相關申請的交叉引用
本申請要求2014年11月7日提交的美國臨時專利申請第62/076,842號的權益,該申請的內容通過引用的方式并入本文。
政府支持聲明
本發(fā)明是在美國國立衛(wèi)生研究院授予的批準號ar050968項下的政府支持下進行的。政府具有本發(fā)明的某些權利。
發(fā)明背景
在本申請的全篇中,各種出版物在括號中引用。這些參考文獻的完整引用可以在權利要求書之前的說明書結尾處找到。這些出版物的公開內容在此以其整體通過引用的方式被并入到本申請中,以便更完整地描述本申請所屬的領域。
關節(jié)炎是疼痛和殘疾的主要原因。骨關節(jié)炎(oa)累及超過2700萬美國人(1,2),并且在美國是一項大的經(jīng)濟負擔,每年醫(yī)療支出超過$1855億(3-7)。到2030年患有關節(jié)炎的受試者數(shù)量預期增長至超過6700萬。該增長歸因于增長的老年群體和增長的肥胖率。在這一群體內,45-64歲組有29.8%報告具有經(jīng)醫(yī)生診斷的關節(jié)炎,而在65歲及以上人中有50%被診斷患有骨關節(jié)炎。雖然16.4%的低/正常體重成年人報告具有經(jīng)醫(yī)生診斷的關節(jié)炎,而52.5%的關節(jié)炎患者超重或肥胖。而且,患有關節(jié)損傷的患者目前占所有oa病例的12%,這在美國大約為560萬。
一些治療可用于骨關節(jié)炎,包括物理療法;藥物療法如硫酸氨基葡萄糖、硫酸軟骨素、非甾體類抗炎藥(nsaid)、皮質類固醇、弱阿片類藥物或其他鎮(zhèn)痛藥;以及最后的晚期疾病管理和外科手術(8)。然而,目前并不能治愈骨關節(jié)炎,并且目前的療法也不能有效地減緩或停止其進展(5,9)。而且,用于治療骨關節(jié)炎的許多藥理學制劑在長期使用時與不利的胃腸、腎和心血管副作用相關(10-12)。也有許多在售的基于營養(yǎng)品的化合物(例如,姜黃/姜黃素、綠茶、氨基葡萄糖、透明質酸)用于治療關節(jié)疼痛和關節(jié)炎,但它們治療oa的有效性尚未得到明確的證實,并且這些補充劑均未經(jīng)fda批準用于治療或治愈疾病(13)。雖然目前的治療方法可以緩解疼痛和一些疾病癥狀,它們可能不能預防或減緩骨關節(jié)炎的進展,因為它們在對這種疾病負責的具體細胞和分子途徑中不能充分矯正病理變化。
本發(fā)明解決了對關節(jié)炎(如骨關節(jié)炎和類風濕性關節(jié)炎)的改進治療的需要,其中所述治療是安全、有效且適合長達數(shù)十年的治療。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供治療或預防有需要的受試者的關節(jié)炎(如骨關節(jié)炎)的方法,該方法包括向該受試者施用一種制劑或組合物,所述制劑或組合物包含有效治療或預防關節(jié)炎的量的香芹酚、姜黃素、表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯和低聚原花青素。
本發(fā)明還提供用于治療或預防關節(jié)炎的制劑或組合物,其包含香芹酚、姜黃素、表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯和低聚原花青素,以及藥學上可接受的載體。
本發(fā)明優(yōu)于已有的技術,原因在于其阻止骨關節(jié)炎的發(fā)展,而這是目前市場上的產(chǎn)品均不能聲稱實現(xiàn)的。
附圖簡要說明
圖1:與c’-ceo的個體各組分相比,c’-ceo制劑(香芹酚、姜黃素、表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯和低聚原花青素的組合)在增加cited2(一種新的軟骨/軟骨細胞保護分子靶標)的表達方面發(fā)揮最高效力。通過實時pcr對在il-1β(10ng/μl)的存在下用香芹酚(c’,1μμ)、姜黃素(c,1μμ)、egcg(e,100μμ)、opc(o,50μg/ml)或c’-ceo處理的人軟骨細胞(c28/i2)進行分析。柱體表示平均cited2表達±sem。*p<0.05,使用單向方差分析(one-wayanova)及圖基事后檢驗(tukeypost-hoctest)與對照比較或所示的比較,n=6/組。
圖2a-2e:與c’-ceo的各個組分相比,c’-ceo在抑制軟骨降解酶mmp-1(a)、mmp-3(b)、mmp-13(c)、adamts5(d)和促炎性介質tnf-α(e)的表達方面發(fā)揮最高功效。在il-1β(10ng/μl)的存在下(一種骨關節(jié)炎細胞培養(yǎng)模型)將人軟骨細胞(c28/i2)用香芹酚(c’,1μμ)、姜黃素(c,1μμ)、egcg(e,100μμ)、opc(o,50μg/ml)或c’-ceo(所有化合物的組合)處理3小時。通過實時pcr對數(shù)據(jù)進行分析。柱體表示mmp-1、mmp-3、mmp-13、adamts5、tnf-α的平均基因表達±sem。*p<0.05,使用單向方差分析及圖基事后檢驗與對照比較或所示的比較,n=6/組。
圖3:與c’-ceo的各個組分相比,用c’-ceo制劑處理的小鼠顯示出最少量的組織學軟骨損傷。每天(7天/周)經(jīng)由口服強飼對dmm小鼠(c57bl/6,雄性,6個月,n=8/組)施用香芹酚(c’:50mg/kg)、姜黃素(c:50mg/kg)、egcg(e:5mg/kg)、opc(o:50mg/kg)、c’-ceo(所有化合物的組合)或溶媒,持續(xù)8周,并采用原始態(tài)小鼠
圖4a-4b:c’-ceo制劑在oa小鼠模型中預防軟骨細胞外基質的分解,抑制蛋白水解酶mmp-13和adamts5,并增加cited2的表達。a.溶媒處理或c’-ceo處理的dmm小鼠和原始態(tài)對照的關節(jié)軟骨中的變性ii型膠原蛋白(col23/4m)、裂解聚集蛋白聚糖(nitege)、mmp-13和adamts-5的免疫組織化學。b.溶媒處理或c’-ceo處理的dmm小鼠和原始態(tài)對照的關節(jié)軟骨中的cited2的免疫組織化學和cited2陽性軟骨細胞的%。
圖5a-5c:在創(chuàng)傷后oa動物模型中采用充分建立的疼痛評估,c’-ceo對疼痛緩解發(fā)揮最大的作用。如圖3所述在處理的dmmoa小鼠中評估關節(jié)痛。在dmm后8周時,采用測定法(a)vonfrey(機械性觸誘發(fā)痛)、和(b)行進的距離和(c)后肢豎立來評估oa相關的疼痛。vonfrey測試由按遞增順序使后爪暴露于vonfrey絲組成。使用相對于它們的基線標準化的回縮反應次數(shù)評價各組。曠場行為測試測量在6min的時間里行進的距離(cm)和豎立(依靠后肢站立)次數(shù)。柱體表示平均值±sem。*p<0.05,使用單向方差分析及圖基事后檢驗與對照比較或所示的比較,n=8/組。
發(fā)明詳述
本發(fā)明提供治療或預防有需要的受試者的關節(jié)炎的方法,所述方法包括向該受試者施用一種制劑或組合物,所述制劑或組合物包含有效治療或預防關節(jié)炎的量的香芹酚、姜黃素、表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯和低聚原花青素。
關節(jié)炎可以是例如骨關節(jié)炎,其可例如繼發(fā)于關節(jié)損傷。在另一實施方式中,關節(jié)炎可以是例如類風濕性關節(jié)炎。
如本文所用,“治療”關節(jié)炎意指改善關節(jié)炎的體征和/或癥狀和/或阻止關節(jié)炎的發(fā)展。優(yōu)選地,向受試者施用所述制劑或組合物阻止或減緩受關節(jié)炎所累的關節(jié)組織的分解。優(yōu)選地,向受試者施用所述制劑或組合物減少與關節(jié)炎相關的炎癥。優(yōu)選地,向受試者施用所述制劑或組合物減輕關節(jié)炎的疼痛癥狀。優(yōu)選地,向受試者施用所述制劑或組合物改善對機械刺激的敏感性、關節(jié)運動和關節(jié)功能中的一種或多種。
“預防”關節(jié)炎意指預防具有關節(jié)炎發(fā)展風險的受試者的關節(jié)炎的發(fā)展。在一個實施方式中,例如,受試者持續(xù)具有關節(jié)損傷并服用所述制劑或組合物以預防創(chuàng)傷后骨關節(jié)炎的發(fā)展。
本發(fā)明還提供用于治療或預防關節(jié)炎的制劑或組合物,其包含四種營養(yǎng)物:香芹酚(c’)、姜黃素(c)、表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯(e)和低聚原花青素(o)(“c’-ceo”制劑或組合物),以及藥學上可接受的載體。在一個實施方式中,所述制劑或組合物的活性成分由香芹酚、姜黃素、表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯和低聚原花青素組成。
如本文所用,“藥學上可接受的載體”是(i)與組合物的其他成分相容,不會導致組合物不適用于其預期目的,和(ii)適合供本文所提供的受試者使用而無過度的不良副作用(如毒性、刺激和過敏反應)。當副作用的危險超過組合物所提供的益處時,副作用是“過度的”。藥學上可接受的載體的非限制性實例包括任何標準藥用載體,如磷酸鹽緩沖鹽水溶液、水和乳液(如油/水乳液和微乳液)。
可使用本領域已知的給藥途徑向受試者施用所述制劑或組合物。優(yōu)選的給藥途徑包括口服給藥、關節(jié)內注射和局部給藥。c’-ceo制劑的一種或多種組分可被納米封裝以改善其溶解度。c’-ceo制劑可被封裝在腸溶包衣的膠囊中用于口服遞送以限制胃腸道降解。
在一個實施方式中,所述制劑或組合物中香芹酚、姜黃素、egcg和opc的摩爾比為1:1:100:50。在一個實施方式中,所述制劑或組合物中香芹酚、姜黃素、egcg和opc的重量比為10:10:1:10。
根據(jù)隨后的實驗詳述將更好地理解本發(fā)明。然而,本領域技術人員將容易理解所論述的具體方法和結果僅僅是其后隨附的權利要求中更完整描述的發(fā)明的示例。
實驗詳述
材料和方法
誘導小鼠骨關節(jié)炎。所有的研究均經(jīng)過阿爾伯特愛因斯坦大學醫(yī)學院動物管理委員會(alberteinsteincollegeofmedicineinstitutionalanimalcareandusecommittee)批準。在成年c57bl/6小鼠(雄性,5-6個月)中通過外科手術橫切右后肢的內側半月板脛骨韌帶(mmtl)建立內側半月板失穩(wěn)(dmm)(36)。簡言之,切開緊鄰髕腱內側的關節(jié)囊,隨后鈍剝離脂肪墊,以提供內側半月板的mmtl的可視化。橫切mmtl,導致dmm。在假外科手術中,使mmtl可視化但不橫切。用縫線縫合關節(jié)囊和皮膚。
免疫組織化學、番紅o染色和oarsi分數(shù)評價。使動物安樂死,將后肢固定在福爾馬林中,在甲酸中脫鈣,包埋在石蠟中并進行組織學和免疫組織化學切片。將切片與抗裂解聚集蛋白聚糖(nitege,ibex)和裂解ii型膠原蛋白(col2-3/4m,ibex)、mmp-13(abcam)和adamts5(abcam)的抗體一起在4℃下孵育過夜,隨后與抗小鼠或抗兔二級抗體(biocaremedical)一起孵育,并用dab顯色劑(dabchromagen,vectorlaboratories)可視化。陰性對照用無關同種型匹配抗體(biocaremedical)染色。使用番紅o固綠染色以使關節(jié)軟骨中的蛋白聚糖可視化。采用國際骨關節(jié)炎研究學會(osteoarthritisresearchsocietyinternational,oarsi)評分系統(tǒng)對每只小鼠評價oa的嚴重程度(34)。通過測定染色的關節(jié)軟骨基質的“相互強度(reciprocalintensity)”來量化ii型膠原蛋白或聚集蛋白聚糖裂解表位的免疫染色強度。簡言之,在adobephotoshop中使用顏色選擇器來測量股骨踝和脛骨踝從后往前方向上的區(qū)域(azone)內的隨機位置的光強度值(37)。通過計算免疫染色細胞的數(shù)目并除以通過蘇木精復染色(vectorlaboratories)可視化的軟骨細胞的總數(shù)來確定陽性mmp-13和adamts5軟骨細胞的百分比。
觸覺敏感性測試。在vonfrey測試之前使小鼠在柵網(wǎng)平臺上的個體隔室中適應30分鐘。用上升的vonfrey絲(stoelting)的力強度刺激后爪的跖面以測定觸覺敏感性。陽性反應被定義為當施加刺激時后爪的快速回縮,并記錄對每次刺激的陽性反應的次數(shù)。觸覺閾值被定義為對于給定刺激強度10次試驗中5次的回縮反應(38)。該閾值對每只動物計算一次。
曠場行為試驗。在進行曠場行為測試之前使小鼠適應測試房30分鐘。將小鼠放置在個體普列克斯玻璃方形隔室(45cmx45cm)的中央,并允許在整個測試階段的持續(xù)期間自由探索該隔室。用攝影機記錄小鼠的運動。當實驗完成時,使每只小鼠返回到它的居住籠中(39)。手動追查小鼠運動以計算小鼠在籠內在6min時間里行進的距離(用cm表示)。每只小鼠豎立(依靠其后肢站立)的次數(shù)由兩個對治療組分配設盲的觀察者記錄。
結果
對c’-ceo制劑組分的選擇。通過創(chuàng)新性的篩選策略識別c’-ceo制劑;其由誘導軟骨保護性轉錄調控因子cited2(具有富含ed尾2的cbp/p300相互作用反式激活因子)(一種潛在的骨關節(jié)炎治療靶標)的表達的營養(yǎng)化合物配制而成(29-32)。cited2介導一種新途徑,該途徑至少部分地通過抑制軟骨降解酶mmp-13和adamts-5的表達和活性而在軟骨保護中起到關鍵作用(29,31)。值得注意的是,cited2缺乏與人骨關節(jié)炎軟骨的降解和創(chuàng)傷后骨關節(jié)炎小鼠相關。根據(jù)實驗,在滑液關節(jié)組織中cited2表達的減少引起骨關節(jié)炎(29,31)。cited2的基因轉移有效地減緩小鼠創(chuàng)傷后疾病的發(fā)作和進展(30)。
因為骨關節(jié)炎的慢性性質以及需要長期治療,發(fā)明人在非毒性營養(yǎng)化合物中尋找cited2(一種用于骨關節(jié)炎治療的新靶標)的激活劑。首次發(fā)現(xiàn)綠茶提取物egcg通過誘導cited2抑制mmp-13和adamts-5(35)。為了增強這一潛在藥物的效能,識別了以協(xié)同方式增強cited2誘導和其他抗關節(jié)炎作用的三種其他化合物。c’-ceo制劑是設計用于顯示出疾病改善和癥狀改善這兩種性質并用于有效預防和治療關節(jié)炎(如骨關節(jié)炎)的產(chǎn)品。
c’-ceo制劑對cited2(一種新的軟骨/軟骨細胞保護分子靶標)的表達的影響。實驗在體外oa模型(在促炎性細胞因子il-1β的存在下培養(yǎng)的軟骨細胞)中進行,該模型模擬人的oa狀況。該體系已被充分認可并常用作oa的藥物篩選的驗證。將人軟骨細胞(c28/i2)在il-1β(10ng/μl)的存在下(一種骨關節(jié)炎細胞培養(yǎng)模型)用香芹酚(c,1μμ)、姜黃素(c,1μμ)、egcg(e,100μμ)、opc(o,50μg/ml)或c’-ceo(所有化合物的組合)處理3小時。通過實時pcr對數(shù)據(jù)進行分析。
與每個個體化合物香芹酚(c’)、姜黃素(c)、egcg(e)和低聚原花青素(o)相比,c’-ceo發(fā)揮最高的cited2表達增加(圖1)。c’-ceo制劑以協(xié)同方式增加cited2表達的程度高于每個個體化合物單用時增加的程度。
c’-ceo制劑對在oa發(fā)展中起關鍵作用的蛋白水解酶(mmp1、mmp3、mmp13、adamts5)和促炎性介質tnf-α的表達的影響。為了測定c’-ceo的潛在療效,在體外測試c’-ceo制劑減少蛋白水解酶和促炎性細胞因子的表達的能力。蛋白水解酶(如基質金屬蛋白酶(mmp)-1、mmp-3、mmp-13)和具有血小板反應蛋白基序的解聚蛋白和金屬蛋白酶(adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotifs,adamts5)在關節(jié)炎軟骨中高度表達,并直接裂解軟骨細胞外基質。已證實具有mmp或adamts敲除的小鼠對于oa的發(fā)展具有抗性,表明靶向這些酶將具有治療益處。此外,促炎性細胞因子(如il-1β和tnf-α)的表達在關節(jié)炎組織中增加,并上調mmp/adamts的表達。
將人軟骨細胞(c28/i2)在il-ιβ(10ng/μl)的存在下(一種骨關節(jié)炎細胞培養(yǎng)模型)用香芹酚(c,1μμ)、姜黃素(c,1μμ)、egcg(e,100μμ)、opc(o,50μg/ml)或c’-ceo(所有化合物的組合)處理3小時。通過實時pcr對數(shù)據(jù)進行分析。
每個個體化合物在抑制mmp-1、mmp-3、mmp-13、adamts5和促炎性細胞因子tnf-α的表達方面發(fā)揮一些效力。然而,在總體上,與每個個體化合物和溶媒對照相比,c’-ceo在抑制這些靶標的表達方面最有效(圖2)。c’-ceo有效抑制多種軟骨降解酶和促炎性介質的表達,表明其對治療oa具有治療潛力。
c’-ceo制劑在體內減緩oa進展的效力。為了測定c’-ceo制劑在體內減緩oa進展的效力,使用充分建立的創(chuàng)傷后oa小鼠模型。這些oa小鼠每天經(jīng)口服施用c’-ceo、個體化合物或安慰劑。在誘導oa后8周,使用充分建立的且fda推薦的軟骨完整性染色劑番紅o和半定量國際骨關節(jié)炎研究學會(oarsi)評分系統(tǒng)評價oa的嚴重程度。此外,因為軟骨降解是oa的標志,通過檢查兩種主要軟骨基質蛋白(ii型膠原蛋白和聚集蛋白聚糖)的分解水平來驗證c’-ceo制劑的效力。通過檢查這些oa小鼠的關節(jié)軟骨中的cited2表達來進一步考查c’-ceo制劑如何通過靶向cited2而具有此種作用。
因為如上所述c’-ceo制劑在增加cited2的表達以及抑制oa發(fā)作和發(fā)展所涉及的主要蛋白水解酶和促炎性介質的表達方面比其各個組分更有效,在創(chuàng)傷后oa小鼠模型中測定c’-ceo制劑減緩oa進展的效力。
所有的研究均經(jīng)過阿爾伯特愛因斯坦大學醫(yī)學院動物管理委員會批準。在成年c57bl/6小鼠(雄性,5-6個月)中通過外科手術橫切右后肢的內側半月板脛骨韌帶(mmtl)建立內側半月板失穩(wěn)(dmm)。外科手術后立即對小鼠施用香芹酚(c’)、姜黃素(c)、egcg(e)、opc(o)、c’-ceo或溶媒對照8周。在外科手術后8周時,使動物安樂死,將后肢固定在福爾馬林中,在甲酸中脫鈣,包埋在石蠟中并進行組織學切片。使用番紅o(一種充分建立的軟骨染色劑)來可視化關節(jié)軟骨的完整性以及關節(jié)軟骨中的聚集蛋白聚糖。使用oarsi評分系統(tǒng)來評價oa的嚴重程度。
雖然個體化合物–香芹酚(c’)、姜黃素(c)、egcg(e)和opc(o)顯示出一些軟骨降解減少,但是以c’-ceo制劑喂養(yǎng)的小鼠顯示出最少量的軟骨損傷(纖維化、侵蝕、聚集蛋白聚糖損失),如以組織學方法采用番紅o染色測定的(圖3)。與用每個個體化合物單獨處理相比,c’-ceo小鼠的軟骨還在數(shù)量上顯示出最低的oa分數(shù),通過oa評分系統(tǒng)(oarsi分數(shù))建立的(表1)。因此,雖然用個體化合物處理表現(xiàn)出一些軟骨保護效力,用所有四種營養(yǎng)物的組合c’-ceo制劑處理在創(chuàng)傷后oa動物模型中發(fā)揮最大的減緩oa進展的效力。
c’-ceo制劑在體內對防止軟骨細胞外基質的分解(oa的一個標志)和增加cited2表達的效力。軟骨細胞外基質主要由兩種蛋白組成:ii型膠原蛋白和聚集蛋白聚糖。這些基質蛋白的分解是oa的一個標志。因此,考查c’-ceo制劑對防止這些蛋白分解的效力以及其對cited2(c’-ceo的分子靶標)的表達的作用。
當與溶媒處理的小鼠相比,c’-ceo-處理的小鼠的關節(jié)軟骨顯示出更少的裂解ii型膠原蛋白(col23/4m)和裂解聚集蛋白聚糖(nitege)的陽性免疫染色。還考查了表達mmp-13和adamts5(其分別裂解ii型膠原蛋白和聚集蛋白聚糖)的軟骨細胞的數(shù)目。當與溶媒對照相比,c’-ceo-處理的小鼠的關節(jié)軟骨中具有更少的表達mmp-13和adamts5的軟骨細胞(圖4a)。將來自實驗動物后肢的組織切片與抗裂解聚集蛋白聚糖(nitege,ibex)和裂解ii型膠原蛋白(col2-3/4m,ibex)、mmp-13(abcam)和adamts5(abcam)的抗體一起在4℃下孵育過夜,隨后與抗小鼠或抗兔二級抗體(biocaremedical)一起孵育,并用dab顯色劑(vectorlaboratories)可視化。陰性對照用無關同種型匹配抗體染色。c’-ceo-處理的小鼠也含有更高百分比的表達cited2的軟骨細胞(圖4b)。c’-ceo制劑可以通過減緩兩種主要的軟骨細胞外基質蛋白(ii型膠原蛋白和聚集蛋白聚糖)的降解以及上調關節(jié)軟骨中的cited2來發(fā)揮軟骨保護的效力。
c’-ceo制劑在充分建立的創(chuàng)傷后oa動物模型中緩解oa相關疼痛的效力。oa的進展伴隨著繼發(fā)性臨床癥狀,最顯著的是疼痛。除了評價c’-ceo制劑的疾病改善作用外,在oa誘導后8周時,還測定了c’-ceo在這一oa動物模型中是否發(fā)揮疼痛緩解的作用。為了測定疼痛緩解,采用三種動物行為評估:1)vonfrey,其測定對機械刺激的敏感性[oa動物傾向于對機械刺激具有更低的疼痛閾值];2)行進的距離–關節(jié)運動的量度[oa動物與非oa動物相比傾向于移動更短的距離];3)豎立–關節(jié)功能的量度[oa動物傾向于豎立或依靠它們的后肢站立的次數(shù)少于非oa動物]。
與溶媒對照相比,用個體化合物處理沒有改善小鼠對機械刺激的敏感性(圖5a),沒有增加行進的距離(圖5b),并且沒有增加后肢豎立的次數(shù)(圖5c)。相比之下,c’-ceo-處理的dmm小鼠,跟原始態(tài)對照一樣,需要更高的力引起爪回縮(p<0.05,圖5a),行進更長的距離(p<0.05,圖5b),并增加豎立/依靠其后肢站立的次數(shù)(p<0.05,圖5c)。
用個體化合物香芹酚、姜黃素、egcg或opc經(jīng)口服施用進行處理沒有導致oa相關疼痛的疼痛緩解的統(tǒng)計學改善。然而,c’-ceo-處理的oa小鼠顯示出疼痛緩解的統(tǒng)計學改善,機械敏感性、關節(jié)運動和功能的水平類似于原始態(tài)的非oa動物。
表1.用c’-ceo制劑處理的小鼠顯示出最低的oa組織學分數(shù)。oarsi分數(shù)是半定量的基于組織學的評分系統(tǒng),0表示健康軟骨,6表示嚴重的軟骨侵蝕。顯示8只動物/組的平均oarsi分數(shù)±標準偏差。*p<0.05,單向方差分析,與溶媒處理的動物比較。**p<0.05,單向方差分析,與個體化合物處理比較。
討論
本結果提供了明顯的證據(jù):當與每個個體化合物單獨處理以及溶媒對照進行比較時,在體內本發(fā)明的c’-ceo制劑不僅對骨關節(jié)炎疾病的發(fā)作和進展發(fā)揮統(tǒng)計學上顯著的協(xié)同作用,而且對緩解疼痛癥狀以及改進移動性也發(fā)揮統(tǒng)計學上顯著的協(xié)同作用。當小鼠在dmm損傷后立即開始口服施用時,c’-ceo制劑顯著減緩創(chuàng)傷后骨關節(jié)炎的發(fā)展。預防或降低骨關節(jié)炎的嚴重程度是極其有價值的,因為組織損傷的逆轉非常困難。大約50%的患有acl損傷的患者在10-15年內發(fā)展骨關節(jié)炎(15)。口服預防對于患有acl撕裂或半月板損傷以及其他無癥狀的患者是方便的。
c’-ceo制劑不僅可以直接改變疾病的進程,而且還可以緩解疼痛癥狀以及改善移動性。采用創(chuàng)傷后骨關節(jié)炎小鼠研究的結果使得c’-ceo制劑是潛在的極其有價值的,因為疼痛緩解和改善的移動性是臨床治療的重要目標。不受控制的疼痛是患者選擇關節(jié)置換手術的主要原因(16)。
c’-ceo制劑還可以用于治療其他形式的關節(jié)炎,包括類風濕性關節(jié)炎。炎癥、軟骨退化和慢性疼痛是所有形式的關節(jié)炎(包括骨關節(jié)炎和類風濕性關節(jié)炎)的常見標志(17)。c’-ceo制劑的抗炎、抗分解代謝和鎮(zhèn)痛作用有可能對所有形式的關節(jié)炎疾病具有有益的作用。
通過對刺激具有一些軟骨保持(軟骨保護)性質的調節(jié)蛋白的產(chǎn)生的能力進行分子篩選來選擇c’-ceo制劑的組分。這些包括抑制骨關節(jié)炎的病理生理學所涉及的一些組織降解酶的表達。c’-ceo制劑的組分是誘導軟骨保護性轉錄調控因子cited2(具有富含ed尾2的cbp/p300相互作用反式激活因子)(一種潛在的骨關節(jié)炎治療靶標)的個體營養(yǎng)化合物(29-32)。這些研究表明cited2不僅調節(jié)與軟骨細胞內穩(wěn)態(tài)的信號途徑,而且還保護軟骨完整性。
此外,c’-ceo制劑的組分特別選自在慢性病治療的長期過程中可能被良好耐受的一類食物產(chǎn)品(“營養(yǎng)物”)。營養(yǎng)物,作為食物或飲食補充劑,在傳統(tǒng)上被認為提供醫(yī)學或健康益處并被認為是對標準藥物療法的潛在安全的替代物(18-27)。在許多情況中,提議用于骨關節(jié)炎治療的營養(yǎng)物來源于傳統(tǒng)替代醫(yī)學(28)或基于它們的普遍的抗炎作用(18)。在本研究之前,營養(yǎng)物在預防或減緩骨關節(jié)炎進展方面的有效性尚未被充分建立起來(13)。
組成c’-ceo制劑的化合物被fda視為是安全的(gras)。這是特別重要的,因為骨關節(jié)炎在超過40歲的成年人中變得越來越普遍,并且包括關節(jié)損傷、肥胖和糖尿病的風險因素可能在甚至更低的年齡段導致疾病發(fā)展(14)。非毒性營養(yǎng)物可在數(shù)十年期間在個體患者中安全使用,提供必要的有意義的益處(13)。
參考文獻
1.lawrence,r.c.,etal.estimatesoftheprevalenceofarthritisandotherrheumaticconditionsintheunitedstates.partii.arthritisrheum58,26-35(2008).
2.suri,p.,morgenroth,d.c.&hunter,d.j.epidemiologyofosteoarthritisandassociatedcomorbidities.pmr4,s10-19(2012).
3.kotlarz,h.,gunnarsson,c.l.,fang,h.&rizzo,j.a.insurerandout-of-pocketcostsofosteoarthritisintheus:evidencefromnationalsurveydata.arthritisrheum60,3546-3553(2009).
4.loeser,r.f.,goldring,s.r.,scanzello,c.r.&goldring,m.b.osteoarthritis:adiseaseofthejointasanorgan.arthritisrheum64,1697-1707(2012).
5.legraverand-gastineau,m.p.diseasemodifyingosteoarthritisdrugs:facingdevelopmentchallengesandchoosingmoleculartargets.currdrugtargets11,528-535(2010).
6.evans,c.h.,ghivizzani,s.c.&robbins,p.d.gettingarthritisgenetherapyintotheclinic.natrevrheumatol7,244-249(2011).
7.heinegard,d.&saxne,t.theroleofthecartilagematrixinosteoarthritis.natrevrheumatol7,50-56(2011).
8.bruyere,o.,etal.analgorithmrecommendationforthemanagementofkneeosteoarthritisineuropeandinternationally:areportfromataskforceoftheeuropeansocietyforclinicalandeconomicaspectsofosteoporosisandosteoarthritis(esceo).seminarsinarthritisandrheumatism(2014).
9.hashimoto,m.,nakasa,t.,hikata,t.&asahara,h.molecularnetworkofcartilagehomeostasisandosteoarthritis.medresrev28,464-481(2008).
10.cheng,d.s.&visco,c.j.pharmaceuticaltherapyforosteoarthritis.pmr4,s82-88(2012).
11.o'neil,c.k.,hanlon,j.t.&marcum,z.a.adverseeffectsofanalgesicscommonlyusedbyolderadultswithosteoarthritis:focusonnon-opioidandopioidanalgesics.amjgeriatrpharmacother10,331-342(2012).
12.vanmanen,m.d.,nace,j.&mont,m.a.managementofprimarykneeosteoarthritisandindicationsfortotalkneearthroplastyforgeneralpractitioners.jamosteopathassoc112,709-715(2012).
13.leong,d.j.,etal.nutraceuticals:potentialforchondroprotectionandmoleculartargetingofosteoarthritis.intjmolsci14,23063-23085(2013).
14.losina,e.&katz,j.n.totalkneearthroplastyontheriseinyoungerpatients:arewesurethatpastperformancewillguaranteefuturesuccess?arthritisrheum64,339-341(2012).
15.wong,j.m.,khan,t.,jayadev,c.s.,khan,w.&johnstone,d.anteriorcruciateligamentruptureandosteoarthritisprogression.theopenorthopaedicsjournal6,295-300(2012).
16.dieppe,p.a.&lohmander,l.s.pathogenesisandmanagementofpaininosteoarthritis.lancet365,965-973(2005).
17.goldring,m.b.&marcu,k.b.cartilagehomeostasisinhealthandrheumaticdiseases.arthritisresther11,224(2009).
18.akhtar,n.&haqqi,t.m.currentnutraceuticalsinthemanagementofosteoarthritis:areview.theradvmusculoskeletdis4,181-207(2012).
19.henrotin,y.,lambert,c.,couchourel,d.,ripoll,c.&chiotelli,e.nutraceuticals:dotheyrepresentanewerainthemanagementofosteoarthritis?-anarrativereviewfromthelessonstakenwithfiveproducts.osteoarthritiscartilage19,1-21(2011).
20.shen,c.l.,etal.dietarypolyphenolsandmechanismsofosteoarthritis.jnutrbiochem23,1367-1377(2012).
21.mobasheri,a.intersectionofinflammationandherbalmedicineinthetreatmentofosteoarthritis.currrheumatolrep14,604-616(2012).
22.lopez,h.l.nutritionalinterventionstopreventandtreatosteoarthritis.partii:focusonmicronutrientsandsupportivenutraceuticals.pmr4,s155-168(2012).
23.lopez,h.l.nutritionalinterventionstopreventandtreatosteoarthritis.parti:focusonfattyacidsandmacronutrients.pmr4,s145-154(2012).
24.vandeweerd,j.m.,etal.systematicreviewofefficacyofnutraceuticalstoalleviateclinicalsignsofosteoarthritis.jvetinternmed26,448-456(2012).
25.olsen,n.j.nutraceuticalsforthetreatmentofosteoarthritis.minervamed102,33-40(2011).
26.ernst,e.herbalmedicineinthetreatmentofrheumaticdiseases.rheumdisclinnortham37,95-102(2011).
27.rosenbaum,c.c.,o'mathuna,d.p.,chavez,m.&shields,k.antioxidantsandantiinflammatorydietarysupplementsforosteoarthritisandrheumatoidarthritis.alterntherhealthmed16,32-40(2010).
28.ameye,l.g.&chee,w.s.osteoarthritisandnutrition.fromnutraceuticalstofunctionalfoods:asystematicreviewofthescientificevidence.arthritisresther8,r127(2006).
29.leong,d.j.,etal.theroleofcited2inthepathogenesisofosteoarthritis.orstransactions(2012).
30.leong,d.j.,etal.thechondroprotectiveroleofcited2inpost-traumaticosteoarthritis.osteoarthrcartilage21,s304-s305(2013).
31.leong,d.j.,etal.cited2isrequiredforcartilagehomeostasis:deletionofcited2inskeletallymaturemiceleadstoosteoarthritis.orstransactions(2014).
32.leong,d.j.,etal.cited2suppressessenescencethroughp21:anewroleinchondroprotection.orstransactions(2013).
33.glasson,s.s.,chambers,m.g.,vandenberg,w.b.&little,c.b.theoarsihistopathologyinitiative-recommendationsforhistologicalassessmentsofosteoarthritisinthemouse.osteoarthritiscartilage18suppl3,s17-23(2010).
34.chaplan,s.r.,bach,f.w.,pogrel,j.w.,chung,j.m.&yaksh,t.l.quantitativeassessmentoftactileallodyniaintheratpaw.jneuroscimethods53,55-63(1994).
35.leong,d.,etal.epigallocatechin-3-gallate(egcg)inhibitshdac7inchondrocytesthroughcited2.orstransactions36,1946(2011).
36.glassonss,blanchettj,morrisea:thesurgicaldestabilizationofthemedialmeniscus(dmm)modelofosteoarthritisinthe129/svevmouse.osteoarthritiscartilage2007,15:1061-1069.
37.nguyend:quantifyingchromogenintensityinimmunohistochemistryviareciprocalintensity.2013.
38.hansteinr,zhaojb,basakr,smithdn,zuckermanyy,hananim,spraydc,gulinellom:focalinflammationcausescarbenoxolone-sensitivetactilehypersensitivityinmice.theopenpainjournal2010,3:123-133.
39.baileykr,crawleyjn:anxiety-relatedbehaviorsinmice.inmethodsofbehavioranalysisinneuroscience.2ndedition.editedbybuccafuscojj.bocaraton(fl);2009:frontiersinneuroscience].