本發(fā)明涉及干細(xì)胞
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：我國(guó)乙型肝炎病毒(HBV)感染人數(shù)達(dá)1.2億，慢性肝炎患者高達(dá)3000多萬(wàn)，其中乙型病毒性肝炎(乙肝)是導(dǎo)致肝硬化、原發(fā)性肝細(xì)胞癌(肝癌)的主要原因，每年因肝硬化、肝癌、肝功能衰竭等死亡的人數(shù)高達(dá)30～50萬(wàn)，嚴(yán)重威脅著人們的健康。對(duì)于終末期的肝炎、肝硬化，以及遺傳性、代謝性肝病，原位肝移植是目前唯一確定有效的治療手段，但肝移植術(shù)后伴有各種并發(fā)癥，主要有感染并發(fā)癥、排斥反應(yīng)、膽道并發(fā)癥、原發(fā)病復(fù)發(fā)及免疫抑制劑相關(guān)疾病等，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量及移植肝的長(zhǎng)期存活率。據(jù)國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道，大約有30％～70％的肝移植受者在移植術(shù)后1年內(nèi)發(fā)生過(guò)一次急性排斥反應(yīng)，是導(dǎo)致移植物丟失的最重要的原因之一。移植物抗宿主反應(yīng)(GVHD，graft-versus-hostdisease)是一種特異的免疫現(xiàn)象，是由于移植物組織中的免疫活性細(xì)胞與免疫受抑制的、組織不相融性抗原受者的組織之間的反應(yīng)。肝移植術(shù)后發(fā)生GVHD很罕見，其發(fā)生率為0.1～0.2％，顯著低于骨髓移植后GVHD的發(fā)生率，但病死率極高，超過(guò)75％。目前除再次肝移植外，常規(guī)治療方法往往療效欠佳甚至無(wú)效，再次移植肝給患者帶來(lái)了較大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神肉體上的痛苦。隨著干細(xì)胞生物學(xué)研究不斷的發(fā)展，MSC具有低免疫原性和很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用(能逃避免疫識(shí)別、抑制免疫應(yīng)答)、炎癥趨化、組織修復(fù)等生物特性，國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，輸注MSC可以提高移植術(shù)后的免疫耐受力，延長(zhǎng)移植物的存活時(shí)間，在治療移植物抗宿主病上也得到有效應(yīng)用，尤其在腎移植、骨髓移植等免疫排斥反應(yīng)治療中已取得較好效果，但在治療肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)中的應(yīng)用還較少。間充質(zhì)干細(xì)胞具備干細(xì)胞的特性及多向分化潛能，可向炎癥或損傷部位定向遷移并抗炎或修復(fù)損傷組織，還因其低免疫原性、較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)及抗微生物作用而成為治療肝移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)的重要研究方向。因此，提供一種新型的能夠有效治療GVHD的干細(xì)胞制劑具有重要的醫(yī)學(xué)價(jià)值。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明提供了一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液及其制備方法和應(yīng)用。該臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液能有效的維持干細(xì)胞的活力，在回輸后能促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化成熟，降低GVHD的發(fā)生率。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液，包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白、低分子肝素鈣、維生素C、珠子參皂苷和溶媒。本發(fā)明制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液，采用臍帶來(lái)源的MSCs，其具有分化潛力大、增殖能力強(qiáng)、免疫原性低、取材方便、無(wú)道德倫理問(wèn)題的限制、易于工業(yè)化制備等特征，以上生物學(xué)特性使其有可能成為用于組織修復(fù)、抑制免疫排斥反應(yīng)的發(fā)生和代謝性疾病細(xì)胞治療最具臨床應(yīng)用前景的多能干細(xì)胞，尤其是在肝移植后治療GVHD有著重要的應(yīng)用前景。其中，人血白蛋白為臨床注射級(jí)成分，為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)；維生素C可維持過(guò)氧化物酶的活性，從而保存細(xì)胞的活性；低分子肝素能有效減少細(xì)胞結(jié)團(tuán)，防止細(xì)胞輸注時(shí)堵塞輸液過(guò)濾器并減少細(xì)胞損失；珠子參皂苷可促進(jìn)輸注的干細(xì)胞在體內(nèi)能更好的分化成成熟的肝細(xì)胞；溶液介質(zhì)可為勃脈力(復(fù)方電解質(zhì)溶液)或葡萄糖或生理鹽水，其可保持細(xì)胞的滲透壓，利于細(xì)胞的保持活性，臨床輸注以復(fù)方電解質(zhì)溶液為最佳。作為優(yōu)選，每100mL臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液中包括：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞：(0.5～1)×108個(gè)；人血白蛋白：1～5g；低分子肝素鈣：0.1Ml；維生素C：0.3～0.7g；珠子參皂苷：5～20g；溶媒：補(bǔ)足。優(yōu)選地，每100mL臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液中包括：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞：1×108個(gè)；人血白蛋白：1～5g；低分子肝素鈣：0.1mL；維生素C：0.3～0.7g；珠子參皂苷：5～20g；溶媒：補(bǔ)足。在本發(fā)明提供的一實(shí)施例中，每100mL臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液中包括：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞：1×108個(gè)；人血白蛋白：1g；低分子肝素鈣：0.1mL；維生素C：0.3g；珠子參皂苷：5g；溶媒：補(bǔ)足。在本發(fā)明提供的另一實(shí)施例中，每100mL臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液中包括：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞：1×108個(gè)；人血白蛋白：3g；低分子肝素鈣：0.1mL；維生素C：0.5g；珠子參皂苷：12.5g；溶媒：補(bǔ)足。在本發(fā)明提供的另一實(shí)施例中，每100mL臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液中包括：臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞：1×108個(gè)；人血白蛋白：5g；低分子肝素鈣：0.1mL；維生素C：0.7g；珠子參皂苷：20g；溶媒：補(bǔ)足。作為優(yōu)選，溶媒為復(fù)方電解質(zhì)注射液、葡萄糖注射液或生理鹽水。臨床輸注以復(fù)方電解質(zhì)注射液為最佳。作為優(yōu)選，復(fù)方電解質(zhì)注射液為勃脈力A復(fù)方電解質(zhì)注射液。在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，生理鹽水為0.9％氯化鈉注射液。作為優(yōu)選，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞為第2～5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。優(yōu)選地，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞為第3代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。本發(fā)明還提供了該臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液在制備治療移植物抗宿主反應(yīng)的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了該臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液的制備方法，包括：將人血白蛋白、低分子肝素鈣、維生素C、珠子參皂苷和溶媒混勻，過(guò)濾除菌，得到混合液；采用混合液重懸臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，得到臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液。作為優(yōu)選，過(guò)濾除菌采用除菌級(jí)親水性過(guò)濾器過(guò)濾除菌。作為優(yōu)選，除菌級(jí)親水性過(guò)濾器的孔徑為0.1～1μm。本發(fā)明提供了一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液及其制備方法和應(yīng)用。該臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液包括臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人血白蛋白、低分子肝素鈣、維生素C、珠子參皂苷和溶媒。本發(fā)明具有如下有益效果之一：1、本發(fā)明采用臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制備干細(xì)胞注射液，取材方便，不違反倫理問(wèn)題；2、本發(fā)明制備的注射液能有效的保存干細(xì)胞的活性，保存時(shí)間長(zhǎng)，細(xì)胞活率高；3、本發(fā)明制備的注射液在回輸后能促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化成熟，降低GVHD的發(fā)生率。附圖說(shuō)明圖1示臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定結(jié)果；其中1-1示P2代細(xì)胞培養(yǎng)96h后在顯微鏡下放大40倍的圖片；1-2示P2代細(xì)胞培養(yǎng)96h后在顯微鏡下放大100倍的圖片；1-3示P5代細(xì)胞培養(yǎng)96h后在顯微鏡下放大40倍的圖片；1-4示P5代細(xì)胞培養(yǎng)96h后在顯微鏡下放大100倍的圖片；圖2示臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的染色鑒定結(jié)果；2-1示P2代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后在顯微鏡下放大40倍的圖片；2-2示P2代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后在顯微鏡下放大100倍的圖片；2-3示P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后在顯微鏡下放大40倍的圖片；2-4示P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞后在顯微鏡下放大100倍的圖片；2-5示P2代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成脂細(xì)胞后在顯微鏡下放大40倍的圖片；2-6示P2代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成脂細(xì)胞后在顯微鏡下放大100倍的圖片；2-7示P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成脂細(xì)胞后在顯微鏡下放大40倍的圖片；2-8示P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成脂細(xì)胞后在顯微鏡下放大100倍的圖片。具體實(shí)施方式本發(fā)明公開了一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液及其制備方法和應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。術(shù)語(yǔ)解釋：間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymalstemcells，MSC)是干細(xì)胞家族的重要成員，來(lái)源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，屬于多能干細(xì)胞，在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下，可分化為胰島、神經(jīng)、血管內(nèi)皮、骨、軟骨、肌肉、肝臟、心肌等多種組織細(xì)胞。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞，它能分化成許多種組織細(xì)胞。移植物抗宿主病(GVHD)是肝移植術(shù)后發(fā)生的以發(fā)熱、皮疹、腹瀉以及骨髓抑制等為主要表現(xiàn)的全身性免疫疾病，患者最終因全身感染或骨髓衰竭而死亡。本發(fā)明提供的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液及其制備方法和應(yīng)用中所用原料藥或輔料均可由市場(chǎng)購(gòu)得。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：實(shí)施例1臍間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方法在無(wú)菌條件下，取離開母體時(shí)間不超過(guò)2h的新鮮臍帶，并篩查產(chǎn)婦是否攜帶傳染性疾病病原體(乙肝表面抗原、丙肝抗體、梅毒抗體和艾滋病抗體陰性)，將新鮮臍帶置于含有雙抗的PBS中于4℃保溫箱中運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室。將新鮮臍帶用無(wú)菌的PBS清洗，再用75％乙醇消毒，然后用PBS清洗干凈，前后清洗消毒所用溶液體積均為能將臍帶浸泡在其中為宜，去除臍帶最外層膜及靜、動(dòng)脈后，將臍帶剪碎至1～3cm3大小的塊，將其以0.5～1cm的間距均勻接種于培養(yǎng)皿中，緩慢加入50μL～100μL/cm2完全培養(yǎng)基，置于37℃、CO2濃度為5％的培養(yǎng)箱中靜止培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁融合后，使用胰酶進(jìn)行消化，離心，分裝至多個(gè)培養(yǎng)皿中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳至2～5代后，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，用胰酶消化后使用PBS緩沖溶液洗滌，離心收集。對(duì)上述制得的2～5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，包括：1)顯微鏡觀察顯微鏡下觀察，可以看出96h后的細(xì)胞已經(jīng)形成較典型的臍帶間充質(zhì)樣，并有明顯的貼壁現(xiàn)象，如圖1所示。2)流式檢測(cè)取第3代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，結(jié)果顯示制得的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)CD105、CD73、CD90和HLA-ABC(表達(dá)量高于90％)，不表達(dá)CD34、CD45和HLA-DR等(表達(dá)量低于1％)，檢測(cè)結(jié)果如表1所示：表1臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的流式檢測(cè)結(jié)果3)誘導(dǎo)分化取第3代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化為成軟脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞，染色觀察，可看出本發(fā)明制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過(guò)適宜條件可向成脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化(圖2)，證明本發(fā)明制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化能力。以上鑒定結(jié)果參照“國(guó)際細(xì)胞治療協(xié)會(huì)(ISCT)”所定制的標(biāo)準(zhǔn)，可證明本發(fā)明所制備的細(xì)胞具備間充質(zhì)干細(xì)胞的特性。實(shí)施例2配制100mL干細(xì)胞注射液：將白蛋白濃度為10％的人血白蛋白原液30mL(質(zhì)量體積比終濃度為3％)、低分子肝素鈣0.1mL(體積百分含量為0.1％)、維生素C0.5g(質(zhì)量體積比終濃度為0.5％)、珠子參皂苷12.5g(質(zhì)量體積比終濃度為12.5％)和0.9％氯化鈉注射液69.9mL混勻，將收集的P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(細(xì)胞終濃度1×106個(gè)/mL)于混合液中重懸，分裝于細(xì)胞凍存袋中，制備完畢。上述制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液留樣進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)、細(xì)菌真菌檢測(cè)、支原體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性為合格。實(shí)施例3配制100mL干細(xì)胞注射液：將白蛋白濃度為20％的人血白蛋白原液5mL(質(zhì)量體積比終濃度為1％)、低分子肝素鈣0.1mL(體積百分含量為0.1％)、維生素C0.3g(質(zhì)量體積比終濃度為0.3％)、珠子參皂苷5g(質(zhì)量體積比終濃度為5％)和0.9％氯化鈉注射液94.9mL混勻，將收集的P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(細(xì)胞終濃度1×106個(gè)/mL)于混合液中重懸，分裝于細(xì)胞凍存袋中，制備完畢。上述制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液留樣進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)、細(xì)菌真菌檢測(cè)、支原體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性為合格。實(shí)施例4配制100mL干細(xì)胞注射液：將白蛋白濃度為20％的人血白蛋白原液25mL(質(zhì)量體積比終濃度為5％)、低分子肝素鈣0.1mL(體積百分含量為為0.1％)、維生素C0.7g(質(zhì)量體積比終濃度為0.7％)、珠子參皂苷20g(質(zhì)量體積比終濃度為20％)和勃脈力74.9mL混勻，將收集的P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(細(xì)胞終濃度1×106個(gè)/mL)于混合液中重懸，分裝于細(xì)胞凍存袋中，制備完畢。上述制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液留樣進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)、細(xì)菌真菌檢測(cè)、支原體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性為合格。試驗(yàn)例功能鑒定試驗(yàn)分組：試驗(yàn)組1：實(shí)施例2制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液；試驗(yàn)組2：實(shí)施例3制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液；試驗(yàn)組3：實(shí)施例4制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液；對(duì)照組1：與實(shí)施例2基本相同，只是不添加維生素C，其制備方法為：配制100mL干細(xì)胞注射液，將白蛋白濃度為10％的人血白蛋白原液30mL(質(zhì)量體積比終濃度為3％)、低分子肝素鈣0.1mL(體積百分含量為1％)、珠子參皂苷25g(質(zhì)量體積比終濃度為25％)和0.9％氯化鈉注射液69.9mL混勻，將收集的P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(細(xì)胞終濃度1×106個(gè)/mL)于混合液中重懸，分裝于細(xì)胞凍存袋中，制備完畢。對(duì)照組2：與實(shí)施例2基本相同，只是不添加維生素C和珠子參皂苷，其制備方法為：配制100mL干細(xì)胞注射液，將白蛋白濃度為10％的人血白蛋白原液30mL(質(zhì)量體積比終濃度為3％)、低分子肝素鈣0.1mL(體積百分含量為1％)和0.9％氯化鈉注射液69.9mL混勻，將收集的P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(細(xì)胞終濃度1×106個(gè)/mL)于混合液中重懸，分裝于細(xì)胞凍存袋中，制備完畢。對(duì)照組3：只添加維生素C，其制備方法為：配制100mL干細(xì)胞注射液，將維生素C1g(質(zhì)量體積比終濃度為1％)和0.9％氯化鈉注射液100mL混勻，將收集的P5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(細(xì)胞終濃度1×106個(gè)/mL)于混合液中重懸，分裝于細(xì)胞凍存袋中，制備完畢。功能鑒定試驗(yàn)方法及結(jié)果如下：1)保存試驗(yàn)上述各實(shí)施例及對(duì)比例使用的干細(xì)胞均為同一管樣本，注入保存液中時(shí)活力均為98.26％，將實(shí)施例2～4的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液、對(duì)照組1～3制備的間充質(zhì)干細(xì)胞同樣的方法置于4℃冰箱中保存。從冰箱中取出保存的細(xì)胞制劑，混勻后，抽取少量的細(xì)胞懸液進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，同樣方法分別測(cè)定0.5h、1h、2h、4h、6h、12h的細(xì)胞活率，測(cè)定其細(xì)胞活率，結(jié)果如表2、表3所示：表2各試驗(yàn)組細(xì)胞活率檢測(cè)結(jié)果保存時(shí)間(h)實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例40.597.88％±0.3％97.89％±0.4％98.16％±0.1％197.51％±0.3％97.20％±0.2％98.02％±0.2％296.10％±0.2％95.34％±0.3％97.88％±0.5％494.30％±0.2％92.68％±0.3％95.17％±0.5％691.00％±0.2％90.12％±0.3％92.34％±0.5％1286.58％±0.2％85.51％±0.3％87.23％±0.5％表3各對(duì)照組細(xì)胞活率檢測(cè)結(jié)果保存時(shí)間(h)對(duì)照組1對(duì)照組2對(duì)照組30.596.50％±0.2％96.32％±0.1％90.21％±0.1％194.98％±0.2％92.05％±0.2％88.51％±0.2％294.70％±0.3％90.31％±0.2％80.62％±0.4％493.36％±0.4％88.68％±0.3％73.52％±0.3％689.32％±0.3％80.57％±0.4％68.76％±0.1％1285.24％±0.2％75.34％±0.4％51.22％±0.3％從表2、3可以看出，本發(fā)明的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間保存，其活力依舊較高，并且達(dá)到國(guó)家要求的一般細(xì)胞治療活率大于等于85％，并且細(xì)胞活率經(jīng)過(guò)4℃保存12h后細(xì)胞活率高于對(duì)比例。2)流式檢測(cè)將實(shí)施例2注射液凍存48個(gè)月后復(fù)蘇的細(xì)胞進(jìn)行流式檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如下表4：表4臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞保存12h后流式檢測(cè)結(jié)果標(biāo)記抗體陽(yáng)性比率(％)標(biāo)記抗體陽(yáng)性比率(％)CD340.1CD10598.21CD9099.36HLA-ABC98.79CD450.54HLA-DR0.69CD7396.8//從以上流式結(jié)果可以看出經(jīng)過(guò)保存12h后的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與新鮮制備的間充質(zhì)干細(xì)胞表型一致，證明本發(fā)明制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間的保存對(duì)細(xì)胞表型及干性無(wú)影響。3)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液對(duì)治療大鼠肝移植術(shù)后GVHD的效果實(shí)驗(yàn)購(gòu)買已經(jīng)建立原位肝移植模型的大鼠30只，將其平均分為A、B、C三組，A組注射本發(fā)明實(shí)施例2的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液、B組注射實(shí)對(duì)比例1的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞注射液、C組注射生理鹽水，A、B兩組分別回輸4個(gè)療程，1個(gè)星期為一個(gè)療程，每個(gè)星期連續(xù)回輸3天，1劑/天，按1×106個(gè)/kg量輸注。經(jīng)過(guò)連續(xù)30天的觀察：A組：全部都存活，其中有3只發(fā)生輕微的排斥反應(yīng)，其它恢復(fù)正常。B組：有5只出現(xiàn)不同程度的術(shù)后并發(fā)癥，其它恢復(fù)正常。C組：10只大鼠中的80％，即8只出現(xiàn)不同程度的術(shù)后并發(fā)癥。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3