本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2012年9月28日、申請(qǐng)?zhí)枮椤?01280058908.7”、發(fā)明名稱為“芳族陽(yáng)離子肽和使用它們的方法”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求2011年9月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/540,910、2012年2月8日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/596,455、2011年11月10日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/558,177、2012年5月3日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/642,282和2012年8月9日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/681,444的權(quán)益和優(yōu)先權(quán)，它們都通過(guò)引用整體并入本文。本發(fā)明技術(shù)一般地涉及用于預(yù)防或治療腎缺血/再灌注組織損害的組合物和方法。具體地，本發(fā)明技術(shù)的實(shí)施方案涉及施用有效量的芳族陽(yáng)離子肽來(lái)預(yù)防或治療與腎動(dòng)脈通暢恢復(fù)有關(guān)的缺血/再灌注損傷，所述腎動(dòng)脈通暢恢復(fù)用于治療腎動(dòng)脈狹窄和用于長(zhǎng)期治療動(dòng)脈粥樣硬化性腎血管疾病(arvd)。
背景技術(shù)：
：：提供以下描述來(lái)輔助讀者的理解。提供的信息或引用的參考文獻(xiàn)不被承認(rèn)為現(xiàn)有技術(shù)。腎動(dòng)脈狹窄(ras)最常見(jiàn)地由動(dòng)脈粥樣硬化造成，在超過(guò)65歲的成年人中具有幾乎7％的發(fā)病率。具有動(dòng)脈粥樣硬化性ras或(arvd)的患者經(jīng)常發(fā)展高血壓或腎血管性高血壓，其顯著增加冠狀動(dòng)脈疾病、中風(fēng)、外周血管病和進(jìn)展至末期腎病的風(fēng)險(xiǎn)。此外，腎功能本身的下降與增加的心血管發(fā)病率和死亡率有關(guān)。在治療動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄(aras)時(shí)，即效治療目標(biāo)是恢復(fù)腎動(dòng)脈的通暢。經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)(ptra)經(jīng)常是推薦的療程。但是，腎動(dòng)脈通暢的成功恢復(fù)不一定轉(zhuǎn)化為組織灌注的恢復(fù)。腎微脈管系統(tǒng)的稀薄化和再灌注損傷可以造成減少的腎灌注和長(zhǎng)期腎功能不全。減輕這些效應(yīng)的方法會(huì)改善經(jīng)歷ptra療法的患者和具有arvd的患者的長(zhǎng)期預(yù)后。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明技術(shù)涉及通過(guò)給有此需要的受試者施用治療有效量的芳族陽(yáng)離子肽(諸如d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2)或其藥學(xué)上可接受的鹽(諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽)來(lái)治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的腎缺血-再灌注損傷和arvd。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明技術(shù)涉及可用于治療或預(yù)防腎微脈管系統(tǒng)稀薄化的方法。在某些方面，本發(fā)明技術(shù)涉及通過(guò)給有此需要的受試者施用治療有效量的芳族陽(yáng)離子肽(諸如d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2)或其藥學(xué)上可接受的鹽(諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽)來(lái)長(zhǎng)期治療具有arvd的受試者。在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了治療或預(yù)防腎缺血/再灌注損傷、腎微脈管系統(tǒng)稀薄化和/或長(zhǎng)期治療動(dòng)脈粥樣硬化性腎血管疾病(arvd)的方法，所述方法包括：給有此需要的受試者施用治療有效量的芳族陽(yáng)離子肽或其藥學(xué)上可接受的鹽，例如，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2，或其藥學(xué)上可接受的鹽，諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括：對(duì)所述受試者執(zhí)行血運(yùn)重建手術(shù)。在某些實(shí)施方案中，所述芳族陽(yáng)離子肽是這樣的肽，其具有：至少一個(gè)凈正電荷；最少4個(gè)氨基酸；最多約20個(gè)氨基酸；凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的關(guān)聯(lián)，其中3pm是小于或等于r+1的最大數(shù)字；和芳族基團(tuán)的最小數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)(pt)之間的關(guān)聯(lián)，其中2a是小于或等于pt+1的最大數(shù)字，例外是，當(dāng)a是1時(shí)，pt也可以是1。在特定實(shí)施方案中，所述受試者是人。在某些實(shí)施方案中，2pm是小于或等于r+1的最大數(shù)字，且可以等于pt。所述芳族陽(yáng)離子肽可以是具有最少2個(gè)或最少3個(gè)正電荷的水溶性肽。在某些實(shí)施方案中，所述肽包含一個(gè)或多個(gè)非天然存在的氨基酸，例如，一個(gè)或多個(gè)d-氨基酸。在某些實(shí)施方案中，所述氨基酸的c-端羧基在c-端處被酰胺化。在某些實(shí)施方案中，所述肽具有最少4個(gè)氨基酸。所述肽可以具有最多約6個(gè)、最多約9個(gè)、或最多約12個(gè)氨基酸。在某些實(shí)施方案中，所述肽包含在n-端處的酪氨酸或2′,6′-二甲基酪氨酸(dmt)殘基。例如，所述肽可以具有式tyr-d-arg-phe-lys-nh2或2′,6′-dmt-d-arg-phe-lys-nh2。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽包含在n-端處的苯丙氨酸或2′,6′-二甲基苯丙氨酸殘基。例如，所述肽可以具有式phe-d-arg-phe-lys-nh2或2′,6′-dmp-d-arg-phe-lys-nh2。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述芳族陽(yáng)離子肽具有式d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽由式i定義：其中r1和r2各自獨(dú)立地選自(i)氫；(ii)直鏈或支鏈c1-c6烷基；(iii)其中m＝1-3；(iv)(v)r3和r4各自獨(dú)立地選自(i)氫；(ii)直鏈或支鏈c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包括氯代、氟代、溴代和碘代；r5、r6、r7、r8和r9各自獨(dú)立地選自(i)氫；(ii)直鏈或支鏈c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包括氯代、氟代、溴代和碘代；且n是1-5的整數(shù)。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，r1和r2是氫；r3和r4是甲基；r5、r6、r7、r8和r9都是氫；且n是4。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽由式ii定義：其中r1和r2各自獨(dú)立地選自(i)氫；(ii)直鏈或支鏈c1-c6烷基；(iii)其中m＝1-3；(iv)(v)r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11和r12各自獨(dú)立地選自(i)氫；(ii)直鏈或支鏈c1-c6烷基；(iii)c1-c6烷氧基；(iv)氨基；(v)c1-c4烷基氨基；(vi)c1-c4二烷基氨基；(vii)硝基；(viii)羥基；(ix)鹵素，其中“鹵素”包括氯代、氟代、溴代和碘代；且n是1-5的整數(shù)。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11和r12都是氫；且n是4。在另一個(gè)實(shí)施方案中，r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9和r11都是氫；r8和r12是甲基；r10是羥基；且n是4。所述芳族陽(yáng)離子肽可以以多種方式施用。在某些實(shí)施方案中，可以口服地、局部地、鼻內(nèi)地、腹膜內(nèi)地、靜脈內(nèi)地、皮下地或透皮地(例如，通過(guò)離子透入法)施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)途徑施用所述芳族陽(yáng)離子肽。在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療有此需要的受試者的動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄的方法，所述方法包括：給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)所述受試者執(zhí)行血運(yùn)重建手術(shù)的步驟。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)。在某些實(shí)施方案中，所述動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄包括受試者的腎微脈管系統(tǒng)的破裂或阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述受試者處于腎微脈管系統(tǒng)稀薄化的風(fēng)險(xiǎn)中或者正在遭受腎微脈管系統(tǒng)稀薄化。在某些實(shí)施方案中，在腎微脈管系統(tǒng)稀薄化開(kāi)始之前，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，在血運(yùn)重建手術(shù)過(guò)程中和之后，或在血運(yùn)重建手術(shù)之前、過(guò)程中和之后連續(xù)地，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少3小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少5小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少8小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少12小時(shí)，或在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少24小時(shí)。在某些實(shí)施方案中，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少8小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少4小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少2小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少1小時(shí)開(kāi)始，或從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少10分鐘開(kāi)始，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括除去腎動(dòng)脈阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括施用一種或多種血栓溶解劑。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、酰化形式的纖溶酶原、?；问降睦w溶酶和酰化的鏈激酶-纖溶酶原復(fù)合物。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療有此需要的受試者的動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄的方法，所述方法包括：對(duì)所述受試者執(zhí)行經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)，和給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述受試者處于腎微脈管系統(tǒng)稀薄化的風(fēng)險(xiǎn)中或者正在遭受腎微脈管系統(tǒng)稀薄化。在某些實(shí)施方案中，在腎微脈管系統(tǒng)稀薄化開(kāi)始之前，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血管成形術(shù)之前，在血管成形術(shù)之后，在血管成形術(shù)過(guò)程中和之后，或在血管成形術(shù)之前、過(guò)程中和之后連續(xù)地，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血管成形術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少3小時(shí)，在血管成形術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少5小時(shí)，在血管成形術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少8小時(shí)，在血管成形術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少12小時(shí)，或在血管成形術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少24小時(shí)。在某些實(shí)施方案中，從血管成形術(shù)之前至少8小時(shí)開(kāi)始，從血管成形術(shù)之前至少4小時(shí)開(kāi)始，從血管成形術(shù)之前至少2小時(shí)開(kāi)始，從血管成形術(shù)之前至少1小時(shí)開(kāi)始，或從血管成形術(shù)之前至少10分鐘開(kāi)始，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，用于治療有此需要的受試者的動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄的方法(其包括對(duì)所述受試者執(zhí)行經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)，和給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽)包括：給所述受試者施用一種或多種血栓溶解劑。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、酰化形式的纖溶酶原、?；问降睦w溶酶和?；逆溂っ?纖溶酶原復(fù)合物。在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療有此需要的受試者中與單側(cè)或兩側(cè)動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄有關(guān)的對(duì)側(cè)腎損傷的方法，所述方法包括：給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療有此需要的受試者中與高血壓或腎血管性高血壓有關(guān)的靶器官損傷(諸如腎臟或心臟)的方法，所述方法包括：給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)所述受試者執(zhí)行腎血運(yùn)重建手術(shù)的步驟。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)。在某些實(shí)施方案中，所述動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄包括受試者的腎微脈管系統(tǒng)的破裂或阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述受試者處于腎微脈管系統(tǒng)稀薄化的風(fēng)險(xiǎn)中或者正在遭受腎微脈管系統(tǒng)稀薄化。在某些實(shí)施方案中，在腎微脈管系統(tǒng)稀薄化開(kāi)始之前，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，在血運(yùn)重建手術(shù)過(guò)程中和之后，或在血運(yùn)重建手術(shù)之前、過(guò)程中和之后連續(xù)地，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少3小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少5小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少8小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少12小時(shí)，或在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少24小時(shí)。在某些實(shí)施方案中，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少8小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少4小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少2小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少1小時(shí)開(kāi)始，或從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少10分鐘開(kāi)始，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括除去腎動(dòng)脈阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括施用一種或多種血栓溶解劑。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、?；问降睦w溶酶原、?；问降睦w溶酶和?；逆溂っ?纖溶酶原復(fù)合物。在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療有此需要的受試者中與動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄有關(guān)的充血性心力衰竭的方法，所述方法包括：給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)所述受試者執(zhí)行腎血運(yùn)重建手術(shù)的步驟。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)。在某些實(shí)施方案中，所述動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄包括受試者的腎微脈管系統(tǒng)的破裂或阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述受試者處于腎微脈管系統(tǒng)稀薄化的風(fēng)險(xiǎn)中或者正在遭受腎微脈管系統(tǒng)稀薄化。在某些實(shí)施方案中，在腎微脈管系統(tǒng)稀薄化開(kāi)始之前，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，在血運(yùn)重建手術(shù)過(guò)程中和之后，或在血運(yùn)重建手術(shù)之前、過(guò)程中和之后連續(xù)地，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少3小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少5小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少8小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少12小時(shí)，或在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少24小時(shí)。在某些實(shí)施方案中，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少8小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少4小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少2小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少33小時(shí)開(kāi)始，或從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少10分鐘開(kāi)始，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括除去腎動(dòng)脈阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括施用一種或多種血栓溶解劑。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、酰化形式的纖溶酶原、?；问降睦w溶酶和?；逆溂っ?纖溶酶原復(fù)合物。在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療有此需要的受試者的arvd的方法，所述方法包括：給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述arvd包含動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄(aras)。在某些實(shí)施方案中，所述arvd包含與正常對(duì)照相比受損的腎血液動(dòng)力學(xué)。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括增加的平均腎動(dòng)脈血壓。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括減小的腎容量。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括減小的皮質(zhì)灌注。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括減小的腎血流量(rbf)。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括降低的腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)。在某些實(shí)施方案中，受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括減少的皮質(zhì)血液氧合。在某些實(shí)施方案中，所述arvd包括腎小管間質(zhì)性纖維化。在某些實(shí)施方案中，治療包括長(zhǎng)期施用肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，長(zhǎng)期施用包括：施用肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽大于1周的時(shí)段。在某些實(shí)施方案中，長(zhǎng)期施用包括：施用肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽大于1年的時(shí)段。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療由動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄(aras)造成的受損的腎血液動(dòng)力學(xué)的方法，所述方法包括：給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述aras包括與正常對(duì)照相比受損的腎血液動(dòng)力學(xué)。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括增加的平均腎動(dòng)脈血壓。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括減小的腎容量。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括減小的皮質(zhì)灌注。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括減小的腎血流量(rbf)。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括降低的腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)。在某些實(shí)施方案中，所述受損的腎血液動(dòng)力學(xué)包括減少的皮質(zhì)血液氧合。在某些實(shí)施方案中，所述aras包括腎小管間質(zhì)性纖維化。在某些實(shí)施方案中，治療包括長(zhǎng)期施用肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，長(zhǎng)期施用包括：施用肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽大于1周的時(shí)段。在某些實(shí)施方案中，長(zhǎng)期施用包括：施用肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽大于1年的時(shí)段。在另一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療由動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄(aras)造成的受損的腎血液動(dòng)力學(xué)的方法，所述方法包括：與一種或多種抗高血壓劑聯(lián)合地給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種抗高血壓劑包括利尿劑、腎上腺素能受體拮抗劑、鈣通道阻滯劑、腎素抑制劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)抑制劑、血管緊張素ii受體拮抗劑、醛固酮拮抗劑、血管擴(kuò)張劑或α-2激動(dòng)劑。在某些實(shí)施方案中，所述利尿劑包括袢利尿劑、噻嗪利尿劑、噻嗪類利尿劑或保鉀利尿劑。在某些實(shí)施方案中，所述利尿劑包括布美他尼、依他尼酸、呋塞米、托拉塞米、依匹噻嗪、氫氯噻嗪、氯噻嗪、芐氟噻嗪、吲達(dá)帕胺、氯噻酮、美托拉宗、阿米洛利、氨苯蝶啶或螺內(nèi)酯。在某些實(shí)施方案中，所述腎上腺素能受體拮抗劑包括β阻滯劑、α阻滯劑或混合的α和β阻滯劑。在某些實(shí)施方案中，所述腎上腺素能受體拮抗劑包括阿替洛爾、美托洛爾、納多洛爾、氧烯洛爾、吲哚洛爾、普萘洛爾、噻嗎洛爾、多沙唑嗪、酚妥拉明、吲哚拉明、酚芐明、哌唑嗪、特拉唑嗪、妥拉唑林、布新洛爾、卡維地洛或拉貝洛爾。在某些實(shí)施方案中，所述鈣通道阻滯劑包括二氫吡啶或非二氫吡啶。在某些實(shí)施方案中，所述鈣通道阻滯劑包括氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、樂(lè)卡地平、尼卡地平、硝苯地平、尼莫地平、尼群地平、地爾硫卓或維拉帕米。在某些實(shí)施方案中，所述腎素抑制劑包括在某些實(shí)施方案中，所述血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)抑制劑包括卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、群多普利或貝那普利。在某些實(shí)施方案中，所述血管緊張素ii受體拮抗劑包括在某些實(shí)施方案中，所述醛固酮拮抗劑包括依普利酮或螺內(nèi)酯。在某些實(shí)施方案中，所述血管擴(kuò)張劑拮抗劑包括硝普鈉或肼屈嗪。在某些實(shí)施方案中，所述α-2激動(dòng)劑拮抗劑包括可樂(lè)定、胍那芐、甲基多巴、莫索尼定、胍乙啶或利舍平。附圖說(shuō)明圖1a是顯示了時(shí)間點(diǎn)和具體干預(yù)的實(shí)驗(yàn)方案的示意圖。圖1b-圖1g的圖顯示了在基線(肽輸注之前)、ptra后30分鐘和ptra后180分鐘時(shí)，在aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽豬中的單核細(xì)胞趨化蛋白(mcp-1)(b)、腫瘤壞死因子(tnf)-α(c)、白介素(il)-1β(d)、粒細(xì)胞集落刺激因子(g-csf)(e)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(tgf)-β(f)和血清肌酸酐(scr)(g)的下腔靜脈水平。*相對(duì)于基線，p<0.05；#相對(duì)于aras+ptra+媒介物，p<0.05。圖2a-圖2b的圖顯示了在基線和ptra后210min時(shí)，在aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者中的8-異前列腺素(a)和尿蛋白(b)的尿水平。#相對(duì)于aras+ptra+媒介物，p<0.05。圖2c和2d的圖解釋了在分離的腎動(dòng)脈環(huán)中沒(méi)有觀察到響應(yīng)于肽的血管收縮效應(yīng)(c)或血管擴(kuò)張效應(yīng)(d)。#相對(duì)于aras+ptra+媒介物，p<0.05。圖3a的圖顯示了通過(guò)遙測(cè)測(cè)得的實(shí)驗(yàn)受試者在71天時(shí)段內(nèi)的平均動(dòng)脈壓。圖3b-圖3e顯示了在正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者中的腎皮質(zhì)(黑色)和髓質(zhì)(灰色)體積(b)、灌注(c)、腎血流量(rbf)(d)和腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)(e)。肽的施用改善了狹窄的血運(yùn)重建的腎的腎功能。*相對(duì)于正常，p<0.05；相對(duì)于aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽，p<0.05。圖4a顯示了在正常、aras、aras+ptra+媒介物、和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者中的代表性的末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶dutp切口末端標(biāo)記(tunel)(上圖)和半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶-3染色(下圖)。圖4b顯示了在正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者中的tunel(黑色)和半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶-3染色(灰色)的定量。圖4c的蛋白質(zhì)印跡顯示了b-細(xì)胞淋巴瘤(bcl)-2、bcl-2-相關(guān)的x蛋白(bax)、過(guò)氧化物酶體增殖子活化的受體γ輔激活因子(pgc)-1α、核呼吸因子(nrf)-1、ga-結(jié)合蛋白(gabp)、過(guò)氧化物酶體增殖子活化的受體(ppar)α、ppar-δ、血紅素加氧酶(ho)-1和sirtuin(sirt)-1在得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織中的表達(dá)。圖4d顯示了這些蛋白相對(duì)于gapdh的定量。圖5a顯示了正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者中的代表性的三維微-ct圖像(上圖)和皮質(zhì)微血管的透壁空間密度的定量(下圖)。圖5b顯示了皮質(zhì)微血管的平均血管直徑和血管迂曲度的定量。圖5c顯示了在正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)和它的受體(vegfr-1和vegfr2)的腎表達(dá)水平。*相對(duì)于正常，p<0.05；相對(duì)于aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽，p<0.05。圖6a顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織中的熒光二氫溴化乙啶(dhe)和dapi染色(上圖)以及信號(hào)的定量(下圖)。圖6b顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織中的p47和硝基酪氨酸(nt)的水平。*相對(duì)于正常，p<0.05；相對(duì)于aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽，p<0.05。圖7a顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織中的代表性的mcp-1(上圖)和cd163(下圖)染色。圖7b顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織中的mcp-1和cd163的定量。圖7c顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織中的tnf-α的蛋白質(zhì)印跡，以及tnf-α水平相對(duì)于gapdh的定量。*相對(duì)于正常，p<0.05；相對(duì)于aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽，p<0.05。圖8a顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織的代表性過(guò)碘酸-希夫(pas)染色，以及腎小管損傷的定量。圖8b顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織中的代表性纖連蛋白(上圖)和膠原iv(下圖)。圖8c顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織中的纖連蛋白和膠原iv染色的定量，作為總面積的百分比。*相對(duì)于正常，p<0.05；相對(duì)于aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽，p<0.05。圖9a顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎小球周圍(上圖)和管間質(zhì)(下圖)腎組織的代表性三色染色。圖9b顯示了正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者中的管間質(zhì)纖維化和腎小球評(píng)分的定量。圖9c顯示了得自正常、aras、aras+ptra+媒介物和aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽受試者的腎組織的pai-1和tgfβ-1蛋白的蛋白質(zhì)印跡，以及pai-1和tgfβ-1水平相對(duì)于gapdh的定量。*相對(duì)于正常，p<0.05；相對(duì)于aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽，p<0.05。圖10顯示了得自正常+媒介物、正常+肽、arvd+媒介物和arvd+肽受試者的腎組織切片的代表性三色染色(藍(lán)色；40倍放大率)。圖11顯示了在圖10中描繪的正常+媒介物、正常+肽、aras+媒介物和aras+肽受試者的三色染色的定量。*相對(duì)于正常，p<0.05；相對(duì)于arvd+肽，p<0.05。圖12顯示了正常+媒介物、正常+肽、aras+媒介物和aras+肽受試者的代表性boldmri圖像。圖13顯示了在圖10中描繪的正常+媒介物、正常+肽、aras+媒介物和aras+肽受試者的皮質(zhì)血液氧合指數(shù)(r2*)的定量。*相對(duì)于正常，p<0.05；相對(duì)于arvd+肽，p<0.05。圖14顯示了在正常+肽、aras+媒介物和aras+肽受試者中響應(yīng)于ach輸注的腎血流量變化(δrbf)的量級(jí)。*相對(duì)于正常，p<0.05；#相對(duì)于arvd+肽，p<0.05。圖15顯示了在正常+肽,aras+媒介物,和aras+肽受試者中響應(yīng)于ach輸注的腎小球?yàn)V過(guò)率的變化(δgfr)的量級(jí)。*相對(duì)于正常，p<0.05；#相對(duì)于arvd+肽，p<0.05。具體實(shí)施方式應(yīng)當(dāng)理解，在下面以不同的詳細(xì)水平描述了本公開(kāi)內(nèi)容的某些方面、模式、實(shí)施方案、變化和特征，以便提供本發(fā)明技術(shù)的實(shí)質(zhì)理解。在實(shí)踐本發(fā)明方法時(shí)，使用分子生物學(xué)、蛋白生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)和重組dna中的許多常規(guī)技術(shù)。這些技術(shù)是眾所周知的，且在例如以下文獻(xiàn)中進(jìn)行了解釋：currentprotocolsinmolecularbiology,第i-iii卷,ausubel編(1997)；sambrook等人,molecularcloning:alaboratorymanual,第2版(coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny,1989)；dnacloning:apracticalapproach,第i和ii卷,glover編(1985)；oligonucleotidesynthesis,gait編(1984)；nucleicacidhybridization,hames和higgins編(1985)；transcriptionandtranslation,hames和higgins編(1984)；animalcellculture,freshney編(1986)；immobilizedcellsandenzymes(irlpress,1986)；perbal,apracticalguidetomolecularcloning；meth.enzymol.系列(academicpress,inc.,1984)；genetransfervectorsformammaliancells,miller和calos編(coldspringharborlaboratory,ny,1987)；和meth.enzymol.,第154和155卷，分別由wu和grossman、以及wu編。下面提供了在本說(shuō)明書(shū)中使用的某些術(shù)語(yǔ)的定義。除非另外定義，在本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)通常具有與本技術(shù)所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。在本說(shuō)明書(shū)和所附權(quán)利要求中使用的單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“所述”包括復(fù)數(shù)指示物，除非上下文另外清楚地指示。例如，所提及的“一個(gè)細(xì)胞“包括兩個(gè)或更多個(gè)細(xì)胞的組合等。本文中使用的將試劑、藥物或肽“施用”給受試者包括給受試者引入或遞送化合物以執(zhí)行其預(yù)期功能的任何途徑?？梢酝ㄟ^(guò)任何合適的途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)施用，包括口服地、鼻內(nèi)地、胃腸外地(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下)或者局部地。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)途徑施用所述芳族陽(yáng)離子肽。施用包括自身施用和/或由其他人施用。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“氨基酸”包括天然存在的氨基酸和合成的氨基酸以及氨基酸類似物和以類似于天然存在的氨基酸的形式起作用的氨基酸模擬物。天然存在的氨基酸是由遺傳密碼編碼的那些氨基酸以及后來(lái)被改性的那些氨基酸，例如，羥脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和o-磷酸絲氨酸。氨基酸類似物表示具有與天然存在的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)(即結(jié)合至氫的α-碳、羧基、氨基和r基)的化合物，例如，高絲氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亞砜、蛋氨酸甲基锍。這樣的類似物具有改性的r基(例如正亮氨酸)或改性的肽主鏈，但是保留與天然存在的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。氨基酸模擬物表示具有與氨基酸的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)、但以類似于天然存在的氨基酸的方式起作用的化學(xué)化合物。在本文中可以通過(guò)它們的通常已知的三字母符號(hào)或者通過(guò)iupac-iub生物化學(xué)命名委員會(huì)(biochemicalnomenclaturecommission)推薦的單字母符號(hào)表示氨基酸。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“有效量”表示足以獲得期望的治療和/或預(yù)防效果的量，例如，導(dǎo)致以下病癥的預(yù)防或減輕的量：腎缺血-再灌注損傷，或與腎缺血、缺血-再灌注損傷或動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄(aras)有關(guān)的一種或多種征狀。在治療或預(yù)防應(yīng)用的背景下，施用給受試者的組合物的量將取決于疾病的類型和嚴(yán)重程度以及諸如平常健康情況、年齡、性別、體重和對(duì)藥物的耐受性等個(gè)體特性。所述量還取決于疾病的程度、嚴(yán)重程度和類型。技術(shù)人員能夠根據(jù)這些因素和其它因素來(lái)確定合適的劑量。還可以與一種或多種其它的治療化合物聯(lián)合施用所述組合物。在本文所述的方法中，可以將芳族陽(yáng)離子肽施用給具有腎缺血損傷、腎缺血-再灌注損傷、高血壓、aras或腎血管性高血壓的一種或多種征象或征狀的受試者。在其它實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物具有腎功能不全的一種或多種征象或征狀，諸如疲倦或疲勞、組織腫脹、背痛、食欲變化、消化不良、血清肌酸酐升高、腎高血壓或排尿的總顏色或頻率的變化。例如，芳族陽(yáng)離子肽的“治療有效量”是指，至少改善腎缺血-再灌注損傷或aras的生理效應(yīng)的水平。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“缺血再灌注損傷”表示如下造成的損傷：首先限制向組織的血液供給，隨后突然再供給血液并伴隨地產(chǎn)生自由基。缺血是向組織的血液供給的減少，且跟隨著再灌注，即氧向被剝奪的組織的突然灌注。缺血性損傷是由向組織的血液供給的限制造成的損傷。缺血性損傷可以是由于急性缺血或慢性缺血?！胺蛛x的”或“純化的”多肽或肽基本上不具有源自細(xì)胞或組織源(從該源衍生出所述試劑)的細(xì)胞材料或其它污染性多肽，或者當(dāng)化學(xué)合成時(shí)基本上不具有化學(xué)前體或其它化學(xué)物質(zhì)。例如，分離的芳族陽(yáng)離子肽將不具有會(huì)干擾試劑的診斷用途或治療用途的材料。這樣的干擾材料可以包括酶、激素和其它蛋白質(zhì)類的和非蛋白質(zhì)類的溶質(zhì)。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中互換地用于表示，包括通過(guò)肽鍵或改性的肽鍵而互相連接的兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸的聚合物，即，肽電子等排體。多肽既指短鏈(通常稱為肽、糖肽或寡聚體)也指較長(zhǎng)的鏈(通常稱為蛋白質(zhì))。多肽可以含有與20種基因編碼的氨基酸不同的氨基酸。多肽包括通過(guò)天然過(guò)程(諸如翻譯后加工)或本領(lǐng)域眾所周知的化學(xué)修飾技術(shù)修飾的氨基酸序列。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“治療”或“減輕”表示治療性處理和預(yù)防性的或防止性的措施，其中，目的是防止或減緩(減輕)目標(biāo)病理性的病癥或障礙。例如，如果在根據(jù)本文所述的方法接受治療量的芳族陽(yáng)離子肽以后，受試者顯示出可觀察的和/或可測(cè)量的與aras有關(guān)的腎缺血-再灌注損傷的減少，則成功地“治療”受試者的與aras有關(guān)的腎缺血/再灌注損傷。還應(yīng)當(dāng)理解，描述的治療或預(yù)防醫(yī)學(xué)病癥的各種模式旨在表示“顯著的”，其包括完全治療或者預(yù)防以及小于完全治療或者預(yù)防，且其中實(shí)現(xiàn)某種生物學(xué)上或醫(yī)學(xué)上相關(guān)的結(jié)果。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“長(zhǎng)期治療”表示，施用超過(guò)單次施用的治療模式。在某些實(shí)施方案中，給受試者施用治療超過(guò)1次。在某些實(shí)施方案中，給受試者施用治療超過(guò)5次。在某些實(shí)施方案中，給受試者施用治療超過(guò)10次、超過(guò)20次、超過(guò)30次、超過(guò)40次、超過(guò)50次、超過(guò)60次、超過(guò)70次、超過(guò)80次、超過(guò)90次或超過(guò)100次。在某些實(shí)施方案中，給受試者施用治療大于約1周、大于約2周、大于約3周、大于約4周、大于約5周、大于約6周、大于約7周、大于約8周、大于約9周、大于約10周、大于約11周、大于約12周、大于約13周、大于約14周或大于約15周的時(shí)段。在某些實(shí)施方案中，給受試者施用治療大于1年、大于5年、大于10年或大于20年的時(shí)段。本文中使用的“預(yù)防”或“防止”障礙或病癥表示，在統(tǒng)計(jì)樣品中的化合物相對(duì)于未治療的對(duì)照樣品降低治療的樣品的障礙或病癥的發(fā)生率，或者相對(duì)于未治療的對(duì)照樣品延遲障礙或病癥的發(fā)作或者減輕障礙或病癥的一種或多種征狀的嚴(yán)重程度。本文中使用的“預(yù)防缺血-再灌注損傷”包括：預(yù)防氧化性損傷或預(yù)防線粒體的通透性轉(zhuǎn)變，由此預(yù)防或改善通向腎的血流量的損失和隨后恢復(fù)的有害作用。i.預(yù)防或治療與高血壓和/或腎動(dòng)脈狹窄有關(guān)的腎和心臟損傷的方法通向腎的血流量的恢復(fù)是治療腎狹窄的一個(gè)重要部分。血流量的快速恢復(fù)可以損傷腎微血管，導(dǎo)致降低的腎功能和長(zhǎng)期預(yù)后不良。該效應(yīng)被稱作缺血/再灌注損傷。再灌注損傷可以發(fā)生在腎臟以外的器官，諸如心臟、肝臟、腎臟、腦、皮膚等。首先在腦缺血中提出再灌注后的組織損傷。遭受2次短暫的1/2分鐘缺血的兔腦在缺血解除后具有正常血流量。當(dāng)兔暴露于更長(zhǎng)缺血時(shí)段時(shí)，不會(huì)恢復(fù)通向腦組織的正常流量，即使在解除血管阻塞以后。長(zhǎng)期缺血會(huì)導(dǎo)致微脈管系統(tǒng)的顯著變化，所述變化會(huì)干擾通向腦細(xì)胞的正常流量。在腦缺血的多種動(dòng)物模型中證實(shí)了該現(xiàn)象的存在。這也在多種其它器官(包括皮膚、骨骼肌和腎)中得到證實(shí)。此外，微循環(huán)改變可以調(diào)控在器官移植過(guò)程中由缺血-再灌注損傷誘導(dǎo)的器官損傷。本發(fā)明技術(shù)涉及通過(guò)給有此需要的受試者施用治療有效量的芳族陽(yáng)離子肽(諸如d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2)或其藥學(xué)上可接受的鹽(諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽)來(lái)治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中的缺血損傷和/或缺血-再灌注損傷。在一個(gè)方面，本發(fā)明技術(shù)涉及可用于治療或預(yù)防具有腎動(dòng)脈狹窄的受試者中與腎血運(yùn)重建有關(guān)的腎損傷的方法。在一個(gè)方面，本發(fā)明技術(shù)涉及arvd的治療，其包括：給有此需要的受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在某些實(shí)施方案中，所述治療是施用時(shí)段大于1周的長(zhǎng)期治療。在另一個(gè)方面，本發(fā)明技術(shù)涉及治療或預(yù)防在沒(méi)有組織再灌注存在下的缺血性損傷。例如，可以將肽施用給經(jīng)歷一個(gè)或多個(gè)組織或器官中的急性缺血的患者，例如，所述患者不是血運(yùn)重建手術(shù)的合適候選人，或不可為其容易地獲得血運(yùn)重建手術(shù)。額外地或可替換地，可以將所述肽施用給具有一個(gè)或多個(gè)組織的慢性缺血的患者，以便搶先于對(duì)血運(yùn)重建手術(shù)的需求。根據(jù)本文所述的方法，在血運(yùn)重建手術(shù)之前、過(guò)程中和之后，可以給被施用芳族陽(yáng)離子肽來(lái)治療或預(yù)防在沒(méi)有組織再灌注存在下的缺血性損傷的患者額外施用肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，腎再灌注損傷的治療包括：與沒(méi)有施用芳族陽(yáng)離子肽的類似受試者相比，在受試者中增加組織灌注的量或面積。在一個(gè)實(shí)施方案中，腎再灌注損傷的預(yù)防包括：與沒(méi)有施用芳族陽(yáng)離子肽的類似受試者相比，在受試者中減少由再灌注造成的微血管損傷的量或面積。在某些實(shí)施方案中，腎再灌注損傷的治療或預(yù)防包括：與沒(méi)有施用芳族陽(yáng)離子肽的類似受試者相比，在受試者中減少對(duì)再灌注后受影響的血管的損傷、減少血細(xì)胞的栓塞效應(yīng)、和/或減少內(nèi)皮細(xì)胞膨脹。通過(guò)本領(lǐng)域已知的任意技術(shù)，包括、但不限于測(cè)量腎容量、腎動(dòng)脈壓、腎血流量(rbf)和腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)，以及通過(guò)本領(lǐng)域已知的成像技術(shù)，包括、但不限于ct和微-ct，可以測(cè)量預(yù)防或治療的程度。通過(guò)將由這些成像技術(shù)中的任一種觀察到的受試者中的腎再灌注損傷的程度相對(duì)于沒(méi)有施用芳族陽(yáng)離子肽的對(duì)照受試者或?qū)φ帐茉囌呷后w進(jìn)行對(duì)比，可以確定成功預(yù)防或治療。在一個(gè)方面，本發(fā)明技術(shù)涉及通過(guò)給有此需要的受試者施用某些芳族陽(yáng)離子肽(諸如d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2)或其藥學(xué)上可接受的鹽(諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽)來(lái)治療或預(yù)防與腎血運(yùn)重建有關(guān)的腎再灌注損傷。也提供了一種治療受試者的腎狹窄以預(yù)防在所述器官的再灌注以后對(duì)腎的損傷的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，在發(fā)生腎再灌注損傷之前給受試者施用芳族陽(yáng)離子肽。例如，在某些實(shí)施方案中，施用所述肽以抑制、預(yù)防或治療有此需要的受試者中的缺血性損傷，和/或搶先于再灌注治療和/或減輕或改善再灌注損傷。額外地或可替換地，在某些實(shí)施方案中，在發(fā)生腎再灌注損傷之后給受試者施用芳族陽(yáng)離子肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，與血運(yùn)重建手術(shù)結(jié)合地執(zhí)行所述方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)是經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)(ptra)。在一個(gè)方面，本發(fā)明技術(shù)涉及一種腎血運(yùn)重建方法，所述方法包括：給哺乳動(dòng)物受試者施用治療有效量的芳族陽(yáng)離子肽，和對(duì)所述受試者執(zhí)行ptra。在一個(gè)實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前，給所述受試者施用肽諸如d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，給所述受試者施用所述肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)過(guò)程中和之后，給所述受試者施用所述肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前、過(guò)程中和之后連續(xù)地給所述受試者施用所述肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在腎動(dòng)脈狹窄和/或腎血運(yùn)重建手術(shù)以后，定期地(即，長(zhǎng)期地)給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，給所述受試者施用所述肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，給所述受試者施用所述肽至少3小時(shí)、至少5小時(shí)、至少8小時(shí)、至少12小時(shí)或至少24小時(shí)。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前，給所述受試者施用所述肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少8小時(shí)、至少4小時(shí)、至少2小時(shí)、至少1小時(shí)或至少10分鐘開(kāi)始，給所述受試者施用所述肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，給所述受試者施用至少1周、至少1個(gè)月或至少1年。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前和之后，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在指定的時(shí)間段內(nèi)給所述受試者施用所述肽作為輸注。在某些實(shí)施方案中，給所述受試者施用所述肽作為推注。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括，與一種或多種血栓溶解劑結(jié)合施用芳族陽(yáng)離子肽。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、?；问降睦w溶酶原、?；问降睦w溶酶和?；逆溂っ?纖溶酶原復(fù)合物。本文還提供了用于在具有高血壓、腎血管性高血壓或單側(cè)腎動(dòng)脈狹窄的患者中預(yù)防或治療狹窄腎和/或?qū)?cè)腎損傷的方法。在這樣的患者中，對(duì)側(cè)腎的損傷是對(duì)腎動(dòng)脈狹窄的代償性生物應(yīng)答的結(jié)果。響應(yīng)于腎微動(dòng)脈中降低的脈搏壓，從狹窄腎釋放出增加的量的腎素。例如，腎灌注壓力的50％下降會(huì)導(dǎo)致來(lái)自缺血腎的腎素分泌的立即和持續(xù)增加以及伴隨的來(lái)自對(duì)側(cè)腎的分泌的抑制。這對(duì)鈉排泄、交感神經(jīng)活動(dòng)、腎內(nèi)前列腺素濃度和一氧化氮產(chǎn)生具有直接影響；且因此造成腎血管性高血壓。當(dāng)腎血管性高血壓持續(xù)時(shí)，血漿腎素活性降低(被稱作“反向快速耐受”)。具有持續(xù)多年的腎血管性高血壓的患者會(huì)遭受對(duì)側(cè)腎的廣泛腎硬化。本文還提供了在具有高血壓、單側(cè)腎動(dòng)脈狹窄或腎血管性高血壓的患者中預(yù)防或治療心臟損傷的方法。在這樣的患者中，心臟損傷是對(duì)腎動(dòng)脈狹窄和高血壓的代償性生物應(yīng)答的結(jié)果。如上所述，響應(yīng)于腎微動(dòng)脈中降低的脈搏壓，從狹窄腎釋放出增加的量的腎素，而來(lái)自對(duì)側(cè)腎的腎素水平下降。這會(huì)導(dǎo)致血漿腎素水平和/或活性的總體下降。這伴有擴(kuò)大的體液體積和增加的心輸出量。心輸出量的持續(xù)增加會(huì)導(dǎo)致充血性心力衰竭的發(fā)展。此外，動(dòng)脈壓的增加會(huì)增加后負(fù)荷和導(dǎo)致心臟肥大。在某些實(shí)施方案中，與第二種活性劑(例如，抗高血壓劑)結(jié)合施用所述肽。示例性的試劑包括、但不限于，利尿劑、腎上腺素能受體激動(dòng)劑、鈣通道阻滯劑、腎素抑制劑、ace抑制劑、血管緊張素ii受體激動(dòng)劑、醛固酮拮抗劑、血管擴(kuò)張劑和/或作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腎上腺素能藥。因而，在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療有此需要的受試者中與單側(cè)腎動(dòng)脈狹窄有關(guān)的對(duì)側(cè)腎損傷的方法，所述方法包括：給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)所述受試者執(zhí)行腎血運(yùn)重建手術(shù)的步驟。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)。在某些實(shí)施方案中，所述動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄包括受試者的腎微脈管系統(tǒng)的破裂或阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述受試者處于腎微脈管系統(tǒng)稀薄化的風(fēng)險(xiǎn)中或者正在遭受腎微脈管系統(tǒng)稀薄化。在某些實(shí)施方案中，在腎微脈管系統(tǒng)稀薄化開(kāi)始之前，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，在血運(yùn)重建手術(shù)過(guò)程中和之后，或在血運(yùn)重建手術(shù)之前、過(guò)程中和之后連續(xù)地，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少3小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少5小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少8小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少12小時(shí)，或在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少24小時(shí)。在某些實(shí)施方案中，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少8小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少4小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少2小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少1小時(shí)開(kāi)始，或從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少10分鐘開(kāi)始，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括除去腎動(dòng)脈阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括施用一種或多種血栓溶解劑。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、?；问降睦w溶酶原、?；问降睦w溶酶和?；逆溂っ?纖溶酶原復(fù)合物。在某些方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種用于治療有此需要的受試者中與動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄有關(guān)的充血性心力衰竭或心臟肥大的方法，所述方法包括：給所述受試者施用治療有效量的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽。在某些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括對(duì)所述受試者執(zhí)行腎血運(yùn)重建手術(shù)的步驟。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)。在某些實(shí)施方案中，所述動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄包括受試者的腎微脈管系統(tǒng)的破裂或阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述受試者處于腎微脈管系統(tǒng)稀薄化的風(fēng)險(xiǎn)中或者正在遭受腎微脈管系統(tǒng)稀薄化。在某些實(shí)施方案中，在腎微脈管系統(tǒng)稀薄化開(kāi)始之前，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前，在血運(yùn)重建手術(shù)之后，在血運(yùn)重建手術(shù)過(guò)程中和之后，或在血運(yùn)重建手術(shù)之前、過(guò)程中和之后連續(xù)地，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少3小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少5小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少8小時(shí)，在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少12小時(shí)，或在血運(yùn)重建手術(shù)之后給所述受試者施用所述肽至少24小時(shí)。在某些實(shí)施方案中，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少8小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少4小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少2小時(shí)開(kāi)始，從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少33小時(shí)開(kāi)始，或從血運(yùn)重建手術(shù)之前至少10分鐘開(kāi)始，給所述受試者施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括除去腎動(dòng)脈阻塞。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括施用一種或多種血栓溶解劑。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、?；问降睦w溶酶原、酰化形式的纖溶酶和?；逆溂っ?纖溶酶原復(fù)合物。在某些實(shí)施方案中，本文中公開(kāi)的方法包括：給有此需要的受試者施用一種或多種芳族陽(yáng)離子肽，以治療或預(yù)防在沒(méi)有組織再灌注存在下的缺血性損傷。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括：給經(jīng)歷一個(gè)或多個(gè)組織的急性缺血的患者施用一種或多種肽諸如d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或其藥學(xué)上可接受的鹽諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽，所述患者不是血運(yùn)重建手術(shù)的合適候選人，或不可為其容易地獲得血運(yùn)重建手術(shù)。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括：給具有一個(gè)或多個(gè)組織的慢性缺血的患者施用一種或多種肽，以便搶先于對(duì)血運(yùn)重建手術(shù)的需求。在某些實(shí)施方案中，在血運(yùn)重建手術(shù)之前、過(guò)程中和之后，給被施用芳族陽(yáng)離子肽來(lái)治療或預(yù)防在沒(méi)有組織再灌注存在下的缺血性損傷的患者額外施用肽。ii.本發(fā)明技術(shù)的芳族陽(yáng)離子肽的制備本發(fā)明技術(shù)的芳族陽(yáng)離子肽是水溶性的和高極性的。盡管所述肽具有這些特性，但是所述肽可以容易地穿透細(xì)胞膜。所述芳族陽(yáng)離子肽通常包括通過(guò)肽鍵共價(jià)連接的最少3個(gè)氨基酸或最少4個(gè)氨基酸。所述芳族陽(yáng)離子肽中存在的氨基酸的最大數(shù)目為通過(guò)肽鍵共價(jià)連接的約20個(gè)氨基酸。適當(dāng)?shù)兀被岬淖畲髷?shù)目為約12個(gè)、更優(yōu)選約9個(gè)和最優(yōu)選約6個(gè)。芳族陽(yáng)離子肽的氨基酸可以是任何氨基酸。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“氨基酸”用來(lái)指包括至少一個(gè)氨基和至少一個(gè)羧基的任何有機(jī)分子。通常，至少一個(gè)氨基是相對(duì)于羧基在α位。所述氨基酸可以是天然存在的。天然存在的氨基酸包括例如在哺乳動(dòng)物蛋白中常見(jiàn)的二十種最常見(jiàn)的左旋(l)氨基酸，即，丙氨酸(ala)、精氨酸(arg)、天冬酰胺(asn)、天冬氨酸(asp)、半胱氨酸(cys)、谷氨酰胺(gln)、谷氨酸(glu)、甘氨酸(gly)、組氨酸(his)、異亮氨酸(ile)、亮氨酸(leu)、賴氨酸(lys)、蛋氨酸(met)、苯丙氨酸(phe)、脯氨酸(pro)、絲氨酸(ser)、蘇氨酸(thr)、色氨酸、(trp)、酪氨酸(tyr)和纈氨酸(val)。其它天然存在的氨基酸包括例如在代謝過(guò)程中合成的與蛋白質(zhì)合成無(wú)關(guān)的氨基酸。例如，在哺乳動(dòng)物代謝中產(chǎn)生尿素期間合成氨基酸鳥(niǎo)氨酸和瓜氨酸。天然存在的氨基酸的另一個(gè)例子包括羥脯氨酸(hyp)。所述肽任選地含有一個(gè)或多個(gè)非天然存在的氨基酸。在某些實(shí)施方案中，所述肽不具有天然存在的氨基酸。所述非天然存在的氨基酸可以是左旋(l-)氨基酸、右旋(d-)氨基酸或其混合物。非天然存在的氨基酸是這樣的氨基酸：其通常不是在活生物體的正常代謝過(guò)程中合成，且非天然地出現(xiàn)在蛋白質(zhì)中。此外，非天然存在的氨基酸適當(dāng)?shù)匾膊粫?huì)被普通的蛋白酶識(shí)別。非天然存在的氨基酸可以存在于肽的任何位置。例如，非天然存在的氨基酸可以是在n末端、c末端或者在n末端和c末端之間的任何位置。例如，非天然的氨基酸可以包含在天然氨基酸中不存在的烷基、芳基或烷基芳基。非天然烷基氨基酸的一些例子包括β-氨基丁酸、β-氨基丁酸、γ-氨基丁酸、δ-氨基戊酸和ε-氨基己酸。非天然的芳基氨基酸的一些例子包括鄰-、間-和對(duì)-氨基苯甲酸。非天然的烷基芳基氨基酸的一些例子包括鄰-、間-和對(duì)-氨基苯乙酸以及γ-苯基-β-氨基丁酸。非天然存在的氨基酸包括天然存在的氨基酸的衍生物。所述天然存在的氨基酸的衍生物可以例如包括一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)向天然存在的氨基酸的添加。例如，可以將一個(gè)或多個(gè)化學(xué)基團(tuán)添加至苯丙氨酸或酪氨酸殘基的芳族環(huán)的2′、3′、4′、5′或6′位置或者色氨酸殘基的苯并環(huán)的4′、5′、6′或7′位置中的一個(gè)或多個(gè)。所述基團(tuán)可以是可添加到芳族環(huán)的任何化學(xué)基團(tuán)。這樣的基團(tuán)的一些例子包括：支鏈或直鏈c1-c4烷基，諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基或叔丁基、c1-c4烷氧基(即，烷氧基)、氨基、c1-c4烷基氨基和c1-c4二烷基氨基(例如，甲基氨基、二甲基氨基)、硝基、羥基、鹵代(即，氟代、氯代、溴代或碘代)。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些具體例子包括正纈氨酸(nva)和正亮氨酸(nle)。肽中氨基酸的修飾的另一個(gè)例子是，將肽中的天冬氨酸或谷氨酸殘基的羧基衍生化。衍生化的一個(gè)例子是與氨或與伯胺或仲胺(例如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺)的酰胺化。衍生化的另一個(gè)例子包括與諸如甲醇或乙醇酯化。另一種這樣的修飾包括賴氨酸、精氨酸或組氨酸殘基的氨基的衍生化。例如，這樣的氨基可以被酰化。一些合適的?；ɡ绫郊柞；蛘甙陨咸峒暗腸1-c4的烷基中的任一個(gè)的烷?；?，諸如乙?；虮；?。非天然存在的氨基酸對(duì)常見(jiàn)蛋白酶優(yōu)選地為耐受性的且更優(yōu)選地為不敏感的。對(duì)蛋白酶耐受性的或者不敏感的非天然存在的氨基酸的例子包括上述天然存在的l-氨基酸中的任一種的右旋(d-)形式以及l(fā)-和/或d-非天然存在的氨基酸。盡管d-氨基酸存在于通過(guò)與細(xì)胞的正常核糖體蛋白合成機(jī)制不同的方法而合成的某些肽抗生素中，但是所述d-氨基酸通常不存在于蛋白質(zhì)中。本文中使用的d-氨基酸被認(rèn)為是非天然存在的氨基酸。為了使蛋白酶敏感性最小化，所述肽應(yīng)當(dāng)具有小于5個(gè)、優(yōu)選地小于4個(gè)、更優(yōu)選地小于3個(gè)、且最優(yōu)選地小于2個(gè)由普通蛋白酶識(shí)別的連續(xù)l-氨基酸，不論所述氨基酸是天然存在的還是非天然存在的。在某些實(shí)施方案中，所述肽僅具有d-氨基酸，且不具有l(wèi)-氨基酸。如果所述肽含有蛋白酶敏感的氨基酸序列，則所述氨基酸中的至少一個(gè)優(yōu)選地為非天然存在的d-氨基酸，由此提供蛋白酶抗性。蛋白酶敏感序列的一個(gè)例子包括可以由常見(jiàn)蛋白酶(諸如內(nèi)肽酶和胰蛋白酶)容易地切割的兩個(gè)或更多個(gè)連續(xù)的堿性氨基酸。堿性氨基酸的例子包括精氨酸、賴氨酸和組氨酸。與肽中的氨基酸殘基的總數(shù)相比，在生理ph，所述芳族陽(yáng)離子肽應(yīng)當(dāng)具有最小數(shù)目的凈正電荷。在生理ph的凈正電荷的最小數(shù)目在下文稱為(pm)。肽中的氨基酸殘基的總數(shù)在下文稱為(r)。下文討論的凈正電荷的最小數(shù)目都是在生理ph。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“生理ph”表示哺乳動(dòng)物體的組織和器官的細(xì)胞中的正常ph。例如，人的生理ph通常為約7.4，而哺乳動(dòng)物中的正常生理ph可以為從約7.0至約7.8的任意ph。本文中使用的“凈電荷”表示存在于肽中的氨基酸所攜帶的正電荷的數(shù)目和負(fù)電荷的數(shù)目之間的平衡。在本說(shuō)明書(shū)中，應(yīng)當(dāng)理解，在生理ph測(cè)量?jī)綦姾?。在生理ph帶正電荷的天然存在的氨基酸包括l-賴氨酸、l-精氨酸和l-組氨酸。在生理ph帶負(fù)電荷的天然存在的氨基酸包括l-天冬氨酸和l-谷氨酸。通常，肽具有帶正電荷的n-端氨基和帶負(fù)電荷的c-端羧基。所述電荷在生理ph相互抵消。作為計(jì)算凈電荷的一個(gè)例子，肽tyr-d-arg-phe-lys-glu-his-trp-d-arg具有1個(gè)帶負(fù)電荷的氨基酸(即，glu)和4個(gè)帶正電荷的氨基酸(即，兩個(gè)arg殘基、一個(gè)lys和一個(gè)his)。因此，以上的肽具有3個(gè)凈正電荷。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述芳族陽(yáng)離子肽具有在生理ph的凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的關(guān)聯(lián)，其中3pm是小于或等于r+1的最大數(shù)字。在該實(shí)施方案中，凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的關(guān)聯(lián)如下：表1.氨基酸數(shù)目和凈正電荷(3pm≤p+1)(r)34567891011121314151617181920(pm)112223334445556667在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述芳族陽(yáng)離子肽具有凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的關(guān)聯(lián)，其中2pm是小于或等于r+1的最大數(shù)字。在該實(shí)施方案中，凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)(r)之間的關(guān)聯(lián)如下：表2.氨基酸數(shù)目和凈正電荷(2pm≤p+1)(r)34567891011121314151617181920(pm)22334455667788991010在一個(gè)實(shí)施方案中，所述凈正電荷的最小數(shù)目(pm)和氨基酸殘基的總數(shù)(r)是相等的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽具有3或4個(gè)氨基酸殘基和最少1個(gè)凈正電荷，適當(dāng)?shù)?，最?個(gè)凈正電荷和更優(yōu)選地最少3個(gè)凈正電荷。還重要的是，與凈正電荷的總數(shù)(pt)相比，芳族陽(yáng)離子肽具有最小數(shù)目的芳族基團(tuán)。芳族基團(tuán)的最小數(shù)目在下文稱為(a)。具有芳族基團(tuán)的天然存在的氨基酸包括氨基酸組氨酸、色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。例如，六肽lys-gln-tyr-d-arg-phe-trp具有2的凈正電荷(由賴氨酸殘基和精氨酸殘基提供)以及3個(gè)芳族基團(tuán)(由酪氨酸殘基、苯丙氨酸殘基和色氨酸殘基提供)。所述芳族陽(yáng)離子肽還應(yīng)當(dāng)具有芳族基團(tuán)的最小數(shù)目(a)和生理ph的凈正電荷的總數(shù)(pt)之間的關(guān)聯(lián)，其中3a是小于或等于pt+1的最大數(shù)字，例外是，當(dāng)pt是1時(shí)，a也可以是1。在該實(shí)施方案中，芳族基團(tuán)的最小數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)(pt)之間的關(guān)聯(lián)如下：表3.芳族基團(tuán)和凈正電荷(3a≤pt+1或a＝pt＝1)(pt)1234567891011121314151617181920(a)11112223334445556667在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述芳族陽(yáng)離子肽具有芳族基團(tuán)的最小數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)(pt)之間的關(guān)聯(lián)，其中2a是小于或等于pt+1的最大數(shù)字。在該實(shí)施方案中，芳族氨基酸殘基的最小數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)(pt)之間的關(guān)聯(lián)如下:表4.芳族基團(tuán)和凈正電荷(2a≤pt+1或a＝pt＝1)(pt)1234567891011121314151617181920(a)1122334455667788991010在另一個(gè)實(shí)施方案中，芳族基團(tuán)的數(shù)目(a)和凈正電荷的總數(shù)(pt)是相等的。羧基，尤其是c-端氨基酸的末端羧基，適當(dāng)?shù)赜美绨滨０坊?，以形成c-端酰胺?？商鎿Q地，c-端氨基酸的末端羧基可以用任意伯胺或仲胺酰胺化。所述伯胺或仲胺可以是例如烷基、尤其是支鏈或直鏈c1-c4烷基或者芳基胺。因此，在肽的c末端的氨基酸可以轉(zhuǎn)化為酰氨基、n-甲基酰氨基、n-乙基酰氨基、n,n-二甲基酰氨基、n,n-二乙基酰氨基、n-甲基-n-乙基酰氨基、n-苯基酰氨基或n-苯基-n-乙基酰氨基。未出現(xiàn)在芳族陽(yáng)離子肽的c末端的天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸和谷氨酸殘基的游離的羧酸酯基也可被酰胺化，不論它們是否存在于肽內(nèi)。這些內(nèi)部位置的酰胺化可以用氨或以上所述伯胺或仲胺中的任一種進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述芳族陽(yáng)離子肽是具有兩個(gè)凈正電荷以及至少一個(gè)芳族氨基酸的三肽。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述芳族陽(yáng)離子肽是具有兩個(gè)凈正電荷和兩個(gè)芳族氨基酸的三肽。芳族陽(yáng)離子肽包括、但不限于：下述肽實(shí)施例:在一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽具有μ-阿片(mu-opioid)受體激動(dòng)劑活性(即，它們活化μ-阿片受體)。通過(guò)與克隆的μ-阿片受體的放射性配體結(jié)合或通過(guò)利用豚鼠回腸的生物測(cè)定，可以評(píng)估μ-阿片活性(schiller等人,eur.j.med.chem.,35:895-901,2000；zhao等人,j.pharmacol.exp.ther.,307:947-954,2003)。μ-阿片受體的活化通常引起鎮(zhèn)痛作用。在某些情況下，具有μ-阿片受體激動(dòng)劑活性的芳族陽(yáng)離子肽為優(yōu)選的。例如，在短期治療期間，諸如在急性疾病或病癥中，可能有益的是，使用活化μ-阿片受體的芳族陽(yáng)離子肽。這樣的急性疾病和病癥經(jīng)常與中等疼痛或嚴(yán)重疼痛有關(guān)。在這些情況下，芳族陽(yáng)離子肽的鎮(zhèn)痛作用在人患者或其它哺乳動(dòng)物的治療方案中可能是有益的。但是，也可以根據(jù)臨床需要與鎮(zhèn)痛藥一起使用或不與鎮(zhèn)痛藥一起使用不活化μ-阿片受體的芳族陽(yáng)離子肽?？商鎿Q地，在其它情況下，不具有μ-阿片受體激動(dòng)劑活性的芳族陽(yáng)離子肽為優(yōu)選的。例如，在長(zhǎng)期治療期間，例如慢性疾病狀態(tài)或病癥中，可能禁忌使用活化μ-阿片受體的芳族陽(yáng)離子肽。在這些情況下，芳族陽(yáng)離子肽的潛在不利作用或上癮作用可能排除活化μ-阿片受體的芳族陽(yáng)離子肽在人患者或其它哺乳動(dòng)物的治療方案中的應(yīng)用。潛在不良作用可以包括鎮(zhèn)靜、便秘和呼吸抑制。在這樣的情況下，不活化μ-阿片受體的芳族陽(yáng)離子肽可以是適當(dāng)?shù)闹委?。具有?阿片受體激動(dòng)劑活性的肽通常是具有在n末端(即，第一氨基酸位置)處的酪氨酸殘基或酪氨酸衍生物的那些肽。適合的酪氨酸衍生物包括2′-甲基酪氨酸(mmt)；2′,6′-二甲基酪氨酸(2′,6′-dmt)；3′,5′-二甲基酪氨酸(3′5′dmt)；n,2′,6′-三甲基酪氨酸(tmt)；和2′-羥基-6′-甲基酪氨酸(hmt)。在一個(gè)實(shí)施方案中，具有μ-阿片受體激動(dòng)劑活性的肽具有式tyr-d-arg-phe-lys-nh2。該肽具有3個(gè)凈正電荷(由氨基酸酪氨酸、精氨酸和賴氨酸提供)，且具有2個(gè)芳族基團(tuán)(由氨基酸苯丙氨酸和酪氨酸提供)。所述酪氨酸可以是經(jīng)修飾的酪氨酸衍生物(諸如在2′,6′-二甲基酪氨酸中)，以產(chǎn)生具有式2′,6′-dmt-d-arg-phe-lys-nh2的化合物。該肽具有640的分子量，且在生理ph攜帶3個(gè)凈正電荷。所述肽可以以獨(dú)立于能量的方式容易地穿透幾種哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的質(zhì)膜(zhao等人,j.pharmacolexpther.,304:425-432,2003)。不具有μ-阿片受體激動(dòng)劑活性的肽通常不具有在n-端(即，氨基酸位置1)處的酪氨酸殘基或酪氨酸衍生物。在n-端處的氨基酸可以是除了酪氨酸以外的任意天然存在的或非天然存在的氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，在n-端處的氨基酸是苯丙氨酸或它的衍生物。示例性的苯丙氨酸衍生物包括2′-甲基苯丙氨酸(mmp)、2′,6′-二甲基苯丙氨酸(2′,6′-dmp)、n,2′,6′-三甲基苯丙氨酸(tmp)和2′-羥基-6′-甲基苯丙氨酸(hmp)。不具有μ-阿片受體激動(dòng)劑活性的芳族陽(yáng)離子肽的一個(gè)例子具有式phe-d-arg-phe-lys-nh2?？商鎿Q地，所述n-端苯丙氨酸可以是苯丙氨酸衍生物諸如2′,6′-二甲基苯丙氨酸(2′,6′-dmp)。在一個(gè)實(shí)施方案中，具有在氨基酸位置1處的2′,6′-二甲基苯丙氨酸的肽具有式2′,6′-dmp-d-arg-phe-lys-nh2。在一個(gè)實(shí)施方案中，將所述氨基酸序列重排，使得dmt不是在n-端處。這樣的不具有μ-阿片受體激動(dòng)劑活性的芳族陽(yáng)離子肽的一個(gè)例子具有式d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2。本文提到的肽和它們的衍生物可以進(jìn)一步包括功能類似物。如果一種肽具有與所描述的肽相同的功能，則將所述肽看作功能類似物。例如，該類似物可以是肽的替代變體，其中，一個(gè)或多個(gè)氨基酸被另一種氨基酸替代。肽的合適的替代變體包括保守氨基酸置換。根據(jù)氨基酸的物理化學(xué)性質(zhì)，可以將氨基酸如下分組：(a)非極性氨基酸：ala(a)ser(s)thr(t)pro(p)gly(g)cys(c)；(b)酸性氨基酸：asn(n)asp(d)glu(e)gln(q)；(c)堿性氨基酸：his(h)arg(r)lys(k)；(d)疏水性氨基酸：met(m)leu(l)ile(i)val(v)；和(e)芳族氨基酸：phe(f)tyr(y)trp(w)his(h)。肽中的氨基酸被同一組中的另一種氨基酸替代，稱為保守置換，且可以保留原始肽的物理化學(xué)性質(zhì)。相反，肽中的氨基酸被不同組中的另一種氨基酸替代，通常更可能改變?cè)茧牡男再|(zhì)?；罨?阿片受體的肽的例子包括、但不限于在表5中顯示的芳族陽(yáng)離子肽。dab＝二氨基丁酸dap＝二氨基丙酸dmt＝二甲基酪氨酸mmt＝2'-甲基酪氨酸t(yī)mt＝n,2',6'-三甲基酪氨酸hmt＝2'-羥基,6'-甲基酪氨酸dnsdap＝β-丹磺?；?l-α,β-二氨基丙酸atndap＝β-氨茴?；?l-α,β-二氨基丙酸bio＝生物素不活化μ-阿片受體的類似物的例子包括、但不限于在表6中顯示的芳族陽(yáng)離子肽。cha＝環(huán)己基丙氨酸在表5和6中顯示的肽的氨基酸可以是處于l-或d-構(gòu)型。通過(guò)本領(lǐng)域眾所周知的任何方法，可以合成所述肽。用于化學(xué)合成蛋白的合適方法包括例如stuart和young在以下文獻(xiàn)中描述的那些方法：solidphasepeptidesynthesis,第2版,piercechemicalcompany(1984)，和methodsenzymol.,289,academicpress,inc,newyork(1997)。iii.本發(fā)明技術(shù)的芳族陽(yáng)離子肽的預(yù)防和治療用途概述.本文描述的芳族陽(yáng)離子肽(諸如d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2)或其藥學(xué)上可接受的鹽(諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽)可用于預(yù)防或治療疾病或病癥。具體地，本公開(kāi)內(nèi)容提供了治療處于腎損傷風(fēng)險(xiǎn)(或易感腎損傷)的受試者的預(yù)防性和治療性方法，所述腎損傷與腎動(dòng)脈狹窄有關(guān)或與腎動(dòng)脈狹窄的治療有關(guān)。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括：對(duì)有此需要的受試者執(zhí)行血運(yùn)重建手術(shù)。在某些實(shí)施方案中，所述血運(yùn)重建手術(shù)包括經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)(ptra)。因此，本發(fā)明方法提供了通過(guò)施用有效量的芳族陽(yáng)離子肽來(lái)預(yù)防和/或治療有此需要的受試者中的腎再灌注損傷?；诜甲尻?yáng)離子肽的治療劑的生物學(xué)效應(yīng)的確定.在不同的實(shí)施方案中，進(jìn)行合適的體外測(cè)定或體內(nèi)測(cè)定來(lái)確定特定的基于芳族陽(yáng)離子肽的治療劑的效果以及其施用是否適于治療。在不同的實(shí)施方案中，可以用代表性的動(dòng)物模型進(jìn)行體外測(cè)定，以確定給定的基于芳族陽(yáng)離子肽的治療劑是否在預(yù)防或治療腎再灌注損傷中發(fā)揮期望的效果。在人受試者中試驗(yàn)之前，可以在合適的動(dòng)物模型系統(tǒng)中試驗(yàn)治療中所用的化合物，所述動(dòng)物模型系統(tǒng)包括、但不限于大鼠、小鼠、雞、豬、牛、猴、兔、綿羊、豚鼠等。類似地，對(duì)于體內(nèi)試驗(yàn)，在施用給人受試者之前，可以使用本領(lǐng)域已知的任意動(dòng)物模型系統(tǒng)。預(yù)防方法.在一個(gè)方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了一種通過(guò)將預(yù)防病癥的起始或進(jìn)展的芳族陽(yáng)離子肽施用給受試者來(lái)預(yù)防所述受試者中的腎缺血性或再灌注性損傷的方法。例如，通過(guò)如本文中所述的或如本領(lǐng)域已知的診斷或預(yù)后測(cè)定中的任一種或組合，可以鑒別處于腎再灌注損傷風(fēng)險(xiǎn)中的受試者。在預(yù)防應(yīng)用中，將芳族陽(yáng)離子肽的藥物組合物或藥物以足夠的量施用給易感疾病或病癥或者以其它方式處于疾病或病癥風(fēng)險(xiǎn)中的受試者，以消除或降低疾病或病癥的風(fēng)險(xiǎn)、減輕疾病或病癥的嚴(yán)重程度或延遲疾病或病癥的發(fā)作，包括疾病或病癥的生物化學(xué)的、組織學(xué)的和/或行為的征狀，所述疾病或病癥的并發(fā)癥和所述疾病或病癥發(fā)展期間的中間病理表型呈現(xiàn)。預(yù)防性的芳族陽(yáng)離子肽的施用可在反常的征狀特點(diǎn)顯現(xiàn)之前進(jìn)行，使得疾病或障礙得到預(yù)防或可替換地使其進(jìn)展得到延遲?？梢曰谏衔拿枋龅暮Y選測(cè)定確定合適的化合物。在某些實(shí)施方案中，預(yù)防方法包括：與一種或多種血栓溶解劑結(jié)合施用芳族陽(yáng)離子肽。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、?；问降睦w溶酶原、?；问降睦w溶酶和?；逆溂っ?纖溶酶原復(fù)合物。治療方法.本發(fā)明技術(shù)的另一個(gè)方面包括，出于治療目的通過(guò)給受試者施用芳族陽(yáng)離子肽來(lái)治療所述受試者中的腎再灌注損傷的方法。在治療性應(yīng)用中，將足夠量的組合物或藥物施用給疑似或已經(jīng)罹患這樣的疾病或病癥的受試者，以治愈或者至少部分地抑制所述疾病或病癥的征狀，包括其并發(fā)癥和所述疾病或病癥發(fā)展中的中間病理表型。這樣，所述技術(shù)提供了治療罹患腎再灌注損傷的個(gè)體的方法。在某些實(shí)施方案中，所述治療方法包括，與一種或多種活性劑結(jié)合施用芳族陽(yáng)離子肽。在某些實(shí)施方案中，肽施用是長(zhǎng)期的。在某些實(shí)施方案中，與一種或多種血栓溶解劑結(jié)合施用所述肽。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種血栓溶解劑選自：組織型纖溶酶原激活物、尿激酶、尿激酶原、鏈激酶、酰化形式的纖溶酶原、酰化形式的纖溶酶和?；逆溂っ?纖溶酶原復(fù)合物。在某些實(shí)施方案中，所述治療方法包括，與一種或多種抗高血壓劑聯(lián)合地施用芳族陽(yáng)離子肽。在某些實(shí)施方案中，所述一種或多種抗高血壓劑包括利尿劑、腎上腺素能受體拮抗劑、鈣通道阻滯劑、腎素抑制劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)抑制劑、血管緊張素ii受體拮抗劑、醛固酮拮抗劑、血管擴(kuò)張劑或α-2激動(dòng)劑。在某些實(shí)施方案中，所述利尿劑包括袢利尿劑、噻嗪利尿劑、噻嗪類利尿劑或保鉀利尿劑。在某些實(shí)施方案中，所述利尿劑包括布美他尼、依他尼酸、呋塞米、托拉塞米、依匹噻嗪、氫氯噻嗪、氯噻嗪、芐氟噻嗪、吲達(dá)帕胺、氯噻酮、美托拉宗、阿米洛利、氨苯蝶啶或螺內(nèi)酯。在某些實(shí)施方案中，所述腎上腺素能受體拮抗劑包括β阻滯劑、α阻滯劑或混合的α和β阻滯劑。在某些實(shí)施方案中，所述腎上腺素能受體拮抗劑包括阿替洛爾、美托洛爾、納多洛爾、氧烯洛爾、吲哚洛爾、普萘洛爾、噻嗎洛爾、多沙唑嗪、酚妥拉明、吲哚拉明、酚芐明、哌唑嗪、特拉唑嗪、妥拉唑林、布新洛爾、卡維地洛或拉貝洛爾。在某些實(shí)施方案中，所述鈣通道阻滯劑包括二氫吡啶或非二氫吡啶。在某些實(shí)施方案中，所述鈣通道阻滯劑包括氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、樂(lè)卡地平、尼卡地平、硝苯地平、尼莫地平、尼群地平、地爾硫卓或維拉帕米。在某些實(shí)施方案中，所述腎素抑制劑包括在某些實(shí)施方案中，所述血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ace)抑制劑包括卡托普利、依那普利、福辛普利、賴諾普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、群多普利或貝那普利。在某些實(shí)施方案中，所述血管緊張素ii受體拮抗劑包括在某些實(shí)施方案中，所述醛固酮拮抗劑包括依普利酮或螺內(nèi)酯。在某些實(shí)施方案中，所述血管擴(kuò)張劑拮抗劑包括硝普鈉或肼屈嗪。在某些實(shí)施方案中，所述α-2激動(dòng)劑拮抗劑包括可樂(lè)定、胍那芐、甲基多巴、莫索尼定、胍乙啶或利舍平。v.施用模式和有效劑量可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的用于使細(xì)胞、器官或組織與肽接觸的任何方法。適當(dāng)?shù)姆椒òw外法、離體法或體內(nèi)法。體內(nèi)法通常包括將芳族陽(yáng)離子肽(諸如上文描述的那些)施用給哺乳動(dòng)物，所述哺乳動(dòng)物適當(dāng)?shù)貫槿?。?dāng)在體內(nèi)用于治療時(shí)，可以將芳族陽(yáng)離子肽以有效量(即具有期望的治療效果的量)施用給受試者。劑量和施用方案將取決于受試者中的損傷的程度、所使用的特定芳族陽(yáng)離子肽的性質(zhì)(例如其治療指數(shù))、受試者以及受試者的病史?？梢栽谂R床前試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)期間通過(guò)內(nèi)科醫(yī)師和臨床醫(yī)師熟悉的方法確定有效量。通過(guò)用于施用藥物化合物的許多眾所周知的方法中的任一種方法，可以將有效量的在所述方法中有用的肽施用給有此需要的哺乳動(dòng)物?？梢匀硇缘鼗蚓植康厥┯盟鲭?。所述肽可以配制成藥學(xué)上可接受的鹽。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指由可接受用于施用給諸如患者(諸如哺乳動(dòng)物)的堿或酸制備成的鹽(例如，對(duì)于給定的劑量方案，具有可接受的哺乳動(dòng)物安全性的鹽)。但是，應(yīng)當(dāng)理解，不要求所述鹽是藥學(xué)上可接受的鹽，例如不意圖施用給患者的中間化合物的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽可以從藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿以及從藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸衍生出。此外，當(dāng)肽包含堿性部分(諸如胺、吡啶或咪唑)和酸性部分(諸如羧酸或四唑)時(shí)，可以形成兩性離子，且所述兩性離子被包括在本文中所用的術(shù)語(yǔ)“鹽”中。從藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)堿衍生出的鹽包括銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、三價(jià)錳鹽、二價(jià)錳鹽、鉀鹽、鈉鹽和鋅鹽等。從藥學(xué)上可接受的有機(jī)堿衍生出的鹽包括伯胺鹽、仲胺鹽和叔胺鹽，包括被取代的胺、環(huán)胺、天然存在的胺等，諸如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、n,n'-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基嗎啉、n-乙基哌啶、還原葡糖胺、葡糖胺、組氨酸、哈胺(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、甲基還原葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶(piperadine)、多胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。從藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸衍生出的鹽包括硼酸、碳酸、氫鹵酸(氫溴酸、鹽酸、氫氟酸或氫碘酸)、硝酸、磷酸、氨基磺酸和硫酸的鹽。從藥學(xué)上可接受的有機(jī)酸衍生出的鹽包括脂族羥基酸(例如，檸檬酸、葡糖酸、羥乙酸、乳酸、乳糖酸、蘋果酸和酒石酸)的鹽、脂族單羧酸(例如，乙酸、丁酸、甲酸、丙酸和三氟乙酸)的鹽、氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨基酸)的鹽、芳族羧酸(例如，苯甲酸、對(duì)氯苯甲酸、二苯乙酸、龍膽酸、馬尿酸和三苯基乙酸)的鹽、芳族羥基酸(例如，鄰羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯甲酸、1-羥基萘-2-甲酸和3-羥基萘-2-甲酸)的鹽、抗壞血酸鹽、二羧酸(例如，富馬酸、馬來(lái)酸、草酸和琥珀酸)的鹽、葡萄糖醛酸鹽、扁桃酸鹽、粘酸鹽、煙酸鹽、乳清酸鹽、撲酸鹽、泛酸鹽、磺酸(例如，苯磺酸、樟腦磺酸、乙二磺酸、乙磺酸、羥乙磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸和對(duì)甲苯磺酸)的鹽、羥萘甲酸的鹽等。在某些實(shí)施方案中，所述鹽是乙酸鹽或三氟乙酸鹽。本文描述的芳族陽(yáng)離子肽(諸如d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2)或其藥學(xué)上可接受的鹽(諸如乙酸鹽或三氟乙酸鹽)可以摻入到藥物組合物中用于單獨(dú)地或聯(lián)合地施用給受試者，以治療或預(yù)防本文中描述的障礙。這樣的組合物通常包括活性劑和藥學(xué)上可接受的載體。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”包括與藥物施用相容的鹽水、溶劑、分散介質(zhì)、包衣劑、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。還可將補(bǔ)充性活性化合物摻入所述組合物中。通常將藥物組合物配制成與其預(yù)期施用途徑相容。施用途徑的例子包括胃腸外的(例如，靜脈內(nèi)的、真皮內(nèi)的、腹膜內(nèi)的或皮下的)、口服的、吸入、透皮的(局部的)、眼內(nèi)的、離子電滲療法和透粘膜的施用。用于胃腸外、真皮內(nèi)或皮下應(yīng)用的溶液或混懸液可以包括以下組分：無(wú)菌稀釋劑諸如注射用水、鹽水溶液、不揮發(fā)性油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其它合成溶劑；抗細(xì)菌劑諸如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑諸如乙二胺四乙酸；緩沖劑諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及用于調(diào)節(jié)張度的試劑，諸如氯化鈉或葡萄糖。可以用酸或堿(諸如鹽酸或氫氧化鈉)調(diào)節(jié)ph?？梢詫⑽改c外制劑包封在由玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多次劑量瓶中。為了患者或治療醫(yī)師的方便，可以在含有療程(例如治療7天)所需的所有必要設(shè)備(例如，藥物瓶、稀釋劑瓶、注射器和針頭)的試劑盒中提供定量給藥制劑。適合于注射應(yīng)用的藥物組合物可以包括無(wú)菌水溶液(在水溶性的情況下)或者用于即時(shí)制備無(wú)菌注射液或分散液的分散體和無(wú)菌粉劑。就靜脈內(nèi)施用而言，合適的載體包括生理鹽水、抑制細(xì)菌的水、cremophoreltm(basf,parsippany,n.j.)或磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)。在所有情況下，用于胃腸外施用的組合物必須是無(wú)菌的，并且應(yīng)當(dāng)是達(dá)到易于注射的程度的流體。它應(yīng)當(dāng)在制備和貯存條件下是穩(wěn)定的，且必須被保存免于微生物(諸如細(xì)菌和真菌)的污染作用。所述芳族陽(yáng)離子肽組合物可以包括載體，所述載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其包括例如水、乙醇、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇以及液態(tài)聚乙二醇等)及其合適的組合物。可以維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性，例如，通過(guò)使用包衣劑諸如卵磷脂通過(guò)維持所需的粒度(在分散系的情況下)和通過(guò)使用表面活性劑。通過(guò)各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑(例如，對(duì)羥基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等)可以實(shí)現(xiàn)微生物作用的預(yù)防?？梢园ü入赘孰暮推渌寡趸瘎┮苑乐寡趸?。在很多情況下，優(yōu)選的是，在所述組合物中包括等滲劑，例如，糖、多元醇諸如甘露醇、山梨醇或氯化鈉。通過(guò)在組合物中包括延遲吸收的試劑(例如，單硬脂酸鋁或明膠)，可以實(shí)現(xiàn)可注射組合物的延長(zhǎng)吸收?？梢匀缦轮苽錈o(wú)菌可注射溶液：將所需量的活性化合物摻入到含有一種或多種以上列出的成分的適當(dāng)溶劑中，根據(jù)需要然后過(guò)濾除菌。通常，如下制備分散體：將活性化合物摻入到無(wú)菌媒介物中，后者含有基本分散介質(zhì)以及所需的以上列出的其它成分。就用于制備無(wú)菌可注射溶液的無(wú)菌粉末而言，典型的制備方法包括真空干燥和冷凍干燥，這可以產(chǎn)生活性成分以及來(lái)自于先前無(wú)菌過(guò)濾的其溶液的任何額外期望成分的粉末。口服組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用的載體。為了口服治療施用的目的，可以將活性化合物與賦形劑摻合，并以片劑、糖錠或膠囊劑(例如明膠膠囊劑)的形式使用。還可以使用流體載體來(lái)制備口服組合物，以用作漱口液?？梢园ㄋ帉W(xué)上適合的粘合劑和/或輔料，作為組合物的一部分。片劑、丸劑、膠囊劑、錠劑等可含有任意下述成分或相似性質(zhì)的化合物：粘合劑諸如微晶纖維素、黃蓍樹(shù)膠或明膠；賦形劑諸如淀粉或乳糖；崩解劑諸如海藻酸、primogel或玉米淀粉；潤(rùn)滑劑諸如硬脂酸鎂或或sterotes；助流劑諸如膠體二氧化硅；甜味劑諸如蔗糖或糖精；或矯味劑諸如薄荷、水楊酸甲酯或橙味矯味劑。對(duì)于吸入給藥，可以以來(lái)自含有合適推進(jìn)劑(例如，諸如二氧化碳等氣體)的加壓容器或分配器或者噴霧器的氣溶膠噴霧的形式遞送所述化合物。這樣的方法包括在美國(guó)專利號(hào)6,468,798中描述的方法。本文中描述的治療化合物的全身施用還可以是通過(guò)透粘膜或透皮方式。關(guān)于透粘膜或透皮給藥，在制劑中使用適合要滲透的屏障的穿透劑。該穿透劑是本領(lǐng)域中普遍已知的，并且對(duì)于透粘膜給藥而言，包括例如去污劑、膽汁鹽和夫西地酸衍生物。通過(guò)使用鼻腔噴霧劑，可以完成透粘膜施用。對(duì)于透皮給藥，將活性化合物配制成本領(lǐng)域普遍已知的軟膏劑、油膏劑、凝膠或乳膏劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，透皮施用可以通過(guò)離子透入法來(lái)進(jìn)行?？梢詫⒅委熜缘鞍踪|(zhì)或肽配制在載體系統(tǒng)中。所述載體可以是膠體系統(tǒng)。所述膠體系統(tǒng)可以是脂質(zhì)體，即磷脂雙層媒介物。在一個(gè)實(shí)施方案中，將治療性肽包囊在脂質(zhì)體中，同時(shí)保持肽完整性。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，存在多種制備脂質(zhì)體的方法(參見(jiàn)lichtenberg等人,methodsbiochem.anal.,33:337-462(1988)；anselem等人,liposometechnology,crcpress(1993))。脂質(zhì)體制劑可以延遲清除并增加細(xì)胞攝取(參見(jiàn)reddy,ann.pharmacother.,34(7-8):915-923(2000))。還可以將活性劑載入到由藥學(xué)上可接受的成分制成的顆粒中，所述成分包括、但不限于可溶性的、不溶性的、可滲透的、不可滲透的、可生物降解的或胃滯留的聚合物或脂質(zhì)體。這樣的顆粒包括、但不限于：納米顆粒、可生物降解的納米顆粒、微粒、可生物降解的微粒、納米球、可生物降解的納米球、微球、可生物降解的微球、膠囊劑、乳劑、脂質(zhì)體、膠束和病毒載體系統(tǒng)。所述載體還可以是聚合物，例如，可生物降解的、生物相容的聚合物基質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以將治療性肽嵌入到聚合物基質(zhì)中，同時(shí)保持蛋白質(zhì)完整性。所述聚合物可以是天然的(諸如多肽、蛋白或多糖)或合成的(諸如聚α-羥酸)。例子包括由例如以下物質(zhì)制成的載體：膠原、纖連蛋白、彈性蛋白、醋酸纖維素、硝酸纖維素、多糖、纖維蛋白、明膠和它們的組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述聚合物是聚乳酸(pla)或乳酸/羥乙酸共聚物(pgla)。可以以各種形式和尺寸(包括微球和納米球)來(lái)制備并分離聚合物基體。聚合物制劑可以導(dǎo)致延長(zhǎng)的治療效果持續(xù)時(shí)間(參見(jiàn)reddy,ann.pharmacother.,34(7-8):915-923(2000))。人生長(zhǎng)激素(hgh)的聚合物制劑已用在臨床試驗(yàn)中(參見(jiàn)kozarichandrich,chemicalbiology,2:548-552(1998))。聚合物微球持續(xù)釋放制劑的例子描述在以下文獻(xiàn)中：pct公開(kāi)wo99/15154(tracy等人.)，美國(guó)專利號(hào)5,674,534和5,716,644(都授權(quán)給zale等人)，pct公開(kāi)wo96/40073(zale等人)，和pct公開(kāi)wo00/38651(shah等人)。美國(guó)專利號(hào)5,674,534和5,716,644和pct公開(kāi)wo96/40073描述了含有促紅細(xì)胞生成素顆粒的聚合物基質(zhì)，所述顆粒用鹽來(lái)穩(wěn)定以防聚集。在某些實(shí)施方案中，與載體一起制備治療化合物，所述載體將保護(hù)所述治療化合物以防止其從身體快速清除，諸如控釋制劑，其包括植入物和微囊化的遞送系統(tǒng)?？梢允褂每缮锝到獾?、生物相容的聚合物，諸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯和聚乳酸。可以使用已知的技術(shù)制備這樣的制劑。還可以商業(yè)獲得所述材料，例如從alzacorporation和novapharmaceuticals,inc.。脂質(zhì)體混懸液(包括靶向具有針對(duì)細(xì)胞特異性抗原的單克隆抗體的特定細(xì)胞的脂質(zhì)體)也可用作藥學(xué)上可接受的載體。這些可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來(lái)制備，例如在美國(guó)專利號(hào)4,522,811中描述的方法。還可以配制所述治療性化合物以增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)遞送。例如，脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)是本領(lǐng)域已知的,參見(jiàn)，例如，chonn和cullis,“recentadvancesinliposomedrugdeliverysystems,”currentopinioninbiotechnology6:698-708(1995)；weiner,“l(fā)iposomesforproteindelivery:selectingmanufactureanddevelopmentprocesses,”immunomethods,4(3):201-9(1994)；和gregoriadis,“engineeringliposomesfordrugdelivery:progressandproblems,”trendsbiotechnol.,13(12):527-37(1995)。mizguchi等人,cancerlett.,100:63-69(1996)描述了融合脂質(zhì)體在體內(nèi)和在體外將蛋白質(zhì)遞送給細(xì)胞的用途。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)規(guī)程，可以確定治療劑的劑量、毒性和治療效果，例如，用于確定ld50(對(duì)群體中的50％致命的劑量)和ed50(對(duì)群體中的50％治療上有效的劑量)。毒性和療效之間的劑量比是治療指數(shù)，且它可以表示為比率ld50/ed50。表現(xiàn)出高治療指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。盡管可以使用具有毒性副作用的化合物，但應(yīng)當(dāng)小心地設(shè)計(jì)將這樣的化合物靶向受影響的組織部位的遞送系統(tǒng)，以便使對(duì)未受感染的細(xì)胞的潛在損傷最小化，且由此減少副作用。從細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定和動(dòng)物研究獲取的數(shù)據(jù)可以用在配制人類使用的劑量范圍中。這樣的化合物的劑量?jī)?yōu)選地在包括ed50又幾乎沒(méi)有或沒(méi)有毒性的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。根據(jù)所用劑型和所用給藥途徑，劑量可以在此范圍內(nèi)變化。對(duì)于該方法中使用的任何化合物而言，可以首先從細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定估測(cè)治療有效劑量?？梢栽趧?dòng)物模型中配制劑量來(lái)獲得包括如在細(xì)胞培養(yǎng)物中確定的ic50(即，達(dá)到征狀的半數(shù)最大抑制時(shí)的試驗(yàn)化合物濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。這樣的信息可以用來(lái)更準(zhǔn)確地確定在人類中有用的劑量?？梢岳缤ㄟ^(guò)高效液相色譜法來(lái)測(cè)量血漿的水平。通常，芳族陽(yáng)離子肽的足以實(shí)現(xiàn)治療或預(yù)防效果的有效量的范圍為約0.000001mg/千克體重/天至約10,000mg/千克體重/天。優(yōu)選地，劑量范圍為約0.0001mg/千克體重/天至約100mg/千克體重/天。例如，劑量可以是每天、每?jī)商旎蛎咳?mg/kg體重或10mg/kg體重，或者在每周、每?jī)芍芑蛎咳?-10mg/kg的范圍內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，肽的單次劑量的范圍為0.1-10,000微克/千克體重。在一個(gè)實(shí)施方案中，在載體中的芳族陽(yáng)離子肽濃度的范圍為每遞送的1毫升中的0.2-2000微克。一個(gè)示例性的治療方案需要每天1次或每周1次的施用。在治療應(yīng)用中，有時(shí)需要在相對(duì)較短的時(shí)間間隔中的相對(duì)較高的劑量，直到疾病的進(jìn)程減緩或終止，且優(yōu)選地直到受試者顯示出疾病征狀的部分或完全改善。此后，可以給患者施用預(yù)防性方案。在某些實(shí)施方案中，可以將芳族陽(yáng)離子肽的治療有效量定義為10-12至10-6摩爾(例如，約10-7摩爾)的靶組織處的肽濃度?？梢砸?.01-100mg/kg的全身劑量或按體表面積計(jì)算的等效劑量來(lái)遞送該濃度?？梢詢?yōu)化劑量的時(shí)間表，以保持靶組織的治療劑濃度，最優(yōu)選地通過(guò)每天或每周單次施用，但也包括連續(xù)施用(例如，胃腸外輸注或透皮應(yīng)用)。在某些實(shí)施方案中，以“低”、“中”或“高”劑量水平提供所述芳族陽(yáng)離子肽的劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供約0.01至約0.5mg/kg/h、適當(dāng)?shù)丶s0.0001至約0.1mg/kg/h的低劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供約0.001至約1.0mg/kg/h、適當(dāng)?shù)丶s0.01至約0.5mg/kg/h的中劑量。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供約0.005至約10mg/kg/h、適當(dāng)?shù)丶s0.01至約2mg/kg/h的高劑量。技術(shù)人員會(huì)明白，某些因素可能影響有效地治療受試者所需的劑量和時(shí)機(jī)選擇，包括、但不限于疾病或障礙的嚴(yán)重程度、先前的治療、受試者的一般健康和/或年齡、以及存在的其它疾病。此外，用本文描述的治療有效量的治療組合物來(lái)治療受試者可以包括單次治療或一系列治療。根據(jù)本發(fā)明方法治療的哺乳動(dòng)物可以是任何哺乳動(dòng)物，包括、例如，家畜，諸如綿羊、豬、牛和馬；寵物動(dòng)物，諸如狗和貓；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，諸如大鼠、小鼠和兔。在一個(gè)合適的實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物是人。v.與腎動(dòng)脈狹窄有關(guān)的腎損傷的測(cè)量成像技術(shù)可用于評(píng)估本發(fā)明技術(shù)的肽對(duì)腎再灌注損傷的影響。例如，通過(guò)ct、微-ct或mri，可以使腎微脈管系統(tǒng)體系結(jié)構(gòu)顯影?？商鎿Q地，使用與本文所述的方法相容的本領(lǐng)域已知的方法，可以評(píng)估腎微脈管系統(tǒng)體系結(jié)構(gòu)。成像方法可用于評(píng)價(jià)腎微脈管系統(tǒng)密度和迂曲度以及平均血管直徑。額外地或可替換地，通過(guò)測(cè)量腎功能的不同參數(shù)，包括、但不限于，動(dòng)脈壓、腎容量、腎血流量、腎氧合和腎小球?yàn)V過(guò)率，可以評(píng)價(jià)腎再灌注損傷。用于測(cè)量這些參數(shù)的方法是本領(lǐng)域已知的，包括、但不限于血氧水平依賴性的磁共振成像(bold-mri)和多檢測(cè)器計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(mdct)。額外地或可替換地，通過(guò)體外方法，包括、但不限于，測(cè)量細(xì)胞凋亡、腎形態(tài)學(xué)(包括炎癥和纖維化)和腎氧化性應(yīng)激，可以評(píng)估腎再灌注損傷。使用本領(lǐng)域已知的方法，例如，通過(guò)末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶dutp切口末端標(biāo)記(tunel)檢測(cè)dna片段化，檢測(cè)半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶活化，和檢測(cè)促細(xì)胞凋亡蛋白諸如bcl-xl和bax，可以評(píng)估細(xì)胞凋亡。使用本領(lǐng)域已知的方法，包括、但不限于，蘇木精和伊紅(h&e)染色、三色染色以及檢測(cè)cd163、mmp-9、pai-1、mcp-1、vegf、tnf-α、tgf-β和vegr1水平，可以檢測(cè)腎形態(tài)學(xué)，包括炎癥和纖維化。通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法，包括、但不限于，測(cè)量異前列腺素、超氧化物、nad(p)h氧化酶、dhe、mncuzn-sod、no合酶、血紅素加氧酶和血漿硝酸鹽/亞硝酸鹽水平，可以測(cè)量氧化性應(yīng)激。實(shí)施例以下實(shí)施例進(jìn)一步例證本發(fā)明技術(shù)，所述實(shí)施例不應(yīng)以任何方式解釋為限制的。如上面所指出的，缺血可以導(dǎo)致微脈管系統(tǒng)的顯著變化，所述變化會(huì)干擾通向許多組織/器官的正常血流量。這樣，缺血/再灌注現(xiàn)象可以發(fā)生在多種組織/器官中，包括心臟、肝臟、腦、皮膚、骨骼肌、腎臟等。預(yù)見(jiàn)到，本發(fā)明技術(shù)的芳族陽(yáng)離子肽可用在預(yù)防或治療多種組織/器官的缺血/再灌注損傷的方法中。另外預(yù)見(jiàn)到，本發(fā)明技術(shù)的芳族陽(yáng)離子肽可用在arvd的長(zhǎng)期治療方法中。實(shí)施例1通過(guò)施用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2來(lái)減輕豬腎動(dòng)脈粥樣硬化性動(dòng)脈狹窄(aras)中的經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)(ptra)以后的腎損傷.a.簡(jiǎn)介本實(shí)施例證實(shí)了芳族陽(yáng)離子肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2在預(yù)防和治療與腎動(dòng)脈粥樣硬化性動(dòng)脈狹窄(aras)有關(guān)的腎損傷中的用途。根據(jù)本發(fā)明方法，使動(dòng)物受試者遭受一段時(shí)間的aras，隨后通過(guò)經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)(ptra)進(jìn)行腎血運(yùn)重建。與ptra聯(lián)合地將芳族陽(yáng)離子肽施用給受試者，包括在血運(yùn)重建手術(shù)之前和之后的確定時(shí)間段。對(duì)照動(dòng)物要么接受輸注，要么接受單獨(dú)對(duì)照媒介物的輸注。與對(duì)照受試者相比，在接受所述肽的受試者中腎功能的多個(gè)方面得到改善，包括腎容量、腎血流量、腎小球?yàn)V過(guò)率、腎微脈管系統(tǒng)密度、平均血管直徑、血管迂曲度和腎氧合。所述肽的施用也減少了早期腎炎癥、細(xì)胞凋亡、纖維化和氧化性應(yīng)激。結(jié)果證實(shí)，肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2可用在用于治療或預(yù)防與血運(yùn)重建有關(guān)的腎損傷的方法中，所述血運(yùn)重建在aras的治療中通過(guò)ptra實(shí)現(xiàn)。b.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)概述實(shí)驗(yàn)時(shí)間線的總結(jié)顯示在表7和圖1中。所有實(shí)驗(yàn)根據(jù)指南進(jìn)行，并得到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)管理小組(institutionalanimalcareandusecommittee，iacuc)的批準(zhǔn)。受試者包括馴養(yǎng)的幼齡雌性受試者(mantheihogfarm,llc,mn)，觀察16周(圖1)。在基線時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)化成正常組(n＝7)或aras組(n＝21)。給正常動(dòng)物飼喂正常豬食，給aras受試者飼喂高膽固醇飲食(td-93296,harlan-teklad,indianapolis,in,usa)，后者誘導(dǎo)彌散性早期動(dòng)脈粥樣硬化，其特征在于升高的膽固醇水平和腎功能損害、ras腎中的炎癥和纖維化，如前面所示。參見(jiàn)表8。6周時(shí)段以后，aras受試者發(fā)生單側(cè)ras(通過(guò)將局部刺激線圈放入腎動(dòng)脈主干中來(lái)誘導(dǎo))，而對(duì)正常動(dòng)物假手術(shù)。為了麻醉，用肌肉內(nèi)注射的氯胺酮和賽拉嗪(0.5g)誘導(dǎo)動(dòng)物，并用靜脈內(nèi)的氯胺酮(0.2mg/kg/min)和賽拉嗪(0.03mg/kg/min)維持麻醉。將遙測(cè)系統(tǒng)(datasciencesinternational,stpaul,minnesota,usa)植入左股動(dòng)脈中，以在接下來(lái)的10周中連續(xù)測(cè)量平均動(dòng)脈壓(map)。誘導(dǎo)ras以后6周，類似地麻醉動(dòng)物，通過(guò)血管造影術(shù)確定狹窄的程度，并用ptra或假手術(shù)治療受試者。在外科手術(shù)期間，加熱墊維持動(dòng)物的體溫在約37℃，并如以前所述在熒光透視導(dǎo)引下進(jìn)行ptra和支架。另外，從ptra或假手術(shù)之前30min至之后3.5小時(shí)，用肽0.050mg/kg或等體積的鹽水媒介物的連續(xù)靜脈內(nèi)輸注治療aras受試者。在基線(即將肽輸注之前)、再灌注后30分鐘和再灌注后180分鐘，收集下腔靜脈(ivc)樣品用于藥代動(dòng)力學(xué)分析以及用于炎癥性生物標(biāo)志物和損傷生物標(biāo)志物。在肽輸注之前和ptra后210min，收集尿樣品。4周后，再次類似地麻醉受試者，并通過(guò)血管造影術(shù)確定狹窄的程度。收集ivc樣品用于pra、肌酸酐和膽固醇測(cè)量。收集尿樣品以定量白蛋白濃度(elisa,bethyllaboratories,texas)。使用多檢測(cè)器計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(mdct)，評(píng)估每個(gè)腎中的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能。完成體內(nèi)研究后3天，將動(dòng)物用戊巴比妥鈉(100mg/kg,fortdodgelaboratories,fortdodge,iowa,usa)安樂(lè)死。取出腎臟，切開(kāi)，并準(zhǔn)備用于離體研究。從正常動(dòng)物收獲腎動(dòng)脈，并將分離的環(huán)懸浮于裝有kreb氏溶液的器官室中，以評(píng)價(jià)響應(yīng)于肽的血管反應(yīng)性。離體評(píng)價(jià)線粒體生源說(shuō)、微血管體系結(jié)構(gòu)、細(xì)胞凋亡、血管生成、炎癥、氧化性應(yīng)激、腎小管損傷和纖維化。進(jìn)行mdct研究，用于評(píng)估單腎腎血液動(dòng)力學(xué)和功能。在中央靜脈注射碘帕醇(每2秒0.5ml/kg)以后，進(jìn)行140次連續(xù)掃描。用analyzetm軟件包(biomedicalimagingresource,mayoclinic,rochester,mn)重構(gòu)并分析橫截面圖像。如以前詳細(xì)描述地評(píng)價(jià)皮質(zhì)和髓質(zhì)體積和灌注、rbf和gfr。c.方法藥代動(dòng)力學(xué)分析在基線(即將肽輸注之前)、即將ptra之前以及再灌注后30和180min，從肽治療的動(dòng)物收集4ml靜脈全血樣品。使用注射器，將靜脈血抽入含有k2edta的bdpsttmplasmaseparationtubes(淡紫色帽)中，10ml/管。將試管輕輕反轉(zhuǎn)8次，并在離心之前保持在冰水浴中。在1小時(shí)內(nèi)，將樣品在擺動(dòng)桶離心機(jī)中在4℃在1000-1300rcf(或約1500xg)離心15min。從各個(gè)血液試管收獲血漿，放在單個(gè)聚丙烯瓶(或螺旋帽試管)中，并在測(cè)定之前在約-80℃保存。使用合格的lc/ms/ms測(cè)定，在k2-edta豬血漿中確定d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的血漿濃度。所述測(cè)定采用氘標(biāo)記的d5-d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2作為分析內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品(is)。簡(jiǎn)而言之，給樣品摻入內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)蛋白沉淀提取(回收率約90％)進(jìn)行處理，并使用具有turboionms/ms檢測(cè)的反相hplc進(jìn)行分析。以mrm模式監(jiān)測(cè)d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2和is(d5-d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2)的陽(yáng)(m+2h)2+離子。使用標(biāo)準(zhǔn)品的藥物與is峰面積比建立在2.5-1000ng/ml范圍內(nèi)的線性校正曲線。測(cè)定精確度的天之間變動(dòng)系數(shù)為小于10％，且準(zhǔn)確度范圍為3.6-11.8％。炎癥性標(biāo)志物和損傷標(biāo)志物在基線(肽輸注之前)和ptra后30min和180min，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(elisa)，測(cè)量腫瘤壞死因子-α(tnf-α)(invitrogen,目錄號(hào)ksc3011)、白介素-1β(il-1β)(r&dsystemsdy681)、單核細(xì)胞趨化蛋白(mcp-1)(kingfisherbiotech,目錄號(hào)vs0081s-002)、粒細(xì)胞集落刺激因子(g-csf)(novateinbio.目錄號(hào)bg-por11157)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(tgf-β)的ivc水平。類似地，在基線和ptra后210min時(shí)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程測(cè)量血清肌酸酐水平(基線、ptra后30min和180min)以及8-表-異前列腺素和蛋白的尿水平。血管反應(yīng)性在如前所述的切開(kāi)的腎動(dòng)脈段(得自正常動(dòng)物，懸浮于裝有kreb氏溶液的器官室中)中，評(píng)價(jià)針對(duì)肽(或媒介物)的血管收縮應(yīng)答和血管擴(kuò)張應(yīng)答。在37℃(ph＝7.4、95％o2和5％co2)，將切開(kāi)的腎動(dòng)脈段(2-3mm長(zhǎng)，2段/動(dòng)物)懸浮于裝有kreb氏溶液的25ml器官室中。通過(guò)懸浮腎動(dòng)脈段(使用2個(gè)穿過(guò)它們的內(nèi)腔連接至靜止柱的不銹夾和應(yīng)變規(guī))，測(cè)量等長(zhǎng)力。通過(guò)使用氯化鉀(kcl,20mm)，逐漸拉伸血管環(huán)，以達(dá)到它們的長(zhǎng)度-張力關(guān)聯(lián)的最佳點(diǎn)。一旦確定最佳張力，在用控制溶液洗滌以后允許血管環(huán)平衡30分鐘。在4個(gè)血管環(huán)中，施用遞增劑量的肽(10-9m至10-4m)來(lái)試驗(yàn)血管收縮應(yīng)答的存在。在其它4個(gè)環(huán)中，在用內(nèi)皮縮血管肽-1(10-7m)(phoenixpharmaceuticals,mountainview,ca,usa)預(yù)收縮以后施用遞增劑量的肽，以評(píng)價(jià)內(nèi)皮松弛。使用windaqacquisitionsoftware(dataqinstruments,inc.akron,oh,usa)將數(shù)據(jù)量化。細(xì)胞凋亡和線粒體生源說(shuō)在用tunel(promega,madison,wi,usa)和半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶-3(1:200,santacruzbiotechnology,santacruz,ca,usa)染色的腎組織切片中，評(píng)估細(xì)胞凋亡。另外，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡，評(píng)價(jià)細(xì)胞凋亡染色調(diào)節(jié)劑蛋白bcl-2(lifespanbiosciences,seattle,wa,usa；1:1000)和bax(santacruzbiotechnology,1:200)的腎蛋白表達(dá)。通過(guò)pgc-1α(abcam,1:1000)、nrf-1(abcam,cambridge,ma,usa；1:300)、gabp(abcam,1:1000)、ppar-α(abcam,1:1000)、ppar-δ(abcam,1:300)、ho-1(abcam,1:250)和sirt-1(abcam,1:1000)的腎表達(dá)，評(píng)價(jià)線粒體生源說(shuō)。微血管體系結(jié)構(gòu)和血管生成為了評(píng)價(jià)微血管體系結(jié)構(gòu)，在生理灌注壓力下給腎灌注不透射線的有機(jī)硅聚合物(microfilmv122；flowtech,carver,ma,usa)。使用微-ct掃描儀掃描經(jīng)灌注的腎切片，并使用analyzetm顯示重構(gòu)的圖像(18μm體素)。如前所述，計(jì)算腎皮質(zhì)微血管(直徑40-500μm)的空間密度、平均直徑和迂曲度。另外，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡，測(cè)量vegf和它的受體(vegfr-1和2)(santacruzbiotechnology；1:200)的腎蛋白表達(dá)。腎形態(tài)學(xué)和纖維化使用計(jì)算機(jī)輔助的圖像分析程序axio4.8.2.0(carlzeisssmt,oberkochen,德國(guó))，在用masson氏三色染色的每個(gè)腎的5μm中肝門(mid-hilar)橫截面中評(píng)估腎纖維化。在15-20個(gè)視野中定量管間質(zhì)纖維化和腎小球評(píng)分(100個(gè)腎小球中發(fā)生硬化的百分比)。另外，以不知情方式在用過(guò)碘酸-希夫(pas)染色的切片中對(duì)腎小管損傷評(píng)分。簡(jiǎn)而言之，將腎小管損傷(膨脹、萎縮、結(jié)石形成、細(xì)胞脫離或管基膜增厚)評(píng)分為1-5，0為正常腎小管，1:<10％的腎小管受損，2:10-25％的腎小管受損，3:26-50％的腎小管受損，4:51-75％的腎小管受損，5:>75％的腎小管受損。炎癥和氧化性應(yīng)激在用mcp-1或cd163(腎巨噬細(xì)胞的定量)染色的組織切片中，并通過(guò)從蛋白質(zhì)印跡測(cè)得的tnf-α(santacruzbiotechnology；1:200)的蛋白表達(dá)，評(píng)估腎炎癥。通過(guò)腎組織的二氫溴化乙啶(dhe)染色、8-表-異前列腺素(eia試劑盒)、nadph-氧化酶亞基p47的腎蛋白表達(dá)(santacruz1:200)和硝基酪氨酸(caymanchemicalco.,annarbor,mi,usa；1:200)的全身水平，評(píng)估氧化性應(yīng)激。統(tǒng)計(jì)方法使用jmp軟件包8.0版(sasinstituteinc.,cary,nc,usa)，分析所有數(shù)據(jù)。使用shapiro-wilk檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)相對(duì)于正常性的偏差。對(duì)于正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，將結(jié)果表達(dá)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(sd)，對(duì)于非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，將結(jié)果表達(dá)為中間值(范圍)。在適當(dāng)時(shí)使用參數(shù)(anova和不成對(duì)的studentt-檢驗(yàn))和非參數(shù)(wilcoxon和kruskalwallis)檢驗(yàn)。認(rèn)為p≤0.05的值是統(tǒng)計(jì)上顯著的。d.結(jié)果ras的誘導(dǎo)和減輕在誘導(dǎo)ras以后6周和血運(yùn)重建之前，在所有aras動(dòng)物中達(dá)到了顯著的狹窄程度(77.5％(65-95％))，并且平均動(dòng)脈壓(map)類似地升高(相對(duì)于正常，p<0.05)(圖3a)。在ptra過(guò)程中肽的循環(huán)水平和損傷信號(hào)在輸注后30min之前，全身血漿肽濃度增加至治療水平(約100ng/ml)，并隨后在輸注后60-90分鐘達(dá)到表觀穩(wěn)態(tài)濃度直到輸注結(jié)束(表9)。在aras+ptra+媒介物和aras+ptra+肽動(dòng)物(圖1b，相對(duì)于基線，二者p<0.05)中，單核細(xì)胞趨化蛋白(mcp-1)的全身血漿水平在血運(yùn)重建以后類似地增加。腫瘤壞死因子(tnf)-α、白介素(il)-1β、粒細(xì)胞集落刺激因子(g-csf)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(tgf)-β和肌酸酐的全身水平在血運(yùn)重建以后保持不變(圖1c-g)，尿蛋白和8-表-異前列腺素水平也是如此(圖2a-b)。藥代動(dòng)力學(xué)分析以0.05mg/kg/h，在ptra手術(shù)之前30分鐘開(kāi)始肽靜脈內(nèi)輸注，并持續(xù)210分鐘。在輸注30分鐘時(shí)(即ptra手術(shù)的時(shí)間)的平均血漿濃度為100.6ng/ml(表7)。血漿濃度繼續(xù)增加，在約60-90分鐘達(dá)到表觀穩(wěn)態(tài)濃度(約125ng/ml)，并維持穩(wěn)態(tài)水平至輸注結(jié)束。血管反應(yīng)性暴露于遞增劑量的d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的分離的腎動(dòng)脈環(huán)沒(méi)有表現(xiàn)出直徑的變化(圖2c-d)。該結(jié)果提示，所述肽既不會(huì)誘導(dǎo)血管收縮也不會(huì)誘導(dǎo)血管舒張。ptra以后4周的腎功能和結(jié)構(gòu)表8顯示了ptra或假手術(shù)以后4周所有組中的全身參數(shù)。在ptra治療的動(dòng)物中沒(méi)有觀察到殘余狹窄，且map下降至正常水平(圖3b)。與正常相比(相對(duì)于正常，都p<0.05)，血清肌酸酐水平在所有aras中升高，但是血漿腎素活性(pra)和尿白蛋白水平類似于正常受試者。與正常相比，所有aras中的總膽固醇水平、高密度脂蛋白(hdl)和低密度脂蛋白(ldl)更高。d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2改善腎血液動(dòng)力學(xué)和功能血運(yùn)重建后4周，與正常動(dòng)物相比，所有aras中的皮質(zhì)和髓質(zhì)體積類似地更低(圖3b)。相比而言，在肽治療的受試者中，在aras中顯著下降且未被單獨(dú)的ptra改變的皮質(zhì)和髓質(zhì)灌注、rbf和gfr恢復(fù)至正常水平(圖3c-e，相對(duì)于正常，都p>0.05)。d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2減少細(xì)胞凋亡和促進(jìn)線粒體生源說(shuō)與正常相比，在aras和aras+ptra+媒介物中末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶dutp切口末端標(biāo)記(tunel)和半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶-3陽(yáng)性的細(xì)胞凋亡細(xì)胞的數(shù)目升高，但是在aras+ptra+肽受試者中下降(圖4a-b)。b-細(xì)胞淋巴瘤(bcl)-2的腎表達(dá)在各組之間沒(méi)有差異，但是在ptra期間的肽治療顯著減少了促細(xì)胞凋亡蛋白bcl-2-相關(guān)的x蛋白(bax,圖4c-d)的隨后表達(dá)。d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2也增量調(diào)節(jié)pgc-1α、核呼吸因子(nrf)-1、ga-結(jié)合蛋白(gabp)和過(guò)氧化物酶體增殖子活化的受體(ppar)-α的表達(dá)(圖4c-d)。在所有aras組中，血紅素加氧酶(ho)-1和ppar-δ的腎表達(dá)類似地保持鈍圓。血運(yùn)重建(用或不用輔助肽)將在aras中觀察到的減量調(diào)節(jié)的sirtuin(sirt)-1表達(dá)恢復(fù)至正常水平(圖4c-d，相對(duì)于正常，p>0.05)。d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2改善微血管網(wǎng)絡(luò)腎皮質(zhì)微血管的空間密度在aras和aras+ptra+媒介物動(dòng)物中類似地較低，但是與在ptra期間用肽治療的受試者中的正常水平?jīng)]有差異(圖5a)。另外，平均血管直徑和迂曲度在aras和aras+ptra+媒介物中類似地增加，但是在肽治療的受試者中改善(圖5b)。vegf和它的受體(vegfr-1和2)的腎表達(dá)在aras中低于正常，且在用ptra+媒介物治療的動(dòng)物中保持降低。但是，用ptra+肽治療會(huì)將它們恢復(fù)至與正常類似(vegfr-1和vegfr-2)或高于正常(vegf)的水平(圖5c)。在用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2治療的動(dòng)物中的氧化性應(yīng)激減少與正常相比，8-表-異前列腺素的全身水平在aras和aras+ptra+媒介物中升高，但是在aras+ptra+肽受試者中降低至正常水平(表8，相對(duì)于正常，p>0.05)。類似地，在aras和aras+ptra+媒介物中，狹窄后腎中超氧化物陰離子的原位產(chǎn)生顯著增加，但是在用肽治療的動(dòng)物中，下降至沒(méi)有不同于正常的水平(圖6a)，p47和硝基酪氨酸的腎表達(dá)也是如此(圖6b，相對(duì)于正常，二者p>0.05)。在肽治療的受試者中消除炎癥在aras和aras+ptra+媒介物中同樣增量調(diào)節(jié)mcp-1免疫反應(yīng)性，但是在用肽治療的受試者中改善，浸潤(rùn)腎的cd163+巨噬細(xì)胞的數(shù)目也是如此(圖7a-b)。類似地，升高的tnf-α的腎表達(dá)僅在肽治療的受試者中正?；?圖7c)。在ptra期間的炎癥性標(biāo)志物和損傷標(biāo)志物在aras+ptra+媒介物和aras+ptra+肽動(dòng)物(圖1b，相對(duì)于基線，二者p<0.05)中，在血運(yùn)重建以后單核細(xì)胞趨化蛋白(mcp-1)的血漿水平類似地增加。但是，腫瘤壞死因子(tnf)-α、白介素(il)-1β、粒細(xì)胞集落刺激因子(g-csf)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(tgf)-β的血漿水平或血清肌酸酐水平?jīng)]有在血運(yùn)重建以后立即變化(圖1c-g)。蛋白尿以及8-異前列腺素和tgf-β的尿水平在ptra以后保持不變(圖2a-b)。肽治療減少腎小管損傷和腎瘢痕形成在所有aras組中的腎小管損傷評(píng)分都高于正常(都p<0.05)，但是在aras+ptra+肽受試者中顯著減小，盡管沒(méi)有消除(圖8a)。促纖維化標(biāo)志物纖連蛋白和膠原iv的免疫染色在aras和aras+ptra+媒介物中增加，但是在肽治療的受試者中減少(圖8b-c)。管間質(zhì)纖維化和腎小球評(píng)分在所有aras中也高于正常，但是在aras+ptra+肽受試者中顯著減小(圖9a-b)。纖溶酶原激活物抑制劑(pai)-1的腎表達(dá)在兩個(gè)ptra組中類似地減弱(相對(duì)于正常，二者p>0.05)，但是tgf-β1表達(dá)僅在肽治療的受試者中恢復(fù)至正常水平(圖9c)。e.討論本研究證實(shí)了mptp開(kāi)放涉入在動(dòng)脈粥樣硬化性腎血管疾病中針對(duì)血運(yùn)重建的減弱腎應(yīng)答。此外，它確立了線粒體靶向肽用于在豬aras的阻塞性腎動(dòng)脈病變的血運(yùn)重建以后保持腎結(jié)構(gòu)和功能結(jié)果的新作用。在血運(yùn)重建以后4周，在aras+ptra+肽受試者中增量調(diào)節(jié)線粒體生源說(shuō)，而在它們的狹窄后腎中改善了氧化性應(yīng)激、細(xì)胞的細(xì)胞凋亡、微血管稀薄化和組織損害。此外，狹窄腎灌注、rbf和gfr在肽治療的受試者中正?；瑥亩沂玖伺cptra結(jié)合的肽用于改善動(dòng)脈粥樣硬化性腎血管疾病中的腎功能結(jié)果的腎臟保護(hù)作用。這樣，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2可用于在具有狹窄后腎中的受試者中增量調(diào)節(jié)線粒體生源說(shuō)、減少氧化性應(yīng)激、細(xì)胞的細(xì)胞凋亡、微血管稀薄化和組織損害的方法中。此外，芳族陽(yáng)離子肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2可用在與ptra結(jié)合提供腎臟保護(hù)作用的方法中，用于改善動(dòng)脈粥樣硬化性腎血管疾病中的腎功能結(jié)果。aras會(huì)活化幾個(gè)增加氧化性損傷、細(xì)胞凋亡、炎癥和間質(zhì)性纖維化的機(jī)制，從而導(dǎo)致腎功能衰退，并且阻塞的腎動(dòng)脈的血運(yùn)重建已經(jīng)作為潛在確定的治療選擇而出現(xiàn)。alas，即將支架+醫(yī)學(xué)治療與單獨(dú)醫(yī)學(xué)治療進(jìn)行對(duì)比的大型隨機(jī)化受控臨床試驗(yàn)，證實(shí)了腎動(dòng)脈通暢的改善和血運(yùn)重建以后的腎結(jié)果之間的無(wú)關(guān)聯(lián)。以前已經(jīng)證實(shí)，ptra不能反轉(zhuǎn)狹窄豬腎中的結(jié)構(gòu)和功能衰退(其伴有持續(xù)的細(xì)胞凋亡和氧化性應(yīng)激)，從而強(qiáng)調(diào)了對(duì)更有效策略的需求，所述策略與ptra相組合以改善aras中的腎功能。在ptra期間使腎組織損傷持續(xù)的機(jī)制之一是急性iri，其涉及ros的產(chǎn)生和炎癥性機(jī)制的活化。此外，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)支持mptp形成在加速iri以后的細(xì)胞死亡中的作用。ros的過(guò)度產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致mptp開(kāi)放和細(xì)胞色素c向胞質(zhì)溶膠中的釋放，這不僅觸發(fā)細(xì)胞凋亡(通過(guò)活化半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶3和9)，而且觸發(fā)線粒體ros釋放進(jìn)胞質(zhì)溶膠中所引起的腎小管損傷。因此，選擇性地靶向mptp的治療干預(yù)可能賦予細(xì)胞保護(hù)和減輕向腎衰竭的進(jìn)展。以前在幾個(gè)動(dòng)物模型中的研究已經(jīng)記載了線粒體靶向肽通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡和減弱氧化性應(yīng)激而產(chǎn)生的保護(hù)作用。與其它抗氧化療法相比，除了抗細(xì)胞凋亡作用(通過(guò)抑制mptp的開(kāi)放而實(shí)現(xiàn))以外，它們的清除ros和集中在線粒體內(nèi)膜(ros產(chǎn)生的主要部位)處的能力，會(huì)給這些小肽提供超凡效能以抑制氧化性應(yīng)激。實(shí)際上，在即將開(kāi)始血運(yùn)重建之前使用環(huán)孢菌素(mptp的有效抑制劑)的治療與具有急性心肌梗塞的患者中的較小梗塞面積有關(guān)，從而強(qiáng)調(diào)了這些治療干預(yù)的臨床重要性。但是，它的治療潛力受限于顯著的副作用。d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2是一種細(xì)胞可透過(guò)的四肽，其在線粒體內(nèi)膜中達(dá)到極高的濃度(500-5000倍)，從而發(fā)揮抗細(xì)胞凋亡和抗氧化性能。不同于其它mptp抑制劑，本發(fā)明技術(shù)的肽不具有已知的免疫抑制作用。最近在實(shí)驗(yàn)性嚙齒動(dòng)物模型中的研究已經(jīng)證實(shí)了本發(fā)明技術(shù)的肽在減小梗塞面積和減弱高血壓心肌病中的有益效果。此外，它會(huì)在急性缺血再灌注損傷和單側(cè)輸尿管阻塞的大鼠模型中阻止間質(zhì)性纖維化和有關(guān)的腎小管細(xì)胞再生，從而提示該藥物用于維持受損腎的功能和結(jié)構(gòu)的潛力。該研究首次證實(shí)了在ptra期間用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2治療會(huì)恢復(fù)線粒體生源說(shuō)和減弱細(xì)胞凋亡和氧化性應(yīng)激，最終導(dǎo)致在慢性豬aras中改善的腎功能。在該研究中，通過(guò)減少的tunel+和半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶-3+細(xì)胞的數(shù)目，反映了d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的有效抗細(xì)胞凋亡作用。此外，促細(xì)胞凋亡蛋白bax的腎表達(dá)在肽治療的受試者中大幅下埃及，從而強(qiáng)調(diào)了目的在于防止細(xì)胞凋亡起始的療法的有效性。另外，使用ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的治療會(huì)降低氧化性應(yīng)激標(biāo)志物8-異前列腺素以及腎氧化性應(yīng)激的全身水平，如減少的ros產(chǎn)生和nad(p)h-氧化酶(p47phox)和硝基酪氨酸的表達(dá)所證實(shí)的。在d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2治療以后這種全身性和腎氧化性應(yīng)激的減少可能促進(jìn)狹窄腎中微血管網(wǎng)絡(luò)的維持。增強(qiáng)的或延長(zhǎng)的ros產(chǎn)生會(huì)損害腎微血管的完整性，從而導(dǎo)致重塑或稀薄化，即針對(duì)血運(yùn)重建的腎損傷和應(yīng)答的進(jìn)展的一個(gè)重要決定因素。在當(dāng)前的研究中，在aras+ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2受試者中的微血管損失被鈍化，如增加的空間密度和減小的皮質(zhì)微血管平均直徑所反映的，而反映微血管不成熟的迂曲度下降。不希望受理論約束，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2也可能已經(jīng)通過(guò)鈍化血管細(xì)胞凋亡和促進(jìn)血管生成(由增加的血管生成因子vegf及其受體的腎表達(dá)提示)來(lái)阻止微血管損失。腎炎癥是aras中的疾病進(jìn)展的一個(gè)關(guān)鍵決定因素。以前已經(jīng)證實(shí)，增加的氧化性應(yīng)激與巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在狹窄豬腎中的浸潤(rùn)有關(guān)，所述浸潤(rùn)與針對(duì)血運(yùn)重建的差腎應(yīng)答有關(guān)，并會(huì)被長(zhǎng)期抗氧化劑補(bǔ)充減弱。值得注意的是，在ptra期間使用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的短期治療會(huì)在4周以后消除腎炎癥，如正?；膍cp-1管間質(zhì)表達(dá)所證實(shí)的，這可能解釋狹窄腎中減少的cd163巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。正?；拇傺准?xì)胞因子tnf-α的腎表達(dá)也支持它的有效抗炎效應(yīng)。重要的是，在用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2治療以后減少的炎癥、氧化性應(yīng)激和細(xì)胞凋亡可能都已經(jīng)減弱腎小管損傷，如減小的腎小管損傷評(píng)分所反映的。因此，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2會(huì)通過(guò)維持腎小管刷狀緣和使腎小管細(xì)胞脫離最小化而在大鼠中減弱急性缺血誘導(dǎo)的腎小管損傷。在用肽治療的動(dòng)物中促進(jìn)了線粒體生源說(shuō)(由恢復(fù)的pgc-1α、nfr-1、gabp和ppar-α的水平公開(kāi))，從而指示該途徑在氧化性應(yīng)激和炎癥的改善中的活化。pgc-1α介導(dǎo)的nrf-1和gabp(也被稱作nrf-2)的活化會(huì)通過(guò)結(jié)合人抗氧化應(yīng)答元件(hare)而調(diào)節(jié)在氧化性應(yīng)激中涉及的許多基因的表達(dá)，所述人抗氧化應(yīng)答元件調(diào)節(jié)解毒酶諸如nad(p)h:醌氧化還原酶(nqo1)的表達(dá)。此外，肽誘導(dǎo)的線粒體生源說(shuō)會(huì)增量調(diào)節(jié)ppar-α的表達(dá)，所述ppar-α是一種在腎中高度表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，其通過(guò)增加ho-1酶活性而調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞炎癥應(yīng)答，盡管ho-1表達(dá)在d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2-治療組中保持受到抑制。類似地，ppar-δ和sirt-1的腎表達(dá)在肽治療的受試者中保持減量調(diào)節(jié)，這與它們對(duì)d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2誘導(dǎo)的ptra之后的炎癥減弱的保護(hù)促進(jìn)相矛盾?？傊@些觀察結(jié)果表明，在ptra期間d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的輔助輸注可能已經(jīng)阻止線粒體生源說(shuō)的急劇下降，這可能解釋持續(xù)至4周以后的腎功能和結(jié)構(gòu)改善。使用ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的治療會(huì)在4周以后減少管間質(zhì)和腎小球纖維化，這與減少的纖連蛋白和膠原iv含量有關(guān)。此外，纖維發(fā)生因子tgf-β和pai-1的腎表達(dá)在肽治療的動(dòng)物中正?；赡苡山档偷哪I氧化性應(yīng)激水平促進(jìn)。這些又可能在肽治療的受試者中促進(jìn)改善的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能(由正?；膯文I灌注、rbf和gfr證實(shí))，從而強(qiáng)調(diào)肽減弱aras中的腎功能障礙的可行性。但是，鑒于在體外對(duì)肽的腎血管反應(yīng)性應(yīng)答的缺乏，這些作用不可能歸因于血管緊張度的直接調(diào)節(jié)。盡管狹窄腎gfr、血清肌酸酐水平的改善保持輕微升高，可能歸因于非狹窄腎中的一些殘余損傷或高血壓損傷或與高膽固醇血癥有關(guān)的腎功能障礙，這可能需要更靶向的針對(duì)延續(xù)的血脂異常(dislipemia)的治療。除了不受d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2影響的mcp-1的增加以外，在ptra以后的3-小時(shí)時(shí)間范圍內(nèi)不存在炎癥介質(zhì)或氧化介質(zhì)的可檢測(cè)的劇烈變化。在ptra期間暴露于d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2足以賦予持續(xù)至4周以后的有效保護(hù)作用。該aras豬模型會(huì)再現(xiàn)早期動(dòng)脈粥樣硬化的影響，并允許使用臨床上適用的工具研究單腎功能和結(jié)構(gòu)，從而提供評(píng)估肽用于改善腎功能、減少細(xì)胞凋亡和aras腎中的纖維化進(jìn)展的潛在作用的機(jī)會(huì)。這些結(jié)果共同地強(qiáng)調(diào)了mptp開(kāi)放在動(dòng)脈粥樣硬化性腎血管疾病的血運(yùn)重建中的重要性，從而揭示了與ptra結(jié)合的d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2用于減少豬aras中的細(xì)胞凋亡、炎癥和氧化性應(yīng)激的腎臟保護(hù)作用。此外，使用ptra+d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的治療會(huì)增量調(diào)節(jié)線粒體生源說(shuō)和改善血管生成，并最終改善在aras的血運(yùn)重建以后的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能。這些結(jié)果揭示了d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2在慢性腎血管疾病中改善ptra以后的應(yīng)答中的獨(dú)特作用。這些結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明技術(shù)的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2可用于在具有ras的受試者中治療和預(yù)防與血運(yùn)重建(通過(guò)ptra實(shí)現(xiàn))有關(guān)的腎損傷的方法中。具體地，這些結(jié)果證實(shí)，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的施用會(huì)保護(hù)腎微脈管系統(tǒng)免于再灌注相關(guān)的損傷，從而導(dǎo)致與未治療的對(duì)照組相比改善的腎功能和針對(duì)ras進(jìn)行治療的受試者的改善的預(yù)后。實(shí)施例2通過(guò)施用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2來(lái)減輕在人動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄(aras)中經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)(aras)以后的腎損傷a.概述本實(shí)施例將證實(shí)芳族陽(yáng)離子肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2在預(yù)防和治療人類的與腎動(dòng)脈粥樣硬化性動(dòng)脈狹窄(aras)有關(guān)的腎損傷中的用途。根據(jù)本發(fā)明方法，具有aras的人受試者經(jīng)歷通過(guò)經(jīng)皮腔內(nèi)腎血管成形術(shù)(ptra)實(shí)現(xiàn)的腎血運(yùn)重建。給受試者施用與ptra結(jié)合的芳族陽(yáng)離子肽，包括在血運(yùn)重建手術(shù)之前和之后的確定時(shí)間段。對(duì)照受試者要么不接受輸注，要么接受單獨(dú)對(duì)照媒介物的輸注。預(yù)期腎功能的多個(gè)方面在接受肽的受試者中得到改善(與對(duì)照受試者相比)，包括腎容量、腎血流量、腎小球?yàn)V過(guò)率、腎微脈管系統(tǒng)密度、平均血管直徑、血管迂曲度和腎氧合。結(jié)果證實(shí)，肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2可用在治療或預(yù)防與血運(yùn)重建(在人類的aras的治療中通過(guò)ptra實(shí)現(xiàn))有關(guān)的腎損傷的方法中。b.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)概述將具有aras的人受試者隨機(jī)化成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。通過(guò)ptra用支架治療受試者，并從ptra之前的時(shí)間點(diǎn)30分鐘至ptra之后的3小時(shí)，輔助連續(xù)輸注芳族陽(yáng)離子肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2(0.05mg/kgiv)。簡(jiǎn)而言之，在熒光透視導(dǎo)引下使鉭支架纏繞的氣囊導(dǎo)管接合進(jìn)腎動(dòng)脈的近側(cè)中段，并充氣，導(dǎo)致膨脹至整個(gè)氣囊直徑，以恢復(fù)腔開(kāi)放。將氣囊放氣并取出，剩下嵌入在血管壁中的支架。從ptra之前30min至ptra之后3小時(shí)30分鐘，用0.50mg/kg的d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的單次連續(xù)靜脈內(nèi)輸注治療實(shí)驗(yàn)受試者。對(duì)照受試者要么不接受輸注(“非輸注對(duì)照”)，要么僅輸注鹽水媒介物(“媒介物對(duì)照”)。ptra以后4周，通過(guò)血管造影術(shù)確定狹窄程度，并收集全身和腎靜脈血液樣品用于血漿腎素活性和肌酸酐測(cè)量(gammacoatpra試劑盒；diasorin,inc.,stillwater,minnesota,usa)。使用mdct評(píng)估每個(gè)腎中的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能，并通過(guò)boldmri評(píng)估腎氧合。c.方法血氧水平依賴性的磁共振成像(bold-mri)——ptra以后4周，使用定制的腹部器官方案，在3特斯拉(signaechospeed；gemedicalsystems,milwaukee,wi)進(jìn)行bold-mri，以測(cè)量腎的髓質(zhì)和皮質(zhì)區(qū)域中的r2*水平。在以前的出版物中已經(jīng)詳細(xì)描述了bold方法的原理。簡(jiǎn)而言之，順磁分子誘導(dǎo)磁場(chǎng)微擾。在血液中，氧合血紅蛋白是反磁性的，且它的濃度對(duì)t2*沒(méi)有影響，但是脫氧血紅蛋白是順磁的并減少組織t2*。因此，當(dāng)梯度回波mri獲取的回波時(shí)間增加時(shí)，mri信號(hào)減弱隨著脫氧血紅蛋白濃度增加而增加。ln(強(qiáng)度)相對(duì)于回波時(shí)間的斜率等于弛豫時(shí)間比率r2*(＝1/t2)，且與脫氧血紅蛋白的濃度直接成比例。在基線bold獲取以后，靜脈內(nèi)地施用呋塞米(20mg)，并用2ml鹽水沖洗。15min以后，重復(fù)bold測(cè)量。對(duì)于數(shù)據(jù)分析，在7-ms回波時(shí)間圖像上在皮質(zhì)和髓質(zhì)中手工地跟蹤目標(biāo)區(qū)域，所述圖像給出了在每個(gè)實(shí)驗(yàn)階段中的最佳解剖學(xué)細(xì)節(jié)。對(duì)于每個(gè)回波時(shí)間，軟件自動(dòng)地計(jì)算在每個(gè)目標(biāo)區(qū)域內(nèi)的mr信號(hào)的平均值。然后測(cè)量bold信號(hào)，其通過(guò)弛豫率r2*來(lái)表征。從基線至呋塞米的r2*變化被確定為“δ-r2*”。多檢測(cè)器計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(mdct)——在boldmri以后1-2天，使用mdct評(píng)估每個(gè)腎中的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能。mdct是一種超快掃描儀，其提供單個(gè)腎容量、局部灌注、血流量、腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)和腎小管功能的準(zhǔn)確且非侵襲性定量。簡(jiǎn)而言之，在中央靜脈注射碘帕醇(每2秒0.5ml/kg)以后，在45次連續(xù)掃描以后得到圖像。用analyze軟件包(biomedicalimagingresource,mayoclinic,mn,usa)重構(gòu)和顯示mdct圖像。目標(biāo)區(qū)域選自得自主動(dòng)脈、腎皮質(zhì)和髓質(zhì)的橫截面圖像。將每個(gè)區(qū)域中的平均組織減弱相對(duì)于時(shí)間繪圖，并通過(guò)曲線擬合算法進(jìn)行擬合，以得到腎功能的量度。通過(guò)analyze(biomedicalimagingresource,mayoclinic,mn,usa)計(jì)算皮質(zhì)和髓質(zhì)體積，并將rbf計(jì)算為皮質(zhì)和髓質(zhì)灌注和對(duì)應(yīng)容積的乘積之和。使用近側(cè)腎小管曲線的斜率，從皮質(zhì)曲線計(jì)算gfr。在15min以后重復(fù)相同的操作，直到10min乙酰膽堿(ach)(5μg/kg/min)腎上輸注結(jié)束，以試驗(yàn)內(nèi)皮依賴性的微血管反應(yīng)性。將從頸動(dòng)脈引入的跟蹤導(dǎo)管(prowlermicrocatheter,cordis,miami,fl,usa)放在腎動(dòng)脈上面用于輸注ach。因此，在基線和ach輸注期間，在穩(wěn)定的3-min觀察期內(nèi)測(cè)量血液動(dòng)力學(xué)和功能。血漿硝酸鹽/亞硝酸鹽水平——使用商購(gòu)可得的試劑盒(nitricoxidequantitationkit,activemotif,carlsbad,ca)，按照生產(chǎn)商的說(shuō)明書(shū)，通過(guò)兩步測(cè)定定量血漿硝酸鹽/亞硝酸鹽水平。藥代動(dòng)力學(xué)分析血液樣品收集和處理1.用于生物分析測(cè)定開(kāi)發(fā)的對(duì)照血液樣品收集：收集20ml靜脈全血樣品。使用注射器將靜脈血抽入含有k2edta的bdpsttmplasmaseparationtubes(淡紫色帽)中，10ml/管。將試管輕輕反轉(zhuǎn)8次，并在離心之前保持在冰水浴中。在血液樣品收集以后1小時(shí)內(nèi)，將樣品在擺動(dòng)桶離心機(jī)中在4℃在1000-1300rcf(或約1500xg)離心15min。從各個(gè)血液試管收獲血漿，放在單個(gè)聚丙烯瓶(或螺旋帽試管)中，并在-70℃保存。2.用于pk和生物標(biāo)志物分析的血液樣品收集：在下面指定的時(shí)間點(diǎn)，收集靜脈全血樣品用于pk分析以及用于生物標(biāo)志物分析和其它炎癥性生物標(biāo)志物。(i)pk分析：在下述時(shí)間點(diǎn)，使用注射器將4ml靜脈全血收集進(jìn)含有k2edta的預(yù)冷的bdpsttmplasmaseparationtubes(淡紫色帽)中：即將開(kāi)始d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2輸注之前，即將開(kāi)始ptra之前，以及再灌注后30、60和180min。將pk血液試管輕輕混合，并立即放入冰(冰浴或碎冰)中。在收集的30分鐘內(nèi)，將樣品在4℃在1500xg離心15min，此后取出2個(gè)血漿等分試樣(各自約0.5ml)，并立即放入螺旋帽聚丙烯試管中。將各個(gè)血漿樣品在干冰上快速冷凍，并在分析之前在-70℃±15℃儲(chǔ)存。(ii)生物標(biāo)志物分析：在下述時(shí)間點(diǎn)，將4ml靜脈全血收集進(jìn)bdssttmserumseparationtubes中：即將開(kāi)始d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2輸注之前，即將開(kāi)始ptra之前，和再灌注后30、60和180min。在填充之后，將試管反轉(zhuǎn)至少5次。將試管在室溫保持約1小時(shí)，以允許血液凝固，并離心以收集血清樣品。如果沒(méi)有產(chǎn)生血清，使用下述基線參照：在凝固以后，在室溫，在擺動(dòng)桶中在1000-1300rcf離心10min，或在固定角度轉(zhuǎn)子中離心15分鐘。將血清收集進(jìn)5個(gè)聚丙烯試管中，每個(gè)試管含有約0.5ml血清，并在-70℃儲(chǔ)存。尿樣品收集和處理1.用于生物分析測(cè)定開(kāi)發(fā)的對(duì)照尿樣品收集：從每位受試者收集10ml對(duì)照尿樣品。將樣品在約1500xg離心10分鐘以除去任何碎片。將樣品放入聚丙烯瓶中并在-70℃儲(chǔ)存。2.用于d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2測(cè)量的尿樣品收集：在d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2輸注(210min)結(jié)束時(shí)，將膀胱排空進(jìn)預(yù)稱重的容器中。測(cè)量并記錄樣品和容器的合并重量。徹底混合以后，將2個(gè)10-ml等分試樣分配進(jìn)標(biāo)記的螺旋帽聚丙烯試管中。將各個(gè)尿樣品在干冰上面快速冷凍，并在試驗(yàn)之前在-70℃±15℃儲(chǔ)存。統(tǒng)計(jì)方法將結(jié)果表示為平均值±sem。使用成對(duì)的studentt-檢驗(yàn)進(jìn)行在組內(nèi)的對(duì)比，并使用anova、隨后用tukey檢驗(yàn)進(jìn)行各組之間的對(duì)比。所有試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)顯著性接受為p≤0.05。d.結(jié)果預(yù)見(jiàn)到，在ptra以后，所有受試者將表現(xiàn)出平均動(dòng)脈壓下降至與正常對(duì)照相當(dāng)?shù)乃?p>0.05)。進(jìn)一步預(yù)見(jiàn)到，接受與ptra相結(jié)合的d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2輸注的受試者將表現(xiàn)出與對(duì)照受試者相比改善的腎容量、腎血流量、腎小球?yàn)V過(guò)率、腎微脈管系統(tǒng)密度、平均血管直徑、血管迂曲度和腎氧合。e.結(jié)論這些結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明技術(shù)的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2可用于在具有ras的人受試者中治療和預(yù)防與血運(yùn)重建(通過(guò)ptra實(shí)現(xiàn))有關(guān)的腎損傷的方法中。具體地，這些結(jié)果證實(shí)，所述肽的施用會(huì)保護(hù)腎微脈管系統(tǒng)免于再灌注相關(guān)的損傷，從而導(dǎo)致與對(duì)照受試者相比改善的腎功能和針對(duì)ras進(jìn)行治療的受試者的預(yù)后改善。實(shí)施例3：通過(guò)施用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2減輕豬動(dòng)脈粥樣硬化性腎動(dòng)脈狹窄(aras)中的腎衰退.a.概述本實(shí)施例將證實(shí)，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的施用會(huì)在未用血管干預(yù)治療的aras受試者中減弱腎細(xì)胞凋亡和炎癥、氧化性應(yīng)激、纖維化和腎功能結(jié)構(gòu)衰退。對(duì)于不是ptra的候選人的aras受試者而言，本實(shí)施例的結(jié)果是特別相關(guān)的。b.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)概述在10周的aras和4周的長(zhǎng)期皮下(sc)輸注d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或鹽水媒介物以后，在體內(nèi)研究2組豬(表11,12)。使用多檢測(cè)器計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)和血氧水平依賴性的磁共振，在未治療的或用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2治療的受試者中研究單腎容量、灌注、腎血流量、腎小球?yàn)V過(guò)率和氧合。每天使用可植入的遙測(cè)發(fā)射機(jī)跟蹤血壓。使用標(biāo)準(zhǔn)的體外方案，評(píng)估d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2對(duì)腎炎癥、細(xì)胞凋亡纖維化、血管生成和氧化性應(yīng)激的影響。使用微型計(jì)算機(jī)體層攝影術(shù)，離體研究d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2對(duì)腎微血管體系結(jié)構(gòu)的影響。在得到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)管理小組(iacuc)批準(zhǔn)以后，在16周的觀察中研究14只豬(50-60kg)(表11)。在基線時(shí)，所有受試者開(kāi)始由2％膽固醇和15％豬油組成的高膽固醇飲食，以便模擬這樣的臨床情形：其中彌散性早期動(dòng)脈粥樣硬化先于狹窄(表12)。6周后，用0.5g肌肉內(nèi)氯胺酮和賽拉嗪麻醉aras受試者，然后用靜脈內(nèi)氯胺酮(0.2mg/kg/min)和賽拉嗪(0.03mg/kg/min)維持麻醉。如在chade等人,fasebj2006；20:1706-1708中所述，通過(guò)將局部刺激線圈(其導(dǎo)致單側(cè)ras的逐漸發(fā)展)放入腎動(dòng)脈主干中來(lái)誘導(dǎo)ras。誘導(dǎo)ras(或假)以后，將遙測(cè)系統(tǒng)植入左股動(dòng)脈中以測(cè)量map，并跟蹤動(dòng)物額外10周。計(jì)算在每個(gè)研究之前最后2周中的平均map。誘導(dǎo)ras以后6周，類似地麻醉動(dòng)物，并通過(guò)血管造影術(shù)確定狹窄程度。在所有受試者中進(jìn)行假手術(shù)，這包括將套管插入腎動(dòng)脈中和使用反差注射劑的選擇性腎血管造影術(shù)。另外，7個(gè)aras受試者開(kāi)始使用長(zhǎng)期皮下d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2(0.1mg/kg，在ml鹽水中，每天1次，每周5天)輸注的治療。在其它7個(gè)aras受試者中施用鹽水媒介物(表12)。4周后，類似地再次麻醉受試者。通過(guò)血管造影術(shù)確定狹窄程度，并收集全身和腎靜脈血液樣品用于血漿腎素活性(gammacoatpra試劑盒；diasorin,inc.,stillwater,minnesota,usa)和肌酸酐測(cè)量。使用多檢測(cè)器計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(mdct)，評(píng)估每個(gè)腎中的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能，并通過(guò)血氧水平依賴性的磁共振成像(boldmri)評(píng)估腎氧合(表13)。所有研究完成以后，將受試者用致命的靜脈內(nèi)給藥的100mg/kg戊巴比妥鈉(sleepaway,fortdodgelaboratories,inc.,fortdodge,iowa,usa)安樂(lè)死。使用腹膜后切口取出腎并立即切開(kāi)，并將切片在液氮中冷凍(和維持在-80℃)或在福爾馬林中保存用于體外研究(表13)。c.方法血氧水平依賴性的磁共振成像(bold-mri)——輸注以后4周，如以前所述，使用定制的腹部器官方案，在3特斯拉(signaechospeed；gemedicalsystems,milwaukee,wi)進(jìn)行bold-mri，以測(cè)量腎的髓質(zhì)和皮質(zhì)區(qū)域中的r2*水平。在懸浮呼吸過(guò)程中進(jìn)行mri檢查。在以前的出版物中已經(jīng)詳細(xì)描述了bold方法的原理。簡(jiǎn)而言之，順磁分子誘導(dǎo)磁場(chǎng)微擾。在血液中，氧合血紅蛋白是反磁性的，且它的濃度對(duì)t2*沒(méi)有影響，但是脫氧血紅蛋白是順磁的并減少組織t2*。因此，當(dāng)梯度回波mri獲取的回波時(shí)間增加時(shí)，mri信號(hào)減弱隨著脫氧血紅蛋白濃度增加而增加。ln(強(qiáng)度)相對(duì)于回波時(shí)間的斜率等于弛豫時(shí)間比率r2*(＝1/t2)，且與脫氧血紅蛋白的濃度直接成比例。在基線bold獲取以后，將呋塞米(20mg)靜脈內(nèi)地施用進(jìn)耳靜脈導(dǎo)管中，并用2ml鹽水沖洗。15min以后，重復(fù)bold測(cè)量。對(duì)于數(shù)據(jù)分析，在7-ms回波時(shí)間圖像上在皮質(zhì)和髓質(zhì)中手工地跟蹤目標(biāo)區(qū)域，所述圖像給出了在每個(gè)實(shí)驗(yàn)階段中的最佳解剖學(xué)細(xì)節(jié)。對(duì)于每個(gè)回波時(shí)間，軟件自動(dòng)地計(jì)算在每個(gè)目標(biāo)區(qū)域內(nèi)的mr信號(hào)的平均值。然后測(cè)量bold信號(hào)，其通過(guò)弛豫率r2*來(lái)表征。最后，從基線至呋塞米的r2*變化被確定為“δ-r2*”。多檢測(cè)器計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(mdct)——在boldmri以后1-2天，使用mdct評(píng)估每個(gè)腎中的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能。mdct是一種超快掃描儀，其提供單個(gè)腎容量、局部灌注、rbf、gfr和腎小管功能的準(zhǔn)確且非侵襲性定量。簡(jiǎn)而言之，在中央靜脈注射碘帕醇(每2秒0.5ml/kg)以后，在160次連續(xù)掃描以后得到圖像。用analyze軟件包(biomedicalimagingresource,mayoclinic,mn,usa)重構(gòu)和顯示mdct圖像。目標(biāo)區(qū)域選自得自主動(dòng)脈、腎皮質(zhì)和髓質(zhì)的橫截面圖像。將每個(gè)區(qū)域中的平均組織減弱相對(duì)于時(shí)間繪圖，并通過(guò)曲線擬合算法進(jìn)行擬合，以得到腎功能的量度。通過(guò)analyze計(jì)算皮質(zhì)和髓質(zhì)體積，并將rbf計(jì)算為皮質(zhì)和髓質(zhì)灌注和對(duì)應(yīng)容積的乘積之和。使用近側(cè)腎小管曲線的斜率，從皮質(zhì)曲線計(jì)算gfr。在15min以后重復(fù)相同的操作，直到10min乙酰膽堿(ach)(5μg/kg/min)腎上輸注結(jié)束，以試驗(yàn)內(nèi)皮依賴性的微血管反應(yīng)性。將從頸動(dòng)脈引入的跟蹤導(dǎo)管(prowlermicrocatheter,cordis,miami,fl,usa)放在腎動(dòng)脈上面用于輸注ach。因此，在基線和乙酰膽堿(ach)輸注期間，在穩(wěn)定的3-min觀察期內(nèi)測(cè)量血液動(dòng)力學(xué)和功能。組織學(xué)——使用計(jì)算機(jī)輔助的圖像分析程序(metamorph,metaimaging,moleculardevices,sunnyvale,ca,usa)檢查每個(gè)腎(每只動(dòng)物1個(gè))的中肝門(midhilar)5-μm橫截面。在每個(gè)載玻片中，通過(guò)計(jì)算機(jī)程序在15-20個(gè)視野中半自動(dòng)地定量三色染色或dhe熒光，表達(dá)為腎表面積的分?jǐn)?shù)，并將得自所有視野的結(jié)果平均化。細(xì)胞凋亡——通過(guò)末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dutp切口末端標(biāo)記(tunel)測(cè)定、活化的半胱氨酰天冬氨酸特異性蛋白酶-3染色和促細(xì)胞凋亡的bax和抗細(xì)胞凋亡的bcl-xl蛋白的水平的測(cè)量，評(píng)價(jià)細(xì)胞凋亡。氧化性應(yīng)激——進(jìn)行體外研究來(lái)評(píng)估腎中的氧化性應(yīng)激。如前所述，使用eia試劑盒評(píng)估氧化性應(yīng)激生物標(biāo)志物異前列腺素的全身水平。通過(guò)評(píng)估超氧化物陰離子的原位產(chǎn)生(如前所述使用二氫溴化乙啶(dhe)通過(guò)熒光顯微術(shù)檢測(cè))，并通過(guò)形成所述陰離子的酶煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氫(nad(p)h)-氧化酶和內(nèi)皮一氧化氮合酶(enos)的表達(dá)，評(píng)價(jià)腎氧化還原狀態(tài)。血漿硝酸鹽/亞硝酸鹽水平——使用商購(gòu)可得的試劑盒(nitricoxidequantitationkit,activemotif,carlsbad,ca,usa)，按照生產(chǎn)商的說(shuō)明書(shū)，通過(guò)兩步測(cè)定定量血漿硝酸鹽/亞硝酸鹽水平二者的總和。蛋白質(zhì)印跡——使用針對(duì)mmp-9、pai-1、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(mcp-1)、vegf、vegf受體-1(vegfr1)、腫瘤壞死因子α(tnf-α)和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(tgf-β)的特異性多克隆抗體，進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡方案。確定每個(gè)腎中的蛋白表達(dá)，并定量蛋白帶(每只動(dòng)物1個(gè))的強(qiáng)度。微型計(jì)算機(jī)體層攝影術(shù)分析(mct)——在沖洗腎以后，在生理壓力下穿過(guò)連接進(jìn)腎動(dòng)脈分支中的插管將microfilmv122(一種血管內(nèi)造影劑)灌注進(jìn)狹窄腎中。制備樣品并掃描，并如前所述分析圖像。還使用軟件包analyzetm，計(jì)算在腎皮質(zhì)的內(nèi)部、中間和外部中的微血管的空間密度和平均直徑(在20-500mm范圍內(nèi)的直徑)。統(tǒng)計(jì)方法——基于初步數(shù)據(jù)，能力計(jì)算指示，每組需要6只動(dòng)物(+1以考慮動(dòng)物損失)來(lái)檢測(cè)80％的能力的差異。將結(jié)果表示為平均值±sem。使用成對(duì)的studentt-檢驗(yàn)進(jìn)行在組內(nèi)的對(duì)比，并使用anova、隨后用tukey檢驗(yàn)進(jìn)行各組之間的對(duì)比。所有試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)顯著性接受為p≤0.05。d.結(jié)果預(yù)見(jiàn)到，給未治療的aras受試者施用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2會(huì)降低細(xì)胞凋亡，如bax水平的下降、bcl-xl水平的增加和tunel+細(xì)胞的數(shù)目的減少所指示。進(jìn)一步預(yù)見(jiàn)到，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的施用會(huì)造成腎血管、腎小管和腎小球纖維化的下降，如纖維化三色染色的程度和纖維發(fā)生因子tgf-β和pai-1的表達(dá)的下降所指示。進(jìn)一步預(yù)見(jiàn)到，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的施用會(huì)減輕腎炎癥，如tnf-α、cd163和mcp-1水平的下降所指示。進(jìn)一步預(yù)見(jiàn)到，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的施用會(huì)減輕氧化性應(yīng)激，如超氧化物的原位產(chǎn)生和伴有增加的no可用性的nad(p)h氧化酶表達(dá)(enos表達(dá)，硝酸鹽/亞硝酸鹽水平)的下降所指示。另外，預(yù)見(jiàn)到，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的施用會(huì)阻止腎微脈管系統(tǒng)的損失(如通過(guò)微-ct所檢測(cè)到的)，從而導(dǎo)致微血管密度、腎血液動(dòng)力學(xué)和氧合的增加。e.結(jié)論本實(shí)施例證實(shí)，芳族陽(yáng)離子肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2可用在用于治療未用血管干預(yù)治療的受試者(諸如不是ptra的候選人的那些受試者)的aras的方法和組合物中。實(shí)施例4使用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的長(zhǎng)期治療會(huì)維持豬arvd中的狹窄腎.概述本實(shí)施例證實(shí)了芳族陽(yáng)離子肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2在維持豬arvd中的狹窄腎中的用途。根據(jù)本發(fā)明方法，使動(dòng)物受試者遭受一段時(shí)間的aras。在10周時(shí)段的最后4周中，每天給受試者施用芳族陽(yáng)離子肽。對(duì)照動(dòng)物要么不接受輸注，要么接受單獨(dú)對(duì)照媒介物的輸注。與對(duì)照受試者相比，在接受所述肽的受試者中腎功能的多個(gè)方面得到改善，包括、但不限于單腎容量、灌注、腎血流量(rbf)、腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)、皮質(zhì)氧合和腎纖維化。結(jié)果證實(shí)，肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2可用在arvd的長(zhǎng)期治療方法中。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)所有實(shí)驗(yàn)根據(jù)指南進(jìn)行，并得到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)管理小組(iacuc)的批準(zhǔn)。受試者包括馴養(yǎng)的幼齡雌性受試者(mantheihogfarm,llc,mn)，觀察10周。在基線時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)化成正常組或aras組。給正常動(dòng)物飼喂正常豬食，給aras受試者飼喂高膽固醇飲食(td-93296,harlan-teklad,indianapolis,in,usa)，后者誘導(dǎo)彌散性早期動(dòng)脈粥樣硬化，其特征在于升高的膽固醇水平和腎功能損害、ras腎中的炎癥和纖維化。參見(jiàn)表14。6周時(shí)段以后，aras受試者發(fā)生單側(cè)ras(通過(guò)將局部刺激線圈放入腎動(dòng)脈主干中來(lái)誘導(dǎo))，而對(duì)正常動(dòng)物假手術(shù)。為了麻醉，用肌肉內(nèi)注射的氯胺酮和賽拉嗪(0.5g)誘導(dǎo)動(dòng)物，并用靜脈內(nèi)的氯胺酮(0.2mg/kg/min)和賽拉嗪(0.03mg/kg/min)維持麻醉。將遙測(cè)系統(tǒng)(datasciencesinternational,stpaul,minnesota,usa)植入左股動(dòng)脈中，以在接下來(lái)的10周中連續(xù)測(cè)量平均動(dòng)脈壓(map)。誘導(dǎo)ras以后10周，受試者每周5天地接受0.1mg/kgd-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或媒介物的皮下注射，持續(xù)4周的時(shí)段。在用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或媒介物治療4周以后，類似地麻醉受試者，并通過(guò)血管造影術(shù)確定狹窄程度。進(jìn)行多檢測(cè)器計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(mdct)研究，用于評(píng)估單腎腎血液動(dòng)力學(xué)和功能。在中央靜脈注射碘帕醇(每2秒0.5ml/kg)以后，進(jìn)行140次連續(xù)掃描。用analyzetm軟件包(biomedicalimagingresource,mayoclinic,rochester,mn)重構(gòu)并分析橫截面圖像。目標(biāo)區(qū)域選自腎皮質(zhì)和髓質(zhì)的橫截面圖像。將每個(gè)區(qū)域中的平均組織減弱相對(duì)于時(shí)間繪圖，并通過(guò)曲線擬合算法進(jìn)行擬合，以得到腎功能的量度。通過(guò)analyze計(jì)算皮質(zhì)和髓質(zhì)體積，并將rbf計(jì)算為皮質(zhì)和髓質(zhì)灌注和對(duì)應(yīng)容積的乘積之和。使用近側(cè)腎小管曲線的斜率，從皮質(zhì)曲線計(jì)算gfr。在15min以后重復(fù)相同的操作，直到10minach(5μg/kg/min)腎上輸注結(jié)束，以試驗(yàn)內(nèi)皮依賴性的微血管反應(yīng)性。將從頸動(dòng)脈引入的跟蹤導(dǎo)管(prowlermicrocatheter,cordis,miami,fl,usa)放在腎動(dòng)脈上面用于輸注ach。在基線和ach輸注期間，在穩(wěn)定的3-min觀察期內(nèi)測(cè)量血液動(dòng)力學(xué)和功能。使用血氧水平依賴性的(bold)mri，評(píng)估腎氧合。體內(nèi)研究結(jié)束后，將動(dòng)物用戊巴比妥鈉(100mg/kg,fortdodgelaboratories,fortdodge,iowa,usa)安樂(lè)死。取出腎臟，切開(kāi)，并準(zhǔn)備用于離體研究。使用計(jì)算機(jī)輔助的圖像分析程序axio4.8.2.0(carlzeisssmt,oberkochen,德國(guó))，在用masson氏三色染色的每個(gè)腎的5μm中肝門(mid-hilar)橫截面中評(píng)估腎纖維化。在15-20個(gè)視野中定量管間質(zhì)纖維化和腎小球評(píng)分(100個(gè)腎小球中發(fā)生硬化的百分比)。使用jmp軟件包8.0版(sasinstituteinc.,cary,nc,usa)，分析所有數(shù)據(jù)。使用shapiro-wilk檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)相對(duì)于正常性的偏差。對(duì)于正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，將結(jié)果表達(dá)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(sd)，對(duì)于非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，將結(jié)果表達(dá)為中間值(范圍)。在適當(dāng)時(shí)使用參數(shù)(anova和不成對(duì)的studentt-檢驗(yàn))和非參數(shù)(wilcoxon和kruskalwallis)檢驗(yàn)。認(rèn)為p≤0.05的值是統(tǒng)計(jì)上顯著的。結(jié)果誘導(dǎo)ras以后6周，在所有aras動(dòng)物中實(shí)現(xiàn)顯著程度的狹窄(81.0-89.8％)，且平均動(dòng)脈壓(map)類似地升高(相對(duì)于正常，p<0.05)(表15)。表15顯示了在10周aras時(shí)段的最后4周期間用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2或媒介物治療以后在正常和aras受試者中的平均動(dòng)脈壓(mmhg)、腎容量(cc)、皮質(zhì)灌注(ml/min/cc)、rbf(ml/min)、gfr(ml/min)和腎小管間質(zhì)性纖維化(％)。腎組織切片的三色染色顯示在圖10中，并在圖11中定量。血氧水平依賴性的(bold)mri圖像顯示在圖12中，皮質(zhì)血液氧合指數(shù)(r2*)的定量顯示在圖13中。誘導(dǎo)aras以后4周，aras受試者中的腎血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)與正常對(duì)照相比下降(表15)。同樣地，aras受試者表現(xiàn)出與正常對(duì)照相比增加的腎小管間質(zhì)性纖維化和減少的皮質(zhì)血液氧合(表15；圖10-13)。aras受試者中的血管反應(yīng)性下降，如通過(guò)rbf和gfr響應(yīng)于ach的變化量級(jí)所測(cè)得的。與未治療的對(duì)照組相比，在aras受試者中使用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的治療會(huì)減輕腎小管間質(zhì)性纖維化和增加腎容量、皮質(zhì)灌注、rbf和gfr(表15；圖10-11)。與未治療的對(duì)照組相比，使用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2的治療也會(huì)改善皮質(zhì)血液氧合和對(duì)ach的血管反應(yīng)性(圖12-15)。*相對(duì)于正常，p<0.05相對(duì)于arvd+肽，p<0.05這些結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明技術(shù)的d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽可用于治療具有aras的受試者。具體地，結(jié)果表明，使用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽長(zhǎng)期治療aras受試者會(huì)減輕腎小管間質(zhì)性纖維化和改善腎血液動(dòng)力學(xué)和血管反應(yīng)性。結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽可用于改善腎功能(通常在具有arvd的受試者中)和改善受試者的預(yù)后。實(shí)施例5在具有arvd的人受試者中用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2長(zhǎng)期治療以后改善的腎功能.概述本實(shí)施例將證實(shí)芳族陽(yáng)離子肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2在具有arvd的人受試者的長(zhǎng)期治療中的用途。根據(jù)本發(fā)明方法，每天給具有arvd的人受試者施用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽，持續(xù)數(shù)周的時(shí)段。對(duì)照受試者要么不接受輸注，要么接受單獨(dú)對(duì)照媒介物的輸注。預(yù)期腎功能的多個(gè)方面在接受肽的受試者中得到改善(與對(duì)照受試者相比)，包括腎容量、皮質(zhì)灌注、rbf、gfr、皮質(zhì)血液氧合和血管反應(yīng)性。結(jié)果證實(shí)，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽可用在具有arvd的人受試者的長(zhǎng)期治療方法中。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將具有arvd的人受試者隨機(jī)化成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。每天1次用皮下施用的d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2(0.1mg/kg)肽或媒介物治療受試者，持續(xù)4周的時(shí)段。使用mdct評(píng)估每個(gè)腎中的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能，并通過(guò)boldmri評(píng)估腎氧合。血氧水平依賴性的磁共振成像(bold-mri)——ptra以后4周，如以前所述，使用定制的腹部器官方案，在3特斯拉(signaechospeed；gemedicalsystems,milwaukee,wi)進(jìn)行bold-mri，以測(cè)量腎的髓質(zhì)和皮質(zhì)區(qū)域中的r2*水平。簡(jiǎn)而言之，順磁分子誘導(dǎo)磁場(chǎng)微擾。在血液中，氧合血紅蛋白是反磁性的，且它的濃度對(duì)t2*沒(méi)有影響，但是脫氧血紅蛋白是順磁的并減少組織t2*。因此，當(dāng)梯度回波mri獲取的回波時(shí)間增加時(shí)，mri信號(hào)減弱隨著脫氧血紅蛋白濃度增加而增加。ln(強(qiáng)度)相對(duì)于回波時(shí)間的斜率等于弛豫時(shí)間比率r2*(＝1/t2)，且與脫氧血紅蛋白的濃度直接成比例。在基線bold獲取以后，靜脈內(nèi)地施用呋塞米(20mg)，并用2ml鹽水沖洗。15min以后，重復(fù)bold測(cè)量。對(duì)于數(shù)據(jù)分析，在7-ms回波時(shí)間圖像上在皮質(zhì)和髓質(zhì)中手工地跟蹤目標(biāo)區(qū)域，所述圖像給出了在每個(gè)實(shí)驗(yàn)階段中的最佳解剖學(xué)細(xì)節(jié)。對(duì)于每個(gè)回波時(shí)間，軟件自動(dòng)地計(jì)算在每個(gè)目標(biāo)區(qū)域內(nèi)的mr信號(hào)的平均值。然后測(cè)量bold信號(hào)，其通過(guò)弛豫率r2*來(lái)表征。從基線至呋塞米的r2*變化被確定為“δ-r2*”。多檢測(cè)器計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(mdct)——在boldmri以后1-2天，使用mdct評(píng)估每個(gè)腎中的腎血液動(dòng)力學(xué)和功能。mdct是一種超快掃描儀，其提供單個(gè)腎容量、局部灌注、血流量、腎小球?yàn)V過(guò)率(gfr)和腎小管功能的準(zhǔn)確且非侵襲性定量。簡(jiǎn)而言之，在中央靜脈注射碘帕醇(每2秒0.5ml/kg)以后，在45次連續(xù)掃描以后得到圖像。用analyze軟件包(biomedicalimagingresource,mayoclinic,mn,usa)重構(gòu)和顯示mdct圖像。目標(biāo)區(qū)域選自得自主動(dòng)脈、腎皮質(zhì)和髓質(zhì)的橫截面圖像。將每個(gè)區(qū)域中的平均組織減弱相對(duì)于時(shí)間繪圖，并通過(guò)曲線擬合算法進(jìn)行擬合，以得到腎功能的量度。通過(guò)analyze(biomedicalimagingresource,mayoclinic,mn,usa)計(jì)算皮質(zhì)和髓質(zhì)體積，并將rbf計(jì)算為皮質(zhì)和髓質(zhì)灌注和對(duì)應(yīng)容積的乘積之和。使用近側(cè)腎小管曲線的斜率，從皮質(zhì)曲線計(jì)算gfr。在15min以后重復(fù)相同的操作，直到10min乙酰膽堿(ach)(5μg/kg/min)腎上輸注結(jié)束，以試驗(yàn)內(nèi)皮依賴性的微血管反應(yīng)性。將從頸動(dòng)脈引入的跟蹤導(dǎo)管(prowlermicrocatheter,cordis,miami,fl,usa)放在腎動(dòng)脈上面用于輸注ach。因此，在基線和ach輸注期間，在穩(wěn)定的3-min觀察期內(nèi)測(cè)量血液動(dòng)力學(xué)和功能。將結(jié)果表示為平均值±sem。使用成對(duì)的studentt-檢驗(yàn)進(jìn)行在組內(nèi)的對(duì)比，并使用anova、隨后用tukey檢驗(yàn)進(jìn)行各組之間的對(duì)比。所有試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)顯著性接受為p≤0.05。結(jié)果預(yù)見(jiàn)到，在用本發(fā)明技術(shù)的肽d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2長(zhǎng)期治療以后，與未治療的對(duì)照組受試者相比，arvd受試者將表現(xiàn)出改善的腎容量、皮質(zhì)灌注、rbf、gfr、皮質(zhì)血液氧合和血管反應(yīng)性以及降低的平均動(dòng)脈血壓。進(jìn)一步預(yù)見(jiàn)到，與未治療的對(duì)照組受試者相比，經(jīng)治療的受試者將表現(xiàn)出減輕的腎小管間質(zhì)性纖維化。預(yù)見(jiàn)到，前述參數(shù)的值與正常對(duì)照相當(dāng)(p<0.05)。這些結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明技術(shù)的d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽可用于治療具有aras的人受試者。具體地，結(jié)果表明，用d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽長(zhǎng)期治療人aras受試者會(huì)減輕腎小管間質(zhì)性纖維化和改善腎血液動(dòng)力學(xué)和血管反應(yīng)性。結(jié)果進(jìn)一步表明，d-arg-2′,6′-dmt-lys-phe-nh2肽可用于改善腎功能(通常在具有arvd的受試者中)和改善受試者的預(yù)后。參考文件bakkeren,等人,smallarteryremodelingdependsontissue-typetransglutaminase.circres.2005；96:119-126.chadearandkelsens,renalmicrovasculardiseasedeterminestheresponsestorevascularizationinexperimentalrenovasculardisease,circcardiovascinterv2010；3(4):376-383.chadear,等人,antioxidantinterventionbluntsrenalinjuryinexperimentalrenovasculardisease,jamsocnephrol2004；15:958-966.chadear,等人,antioxidantinterventionpreventsrenalneovascularizationinhypercholesterolemicpigs,jamsocnephrol2004；15:1816-1825.chadear,等人,beneficialeffectsofantioxidantvitaminsonthestenotickidney.hypertension.2003；42:605-612.chadear,等人,compa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