專利名稱:一種藥物制劑的制備過程的制作方法
1-(5-氧代己基)-3，7-二甲基黃嘌呤(己酮可可堿)可用作為改善血液流動性質(zhì)的藥物，這已為大家所熟知。據(jù)認為其機制可能是血液粘性應(yīng)力的減弱是由于紅細胞的變形性所致，而這種變形性可為己酮可可堿所改善(Deutsche Mediz，Wochenschrift107(1982)，1674)。此外，己酮可可堿也可體外抑制血小板凝集，但其濃度要高于治療劑量下所達到的藥物濃度〔IRCS(Med.Sci.)8(1980)，293，Thrombos.Haemostas.46(1981)272〕。
此外，據(jù)報道給予大鼠己酮可可堿能增加大鼠主動脈體外釋放有抗凝集作用的物質(zhì)。亦有報道，因此而增加的這種抗凝集物質(zhì)(據(jù)認為是前列腺環(huán)素)的釋放，可被給予大鼠的乙酰水楊酸所抑制(Vasa10(1981)249)。我們所作的有關(guān)試驗證實了這一結(jié)果(見下述)。
0-乙?；畻钏釋θ搜“迥幸种谱饔?Br.J.Clin.Pharmac.7(1979)283)。并據(jù)認為它對預防血栓形成和中風可能有有價值的治療作用(Blood 52 (1978)1073，N.Engl.J.Med.299(1978)53)。據(jù)報道其作用機制為乙酰水楊酸能抑制集中在血小板內(nèi)的環(huán)氧合酶(J.Clin.Invesf.56(1975)624)和抑制促進凝集的凝血氧烷A2的生物合成。然而，乙酰水楊酸也能抑制血管壁內(nèi)的環(huán)氧合酶，因而抑制前列腺環(huán)素(它抑制凝集作用)的合成。但對血管環(huán)氧合酶的這種抑制作用僅在大劑量水楊酸下才出現(xiàn)(Pharmacol，Research Commun.10 (1978)759)，所以推薦使用低劑量乙酰水楊酸來達到抗血栓形成作用(Lancet，ⅲ(1979)1213，Prosta-glandins and Medicines 4 (1980)439)。然而還有報道乙酰水楊酸的抗血栓形成作用隨劑量增加而增強，而在對前列腺環(huán)素和凝血氧烷生物合成有明顯抑制作用的劑量下效果最佳(Prostaglandines，Leukotrienes and Medicine 12 (1983)235)。
通過制成乙酰水楊酸和黃嘌呤衍生物7-(2-二乙氨乙基)-1，3-二甲基黃嘌呤的酸-堿加合物可以把它們的有利作用綜合起來，這種加合物的治療作用文獻已有敘述(GB Laid-Open Applicafion 2096138)。此外，也有報道這種結(jié)合的、同時給予的乙酰水楊酸和己酮可可堿對裝有人工心瓣膜病人血小板存活時間的影響(Singapore Med Journal 20 Suppl 1 (1979)30)。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，按特定順序并經(jīng)過一段時間間隔相繼給予A)黃嘌呤衍生物或其活性代謝物和B)乙酰水楊酸或其可供藥用的鹽，有可能大大提高對因血液成分(尤其是血小板或紅細胞以及白細胞)損壞引起的或以此為特征的疾病的療效。這種先給予黃嘌呤衍生物(特別是己酮可可堿)，隔10分鐘到4小時再給予乙酰水楊酸或其鹽的序貫給藥方法比同時給予這兩種藥物加合物的效果要好得多。事實上后一種給藥方法使這種影響減弱。這就是為什么同時給予黃嘌呤衍生物如己酮可可堿和乙酰水楊酸只能達到單獨給予乙酰水楊酸時所達到的抗血栓形成和抗凝集作用的原因(見下述，表1和2)。
因此本發(fā)明涉及以這樣一種方式使含A)式如(Ⅰ)或(Ⅱ)的黃嘌呤衍生物(見專利權(quán)利要求
書1)或氧代烷基-或羥烷基黃嘌呤的前藥或它們的活性代謝物和B)O-乙?；畻钏峄蚱淇晒┧幱玫柠}以及含或不含C)一種藥用賦形劑的制劑首先釋放A)組分。這樣可以用于治療因血液成分(尤其是血小板或紅細胞以及白細胞)損壞引起的或以此為特征的疾病。換言之，根據(jù)本發(fā)明這種制劑(由于它有超加作用)適用于抗血栓形成，促進血液流動，抗炎，鎮(zhèn)痛，抗凝集和細胞抑制。因而本發(fā)明也涉及使用含A)式如(Ⅰ)或(Ⅱ)的黃嘌呤衍生物或式(Ⅰ)或(Ⅱ)的氧代烷基黃嘌呤的前藥或式如(Ⅰ)的羥基黃嘌呤的前藥或它們的活性代謝物和B)O-乙酰水楊酸或其可供藥用的鹽以及含或不含C)即制備能首先釋放組分A)的序貫釋放劑型的藥物賦形劑的制劑治療因血液成分損壞引起的疾病。本發(fā)明還涉及如權(quán)利要求
3所述的藥物制劑的制備和用這種制劑作為人用和獸用藥。根據(jù)本發(fā)明這種復方產(chǎn)品有可能使黃嘌呤衍生物甚至在乙酰水楊酸之前釋放(即被生物利用)。
特別突出的優(yōu)點是由于序貫給藥的超加作用，所以黃嘌呤衍生物和乙酰水楊酸的給藥劑量可以減少至假如單獨給予時只顯示極弱的藥理作用。這樣，也同時可以避免這些藥物在高劑量下產(chǎn)生的副作用。這一點很重要，因為眾所周知在常用劑量下，乙酰水楊酸能產(chǎn)生不良副反應(yīng)(例如British J.of Clinical Pharmacology 1980，10 Suppl 2和International Meeting on side effecfs of Anti-inflammatory，Analgesic Drugs，Verona，Sept 13～15，1982，文摘)如哮喘，過敏性蕁麻疹，鎮(zhèn)痛藥致腎病和消化性潰瘍。此外，黃嘌呤衍生物也可能產(chǎn)生不良副反應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明，這種復方產(chǎn)品能令人驚異地大幅度地減少為人治療所需的乙酰水楊酸劑量和黃嘌呤衍生物的數(shù)量，這樣可以大大改善總的毒理學耐受性(見下述)。
適宜的黃嘌呤衍生物為式如(Ⅰ)的1，3，7，-三取代化合物，其R1和R3中有一個為3～8C的直鏈烷基、(ω-1)-氧代烷基或(ω-1)-羥烷基，其它兩個基團R2和R3或R1和R2為1～8C(R1和R3)和1～4C(R2)直鏈或支鏈烷基，這兩個烷基取代基的碳原子的總數(shù)不超過10。
在這種情況下，式(Ⅰ)的黃嘌呤化合物最好是其R1或R3為5～6C的烷基、(ω-1)-氧代烷基或(ω-1)-羥烷基，兩個烷基取代物R2和R3或R1和R2總計含2～6個碳原子的化合物。
在這些化合物中，又以R1或R3帶一個己基、5-氧代己基或5-羥己基的那些化合物較好。這些化合物包括1-己基-3，7-二甲基黃嘌呤，1-(5-羥己基)-3，7-二甲基黃嘌呤，1，3-二甲基-7-(5-羥己基)黃嘌呤，1，3-二甲基-7-(5-氧代己基)黃嘌呤，1-(5-羥己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤和1-(5-氧代己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤。
另一組適宜的黃嘌呤包括式如(Ⅱ)的化合物，其中R為1～4C烷基。
不一定要用式如(Ⅰ)和(Ⅱ)的氧化烷基黃嘌呤和式如(Ⅰ)的羥烷基黃嘌呤本身，也可以用其前藥，這樣只在體內(nèi)經(jīng)過生物轉(zhuǎn)換后釋放出具有如式(Ⅰ)和(Ⅱ)取代基的有治療作用的黃嘌呤化合物。適于這種意圖的是那些縮醛化的氧代烷基黃嘌呤，其中羰基用式如(Ⅲ)的結(jié)構(gòu)單元取代(見專利權(quán)利要求
第6項)和具有結(jié)構(gòu)單元R6-CO-O-(Ⅳ)(代替羥基)的O-?；u烷基黃嘌呤，其中R4和R5各為不超過4C的烷基或一起構(gòu)成亞乙基，亞丙基或亞丁基，R6為不超過4C的烷基，苯基，取代苯基，吡啶基或取代吡啶基。
適于藥用的乙酰水楊酸鹽為那些帶金屬陽離子，銨，胺陽離子或季銨陽離子的鹽，雖然也可用其它金屬的陽離子如鋁、鋅和鐵，但最好用堿金屬如鋰，鈉、鉀和堿土金屬如鎂和鈣的金屬陽離子。
適于藥用的胺陽離子是那些伯、仲或叔胺如烷胺例如甲基一，二甲基一，三甲基一，乙基一，二丁基一，三異丙基一，N-甲基己基一，芐基一，β-苯乙胺，亞乙基二胺，二亞乙基三胺，哌啶，嗎啉，哌嗪，一、二和三乙醇胺，乙基二乙醇胺，N-丁基乙醇胺及類似的胺等。
黃嘌呤衍生物和乙酰水楊酸也可以同時給藥以達到超加作用，但還是以分開的制劑單位給藥為好。盡管這些組分可以混合在一起給藥，但其劑型要能保證時間上的序貫性。制劑單位可以是固體劑型如膠囊(包括微囊，通常它不含賦形劑)，片劑(包括包衣和藥丸)或栓劑。當用膠囊時，膠囊材料要承擔起賦形劑的功能。內(nèi)含物可以是粉末，膠體，乳劑，分散劑或溶液。然而，最直接和最方便的辦法是制備含這兩種有效成分的口服和經(jīng)口給藥配方。它含有計算量的活性化合物和所需的藥物賦形劑，其性質(zhì)要使得活性化合物的釋放是序貫進行的。也有可能采用合適的配方(栓劑)供直腸給藥用。同樣，也可制成透皮貼膏和胃腸道外(腹腔，靜脈，皮下或肌肉)注射劑，例如用適當?shù)亩嗍易⑸鋯卧葎┬汀?br>這種類型的復方產(chǎn)品可采用常規(guī)過程制備。根據(jù)本發(fā)明，活性化合物的序貫釋放(生物劑用度)可通過常規(guī)的包裹方法制備，如將含乙酰水楊酸或其可供藥用的鹽如DL-賴氨酸單乙酰水楊酸鹽的片劑、藥丸或顆粒用含活性化合物如己酮可可堿包裹(參考Sacker，F(xiàn)uchs和Speiser，Pharmazeutische Technologie，Stuttgart 1978，P 424)。最好與膨脹劑(分泌粘液的物質(zhì))，樹脂如聚苯乙烯或其它常用藥劑配合使用，以增強耐受性。這些片子，藥丸或顆粒按常規(guī)方法制成藥核。它也可含常用的賦形劑和其它輔料如淀粉，例如土豆淀粉，玉米淀粉或小麥淀粉，纖維素或它們的衍生物，尤其是微晶纖維素，硅膠，各種糖如乳糖，碳酸鎂和/或磷酸鈣。包衣或外層含例如己酮可可堿可用常規(guī)的制藥工藝如用模壓，浸漬，流化床或包衣罐包裹在藥核上，包衣溶液通常含糖和/或淀粉糖漿，并加入明膠，阿拉伯膠，聚乙烯基吡咯酮，合成纖維素酯，表面活性物質(zhì)，增塑劑，染料和類似的添加物，主要根據(jù)工藝要求而定。
也可用層片的劑型來達到活性化合物序貫釋放(這種劑型也包括非正園形藥心片)，Sucker等采用過這種方法。在這種劑型中，吸收最快的一層含黃嘌呤，最好與分泌粘液的物質(zhì)或其它提高耐受性的常用物質(zhì)配方。有效成分的釋放可以根據(jù)不同層釋放速度的差異加以控制。這種差異可通過采用適當?shù)某Ｓ幂o料如上所述的那些物質(zhì)。例如兩種活性成分(如己酮可可堿和乙酰水相酸)的梯度釋放也可通過在含乙酰水楊酸的組分內(nèi)加入緩釋劑來實現(xiàn)。在適當?shù)膱龊弦部捎脻B透膜如纖維素或聚苯乙烯為基質(zhì)的材料，或離子交換樹脂，或采用微囊劑型(它耐胃液的作用，所以能延遲釋放)。然而，含乙酰水楊酸的藥核也可以用例如聚甲基丙烯酸酯(Eudragit
)包衣，也能達到延遲釋放的效果。
所有常用的流動性調(diào)節(jié)劑，潤滑劑如硬脂酸鎂和脫模劑都可用于各種劑型的制造。
乙酰水楊酸與黃嘌呤衍生物如己酮可可堿的重量比可以在較寬的范圍內(nèi)變動。對于一種特定的復方其組分的正確比例可按下述實驗程序容易地確定。黃嘌呤衍生物例如己酮可可堿的重量比(以一份的乙酰水楊酸為基準)通常在最小值為0.1和最大值為50之間。最小值在0.3～0.5較好，但在2左右最好，最大值在10左右較好，也可以通過這些實驗程序來確定黃嘌呤和乙酰水楊酸給藥的最適時間間隔或從藥物制劑中釋放的最適速率。黃嘌呤衍生物例如己酮可可堿首先釋放，然后在15分鐘到4小時后再釋放乙酰水楊酸組分。時間間隔為20～90分鐘，以30～60分鐘最好。當然，給藥劑量與許多因素如治療對象(即人還是動物，其年齡，體重，一般健康狀態(tài))，癥狀的嚴重程度，需要治療的疾病類別，用其它藥物合并治療的情況，治療的次數(shù)等有關(guān)。一般日劑量的給藥次數(shù)不超過5次，最好1～3次。各個有效成分的重量比應(yīng)在上述范圍內(nèi)，并且組分的數(shù)量應(yīng)在治療對象能耐受的有效劑量范圍內(nèi)。
例如，當人用時單味乙酰水楊酸的推薦劑量為500～2，000毫克，最好為1，000毫克，每日服2～3次，而單味己酮可可堿的推薦劑量為200～800毫克，最好是300～600毫克，每天2～3次。從這些重量比以及乙酰水楊酸與己酮可可堿的比例，有可能正確地計算它們的數(shù)量。因而，根據(jù)本發(fā)明，適宜的治療包括給予例如1個以上，最好是3～8個單次量的復方。每個單次量含100～600毫克，至少為200最好不超過400毫克的黃嘌呤衍生物，特別是己酮可可堿和10～2，000毫克例如不超過400毫克的乙酰水楊酸或其等當量的鹽。當然，其數(shù)量與單次量的數(shù)目以及所治療的疾病有關(guān)。單次量可由例如幾片片劑組成，同時服入，然而，根據(jù)本發(fā)明，即使所用的乙酰水楊酸量特別小(例如10～50毫克/日以下)也可以獲得良好的療效，它比給予相同數(shù)量的單味水楊酸要好得多。
根據(jù)本發(fā)明，此復方也可以和已知的抗血栓形成藥和血小板凝集抑制劑一樣使用。體內(nèi)應(yīng)用包括給予人和動物以預防動、靜脈血栓形成，例如防止短暫性局部缺血發(fā)作和心肌梗塞以及中風的長期預防，動脈硬化預防和術(shù)后用藥以防止術(shù)后血栓形成，和癌癥后使用以防止或減弱轉(zhuǎn)移作用等。也可用于使用心肺機和腎透析裝置的病人，同樣也可用于裝有人工心瓣膜，人工血管等的病人。當然，用于各組分各自真正的適應(yīng)癥如改善血液流動(間歇性跛行)和鎮(zhèn)痛及抗炎(包括慢性炎癥)也是可能的。在抗炎用制劑中，黃嘌呤衍生物與組分B的比通常在0.1～1之間。而在其它制劑中，此比例一般在0.5～30之間。
體內(nèi)研究
在大鼠腸系膜的小動脈內(nèi)用激光產(chǎn)生血管內(nèi)血栓形成，并以此為實驗?zāi)Ｐ蛯Ρ景l(fā)明的己酮可可堿和乙酰水楊酸復方的療效進行評價。采用活檢顯微鏡檢查進行分析(Nature，218(1968)887和Haemostasis 13(1983)61和IRCS Med.Sci.12(1984)91)。
將受試物質(zhì)溶于0.9%的氧化鈉溶液中(含1%羥甲基纖維素(Serva，Heidelberg)，口服，腹腔或靜注給藥。對照組動物給予相同的溶液，但不含受試物質(zhì)。所用的實驗動物為雄性或雌性Sprague-Dawley或Wistar大鼠。
用激光誘發(fā)血栓形成模型研究己酮可可堿，其它黃嘌呤衍生物和乙酰水楊酸的作用。試驗用體重200克的雌性Sprague-Dawley大鼠進行，事先皮下給予試驗動物0.1毫克硫酸阿托品(溶液)，再腹腔給予100毫克鹽酸氯胺酮和4毫克甲苯噻嗪/公斤體重進行麻醉。研究利用腸系膜直徑約為13微米的小動脈和小靜脈進行。腸系膜涂以除氣的液體石蠟，將4瓦氬激光器(Spectra Phpsics，Darmstadt制造)同軸地導入顯微鏡(ICM 405，LD-Epipland 40/0.60;Zeiss.Oberkochen制造)的逆轉(zhuǎn)光徑內(nèi)，所用的波長為514.5毫微米，靶物上的能量約30.5毫瓦。一次照射的暴露時間為1/15秒。全部測定操作用電視攝像機(Tricon tube.Sony，Cologne)拍攝并記錄入記錄器(Song，U-matic 3/4″)內(nèi)。在試驗開始前1小時(口服給藥)和10分鐘(靜注給藥)將各種劑量的受試物質(zhì)給予試驗動物。對照組給予相同數(shù)量的安慰劑，受試物質(zhì)的給藥方式如下1)作為單味藥，2)作為復方或 3)先給予乙酰水楊酸，1小時后給予己酮可可堿，或另一個黃嘌呤衍生物和4)先給予己酮可可堿，1小時后給予乙酰水楊酸(表Ⅰa)。表Ⅰb表示不同時間間隔的影響，表Ⅰc綜合了其它黃嘌呤的作用。
評價
計算出誘發(fā)一個明顯的血栓所需的照射次數(shù)，照射頻率相當于每兩分鐘造成一個損害，計算并測定在觀察期間所形成的最小尺寸為血管直徑1/4的所有血栓。
實驗結(jié)果用X2試驗進行統(tǒng)計分析(L，Cavalli-Sforza，Biometric (Biostatistics)，Stuttgart，1969，P 49)。
結(jié)果
結(jié)果列于表Ⅰa～c?？诜?毫克單次量乙酰水楊酸或己酮可可堿作用不明顯。但己酮可可堿對血栓形成的抑制率為20%。在口服10毫克/公斤劑量時，兩種物質(zhì)的作用均較明顯。同時給予己酮可可堿和乙酰水楊酸對激光誘發(fā)血栓形成模型無作用，先給予乙酸水楊酸，1小時后給己酮可可堿其結(jié)果也和同時給藥一樣。相反，先給予己酮可可堿，1小時后給乙酰水楊酸對激光誘發(fā)大鼠腸系膜小動脈和小靜脈血栓形成有顯著作用，其作用程度與劑量有關(guān)。與單次量比較，這種序貫給藥的超加作用可以從變化的百分數(shù)(與對照組比較)明顯地得到證明。
表Ⅰb列出的結(jié)果表示在兩個單次劑量之間有一個可供選擇的較寬的時間范圍，最佳選擇是在15～180分鐘之間。根據(jù)本發(fā)明，其它黃嘌呤衍生物(見專利權(quán)利要求
書)當與乙酰水楊酸一起給藥時也可達到同樣的作用，但時間間隔不同。這些黃嘌呤衍生物的抗血栓形成作用列于表Ⅰc。
序貫給藥可以用帶有兩個分隔的可控制室結(jié)構(gòu)的市售輸注裝置進行(例如Braun，Melsungen制造的通過時間開關(guān)分隔的馬達驅(qū)動裝置)。輸注裝置的兩個室分別裝入己酮可可堿溶液(相當于10毫克己酮可可堿/公斤大鼠)和乙酰水楊酸溶液(相當于1毫克/公斤)(溶劑見上述)。時間開關(guān)控制己酮可可堿溶液注入尾靜脈20分鐘后再注入乙酰水楊酸溶液。在對比試驗中，兩室同時注入。結(jié)果與口服給藥相同，即序貫給藥產(chǎn)生的作用遠遠大于同時給藥。
體外試驗研究
用已知的方法測定血小板凝集。靜脈(耳靜脈)給予雄性兔子(自家培養(yǎng)，BASK SPF Wiga約2.5～3.5公斤)己酮可可堿和/或DL-賴氨酸單乙酰水楊酸的生理鹽水溶液。從耳靜脈取血樣，按9∶1的比例加入3.8%強度的檸檬酸三鈉溶液?；旌衔镉谑覝叵屡嘤?5分鐘，隨后離心(1，000轉(zhuǎn)/分)分離10分鐘，分出富含血小板的上層血漿，下層再離心(28，000轉(zhuǎn)/分)分離10分鐘，同樣分出含血小板少的上層。將富含血小板的血漿用含血小板少的血漿稀釋至6～7×108血小板/毫升(Coulter計數(shù)器，Coulter Electrons，Krefeld)，然后用Born凝集計(Labor GmbH，Hamburg制造)通過測定光透射的光學方法測出血小板凝集情況。試驗混合物的體積為0.25毫升，溫度為37℃。用經(jīng)制備高壓液相色譜(HPLC，反相C-18柱)在氣體(氬氣)保護下純化的花生四烯酸(Serva，Heidelburg，2×10-4M)誘發(fā)凝集，血小板凝集的增加可以通過光透射情況判定，在這個系統(tǒng)中所測定的變數(shù)是最大凝集幅度E。結(jié)果列于表2。
經(jīng)口給予雌性大鼠(Hoe Liskf.約180克)下述藥物(分散于聚乙二醇(PEG，其分子量為400)內(nèi)，相當于1毫升/公斤)
實驗1)30毫克/公斤己酮可可堿，30分鐘后給3毫克/公斤乙酰水楊酸。
實驗2)30毫克/公斤己酮可可堿，30分鐘后給10毫克/公斤乙酰水楊酸。
實驗3)30毫克/公斤乙酰水楊酸，30分鐘后給30毫克/公斤己酮可可堿。
實驗4)10毫克/公斤乙酰水楊酸，30分鐘后給30毫克/公斤己酮可可堿。
實驗5)30毫克/公斤己酮可可堿，30分鐘后只給溶劑。
對照實驗6)1毫克/公斤PEG 400，不加任何藥物。
這些給藥程序在18小時后重復一次，在最后一次給藥后1小時，用乙醚將大鼠麻醉后殺死，取出胸主動脈。將切下的胸主動脈立即放入3毫升PH7.5的0.09MNaCl緩沖液內(nèi)，于24℃下培育30分鐘。然后將上清液按下述程序用作為二磷酸腺甙誘發(fā)人血小板凝集的抑制劑。在前十天內(nèi)未用過藥物的健康男、女性志愿人員的肘前靜脈內(nèi)，小心插入導管取血樣，并立即用檸檬酸鈉(加0.38%)穩(wěn)化。經(jīng)140×克離心分離15分鐘后。得到富含血小板的血漿(PRP)，其血小板含量在2.5～3.5×108/毫升范圍內(nèi)(Coulter計數(shù)器)。血小板凝集情況用Born凝集計(Labor Gmbh，Hamburg制造)測定光透過的方法進行光學測量。試驗混合物的總體積為0.25毫升。此血漿與上述主動脈上清液一起于37℃下培育5分鐘，然后用2×10-6M的二磷酸腺甙誘發(fā)凝集，根據(jù)每次實驗得到的最大凝集幅度作劑量-作用曲線(作為主動脈重量的函數(shù))。根據(jù)這些曲線圖可以確定0.1毫克主動脈上清液的抗凝集活性。主動脈的重量是將主動脈于60℃下干燥20小時后測得的。在取血樣后1～2小時內(nèi)進行凝集測定。
毒性試驗方法
按上述程序經(jīng)口給予大鼠藥物，但逐漸增大劑量。一組接受己酮可可堿，第二組接受己酮可可堿加乙酰水楊酸，其比例為10∶1，根據(jù)常用的標準方法(Litchfield和Wilcoxon，1949)計算出致死劑量(LD50)。
LD50(己酮可可堿)＝1，400毫克/公斤
LD50(己酮可可堿/乙酰水楊酸)＝1.400毫克/公斤
結(jié)果
兩組動物的毒理學耐受性相同。這意味著本發(fā)明的己酮可可堿和乙酰水楊酸復方其治療劑量與致死劑量之比相當小，因而比單味己酮可可堿或乙酰水楊酸要安全得多。
胃耐受性試驗
方法
按上述程序經(jīng)口給予禁食的雄性Sprague-Dawley大鼠(體重200～300克)己酮可可堿，1小時后再給乙酰水楊酸或只給乙酰水楊酸，在最后一次給藥24小時后，將鼠胃沿彎曲較少的部分切開，用自來水沖洗干凈，檢查胃粘膜損傷情況，在胃粘膜上能用顯微鏡觀察到的所有損傷均認為是潰瘍。
結(jié)果
先給予己酮可可堿對乙酰水楊酸的致胃潰瘍性無影響(表4)。這表明根據(jù)本發(fā)明(在給予乙酰水楊酸之前給予己酮可可堿)，此復方的治療劑量與胃不耐受劑量的比值明顯小于單獨給予乙酰水楊酸時的比值，因為根據(jù)表1，要達到相同的抗血栓形成作用，所需的乙酰水楊酸量要大得多。
慢性炎癥模型試驗
根據(jù)臨床血液學雜誌(Clinical Haemorheology 3(1983)，469～480)報道的方法用大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(用乳酪分支桿菌誘發(fā))病理模型，研究了本發(fā)明復方的血液學、抗血栓形成、抗凝集和抗炎作用，并與一些單味藥作比較。在最后一次給藥后1小時從胸主動脈取血樣。有關(guān)血液學作用的確定詳見Clinical Haemorheology 4(1984)263～273。紅血球的變形性可用過濾計(Myrenne MF 4，Roetgen，Germany)通過估計流動曲線的起始斜率來定量確定，表5a表示紅血球的濾過率，關(guān)節(jié)炎大鼠的這個數(shù)值比對照組健康大鼠小，但在給予乙酰水楊酸和己酮可可堿后能復增，即使是同時給予這兩種藥物也可見有超加作用，但序貫給藥時(先給己酮可可堿，1小時后再給予乙酰水楊酸)這種作用尤為明顯。
抗血栓形成作用采用如上所述的激光誘發(fā)血栓形成模型進行測定。表5b表示試驗結(jié)果，使對照組健康動物產(chǎn)生血栓的平均激光照射次數(shù)為2.7(＝100%)，而對關(guān)節(jié)炎動物0.99(＝46%)即已足夠，亦即患病動物的血栓形成趨勢較強，表5b表示經(jīng)給藥后，這種血栓形成的趨勢減弱了，尤其是給予本發(fā)明復方后，其數(shù)值近似于健康動物的數(shù)字。
血小板凝集的測定是按上面敘述的方法進行。然而，用0.4毫克膠原代替花生四烯酸在1毫升富含血小板的血漿內(nèi)(Myrenne制造的PAⅡ凝集計，Roetgen)誘發(fā)血小板凝集。未經(jīng)處理的關(guān)節(jié)炎大鼠其凝集幅度值(凝集趨勢)最大(＝100%)，而健康大鼠用0.04毫克膠原誘發(fā)未見出現(xiàn)凝集現(xiàn)象(表5c)。所列的結(jié)果表明，關(guān)節(jié)炎大鼠病理學上增強的凝集趨勢，在給藥后能減弱。序貫給藥(己酮可可堿1小時后再給乙酰水楊酸)再次表明有超加作用。
如上所述，抗炎作用的定量測定采用腳爪水腫的體積和標準的壞死指數(shù)進行。用藥組動物的壞死形成和水腫體積明顯減少。表6表示治療組動物與未治療關(guān)節(jié)炎大鼠癥狀改善情況的比較。本發(fā)明提出的序貫給藥(己酮可可堿，1小時后再給乙酰水楊酸)再次表明有超加作用。
藥物配方
也有可能用如上所述的輸注裝置代替靜脈注射，也可用混懸液或固體劑型，后者適于口服和直腸給藥以達到超加作用。
這種類型的人用藥配方含x毫克己酮可可堿或其它黃嘌呤衍生物(見例1～17)作為純物質(zhì)和/或配成市售成藥(如Trental
，Albert Roussel Pharma GmbH，Wiesbaden生產(chǎn)或Rentylin
，Dr Rentschler Arzeimittel GmbH Co，Laupheim生產(chǎn))(分別以縮寫T和R表示))或部分這些成藥與y毫克乙酰水楊酸配合，后者也可以與堿性離子交換樹脂(Dowex
1×8和QAE-Sephadex
(Serva，Heidelberg))或樹脂吸附劑(Amberite
XAD 2)結(jié)合或制成市售微囊劑型(Colfarit
，Bayer AG，Leverkusen(縮號為C))或結(jié)晶(R 95D和M 80D，Rohm Pharma GmbH，Weiterstadt，Germany生產(chǎn))。在這些復方中所用的藥物賦形劑是經(jīng)加熱可固化的膠(a)20(重量)%的明膠和1(重量)%的甘油水溶液，(b)1(重量)%的瓊脂糖水溶液和(c)10(重量)%的乙基纖維素T50(Hercules GmbH，Hamburg)的丙酮/水〔80∶20%(重量)〕溶液，在每種賦形劑中可不加或攪拌加入8%(重量)的己酮可可堿或另一種黃嘌呤衍生物或裝入市售明膠膠囊內(nèi)(對人或大動物給藥用0號膠囊(Kapsugel，Basle生產(chǎn)))。
將這些藥物配方(見例1～17)加入到10毫升犬的胃液或10毫升0.1NHCl內(nèi)于37℃下(體外)緩緩攪拌。在規(guī)定的時間間隔內(nèi)分出上層清液，并用高壓液體色譜分離(柱Rad Pak C-18(Waters GmbH，Eschborn，Germamy)100×8毫米。10微米，移動相300毫升甲醇/1毫升醋酸，700毫升水，流速1.5毫升/分)，并用UV在280毫微米下對組分定量。按類似的方法將藥物配方放入十二指腸液(狗)或碳酸氫鈉溶液(PH＝7.4)內(nèi)。
若對小動物給藥(見表1，大鼠)時，在例1～17提到的各配方組分各減至為其重量的1/200或采用4和5號膠囊。
表Ⅰ
x)M80D乙酰水楊酸結(jié)晶(它不溶于胃酸)于PH7.4下能定量溶解。
表1b己酮可可堿和乙酰水楊酸對激光誘發(fā)的血栓形成的影響。
給藥時間間隔的影響。
每個試驗的劑量為10毫克/公斤己酮可可堿(口服)，然后在所述的時間間隔后給1毫克/公斤乙酰水楊酸
物質(zhì) 動物數(shù) 損傷數(shù)XSEM 對對照組 x2試驗
的變化%
對照(安慰
劑) 8 32 2.19 0.02 - -
己酮可可堿
無乙酰水楊酸 9 36 3.27 0.32 +19 P＜0.05
乙酰水楊酸
無己酮可可堿 9 36 1.90 0.34 -13
0分鐘 9 36 2.18 0.13 0 -
15分鐘 5 20 3.42 0.21 +56 P＜0.05
30分鐘 5 20 3.59 0.17 +64 P＜0.01
45分鐘 5 20 3.68 0.19 +69 P＜0.01
60分鐘 7 28 3.71 0.18 +76 P＜0.01
90分鐘 4 16 3.33 0.23 +52 P＜0.01
120分鐘 4 16 2.91 0.21 +33 P＜0.01
180分鐘 8 32 2.63 0.21 +20 P＜0.05
300分鐘 8 32 2.25 0.17 +3 -
表 表1c黃嘌呤衍生物(每實驗例為口服10毫克/公斤，n＝3)(a行)或根據(jù)本發(fā)明的序貫給藥(10毫克/公斤黃嘌呤衍生物，1小時后給1毫克/公斤乙酰水楊酸，口服，n＝3)(b行)對激光誘發(fā)大鼠血栓形成模型的抗血栓形成作用。表列出與對照組(安慰劑)比較的改善百分數(shù)。實驗詳見本文。
物質(zhì) a b
對照(僅乙酰水楊酸) - -10%
1-(5-氧代己基)-3-甲基
-7-丙基黃嘌呤 42% 56%
1-(5-羥己基)-3-甲基
-7-丙基黃嘌呤 40% 53%
1-(5-羥己基)-3，7-
二甲基黃嘌呤 52% 68%
1-丙基-3-甲基-7-
(5-羥己基)-黃嘌呤 35% 42%
1-己基-3，7-二甲基
黃嘌呤 39% 46%
1-乙基-3-乙基-7-
(5-氧代己基)-黃嘌呤 41% 48%
1-n-丁基-3-n-丁基
-7-(2-氧代丙基)-黃嘌呤 33% 50%
1-(5-羥己基)-3-甲基-
7-(2-甲基丙基)-黃嘌呤 23% 34%
1-(2-甲基丙基)-3-甲基
-7-(5-氧代己基)-黃嘌呤 28% 39%
1-(5-氧代己基)-3-甲基
-7-(2-甲基丙基)-黃嘌呤 28% 39%
1-(2-甲基丙基)-3-甲基
-7-(5-羥己基)-黃嘌呤 29% 39%
1-(異丙基)-3-甲基-7-
(5-羥己基)-黃嘌呤 31% 36%
1-(3-甲基丁基)-3-甲基
-7-(5-氧代己基)-黃嘌呤 26% 35%
1-(3-甲基丁基)-3-甲基
-7-(5-羥己基)-黃嘌呤 28% 37%
1-(3-氧代丁基)-3-甲基
-7-丙基-黃嘌呤 40% 49%
表2 己酮可可堿和/或DL-賴氨酸單乙酰水楊酸對血小板凝集的作用的時間變化。
物質(zhì) 時間過程 靜注劑量 凝集幅度E
(分) (毫克/公斤) (體外)
Ⅰ 無對照 0 - 27.5
DL-賴氨酸單乙酰水楊酸 15 1.5
30 23.5
DL-賴氨酸單乙酰水楊酸 35 0.5
45 19.5
己酮可可堿 90 20
150 20
Ⅱ無對照 0 - 26
己酮可可堿 15 20
DL-賴氨酸單乙酰水楊酸 45 1.5
110 0.5
Ⅲ 無對照 0 - 23
己酮可可堿 15 10
45 22
60 10
120 20
表3 表示經(jīng)口給予己酮可可堿和不同數(shù)量的乙酰水楊酸后從大鼠主動脈釋放抗凝集活性物質(zhì)的分析
表3
實驗 1 2 3 4 5 6
凝集幅度E
(×102) 0.15 0.6 0.15 0.6 0.15 0.45
與對照實驗
的差異 -0.3 +0.15 -0.3 +0.15 -0.3 -
表4 藥物的致潰瘍作用
物質(zhì) 乙酰水楊酸 動物數(shù) 出現(xiàn)潰瘍
毫克/公斤 的動物數(shù)
口服 n n
1.25 10 1
乙酰水楊酸 12.50 10 2
25 10 5
50 10 7
100 10 9
序貫給藥。
即在每個 1.25 10 1
實驗例中先
給予100 12.5 10 2
毫克/公斤
己酮可可堿 25 10 5
1小時后給乙酰
水楊酸 50 10 7
100 10 8
表5 各種藥物對關(guān)節(jié)炎大鼠(n＝8/組)血液參數(shù)的影響(詳見本文)
關(guān)節(jié)炎大鼠 紅細胞濾 血栓形成趨勢 誘發(fā)的血
過性 (照射次數(shù)) 小板凝集
未處理 59% 46% 100%
10毫克乙酰水
楊酸 63% 47% 62%
180毫克乙酰
水楊酸 68% 91% 35%
30毫克己酮
可可堿 79% 87% 94%
30毫克己酮可
可堿同時給予
10毫克乙酰水楊酸 84% 57% 93%
30毫克己酮可可堿
同時給予180毫克
乙酰水楊酸 86% 91% 43%
30毫克己酮可可堿
1小時后給10毫克
乙酰水楊酸 90% 109% 22%
30毫克己酮可可堿
1小時后給180毫
克乙酰水楊酸 96% 104% 30.5%
(對照組健康大
鼠 100% 100% 0%)
表6 與未給藥的關(guān)節(jié)炎大鼠比較給予關(guān)節(jié)炎大鼠各種藥物后(每組8只)癥狀改善的百分數(shù)(詳見本文)
腳爪水腫體積
左 右 壞死指數(shù)
10毫克乙酰水楊酸 2 3 8
180毫克乙酰水楊酸 28 26 28
30毫克己酮可可堿 3 0 7
30毫克己酮可可堿/
10毫克乙酰水楊酸 3 0 4
30毫克己酮可可堿/
180毫克乙酰水楊酸 10 13 28
30毫克己酮可可堿/
1小時后10毫克乙酰
水楊酸 9 12 19
30毫克己酮可可堿/
1小時后180毫克
乙酰水楊酸 34 32 3權(quán)利要求
1、一種藥物制劑的制造過程，制劑含A)式如(Ⅰ)的黃嘌呤衍生物，
其中R1和R3中有一個為3～8C的直鏈烷基，(ω-1)-氧代烷基或(ω-1)-羥烷基，其它兩個基團R2和R3或R1和R2分別為1～8C(R1和R3)和1～4C(R2)直鏈或支鏈烷基，這兩個烷基取代基碳原子的總數(shù)不超過10；或含一個式如(Ⅱ)的黃嘌呤衍生物，
其中R為1～4C烷基；或含一個式如(Ⅰ)或(Ⅱ)的氧代烷基黃嘌呤或一個式如(Ⅰ)的羥烷基黃嘌呤的前藥；或含一個式如(Ⅰ)或(Ⅱ)的任何黃嘌呤衍生物的代謝物和B)0-乙?；畻钏峄蚱淇晒┧幱玫柠}，也可含C)一個藥物載體以制造各種制劑單位，如首先制造含組分B)的制劑單位(每單位含10～2，000毫克)，然后將這些制劑單位與100～600毫克黃嘌呤衍生物壓成疊層片或多層片或栓劑。其中黃嘌呤衍生物在外層，組分B)在核心或?qū)⑸鲜鼋M分制成膠囊，黃嘌呤衍生物的重量比(以1份重量乙酰水楊酸為基準)為0.1～50。
2、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中式(Ⅰ)的黃嘌呤衍生物其條件是R1或R3為5～6C的烷基，(ω-1)-氧代烷基或(ω-1)-羥烷基，其它兩個烷基取代基R2和R3或R1和R2的碳原子總數(shù)為2～6。
3、根據(jù)權(quán)利要求
2所述的過程，其中黃嘌呤衍生物的R1或R3代表己基、5-氧代己基或5-羥己基，并且最好是1-己基-3，7-二甲基黃嘌呤，1-(5-羥己基)-3，7-二甲基黃嘌呤，1-(5-氧代己基)-3，7-二甲基黃嘌呤，1，3-二甲基-7-(5-羥己基)-黃嘌呤，1，3-二甲基-7-(5-氧代己基)-黃嘌呤，1-(5-羥己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤或1-(5-氧代己基)-3-甲基-7-丙基黃嘌呤。
4、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中黃嘌呤衍生物可制成前藥制劑，如一個縮醛化的氧代烷基黃嘌呤。其中至少有一個羰基為式如(Ⅲ)的結(jié)構(gòu)單元所取代
或為一個具有式如(Ⅳ)R6-CO-O-結(jié)構(gòu)單元的O-乙?；牧u烷基黃嘌呤。其中式(Ⅲ)的R4和R5均為一個不超過4C的烷基或R4和R5一起構(gòu)成一個亞乙基，亞丙基或四亞甲基;在式(Ⅳ)中，R6代表一個不超過4C的烷基或苯基，取代苯基，吡啶基或取代吡啶基。
5、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中制劑可為口服、經(jīng)口或直腸給藥的制劑單位，它含100～600毫克最好為200～400毫克己酮可可堿和10～2，000毫克乙酰水楊酸或其等當量數(shù)的鹽。
6、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中黃嘌呤衍生物的重量比(以1份重量乙酰水楊酸為基準)為0.5～50，最好是2～10。
7、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中用作組分B)乙酰水楊酸的載體含有能起延遲作用的物質(zhì)。
8、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中制劑可制成微囊劑型。包含乙酰水楊酸的微囊材料應(yīng)有抗胃液作用或延遲釋放作用。
9、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的過程，其中制劑可制成疊層片或多層片，其中黃嘌呤衍生物是在首先被吸收的外層。
專利摘要
本復方產(chǎn)品用于人、獸序貫給藥，先釋放組分A，治療血液組分損壞引起的疾病。本品含A)式Ⅰ黃嘌呤衍生物，式中R1、R3之一為C3-8直鏈烷基、(ω-1)一烷氧或(ω-1)羥烷基、另一基團及R2為C1-4直鏈或支鏈烷基，上述兩取代基碳原子總數(shù)為10；或式Ⅱ黃嘌呤衍生物，式中R為C1-4烷基；或式Ⅰ、或Ⅱ氧烷基黃嘌呤或式Ⅰ羥烷基黃嘌呤前藥；或其代謝物。B)0-乙酰水楊酸或其供藥用的鹽。C)含或不含藥物賦形劑。
文檔編號A61K31/60GK85106465SQ85106465
公開日1986年10月29日 申請日期1985年8月28日
發(fā)明者克勞斯·尤爾里克·威思曼, 迪克·塞福格 申請人:赫徹斯特股份公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan