本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種七葉皂苷A注射劑，本發(fā)明還涉及制備方法。
背景技術(shù)：
：七葉皂苷是從七葉樹科七葉樹屬植物種子提取得到的總皂苷，七葉皂苷的水溶解度較差，為增加其溶解度，常將其制成鈉鹽。七葉皂苷主要含有4種成分，我國國家標準按液相色譜出峰前后，依次命名為七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D。七葉皂苷鈉具有抗炎、抗水腫等多種功效，可用于腦水腫、創(chuàng)傷等疾病的治療，目前多采用靜脈注射的給藥方式。CN102836133A公開了一種七葉皂苷鈉凍干粉針及其制備方法，它采用七葉皂苷鈉、凍干保護劑叔丁醇和注射用水制成，但是由于七葉皂苷鈉具有較強的血管刺激性，還具有較強的腎毒性，易引起急性腎功能衰竭，從而限制了其臨床應(yīng)用。CN1491657A公開了一種由七葉皂苷鈉和雙氯芬酸鹽組成的藥物組合物，雙氯芬酸鹽的加入明顯減輕了注射用七葉皂苷鈉的刺激性及引起的疼痛。CN1931176A公開了一種七葉皂苷的藥物組合物，它由七葉總皂苷與賴氨酸等藥物載體組成，二者聯(lián)用具有顯著的協(xié)同增效作用，并降低了七葉皂苷對血管和肌肉的刺激性，但是不能減少腎毒性。已有試驗表明，七葉皂苷的抗炎活性與七葉皂苷的純度正相關(guān)，即七葉皂苷A、B、C、D的總純度越高，有關(guān)物質(zhì)含量越少，活性越強，而七葉皂苷的血管刺激性正好相反，即七葉皂苷A、B、C、D的總純度越高，有關(guān)物質(zhì)含量越少，刺激性越大。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供一種七葉皂苷A注射劑，不僅具有更強的治療活性，同時還能減少血管刺激和腎毒性，從而更好的滿足臨床治療。本發(fā)明所提供的七葉皂苷A注射劑，含有七葉皂苷A與氨基酸，所述七葉皂苷A與氨基酸的重量比為10～50∶1～10。優(yōu)選地，所述氨基酸為甘氨酸、賴氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、半胱氨酸中的一種或多種的任意組合。優(yōu)選地，所述七葉皂苷A與氨基酸的重量比為30～40∶2～6。優(yōu)選地，所述的七葉皂苷A注射劑還含有藥劑上可接受的輔助成分。優(yōu)選地，所述注射劑為凍干粉針，所述輔助成分為pH調(diào)節(jié)劑和甘露醇。本發(fā)明所提供的制備方法包括以下步驟：1)將七葉皂苷A、氨基酸、甘露醇溶于注射用水制得混合溶液，所述混合溶液中甘露醇的濃度為10～20g/100ml，七葉皂苷A的濃度為0.5～2g/100ml；2)用pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為4.5～6.5；3)將調(diào)節(jié)pH值后的溶液用濾膜或濾芯過濾；4)灌裝后冷凍干燥，即得。優(yōu)選地，所述pH調(diào)節(jié)劑為乳酸。七葉皂苷A性質(zhì)不穩(wěn)定，用酸調(diào)節(jié)pH能夠提高穩(wěn)定性，其中乳酸的穩(wěn)定性最好，而且乳酸還能降低刺激性。優(yōu)選地，所述冷凍干燥包括預(yù)凍、一次升華和再干燥三個階段，每個階段的操作步驟如下：預(yù)凍：先將物料溫度迅速降至-25～-20℃，保持0.5～1小時，然后再將物料溫度緩慢降至-40～-35℃，保溫2～5小時；一次升華：控制真空度在20帕以下，將物料溫度升高到-15～-5℃并保溫3～5小時；再干燥：將物料溫度升到30～40℃，保溫10～15小時。采用以上凍干工藝能提高制劑質(zhì)量和穩(wěn)定性。本發(fā)明的有益效果是：1)與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有更強的抗炎、抗?jié)B出活性。動物試驗表明，小鼠靜脈注射0.125mg/Kg，對腫脹抑制率即可達到60％以上，最高達到70％以上；小鼠靜脈注射1mg/Kg，對滲出的抑制率即可達到50％以上，最高達到60％。2)注射部位未見明顯刺激反應(yīng)，病理切片觀察未見血管及其周圍細胞有變性、壞死及明顯病理異常，表明本發(fā)明無血管刺激性。3)各項生化指標以及肝臟、腎臟系數(shù)與生理鹽水組比較無顯著差異，其病理切片觀察與生理鹽水組基本相似，未見肝腎細胞有變性、壞死及明顯病理異常，表明本發(fā)明的肝腎毒性很低。4)本發(fā)明提供的凍干粉針外觀飽滿，無萎縮、塌陷、斷層等現(xiàn)象，復(fù)溶性和質(zhì)量穩(wěn)定性好，貯存期可達一年。具體實施方式以下通過實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例中所使用的原料七葉皂苷A是從七葉皂苷中采用色譜分離方法得到的純度達98％以上的純品。實施例11)將30g七葉皂苷A、2g甘氨酸、200g甘露醇溶于2000ml注射用水制得混合溶液，所述混合溶液中甘露醇的濃度為10g/100ml，七葉皂苷A的濃度為1.5g/100ml，甘氨酸的濃度為0.1g/100ml；2)用乳酸調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為6.5；3)將調(diào)節(jié)pH值后的溶液用0.22μm的濾膜過濾；4)灌裝后冷凍干燥。冷凍干燥的程序如下：預(yù)凍：先將物料溫度迅速降至-20℃，保持1小時，然后再將物料溫度緩慢降至-40℃，保溫4小時；一次升華：控制真空度在20帕以下，將物料溫度升高到-10℃并保溫4小時；再干燥：將物料溫度升到35℃，保溫12小時。實施例21)將40g七葉皂苷A、6g賴氨酸、800g甘露醇溶于4000ml注射用水制得混合溶液，所述混合溶液中甘露醇的濃度為20g/100ml，七葉皂苷A的濃度為1g/100ml，賴氨酸的濃度為0.15g/100ml；2)用乳酸調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為4.5；3)將調(diào)節(jié)pH值后的溶液用0.22μm的濾膜過濾；4)灌裝后冷凍干燥。冷凍干燥的程序如下：預(yù)凍：先將物料溫度迅速降至-25℃，保持0.5小時，然后再將物料溫度緩慢降至-35℃，保溫5小時；一次升華：控制真空度在20帕以下，將物料溫度升高到-5℃并保溫3小時；再干燥：將物料溫度升到40℃，保溫10小時。實施例31)將25g七葉皂苷A、5g天冬氨酸、150g甘露醇溶于1250ml注射用水制得混合溶液，所述混合溶液中甘露醇的濃度為12g/100ml，七葉皂苷A的濃度為2g/100ml，天冬氨酸的濃度為0.4g/100ml；2)用乳酸調(diào)節(jié)混合溶液的pH值為5.5；3)將調(diào)節(jié)pH值后的溶液用0.22μm的濾膜過濾；4)灌裝后冷凍干燥。冷凍干燥的程序如下：預(yù)凍：先將物料溫度迅速降至-22℃，保持0.5小時，然后再將物料溫度緩慢降至-38℃，保溫3小時；一次升華：控制真空度在20帕以下，將物料溫度升高到-15℃并保溫5小時；再干燥：將物料溫度升到30℃，保溫15小時。試驗例1.抗炎活性試驗試驗藥物：將七葉皂苷A分別與甘氨酸、賴氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、谷氨酸按15∶1的重量比混合，并按常規(guī)方法制成凍干粉針，同時以七葉皂苷A凍干粉針為陽性對照。取體重25～30g的健康雄性昆明小鼠100只，分為10大組，每組10只小鼠，靜脈注射0.125mg/Kg(以七葉皂苷A計)，空白對照注射生理鹽水，30分鐘后，每鼠右耳涂抹二甲苯0.06ml，再過2小時后處死小鼠，用打孔器打下雙耳圓片，稱重，計算各鼠的腫脹度，詳細方法參照文獻CN1931176A。試驗結(jié)果見表1。表1七葉皂苷A注射劑的抗炎活性分組試驗藥物動物數(shù)(n)腫脹值(x±s.mg)抑制率(％)1七葉皂苷A+甘氨酸105.3571.22七葉皂苷A+賴氨酸106.4265.43七葉皂苷A+脯氨酸107.0761.94七葉皂苷A+天冬氨酸105.8668.45七葉皂苷A+酪氨酸104.7974.26七葉皂苷A+半胱氨酸107.6758.77七葉皂苷A+色氨酸109.8646.98七葉皂苷A+谷氨酸109.6048.39七葉皂苷A(陽性對照)1010.0046.110生理鹽水(空白對照)1018.56——從以上試驗可以看出：與空白對照相比，七葉皂苷A及其氨基酸組合物均具有明顯的抗炎活性。與七葉皂苷A陽性對照相比，第1～6組均具有顯著差異，尤其是第1和第5組的腫脹抑制率達到了70％以上，而第7、8組與陽性對照相比沒有明顯差異，說明甘氨酸、賴氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、半胱氨酸能進一步提高七葉皂苷A的抗炎活性。2.抗?jié)B出活性試驗試驗藥物同試驗例1。參照文獻CN1931176A試驗例6的方法，取健康昆明小鼠100只，分成10組，每組10只，靜脈注射1mg/Kg(以七葉皂苷A計)，空白對照注射生理鹽水，1小時后，靜脈注射1％伊文思藍生理鹽水，同時腹膜注射1％醋酸溶液0.2ml，20分鐘后處死小鼠，剪開腹腔，用生理鹽水6ml，分次洗滌腹腔，將洗滌液合并，加生理鹽水10ml，離心300rpm×20分鐘，取上清液，在590nm處測定吸光度值，結(jié)果見表2。表2七葉皂苷A注射劑的抗?jié)B出活性分組試驗藥物動物數(shù)(n)吸光度抑制率(％)1七葉皂苷A+甘氨酸100.170754.72七葉皂苷A+賴氨酸100.183951.23七葉皂苷A+脯氨酸100.166255.94七葉皂苷A+天冬氨酸100.189149.85七葉皂苷A+酪氨酸100.147360.96七葉皂苷A+半胱氨酸100.179052.57七葉皂苷A+色氨酸100.216342.68七葉皂苷A+谷氨酸100.221641.29七葉皂苷A(陽性對照)100.231038.710生理鹽水(空白對照)100.3768——從以上試驗可以看出：與空白對照相比，七葉皂苷A及其氨基酸組合物均具有明顯的抗?jié)B出活性。與七葉皂苷A陽性對照相比，第1～6組均具有顯著差異，尤其是第5組的滲出抑制率達到了60％以上，而第7、8組與陽性對照相比沒有明顯差異，說明甘氨酸、賴氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、半胱氨酸能進一步提高七葉皂苷A的抗?jié)B出活性。3.血管刺激性試驗試驗藥物與實施例1相同。參考文獻CN1931176A試驗例3的方法，取體重為2Kg的家兔30只分成10組，每組3只，分組方法與試驗例1相同。各試驗藥物以所含七葉皂苷A計，每兔每天1ml∶5mg，空白對照注射生理鹽水，連續(xù)3天從同一耳緣靜脈注射，第4天處死動物，剪下給藥耳緣，觀察藥物對靜脈的刺激作用，并作病理切片檢查，結(jié)果如下：第1～8組均未見明顯刺激反應(yīng)，病理切片觀察與生理鹽水組基本相似，未見血管及其周圍細胞有變性、壞死及明顯病理異常；第9組出現(xiàn)嚴重充血水腫，大部分注射部位顯紫褐色，病理切片表明有嚴重變性、壞死和血栓形成；第10組動物的耳朵未見明顯刺激反應(yīng)，病理切片未見異常。以上結(jié)果表明：氨基酸能明顯地降低七葉皂苷A的血管刺激性。4.肝腎毒性試驗取健康昆明小鼠100只，分成10組，每組10只，靜脈注射5mg/Kg(以七葉皂苷A計)，連續(xù)給藥7d,對照組靜脈注射生理鹽水.給藥前稱重并記錄,處死前禁食12h,稱重。15％烏拉坦腹腔注射麻醉,腹主動脈采血,分離血清,測定各組大鼠血清氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)四項生化指標。處死大鼠，取肝、腎臟測定臟器系數(shù)(臟/體比值)＝臟器質(zhì)量/體質(zhì)量×100％，取肝臟和腎臟的組織，分別用4％的甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察肝臟和腎臟組織的顯微結(jié)構(gòu)。試驗結(jié)果見表3，表4。表3七葉皂苷A注射劑對小鼠生化指標水平的影響表4七葉皂苷A注射劑對小鼠肝臟、腎臟系數(shù)的影響分組試驗藥物動物數(shù)(n)肝臟系數(shù)腎臟系數(shù)1七葉皂苷A+甘氨酸106.876±0.5291.762±0.2362七葉皂苷A+賴氨酸106.843±0.6821.755±0.2013七葉皂苷A+脯氨酸106.836±0.7431.783±0.1984七葉皂苷A+天冬氨酸106.891±0.4741.790±0.2415七葉皂苷A+酪氨酸106.867±0.5381.748±0.2256七葉皂苷A+半胱氨酸106.835±0.3271.757±0.3217七葉皂苷A+色氨酸106.981±0.6731.813±0.1178七葉皂苷A+谷氨酸106.905±0.5321.801±0.2219七葉皂苷A(陽性對照)108.049±0.9522.831±0.31410生理鹽水(空白對照)106.821±0.7681.742±0.237從表3和表4的試驗結(jié)果可以看出，第1～8組的各項生化指標以及肝臟、腎臟系數(shù)與生理鹽水組比較無顯著差異，其病理切片觀察與生理鹽水組基本相似，未見肝腎細胞有變性、壞死及明顯病理異常；第9組出現(xiàn)嚴重肝腎腫大，各項生化指標顯著增大，病理切片表明有嚴重出血、變性、壞死等病理變化。以上結(jié)果表明：氨基酸能明顯地降低七葉皂苷A的肝腎毒性。當(dāng)前第1頁1 2 3