘后，將沉淀再懸浮于100μL0.2mol/L冰冷硫酸中1小時(shí)，并且在孵育期間渦旋若干次。通過在4℃下以10,000×g離心10分鐘來澄清上清液，并將1mL冰冷丙酮添加到所收集的上清液中。使組蛋白在–20℃下沉淀1小時(shí)，通過在4℃下以10,000×g離心10分鐘?；?，并且再懸浮于100μL水中。使用BCA蛋白質(zhì)分析試劑盒(皮爾斯(Pierce))對(duì)所提取的組蛋白進(jìn)行定量。通過混合2×加樣緩沖液(用于TrisSDS的β-ME樣品處理，科斯莫生物)和水與細(xì)胞裂解產(chǎn)物來制備樣品溶液，并在95℃下孵育5分鐘。如下進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。將樣品溶液在還原性條件下在15％-25％梯度聚丙烯酰胺凝膠上分離，并將其轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜(GE醫(yī)療，沃基肖，威斯康辛州)。用以下封閉溶液將印跡在室溫下封閉1小時(shí)：1×封閉Ace溶液用于H3K27me3和H3K27me2，并且含有0.5％Tween20和5％脫脂乳的TBS用于總組蛋白H3。用以下稀釋條件將印跡與一級(jí)抗體一起在4℃下孵育過夜：H3K27me3抗體(9733號(hào)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))和H3K27me2抗體(9728號(hào)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))，1:1000稀釋度，在含有0.5％Tween20和0.1×封閉Ace溶液的TBS中；以及總組蛋白H3抗體(ab1791，艾博抗(Abcam)，劍橋，馬薩諸塞州)，1:2000稀釋度，在含有0.5％Tween20和5％脫脂乳的TBS中。在用含有0.5％Tween20的TBS洗滌后，用以下條件將印跡與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔IgG(細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))在室溫下進(jìn)一步一起孵育60分鐘：1:1000稀釋度，在含有0.5％Tween20和0.1×封閉Ace溶液的TBS中，用于H3K27me3和H3K27me2；或1:2000稀釋度，在含有0.5％Tween20和5％脫脂乳的TBS中，用于總組蛋白H3。在通過含有0.5％Tween20的TBS充分洗滌后，用西方穩(wěn)定素(ImmobilonWestern)化學(xué)發(fā)光HRP底物(密理博)將印跡顯影。用發(fā)光圖像分析儀LAS-3000(富士膠片(FujiFilm)，東京，日本)通過化學(xué)發(fā)光使免疫反應(yīng)性條帶可視化。蛋白質(zhì)印跡的代表性圖像顯示于圖2A中。使用MultiGauge3.0版軟件(富士膠片)對(duì)蛋白質(zhì)條帶的信號(hào)定量。示出一系列圖來顯示各種細(xì)胞系中的定量H3K27me3/總H3(圖2B)、H3K27me2/總H3(圖2C)或H3K27me3/H3K27me2(圖2D)比率。與具有Y646EZH2突變的WSU-DLCL2中的高H3K27me3/H3K27me2狀態(tài)相比，HS-SY-II未顯示高H3K27me3/H3K27me2狀態(tài)。實(shí)例3：粘附性細(xì)胞系長(zhǎng)期增殖分析方案：用于7天分析的96孔鋪板：對(duì)于每種粘附性細(xì)胞系，在晚上(用于第二天用化合物處理)或在早上(用于在晚上用化合物處理)將細(xì)胞以100μL的體積鋪板于要按一式三份處理的96孔板中，以允許細(xì)胞在化合物處理前附著到板上。要被分開用于7-14天分析的6孔板：將2mL細(xì)胞以正確密度鋪板于6孔板的每個(gè)孔中。從96孔板生長(zhǎng)曲線通過將96孔密度乘以30計(jì)算正確密度。因子30來自6孔板的生長(zhǎng)面積除以96孔板的生長(zhǎng)面積(9.5cm2/0.32cm2＝29.7，上舍入至30)，其對(duì)應(yīng)于在6孔板中相對(duì)于96孔板大30倍的表面積。第0天：通過去除介質(zhì)并添加回100μL(用于96孔板)或2mL(用于6孔板)具有化合物/DMSO的正確稀釋度的介質(zhì)來用化合物或DMSO處理。表1包括96孔板圖譜的實(shí)例。將板孵育96小時(shí)。表1：用CellTiter-讀取一個(gè)96孔板的第0天讀數(shù)(這個(gè)板不需要更換介質(zhì))。第4天：用CellTiter-讀取一個(gè)96孔板的第4天讀數(shù)(這個(gè)板在讀取前不需要更換介質(zhì))。在第4天在96孔板和6孔板中用含有化合物的新鮮介質(zhì)更換介質(zhì)。第7天：用CellTiter-讀取最終96孔板。計(jì)數(shù)6孔板的單獨(dú)孔，并將細(xì)胞在96孔板中重新鋪板到初始鋪板接種密度，如上文所述。在增殖分析的第7-14天重復(fù)第0-7天的步驟。具體地，在化合物處理前約12小時(shí)，在6孔板中分別以24,000個(gè)細(xì)胞/孔和7,500個(gè)細(xì)胞/孔的密度將HS-SY-II或SW982細(xì)胞進(jìn)行鋪板。在第0天，用DMSO或化合物處理細(xì)胞，以10μmol/L開始并以4倍稀釋度遞減。在第7天，將6孔板中的細(xì)胞用胰蛋白酶消化，通過TC10自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)器(伯樂(Bio-Rad)，里士滿，加利福尼亞州)計(jì)數(shù)，并且對(duì)于HS-SY-II和SW982在96孔板中按一式三份分別以800個(gè)細(xì)胞/孔和250個(gè)細(xì)胞/孔的密度重新鋪板。使細(xì)胞粘附到板過夜并如在第0天一樣用DMSO或化合物處理。在第0天、第7天、第11天和第14天，通過CellTiter-發(fā)光細(xì)胞活力分析(普洛麥格(Promega))和遠(yuǎn)景(EnVision)2103多標(biāo)記讀板儀(珀金埃爾默(Perkin–Elmer)，韋爾斯利，馬薩諸塞州)測(cè)定細(xì)胞活力。在第4天和第11天用新化合物/介質(zhì)更換化合物/介質(zhì)。使用第7天、第11天和第14天的測(cè)量值對(duì)第7天的測(cè)量值的比率繪制第7天到第14天的增殖圖，并在第14天計(jì)算IC50值。使用化合物E和化合物A(本文中也稱為E7438和EPZ-6438)的實(shí)驗(yàn)的代表性圖分別顯示于圖3A、3B和3C、3D中。HS-SY-II細(xì)胞在14天長(zhǎng)期增殖分析中顯示對(duì)化合物E和化合物A的高敏感性，而SW982細(xì)胞并未顯示。實(shí)例4：體外和體內(nèi)的化合物A處理在體外，HS-SY-II細(xì)胞對(duì)化合物A是高度敏感的并顯示以劑量依賴性方式對(duì)細(xì)胞增殖的抑制。另一方面，SW982細(xì)胞對(duì)化合物A不敏感(圖5A和5B)。通過用EZH2抑制劑(圖6A)處理在兩個(gè)細(xì)胞系中都觀察到H3K27me3減少，并且IC50值彼此相當(dāng)(圖6B)。這表明，通過用EZH2抑制劑處理導(dǎo)致的組蛋白標(biāo)記變化與SS18-SSX融合蛋白的存在無關(guān)。在HS-SY-II異種移植小鼠模型中分析PK值和PD變化。測(cè)定化合物A在最后一次劑量之前5分鐘和之后3小時(shí)的血漿濃度。觀察到劑量依賴性暴露(圖7A)。同時(shí)，還觀察到腫瘤組織中H3K27me3水平的劑量依賴性降低(圖7B)。表2和3提供關(guān)于圖7B中所示數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。表2：家族數(shù)1每個(gè)家族的比較數(shù)3α0.05鄧尼特多重比較檢驗(yàn)平均差差別的95％CI顯若？匯總運(yùn)載體相對(duì)于E7438125mg/kg0.30.1681-0.4319是****運(yùn)載體相對(duì)于E7438250mg/kg0.450.3101-0.5899是****運(yùn)載體相對(duì)于E7438500mg/kg0.6960.5641-0.8279是****檢驗(yàn)細(xì)節(jié)均值1均值2平均差差別的SEn1n2aDF運(yùn)載體相對(duì)于E7438125mg/kg10.70.30.05052555.93815運(yùn)載體相對(duì)于E7438250mg/kg10.550.450.05359548.39815運(yùn)載體相對(duì)于E7438500mg/kg10.3040.6960.050525513.7815表3：線性趨勢(shì)的事后檢驗(yàn)斜率-0.1119R方0.9104P值＜0.0001P值匯總****線性趨勢(shì)顯著(P＜0.05)？是在HS-SY-II和SW982的體外培養(yǎng)中分析通過用化合物A或EPZ-011989(即，化合物C)處理導(dǎo)致的基因表達(dá)變化。已報(bào)道，PRC2復(fù)合體被TLE1募集到SS18-SSX融合蛋白并且抑制ATF2靶基因(EGR1、ATF3、MEIS2和CDKN2A)(癌細(xì)胞(CancerCell)21，333-347，2012)。此處檢查EGR1、ATF3和CDKN2A的表達(dá)水平。在HS-SY-II中觀察到劑量和時(shí)間依賴性CDKN2A上調(diào)，而已知CDKN2A基因座在SW982中純合地缺失(圖8)。在HS-SY-II中但并非在SW982中，ATF3和EGR1通過用化合物A和EPZ-011989處理而發(fā)生上調(diào)。因此，化合物A誘導(dǎo)滑膜肉瘤發(fā)病機(jī)制中所涉及基因的表達(dá)的變化。表4提供關(guān)于圖8中所示數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。表4：星號(hào)意指與0μM處理組的水平相比的顯著變化。同樣在HS-SY-II異種移植模型中分析通過用化合物A處理導(dǎo)致的基因表達(dá)變化。CDKN2A在給予500mg/kg化合物A的小鼠中顯著上調(diào)(圖9)。同樣，化合物A誘導(dǎo)滑膜肉瘤發(fā)病機(jī)制中所涉及基因的表達(dá)的變化。圖10A至10C顯示負(fù)載HS-SY-II異種移植物的無胸腺裸鼠的體內(nèi)腫瘤體積均值。在第一研究中，給予小鼠運(yùn)載體(經(jīng)口28天或在第1天和第22天iv)、化合物A(經(jīng)口：125mg/kg、250mg/kg或500mg/kg持續(xù)28天)或多柔比星(iv：10mg/kg，第1天和第22天)；一周兩次測(cè)量腫瘤體積(圖10A和10B)。在第二研究中，給予小鼠運(yùn)載體(經(jīng)口28天)、化合物A(經(jīng)口：250mg/kg或500mg/kg持續(xù)28天)、多柔比星(iv：10mg/kg，在第1天和第22天)或多柔比星(iv：10mg/kg，在第1天和第22天)與化合物A(經(jīng)口：250mg/kg持續(xù)28天)的組合(圖10C)。來自第二研究的動(dòng)物的腫瘤是在第28天(最后一次劑量后3h)收獲并通過ELISA(圖10D)或用于增殖標(biāo)記物Ki67的IHC(圖10E)進(jìn)行H3K27me3分析。盡管在2D細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)化合物A敏感，但HS-SY-II細(xì)胞系異種移植物在小鼠異種移植模型中展現(xiàn)劑量相關(guān)的腫瘤體積增加；這個(gè)觀察結(jié)果的潛在機(jī)制正在研究中。圖11A和11C顯示負(fù)載滑膜肉瘤的兩種不同PDX中的一種的無胸腺裸鼠的體內(nèi)腫瘤體積均值。圖11B和11D顯示負(fù)載PDX的小鼠的存活％。給予小鼠運(yùn)載體(經(jīng)口35天)、化合物A(經(jīng)口：125mg/kg、250mg/kg或500/400mg/kg持續(xù)35天)或多柔比星(iv：3mg/kg，一周一次持續(xù)3周)。圖11A和11B顯示來自負(fù)載來自患有高級(jí)紡錘體細(xì)胞肉瘤的57歲男性的PDX的小鼠的數(shù)據(jù)。圖11C和11D顯示來自負(fù)載來自16歲女性的PDX的小鼠的數(shù)據(jù)。與HS-SY-II細(xì)胞系異種移植物相比，PDX小鼠展現(xiàn)劑量相關(guān)的體內(nèi)腫瘤體積減小。圖12A和12B顯示來自多個(gè)小鼠亞組的滑膜肉瘤PDX腫瘤的陣列數(shù)據(jù)，所述腫瘤是在第35天收獲并通過RNA-seq分析加以分析。圖12A是來自負(fù)載來自57歲男性的PDX的小鼠的數(shù)據(jù)；圖2B是來自負(fù)載來自16歲女性的PDX的小鼠的數(shù)據(jù)。HLA基因Fas和KLRD1的表達(dá)在經(jīng)400mg/kg化合物A處理的小鼠中相對(duì)于經(jīng)運(yùn)載體處理的小鼠有所增加。在該圖中，藍(lán)色是低表達(dá)并且紅色是高表達(dá)。材料與方法細(xì)胞培養(yǎng)使HS-SY-II(RCB2231，日本理研生物資源中心(RIKENBioResourceCenter))和SW982(HTB-93，ATCC)在37℃和5％CO2條件下在含有10％FBS的RPMI1640中生長(zhǎng)。HS-SY-II細(xì)胞被表征為具有SS18-SSX1的融合體，而SW982細(xì)胞具有野生型SS18。通過化合物A誘導(dǎo)的H3K27甲基化變化用DMSO或化合物A處理HS-SY-II和SW982細(xì)胞，以40nmol/L開始并以4倍稀釋度遞減，持續(xù)96小時(shí)。用冰冷PBS洗滌細(xì)胞，用細(xì)胞刮棒收集細(xì)胞，并用100μl核提取緩沖液(10mMTris-HCl、10mMMgCl2、25mMKCl、1％TritonX-100、8.6％蔗糖，加上1xHalt蛋白酶抑制劑混合劑(1861281，賽默飛世爾科技))裂解細(xì)胞。通過在4℃下以600g離心5分鐘來收集細(xì)胞核，并用冰冷PBS洗滌一次。取出上清液并經(jīng)1小時(shí)用100μL0.4N冷硫酸提取組蛋白。通過在4℃下以10,000g離心10分鐘使提取物澄清，并將其轉(zhuǎn)移到含有1mL冰冷丙酮的新微量離心管中。使組蛋白在-20℃下沉淀過夜，通過以10,000g離心10分鐘?；?，并將其再懸浮于100μl水中。使用BCA蛋白質(zhì)分析(23225，皮爾斯)對(duì)組蛋白定量。將稀釋組蛋白涂布于Immulon4HBX板(3855，賽默飛世爾科技)上過夜并進(jìn)行ELISA。簡(jiǎn)單來說，在用含有0.05％Tween20和2％牛血清白蛋白(BSA)的PBS封閉后，將板與H3K27me3抗體(9733號(hào)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))或總組蛋白H3抗體(AB1791，艾博抗)一起孵育。將板與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔IgG(7074號(hào)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))進(jìn)一步一起孵育，之后與TMB底物(TMBS-0100-01，BioFx實(shí)驗(yàn)室(BioFxLaboratories))一起孵育。之后，使用板分光光度計(jì)(SpectraMax250，分子裝置(MolecularDevices))在450nm下(參考波長(zhǎng)650nm)測(cè)量孔中的顯影顏色。相對(duì)于總組蛋白H3調(diào)節(jié)H3K27me3水平，并表達(dá)為相對(duì)于DMSO對(duì)照的倍數(shù)變化。圖6A顯示代表圖。通過GraphPadPrism(格拉夫帕德軟件(GraphPadSoftware))測(cè)定圖6B中顯示的IC50值的范圍(兩次獨(dú)立實(shí)驗(yàn))。組蛋白標(biāo)記變化在HS-SY-II與SW982之間相當(dāng)，并且所述變化與SS18-SSX融合蛋白無關(guān)。HS-SY-II異種移植模型中的PK值和PD變化HS-SY-II細(xì)胞在對(duì)數(shù)中期生長(zhǎng)期間收獲，并再懸浮于含有50％基質(zhì)膠(BD生物科技(BDBiosciences))的漢克(Hank)平衡鹽溶液中。Balb/C-nu小鼠(日本查爾斯河實(shí)驗(yàn)室(CharlesRiverLaboratoriesJapan))在右側(cè)腹皮下接受1x107個(gè)細(xì)胞(0.1mL細(xì)胞懸浮液)。將載有約200mm3(注射后31天)的小鼠分到具有類似腫瘤體積均值的處理組中。化合物A或運(yùn)載體(0.5％MC+0.1％Tween-80，于水中)是通過經(jīng)口管飼以所指示劑量一天兩次給予持續(xù)7天。每個(gè)劑量是以0.2mL/20g小鼠(10mL/kg)的體積遞送，并針對(duì)最后記錄的單獨(dú)動(dòng)物的體重進(jìn)行調(diào)整。在最后一次劑量之前大約5分鐘和之后3小時(shí)從用化合物A處理的小鼠收集外周血樣品。在通過離心獲得血漿樣品后，通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC/MS/MS)方法對(duì)化合物A的血漿濃度進(jìn)行分析。使用配備有質(zhì)譜儀(Quattropremier，麥克羅麥斯(MICROMASS))的UPLC系統(tǒng)(Acquity，沃特斯(Waters))對(duì)化合物A進(jìn)行定量。將濃度繪圖(n＝5)于圖7A中。每個(gè)條形代表每組中血漿濃度的均值。在最后一次劑量后約3小時(shí)從用于PK值和PD變化的分析中的小鼠收集腫瘤樣品。使用RNAlater(AM7020，生命技術(shù)(Lifetechnologies))儲(chǔ)存腫瘤樣品。通過RNeasy微型試劑盒(74104，凱杰(Qiagen))和大容量cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(4368814，生命技術(shù))根據(jù)制造商說明書進(jìn)行總RNA分離和逆轉(zhuǎn)錄。如上文所述使用cDNA樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR。相對(duì)于GAPDH調(diào)節(jié)表達(dá)水平并表達(dá)為相對(duì)于運(yùn)載體對(duì)照的倍數(shù)變化(圖9)。對(duì)于圖10D，將腫瘤在液氮中快速冷凍。將冷凍腫瘤樣品切成20mg切片并置于500μL冰冷核提取緩沖液(10mMTris-HCl、10mMMgCl2、25mMKCl、1％TritonX-100、8.6％蔗糖，加上1xHalt蛋白酶抑制劑混合劑(1861281，賽默飛世爾科技))中并用手動(dòng)微型勻漿器勻漿。通過在4℃下以600g離心5分鐘來收集細(xì)胞核，并用冰冷PBS洗滌一次。取出上清液并經(jīng)1小時(shí)用100μL0.4N冷硫酸提取組蛋白。通過在4℃下以10,000g離心10分鐘使提取物澄清，并將其轉(zhuǎn)移到含有1mL冰冷丙酮的新微量離心管中。使組蛋白在-20℃下沉淀過夜，通過以10,000g離心10分鐘?；⑵湓賾腋∮?00μl水中。使用BCA蛋白質(zhì)分析(23225，皮爾斯)對(duì)組蛋白定量。將稀釋組蛋白涂布于Immulon4HBX板(3855，賽默飛世爾科技)上過夜并進(jìn)行ELISA。簡(jiǎn)單來說，在用含有0.05％Tween20和2％牛血清白蛋白(BSA)的PBS封閉后，將板與H3K27me3抗體(9733號(hào)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))或總組蛋白H3抗體(AB1791，艾博抗)一起孵育。將板與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗兔IgG(7074號(hào)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)技術(shù))進(jìn)一步一起孵育，之后與TMB底物(TMBS-0100-01，BioFx實(shí)驗(yàn)室(BioFxLaboratories))一起孵育。之后，使用板分光光度計(jì)(SpectraMax250，分子裝置(MolecularDevices))在450nm下(參考波長(zhǎng)650nm)測(cè)量孔中的顯影顏色。相對(duì)于總組蛋白H3調(diào)節(jié)H3K27me3水平，并表達(dá)為相對(duì)于運(yùn)載體對(duì)照的倍數(shù)變化。將所述值繪圖(n＝6)于圖10D中。每個(gè)條形代表每組中的值的均值。在從給予化合物A的小鼠得到的腫瘤中觀察到顯著降低的H3K27me3水平。提取組蛋白并定量，并如上文所述分析H3K27me3的水平。將腫瘤中H3K27的三甲基化水平繪圖(n＝5)于圖7B中。每個(gè)條形代表每組中的三甲基化水平的均值±SEM。在化合物A處理后的體外基因表達(dá)變化用EZH2抑制劑(化合物A或EPZ-011989)處理HS-SY-II和SW982細(xì)胞并在所指示時(shí)間點(diǎn)收集。使用TaqMan基因表達(dá)Cells-to-CT試劑盒(4399002，生命技術(shù))根據(jù)制造商的方案進(jìn)行總RNA分離和cDNA合成。通過使用TaqMan基因表達(dá)分析(生命技術(shù)，4331182)和TaqMan探針(分別為Hs00231069_m1、Hs00152928_m1、Hs00233365_m1和Hs99999905_m1)分析ATF3、EGR1、CDKN2A和GAPDH表達(dá)。相對(duì)于GAPDH調(diào)節(jié)表達(dá)水平并表達(dá)為相對(duì)于DMSO對(duì)照的倍數(shù)變化(圖8)。在化合物A處理后的體內(nèi)基因表達(dá)變化在最后一次劑量后約3小時(shí)從用于PK值和PD變化的分析中的小鼠收集腫瘤樣品。使用RNAlater(AM7020，生命技術(shù)(Lifetechnologies))儲(chǔ)存腫瘤樣品。通過RNeasy微型試劑盒(74104，凱杰(Qiagen))和大容量cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(4368814，生命技術(shù))根據(jù)制造商說明書進(jìn)行總RNA分離和逆轉(zhuǎn)錄。如上文所述使用cDNA樣品進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR。相對(duì)于GAPDH調(diào)節(jié)表達(dá)水平并表達(dá)為相對(duì)于運(yùn)載體對(duì)照的倍數(shù)變化(圖9)。另外或可替代地，從冷凍腫瘤樣品分離總RNA。使用TruSeqTMRNA樣品制備試劑盒(伊魯米那(Illumina))構(gòu)建cDNA文庫以用于在IlluminaHiSeq上進(jìn)行配對(duì)末端測(cè)序(詳情闡述于IlluminaTruSeqRNA樣品制備指南(IlluminaTruSeqRNASamplePreparationGuide)中)。標(biāo)準(zhǔn)簇生成試劑盒v5將cDNA文庫結(jié)合到流動(dòng)細(xì)胞表面。在IlluminaHiSeq上使用TruSeqSBS試劑盒從每個(gè)樣品約50M簇生成配對(duì)末端讀數(shù)。RNAseq數(shù)據(jù)處理將呈FASTQ格式的原始測(cè)序讀數(shù)與人類基因組hg19以及小鼠基因組mm10比對(duì)。用RSEMv1.1.13程序使用USCSKnownGene轉(zhuǎn)錄組作為參考進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組定量。用針對(duì)伊魯米那50x50配對(duì)末端測(cè)序最優(yōu)化的參數(shù)運(yùn)行RSEM表達(dá)計(jì)算。用于生物學(xué)解釋的RNAseq轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析關(guān)于兩種PDX模型(每種模型用5個(gè)重復(fù)處理)使用GSEAJava啟用的桌面軟件(2.0.13版，在萬維網(wǎng)(WorldWideWeb，www)broadinstitute.org/gsea/index.jsp)對(duì)化合物A相對(duì)于DMSO處理的兩個(gè)樣品比較進(jìn)行基因集合富集分析(GSEA)。使用標(biāo)準(zhǔn)化后RSEM生成的基因水平計(jì)數(shù)進(jìn)行GSEA輸入。針對(duì)基因集合而非表型進(jìn)行排列，以適應(yīng)小的樣本大小。使用來自MSigDB(4.0版，萬維網(wǎng)(www)broadinstitute.org/gsea/msigdb/index.jsp)的已策劃KEGG路徑以及轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合基序基因集合用于所有GSEA分析。對(duì)于圖10E，對(duì)所收集腫瘤進(jìn)行福爾馬林固定，包埋于石蠟中。遵循通用工藝根據(jù)聚合物基方法(遠(yuǎn)景(EnVision)，達(dá)克(DAKO)，日本)制備石蠟切片，脫石蠟并加工用于IHC。通過在121℃下在2個(gè)大氣壓下在靶修復(fù)溶液(達(dá)克，稀釋到10％的最終濃度)中高壓滅菌20分鐘處理脫石蠟切片用于抗原修復(fù)，并用3％過氧化氫溶液處理5分鐘以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。使可商購的一級(jí)抗體與Ki-67在室溫下反應(yīng)約1小時(shí)(抗人類Ki-67小鼠單克隆抗體，達(dá)克，日本，具有1:50稀釋度)。后續(xù)步驟使用遠(yuǎn)景(EnVision)系統(tǒng)遵循制造商說明書進(jìn)行，包括在室溫下用二級(jí)抗體處理30分鐘；使用3,3'-二氨基聯(lián)苯胺作為色原體并使用蘇木精作為復(fù)染劑。對(duì)于圖10E，使用AperioXTTM掃描儀將載玻片數(shù)字化。使用AperioImageScopeTM軟件分析數(shù)字化載玻片以對(duì)陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行定量。在處理組中，針對(duì)Ki67對(duì)IHC染色的定量未顯示細(xì)胞增殖的變化。每個(gè)條形代表每組中的值的均值。(在所有給藥組中都沒有觀察到Ki67陽性細(xì)胞百分比的顯著變化。)滑膜肉瘤RNA測(cè)序方法源自患者的異種移植(PDX)模型CTG-0331和CTG-0771是代表人類滑膜肉瘤的低傳代ChampionsTumorGraftTM模型。在免疫受損的雌性小鼠(塔克尼克(Taconic)；NCr裸鼠)中在側(cè)腹區(qū)域中單邊植入從供體動(dòng)物收獲的腫瘤片段(5mmx5mmx5mm)，所植入的每一片段來自特定世代批次(在P4的CTG-0331和CTG-0771)。在腫瘤達(dá)到約100-300mm3時(shí)，依據(jù)腫瘤體積將動(dòng)物匹配到處理組和對(duì)照組并開始給藥。經(jīng)口BID以10μL/g的劑量體積給予運(yùn)載體(0.5％NaCMC加上0.1％Tween80，在水中)或化合物A(對(duì)于CTG-0331，500mg/kg，并且對(duì)于CTG-0771，在第17天，500mg/kg降低到400mg/kg)持續(xù)35天。一周兩次測(cè)量腫瘤尺寸。在第35天，在最終劑量后3小時(shí)，將多達(dá)5只具有最大腫瘤負(fù)荷的小鼠安樂死用于收集腫瘤，并快速冷凍。將來自運(yùn)載體和最高化合物A劑量組的冷凍腫瘤樣品(30mg)運(yùn)送以用于針對(duì)RNA加工的表達(dá)分析和RNA測(cè)序分析。出于所有目的，本文中所提到的每個(gè)專利文件和科學(xué)論文的全部披露內(nèi)容都是通過引用并入。在不背離本發(fā)明的精神或本質(zhì)特征的情況下，本發(fā)明可體現(xiàn)為其他具體形式。因此前述實(shí)施例應(yīng)當(dāng)在所有方面視為是說明性的而不是限制在此所述的發(fā)明。因此，本發(fā)明的范圍是由所附的權(quán)利要求書而不是通過上述的說明書來指明的，并且在該權(quán)利要求書的等效性的含義和范圍之內(nèi)的所有變化均旨在被包括在其中。當(dāng)前第1頁1 2 3