本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及瑞普特羅及其衍生物的新用途，具體涉及瑞普特羅及其衍生物在制備預(yù)防和/或治療脂肪肝產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

瑞普特羅為選擇性激動(dòng)支氣管平滑肌β2受體激動(dòng)劑，目前臨床用于支氣管哮喘，喘息型支氣管炎的治療。其擴(kuò)張支氣管作用強(qiáng)于間羥異丙腎上腺素，耐受性佳，口服后30min起效，維持時(shí)間4-6h，對(duì)心率、心排血量和血壓影響較小，而瑞普特羅在脂肪肝疾病中的治療作用目前尚無(wú)任何報(bào)道。

脂肪肝是指由于各種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積過(guò)多的病變。當(dāng)脂肪含量超過(guò)肝濕重5％時(shí)(正常為1～2％)，或組織學(xué)上脂肪變性超過(guò)30％肝實(shí)質(zhì)時(shí)稱(chēng)為脂肪肝。脂肪肝的主要病理生理學(xué)特征為肝細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集，肝細(xì)胞氣球樣變以及腫脹的線(xiàn)粒體。胰島素抵抗、內(nèi)臟脂質(zhì)沉積、炎癥和線(xiàn)粒體功能障礙為脂肪肝發(fā)展過(guò)程中重要的病理過(guò)程。我國(guó)目前脂肪肝的發(fā)病率已超過(guò)18％，脂肪肝已經(jīng)成為各種慢性肝臟疾病的主要病因，也是隱源性肝硬化的首因，而其發(fā)病趨年輕化趨勢(shì)。

目前臨床并無(wú)有效的治療脂肪肝的藥物。在臨床治療中，仍以去除病因、積極治療原發(fā)病和堅(jiān)持合理飲食制度為主，而藥物僅起輔助作用。常用藥物主要針對(duì)降血脂、肝細(xì)胞保護(hù)等方面，缺乏直接作用于肝臟脂質(zhì)沉積的有效治療手段。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一是提供一種瑞普特羅及其衍生物的新用途。

本發(fā)明所提供的瑞普特羅及其衍生物的新用途是其在制備預(yù)防和/或治療脂肪肝產(chǎn)品中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的瑞普特羅及其衍生物的結(jié)構(gòu)如通式i所示:

通式i中，q1和q2各自獨(dú)立地選自氫、羥基、鹵素、直鏈或支鏈烷基、環(huán)烷基、三鹵烷基、烷氧基、芳基、雜芳基、-(co)r1和-s(o2)r2；其中r1和r2各自獨(dú)立地選自c1-c4直鏈或支鏈烷基、氨基；

具體地，當(dāng)q1和q2均為羥基時(shí)，通式i所示化合物為瑞普特羅(reproterol)。

進(jìn)一步，所述瑞普特羅及其衍生物在制備如下任一產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍：

(i)降低患病機(jī)體肝臟組織中甘油三脂含量的產(chǎn)品；

(ii)減輕患病機(jī)體肝臟組織中脂肪變性的產(chǎn)品；

(iii)緩解患病機(jī)體肝臟組織中肝臟脂滴蓄積的產(chǎn)品；

(iv)降低患病機(jī)體肝臟組織中膽固醇含量的產(chǎn)品。

以上所述患病機(jī)體可為具有脂肪肝臨床癥狀的機(jī)體，如確診為脂肪肝的患者。

以上所述產(chǎn)品具體可為藥物或保健品。

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種預(yù)防和/或治療脂肪肝，降低患病機(jī)體肝臟組織中甘油三脂含量、減輕患病機(jī)體肝臟組織中脂肪變性、緩解患病機(jī)體肝臟組織中肝臟脂滴蓄積或降低患病機(jī)體肝臟組織中膽固醇含量的產(chǎn)品。

所述產(chǎn)品包含瑞普特羅或其衍生物。

以上所述患病機(jī)體可為具有脂肪肝臨床癥狀的機(jī)體，如確診為脂肪肝的患者。

以上所述產(chǎn)品具體可為藥物或保健品。

實(shí)驗(yàn)證明，使用瑞普特羅處理脂肪肝模型大鼠，可以顯著減輕肝臟脂肪變性、減輕肝臟脂滴蓄積以及減輕肝臟甘油三酯含量。因此，瑞普特羅及其衍生物對(duì)于預(yù)防和/或治療脂肪肝具有重要意義。

附圖說(shuō)明

圖1為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的體重變化對(duì)比圖。

圖2為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂肪變性外觀對(duì)比圖。

圖3為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂肪變性對(duì)比圖。cd+vehicle:普通飲食組，hfd+vehicle：高脂飲食給予安慰劑組，hfd+aims-r：高脂飲食給予瑞普特羅藥物組。

圖4為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂滴蓄積對(duì)比圖。cd+vehicle:普通飲食組，hfd+vehicle：高脂飲食給予安慰劑組，hfd+aims-r：高脂飲食給予瑞普特羅藥物組。

圖5為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂肝臟甘油三酯含量對(duì)比圖。

圖6為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂肝臟膽固醇含量對(duì)比圖。

圖7為以不同濃度的瑞普特羅處理hepg2細(xì)胞對(duì)油酸誘導(dǎo)的脂滴蓄積的作用圖。圖7柱狀圖中依次為給予dmso，給予100umoa(油酸),100umoa+12.5um瑞普特羅,100umoa+25um瑞普特羅,100umoa+50um瑞普特羅,100umoa+100um瑞普特羅。

圖8為以不同濃度的瑞普特羅處理hepg2細(xì)胞對(duì)油酸誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積的作用圖。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明，但本發(fā)明并不局限于此。

下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；下述實(shí)施例中所用的試劑、生物材料等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。

下述實(shí)施例中所采用的瑞普特羅購(gòu)自美國(guó)torontoresearchchemicalsinc公司，貨號(hào)為r144650，商品名為reproterol(瑞普特羅)。(文中涉及到的藥物或者圖上標(biāo)記r均指瑞普特羅)

實(shí)施例瑞普特羅的藥效實(shí)驗(yàn)

22只雄性sd大鼠(6周齡)購(gòu)自spf試驗(yàn)動(dòng)物中心，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，開(kāi)始試驗(yàn)，將大鼠按體重進(jìn)行蛇形分組，分為3組。其中，正常飲食對(duì)照組給予10％脂肪含量飼料，高脂飲食組及用藥組均給予45％脂肪含量飼料。8周時(shí)，高脂飲食組已經(jīng)出現(xiàn)顯著的體重增加(圖1)，正常飲食對(duì)照組及高脂飲食組均開(kāi)始應(yīng)用dmso灌胃處理，用藥組開(kāi)始應(yīng)用瑞普特羅3.6mg/kg/day。(大鼠飼料購(gòu)自江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司，瑞普特羅購(gòu)自torontoresearchchemicalsinc)。12周時(shí)稱(chēng)重，其結(jié)果如圖1所示。

圖1為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的體重變化對(duì)比圖。

由圖1可知：較高脂飲食組相比，給藥組體重有減輕趨勢(shì)。

大鼠稱(chēng)重后，應(yīng)用1％戊巴比妥鈉，腹腔注射麻醉大鼠，打開(kāi)腹腔，給大鼠肝臟照相。

圖2為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂肪變性外觀對(duì)比圖。

由圖2可知：較高脂飲食組，給藥組肝臟脂肪變性顯著減輕。

打開(kāi)腹腔后，應(yīng)用預(yù)冷的pbs，全身灌流，之后取一小塊肝臟組織，投入4％多聚甲醛中固定48h后，蔗糖脫水，石蠟包埋，切片，常規(guī)he染色。

圖3為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂肪變性對(duì)比圖。

由圖3可知：較高脂飲食組，給藥組肝臟臟脂肪變性顯著減輕。

經(jīng)過(guò)固定及脫水的肝臟組織，應(yīng)用oct包埋，液氮速凍，-80℃保存。染色時(shí)，切片先平衡至室溫，4％多聚甲醛室溫固定10min，蒸餾水3min洗3次，60％的異丙醇同化3-5min，將切片浸到油紅o工作液中，37℃，避光染色30min-2h。之后切片迅速依次經(jīng)過(guò)60％的異丙醇和70％的酒精，蒸餾水洗1次，蘇木素復(fù)染(染細(xì)胞核30s-30min)，自來(lái)水洗去浮色，封片。

圖4為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂滴蓄積對(duì)比圖。

由圖4可知：較高脂飲食組，給藥組肝臟脂滴蓄積有所緩解。

取約50mg左右肝臟組織，按照北京普利萊基因有限公司組織細(xì)胞甘油三酯酶法測(cè)定試劑盒e1013操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

圖5為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂肝臟甘油三酯含量對(duì)比圖。

由圖5可知：較高脂飲食組，給藥組肝臟內(nèi)甘油三酯含量明顯減少。

取約50mg左右肝臟組織，按照北京普利萊基因有限公司組織細(xì)胞總膽固醇酶法測(cè)定試劑盒e1015操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

圖6為正常飲食對(duì)照組、高脂飲食組、高脂飲食及瑞普特羅給藥組sd大鼠的肝臟脂肝臟膽固醇含量對(duì)比圖。

由圖6可知：較高脂飲食組，給藥組肝臟內(nèi)膽固醇含量明顯減少。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：hepg2細(xì)胞用含10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)液，于37℃，5％co2條件下培養(yǎng)，細(xì)胞長(zhǎng)至90％融合時(shí)，以1：3傳代，以相同密度種植到六孔板中，融合度達(dá)50％時(shí)進(jìn)行無(wú)血清培養(yǎng)12h，應(yīng)用油酸100um誘導(dǎo)脂滴生成，同時(shí)再分別給予dmso或瑞普特羅處理48h。

圖7為以不同濃度的瑞普特羅處理hepg2細(xì)胞對(duì)油酸誘導(dǎo)的脂滴蓄積的作用圖。

由圖7可知：在hepg2上給予瑞普特羅處理細(xì)胞48h，能顯著緩解油酸誘導(dǎo)的脂滴蓄積。

圖8為瑞普特羅10um處理hepg2細(xì)胞對(duì)油酸誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積的作用圖。

由圖8可知：在hepg2上給予瑞普特羅10um處理細(xì)胞48h，能顯著逆轉(zhuǎn)油酸誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積。