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      一種靈芝和人參復合提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法

      文檔序號:79975閱讀:468來源:國知局
      專利名稱:一種靈芝和人參復合提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
      一種靈芝和人參復合提取物及其制備方法和應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域
      [0001]本發(fā)明涉及食用藥用真菌和草本植物的深加工領(lǐng)域,確切地說,是涉及一種對靈芝和人參的活性成分進行萃取的方法。
      背景技術(shù)
      [0002]靈芝(Ganodermalucidum)是一種靈芝屬真菌,也稱為靈芝草、仙草、瑞草、神草等,是補益強壯,扶正固本的珍貴藥材,具有多種生理活性和藥理作用,是祖國傳統(tǒng)中藥寶庫中的珍貴藥材。從現(xiàn)代中醫(yī)學的觀點來看,靈芝具有無毒性、無副作用;能對全身器官有療效;可以促使全部器官機能正?;忍攸c。靈芝中的有效成分主要有靈芝多糖、靈芝酸、核苷類、留醇類、生物堿類、氨基酸多肽類、無機元素和其它不飽和脂肪酸類。在我國,根據(jù)外觀對靈芝進行劃分有赤芝、紫芝、黃芝、白芝、黑芝、青芝等六種,主要分布在我國黑龍江、吉林、河北、山東、山西、內(nèi)蒙古、安徽、江蘇、浙江、江西、廣東、廣西、貴州、云南、湖南、福建及臺灣等地。其中長白山靈芝是一種生長在我國東北長白山中的赤芝。[0003]靈芝油是存在于靈芝子實體和靈芝孢子中的脂溶性揮發(fā)成分,在常溫下呈膏狀,其主要成分為靈芝酸(主要為三萜類物質(zhì))、氨基酸多肽和脂肪酸。其中三萜類物質(zhì)具有強烈的藥理活性,有抑制腫瘤、止痛、鎮(zhèn)靜、抑制組織胺釋放、解毒、保肝、毒殺腫瘤細胞等功效。目前已知的靈芝三萜成分有一百多種。一般地講,靈芝生長期越長,其中的靈芝酸的含量就越高,而靈芝酸含量越高靈芝就越貴重。目前,靈芝油已被制成丸劑或片劑,也可以制成口服液用于抑制腫瘤,延長癌癥患者的壽命。[0004]人參(Ginseng)是一種多年生草本植物,被人們稱為“百草之王”。它是馳名中外、老幼皆知的名貴藥材。目前已知人參中的藥用成分主要有人參皂甙類、有機酸及酯類、維生素類、留醇、甙類以及多種酶。在人參油中主要含有皂甙和有機酸及酯,其中人參二醇和人參三醇均是三萜類化合物,有較強的藥理活性。對久病、失血、脫液所致元氣欲脫,神疲脈微;脾氣不足之食少倦怠,嘔吐泄瀉;肺氣虛弱之氣短喘促,咳嗽無力;心氣虛衰之失眠多夢,驚悸健忘,體虛多汗;津虧之口渴,消渴;血虛之萎黃,眩暈;腎虛陽萎,尿頻,氣虛外感等有著顯著的療效。[0005]目前,超臨界二氧化碳萃取是將靈芝油從靈芝實體和靈芝孢子中高效率無成分破壞地提取出來的一種有效方法。在用超臨界二氧化碳萃取靈芝油方面的發(fā)明創(chuàng)造中,中國專利申請?zhí)枮?00610033686, 公開號為CN1850124公開的一種超臨界CO2萃取靈芝孢子油的方法,是選用破壁靈芝孢子粉為原料,混合一定量的粒狀填料,CO2壓力范圍在10 35MPa,溫度范圍在35 55°C下萃取2_5小時;一級分離釜壓力范圍在8 lOMPa,溫度范圍在30 50°C,二級分離釜壓力范圍在4 6MPa,溫度范圍在30 50°C,進行分離,獲得淡黃色靈芝孢子油。申請?zhí)枮?00410017468,公開號為CN1562334公開的全靈芝孢子中有效成分的超臨界CO2萃取方法,是將粉碎為顆粒的靈芝子實體與靈芝孢子混合物置于萃取釜,CO2壓力范圍在12 40MPa,溫度范圍在32 48°C下萃取3_6小時;在分離釜減壓降溫后流出呈油、膏狀態(tài)的全靈芝孢子提取物。申請?zhí)枮?00610000663,公開號為CN100998613公開的一種超臨界技術(shù)生產(chǎn)靈芝有效成分的方法,是以小麥培養(yǎng)靈芝菌的成品為原料,采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)獲得靈芝油、靈芝三萜類成分、靈芝核苷成分、靈芝留醇和生物堿。申請?zhí)枮?00410005571,公開號為CN1560072公開的一種從靈芝中制備靈芝三萜酸和靈芝多糖的方法,是將靈芝子實體的顆粒物為原料,向提取罐內(nèi)注入CO2和極性溶劑,提取壓力為25 50MPa,極性溶劑注入量按體積百分比為10 20%,提取溫度為35 80°C,提取時間2-4小時,得到靈芝三萜酸提取液。申請?zhí)枮?00810023834.9,公開號為CN101269095A的靈芝與靈芝孢子超臨界復合式加工方法,是將靈芝子實體與破壁靈芝孢子粉混合制成復合粉,利用超臨界CO2進行提取,同時滲入30% 5%夾帶劑水、乙醇,以便得到靈芝孢子油。申請?zhí)枮?00310107892.7,公開號為CN1607001A的用靈芝菌絲體萃取靈芝油的方法,是將靈芝菌絲體粉碎后用超臨界CO2萃取靈芝油。萃取釜內(nèi)萃取壓力為15 35MPa ;萃取溫度為35 60°C ;C02流體流量為60 100kg/h ;萃取時間為0.5 4h。[0006]上述專利主要從萃取釜及分離釜中CO2的壓力、溫度及萃取時間等條件角度,在一定程度上解決了從相關(guān)靈芝子實體、靈芝孢子粉以及靈芝菌絲等原料中提取靈芝油問題。然而以一定重量比例的靈芝子實體和人參制成復合粉,用超臨界CO2方法獲取靈芝/人參復合油方面的技術(shù)還未見專利報道。從中醫(yī)學來講,靈芝油與人參油合理配伍能夠提高藥理活性,而從靈芝人參復合粉末中萃取得到的靈芝/人參復合油與簡單同比例靈芝油和人參油相加得到的混合油相比,其前者的藥理活性顯著高于后者。因此,從靈芝人參復合粉中提取靈芝/人參復合油對于相關(guān)中醫(yī)新藥的發(fā)展具有重要的意義。
      發(fā)明內(nèi)容
      [0007]本發(fā)明的目的之一是提供一種靈芝和人參的復合提取物,具有比分別提取的靈芝和人參提取物的混合物更顯著的藥理活性。[0008]本發(fā)明的另一個目的是提供所述靈芝和人參的復合提油取物的制備方法。[0009]本發(fā)明的再一個目的是提供所述靈芝和人參的復合提油取物在藥物制備中的應(yīng)用。[0010]本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:[0011]提供一種靈芝和人參的復合提取物,它是以1:5 5:1重量比的靈芝和人參為原料,混合制成復合粉末后,用超臨界CO2流體萃取得到的靈芝/人參復合油。[0012]所述的靈芝優(yōu)選靈芝子 實體;進一步優(yōu)選長白山特產(chǎn)的赤靈芝子實體。所述的人參優(yōu)選生曬參;進一步優(yōu)選長白山特產(chǎn)的生曬參。[0013]所述的靈芝和人參的重量比優(yōu)選1:5 5:1,更優(yōu)選1:2 2:1 ;最優(yōu)選1:1。[0014]所述的復合粉末,優(yōu)選細度為20 40目。[0015]所述的超臨界CO2流體萃取靈芝/人參復合油的方法,優(yōu)選使所述的靈芝和人參復合粉末在由萃取釜、一級分離釜和二級分離釜構(gòu)成的超臨界CO2流體萃取系統(tǒng)中,經(jīng)過裝料、萃取、分離過程,得到靈芝/人參復合油。[0016]所述的裝料優(yōu)選將所述的靈芝和人參的復合粉末含水率控制在12 15%,然后均勻裝填到超臨界CO2流體萃取料罐中,裝填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ;[0017]所述的萃取優(yōu)選將CO2在裝填有所述的靈芝和人參復合粉末的萃取系統(tǒng)中循環(huán),同時向萃取釜打入85%乙醇作夾帶劑;按CO2流體體積和料罐橫截面積計,控制CO2流量為0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜內(nèi)的壓力保持在28 32MPa、溫度保持在55 60°C ;夾帶劑打入量按靈芝/人參復合粉末重量計為0.01 0.04mL/g ;萃取時間為2.5 24小時。[0018]所述的分離優(yōu)選一級分離釜的壓力保持在6 8MPa、溫度保持在60 65°C;二級分離釜的壓力保持在4 6MPa、溫度保持在35 40°C。[0019]本發(fā)明還提供所述的靈芝和人參的復合提取物的制備方法,包括以下步驟:[0020]I)將靈芝和人參分別初步粉碎后,按照所述1: 5 5:1的重量比混合均勻,再進一步將靈芝和人參的混合物粉碎至20 40目;[0021]2)將步驟I)得到的靈芝和人參的復合粉末含水率控制在12 15%,然后均勻裝填到超臨界CO2流體萃取料罐中,裝填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ;[0022]3)將CO2在由萃取釜、一級分離釜和二級分離釜構(gòu)成的超臨界CO2流體萃取系統(tǒng)中循環(huán),同時向萃取釜打入85%乙醇作夾帶劑;按CO2流體體積和料罐橫截面積計,控制CO2流量為0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜內(nèi)的壓力保持在28 32MPa、溫度保持在55 60°C ;夾帶劑打入量按靈芝/人參復合粉末重量計為0.01 0.04mL/g ;萃取時間為2.5 24小時;所述的一級分離釜的壓力保持在6 8MPa、溫度保持在60 65°C;上述的二級分離釜的壓力保持在4 6MPa、溫度保持在35 40°C,最終得到本發(fā)明所述的靈芝和人參的復合提取物。[0023]本發(fā)明所述的制備方法中, 步驟2)所述的控制靈芝和人參的復合粉末含水率,可以通過現(xiàn)有的多種方法完成,例如可以通過以下方法實現(xiàn):[0024]首先測定靈芝子實體和生曬參的含水率。方法是將一個批次的靈芝子實體和生曬參分別取樣破碎成粒度為8 12_的塊體,稱其重量(Wtl)后放置到真空干燥箱中,其真空度為小于50Pa,在60°C下恒溫干燥2小時,自然冷卻至室溫后取出稱重(W),其含水率為U = (W0-W) /X。再對同一批次的將靈芝子實體和生曬參塊體稱重,分別為Wa2和WA#,按一定重量比例貨靈芝/貨人參=1:5 5:1混合均勻并繼續(xù)破碎到20 40目粉末。根據(jù)所測定的含水率,U U入#對同一批次的靈芝子實體和生曬參復合粉用水進行加濕或干燥處理,使復合粉的含水率保持在12 15%。[0025]本發(fā)明所述的制備方法中,步驟3)所述的CO2流體的流量Q (單位是立升/小時(L/h))與復合粉的裝填密度及料罐的橫截面積S (單位是平方厘米(cm2))有關(guān),定義比流量q=Q/S ;所述的夾帶劑的打入量V與復合粉的重量W有關(guān)。[0026]步驟3)上述的萃取中,在所述工藝條件下萃取24小時后已基本沒有萃取物,可以認為經(jīng)24小時萃取已將復合粉末中的靈芝/人參復合油完全萃取出來。定義萃取率n=x小時復合油提取重量(Wx) /24小時復合油提取重量(W24X所述的X小時復合油提取重量是指在上述工藝參量下,經(jīng)X小時萃取后在一級分離釜和二級分離釜得到的復合油重量之和;所述的24小時復合油提取重量是指在同樣工藝參量下,經(jīng)24小時萃取后在一級分離釜和二級分離釜得到的復合油重量之和。[0027]在本發(fā)明所述的工藝參量下,經(jīng)4小時萃取,其萃取率n高于95%。經(jīng)色譜分析表明,其三萜類物質(zhì)含量高于22%。[0028]本發(fā)明還提供所述的靈芝和人參的復合提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。[0029]所述的抗腫瘤藥物優(yōu)選抗口腔粘膜癌的藥物。[0030]與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明先將靈芝和人參混合制粉后,再經(jīng)超臨界CO2流體萃取,得到的靈芝和人參復合提取物,不僅在靈芝和人參活性成分提取率方面取得了顯著提高,而且本發(fā)明人經(jīng)過試驗發(fā)現(xiàn),經(jīng)本發(fā)明方法獲得的靈芝/人參復合油,比分別提取的靈芝油和人參油以同比例簡單混合得到的混合油的藥理活性顯著提高,有以下對比試驗為證:[0031]1.試驗制劑及動物飼養(yǎng):[0032]取本發(fā)明實施例1制備的復合油10克,用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制成濃度為10g/L的靈芝/人參復合油羧甲基纖維素鈉溶液,簡稱A溶液。[0033]再取單獨用靈芝經(jīng)超臨界CO2流體萃取的靈芝油5克、單獨用人參經(jīng)超臨界CO2流體萃取的人參油5克,混合在一起,用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制成濃度為10g/L的靈芝/人參混合油羧甲基纖維素鈉溶液,簡稱B溶液。[0034]再取單獨用靈芝經(jīng)超臨界CO2流體萃取的靈芝油10克,用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制成濃度為10g/L的靈芝油羧甲基纖維素鈉溶液,簡稱C溶液。[0035]取0.5%羧甲基纖維素鈉溶液為D溶液。[0036]6 7周齡健康的金黃地鼠240只,體重80 100g,雌雄各半。隨機分為A、B、C和D四組,在干燥、空氣流通、24小時光暗循環(huán)條件下雌雄分籠飼養(yǎng),飼以金黃地鼠專用飼料,飲用水為普通自來水。[0037]用分析純丙酮將二甲基苯丙蒽(9,10-dimethyl-l,2-benzanthracene, DMBA,購自Sigma公司)配置成0.5% (5g/L)的DMBA丙酮液。用于誘導金黃地鼠頰囊癌變。[0038]2.試驗方案:[0039](I)A組60只,常規(guī)飼養(yǎng)2周后,每日上午禁食4小時,按100mg/kg劑量將A溶液Iml經(jīng)口直接喂入。每周一、三、五對金黃地鼠雙側(cè)頰囊圓周式涂布2次DMBA丙酮液,涂藥前后吹干頰囊粘 膜,涂藥后禁水禁食2小時。涂布期間分6,9,12周(周日)各處死20只,得到雙側(cè)頰囊標本。[0040](2)B組60只,常規(guī)飼養(yǎng)2周后,按100mg/kg劑量灌胃喂服B溶液lml。其余同A組。[0041](3)C組60只,常規(guī)飼養(yǎng)2周后,按100mg/kg劑量灌胃喂服C溶液lml。其余同A組。[0042](4) D組60只,常規(guī)飼養(yǎng)2周后,灌胃喂服D溶液lml。其余同A組。[0043]各組處死后取動物頰囊粘膜病變組織進行常規(guī)脫水、包埋、切片并作HE染色。根據(jù)WHO 口腔癌前病變協(xié)作中心12項診斷標準進行分級診斷,比較各組病損的組織學嚴重程度。并結(jié)合肉眼觀察。得到結(jié)果表I和表2所示:[0044]表中“正?!睘檎pつ?復層角化鱗狀上皮,細胞排列整齊,無釘突或釘突不明顯。棘細胞層較人之正常黏膜薄,基底層細胞明顯,類似人之正常黏膜。[0045]表中“單純增生”為上皮單純增生黏膜:上皮多數(shù)呈過度角化,少數(shù)錯角化。棘層增厚?;啄と哉R,固有層下有淋巴細胞、漿細胞浸潤。[0046]表中“異常增生”為上皮異常增生黏膜:多數(shù)基底細胞極性消失,上皮釘突呈釘狀、乳頭狀。上皮層次紊亂,胞核濃染,并有核仁增大,有絲分裂相增加。棘細胞層中單個或成團細胞角化。基底膜仍完整,未侵入黏膜下層。根據(jù)異型性程度和累及范圍分為輕、中、重三級。輕度和中度非典型增生,累及上皮層下部的1/3 2/3處,病因消除后可恢復正常。重度非典型增生累及上皮2/3以上尚為達到全層且很難逆轉(zhuǎn),常轉(zhuǎn)變?yōu)榘?。[0047]表中鱗癌:細胞異形性明顯,上皮增殖并突入結(jié)締組織內(nèi),呈團塊狀或條索狀排列,部分可見明顯的角化珠,核分裂象增加,細胞與胞核呈多形性。B、C組所誘導的癌均為疣狀癌,D組多為浸潤性鱗癌。[0048]表I動物頰囊粘膜組織病理觀察結(jié)果(例)[0049]
      權(quán)利要求
      1.一種靈芝和人參的復合提取物,其特征在于:它是以1:5 5:1重量比的靈芝和人參為原料,混合制成復合粉末后,用超臨界CO2流體萃取得到的靈芝/人參復合油。
      2.權(quán)利要求
      1所述的靈芝和人參的復合提取物,其特征在于:所述的靈芝為靈芝子實體;所述的人參為生曬參。
      3.權(quán)利要求
      1所述的靈芝和人參的復合提取物,其特征在于:所述的靈芝和人參的重量比為1:5 5:1,優(yōu)選1:1。
      4.權(quán)利要求
      1所述的靈芝和人參的復合提取物,其特征在于:所述的復合粉末細度為20 40目。
      5.權(quán)利要求
      1所述的靈芝和人參的復合提取物,其特征在于:所述的超臨界CCV流體萃取靈芝/人參復合油的方法,是所述的靈芝和人參復合粉末在由萃取釜、一級分離釜和二級分離釜構(gòu)成的超臨界CO2流體萃取系統(tǒng)中,經(jīng)過裝料、萃取、分離過程,得到靈芝/人參復口徹O
      6.權(quán)利要求
      5所述的靈芝和人參的復合提取物,其特征在于:所述的裝料是將所述的靈芝和人參的復合粉末含水率控制在12 15%,然后均勻裝填到超臨界CO2流體萃取料罐中,裝填密度控制在0.10 0.25g/cm3。
      7.權(quán)利要求
      5所述的靈芝和人參的復合提取物,其特征在于:所述的萃取是將CO2在裝填有所述的靈芝和人參復合粉末的萃取系統(tǒng)中循環(huán),同時向萃取釜打入85%乙醇作夾帶劑;按CO2流體體積和料罐橫截面積計,控制CO2流量為0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜內(nèi)的壓力保持在28 32MPa、溫度保持在55 60°C;夾帶劑打入量按靈芝/人參復合粉末重量計為0.01 0.04mL/g ;萃取時間為2.5 24小時。
      8.權(quán)利要求
      5所述的靈芝和人參的復合提取物,其特征在于:所述的分離是將一級分離釜的壓力保持在6 8MPa、溫度保持在60 65°C ;二級分離釜的壓力保持在4 6MPa、溫度保持在35 40°C。
      9.制備權(quán)利要求
      1所述的靈芝和人參的復合提取物的方法,包括以下步驟: 1)將靈芝和人參分別初步粉碎后,按照所述1:5 5:1的重量比混合均勻,再進一步將靈芝和人參的混合物粉碎至20 40目; 2)將步驟I)得到的靈芝和人參的復合粉末含水率控制在12 15%,然后均勻裝填到超臨界CO2流體萃取料罐中,裝填密度控制在0.10 0.25g/cm3 ; 3)將CO2在由萃取釜、一級分離釜和二級分離釜構(gòu)成的超臨界CO2流體萃取系統(tǒng)中循環(huán),同時向萃取釜打入85%乙醇作夾帶劑;按CO2流體體積和料罐橫截面積計,控制CO2流量為0.3 0.6L/h.cm2 ;萃取釜內(nèi)的壓力保持在28 32MPa、溫度保持在55 60°C ;夾帶劑打入量按靈芝/人參復合粉末重量計為0.01 0.04mL/g ;萃取時間為2.5 24小時;所述的一級分離釜的壓力保持在6 8MPa、溫度保持在60 65°C;上述的二級分離釜的壓力保持在4 6MPa、溫度保持在35 40°C,最終得到所述的靈芝和人參的復合提取物。
      10.權(quán)利要求
      1所述的 靈芝和人參的復合提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
      專利摘要
      本發(fā)明提供一種靈芝和人參的復合提取物,它是以1:5~5:1重量比的靈芝和人參為原料,混合制成復合粉末后,用超臨界CO2流體萃取得到的靈芝/人參復合油。本發(fā)明所述的靈芝和人參復合提取物,比分別提取的靈芝油和人參油以同比例簡單混合得到的混合油的藥理活性有顯著提高。本發(fā)明還提供所述復合提取物的制備方法,及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
      文檔編號A61K36/258GKCN103191164SQ201310127859
      公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月12日
      發(fā)明者楊海濱 申請人:吉林大學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan
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