專利名稱：抗栓降脂含片及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明屬于具有生物活性物質(zhì)提取、精制及劑型制備方法。
肝素(Heparinum)是一種具有相同糖重復單位和功能基團的不同鏈長和分子量的一族化合物，廣泛存在于哺乳動物體內(nèi)各臟器組織中，如腸粘膜、十二指腸、肺、肝、心、胰、胎盤及血液中。本世紀初已從動物臟器中分離出這一物質(zhì)并證明其具有抗凝血活性，多年的研究和應用證明肝素具有抗凝血、血脂凈化、減少血糖等作用、因而對由于血液變稠、栓塞形成等原因而形成的心血管疾病有預防和治療作用。最新研究表明肝素對惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移有影響，可減少或防止癌細胞發(fā)展為癌灶或轉(zhuǎn)移灶，特別是減少肺和肝的癌轉(zhuǎn)移。肝素還在利尿而降低水腫、中和蛇毒、降低高血壓、幫助治療燒傷以及預防動脈硬化等方面有著一定的療效，并在肝病、腎病等方面的治療開發(fā)更多的用途。對肝素的提取國內(nèi)外進行過許多研究并取得較好的效果，這些提取方法歸納起來有如下幾種(1)鹽解-季胺鹽絡合;(2)鹽解-離子交換;(3)酶解-離子交換;(4)酶解-季胺鹽絡合。其共同原理是用無機鹽或酶將動物臟器中的肝素和蛋白質(zhì)拆開，然后用離子交換樹脂交換回收或用季胺鹽絡合沉淀，最后洗脫或溶解用醇再沉淀而制得粗品。例如USP 3058884用硫酸鈉鹽解，用混合季胺鹽絡合沉淀，用乙醇沉淀粗肝素。而USP 3337409用氯化胺、氯化鈉提取動物組織中的肝素，然后用季胺鹽陰離子交換樹脂沉淀肝素，用氯化鈉溶液洗脫和用甲醇沉淀出肝素。如此提取的是粗品肝素，使用上受到限制而需要進一步精制，如USP 3135660用高錳酸鉀或溴水氧化而制得脫色成品。由于肝素在消化道里會完成滅活或在體內(nèi)被肝臟產(chǎn)生的肝素酶滅活而對疾病完全不能有治療作用，因而口服是無效的。通常是將肝素制成針劑、滴鼻劑、栓劑、軟膏等劑型，使用較多的是靜脈注射針劑，效果較好。然而臨床應用中曾發(fā)現(xiàn)在注射后15～30分鐘患者血液中藥量濃度急劇增加，易造成流血不止，嚴重者甚至造成死亡。由于肝素是由六糖或八糖重復單位組成的線形大分子(Silva ME J.Biolchem.2506841，1975)，研究發(fā)現(xiàn)分子量至少為7000的肝素組分才有明顯的抗凝活性(McDuffie NM，etal，BioPolymers，14(7)1473，1975)，而不是所有的肝素都具有抗凝活性，如何提取和精制最有效的肝素和制取能滿足最合理的給藥途徑的肝素劑型是實際生產(chǎn)和應用尚未解決的問題。
本發(fā)明的目的是研究出一種簡易可行的有效肝素精制的方法，并創(chuàng)制一種新的肝素劑型-舌下含片，藥物不經(jīng)消化系統(tǒng)和肝臟而通過口腔粘膜吸收進入血液達到治療疾病的目的。
本發(fā)明是以動物臟器粘膜用氯化鈉提取、離子交換樹脂交換、洗脫和乙醇沉淀而制得的粗肝素為原料，經(jīng)除酸性蛋白、兩步氧化、分級沉淀并干燥而得精品肝素。其方法是將粗肝素溶于15倍2%的氯化鈉溶液中，用6M鹽酸調(diào)PH為3～6，過濾，濾液用5M氫氧化鈉調(diào)PH為8。將其置入氧化缶中，加入濃度為2～10%的高錳酸鹽，其用量為每億單位肝素用0.1～1.0M，在80℃下氧化1小時。冷卻并過濾，濾渣用水洗滌數(shù)次，洗滌液與濾液合并，用5M氫氧化鈉調(diào)PH為10，加2～5%雙氧水(濃度為25～32%)，在10～30℃下封閉氧化24小時，繼而再加1%雙氧水封閉氧化一次，兩次氧化必須保證PH為8.0～10.0，最好9.0～9.5氧化后的溶液用6M鹽酸調(diào)PH為6.0～7.0，過濾，濾液按體積用0.8+(n-1)×0.2倍的95%乙醇沉淀n次，其中n＝2～5次，最好是3次。沉淀溫度為0～10℃，時間每次至少12小時。沉淀再用少量水溶解，用四倍量的95%乙醇在10℃以下溫度沉淀。沉淀經(jīng)過濾，干燥，效價為120～180單位，收率為65～75%。
將精制肝素1200，000～1300，000單位，透明質(zhì)酸酶或粘多糖水解酶15000單位，蔗糖，乳糖以及硬脂酸鎂適量制成1000片含片，每片0.1克。以此含片對千余名患者臨床應用觀察，其對腦血栓形成有效率為88～89.7%，高血脂癥有效率78.6～88%，高紅細胞聚積癥有效率94%，高凝血癥有效率為97%，冠心病癥狀控制率71～86%。含片最大特點是舌下含化經(jīng)粘膜吸收而直接進入血液循環(huán)，具有起效快、藥量低、療程短、無任何副作用，這是目前治療同類疾病的其它藥物無法比擬的。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有特點是(1)兩種氧化劑分步氧化，對雜質(zhì)氧化充分，氧化后不留下有害、有色降解物。(2)分級沉淀可提取有效的肝素組分。(3)肝素含片是創(chuàng)制出新的給藥途徑的劑型，配方獨特。
例1將效價為100～120單位/毫克的粗肝素溶解在15倍量的2%氯化鈉溶液中，以6M鹽酸調(diào)PH為3并攪拌均勻，過濾除去酸性蛋白。以5M氫氧化鈉調(diào)PH為8，置入氧化缶中，加4%高錳酸鉀，加量為每億單位用0.4M。80℃下氧化1小時，冷卻過濾，濾渣用少量清水洗兩次，洗滌水與濾液合并。在30℃以下用5M氫氧化鈉調(diào)PH為10，按體積加3%的雙氧水(含量30%)此時需保證PH為9.0～9.5，密封氧化24小時。而后再加1%雙氧水，同條件下氧化24小時。以6M鹽酸調(diào)PH為6.2～6.5，過濾，濾液先用0.8倍95%乙醇在5～10℃沉淀12小時，取出沉淀，繼而再用1.0、1.2倍95%乙醇沉淀兩次。分級沉淀用少量水溶解，再用四倍量的95%乙醇沉淀，沉淀時PH為6.5。沉淀物吸去清液，剩余物用燒結(jié)玻璃漏斗減壓過濾，用丙酮洗滌兩次，并置于60℃下真空干燥即得肝素精品。效價為120～180單位/毫克，收率為70%。
例2取效價為130～140單位/毫克的精品肝素10克，透明質(zhì)酸酶150000單位，乳糖、蔗糖和硬脂酸酶適量，以常規(guī)法制片1000片，每片重0.1克。
權(quán)利要求
1.以動物臟器提取的粗肝素為原料，進行氧化提取制得肝素精品的方法，本發(fā)明的特征是采用氧化劑進行兩步氧化，并用乙醇進行分級沉淀的方法提取精制肝素。氧化劑是高錳酸鹽和雙氧水。
2.如權(quán)利要求1所述，本發(fā)明的特征是所述的兩步氧化的第一步是用高錳酸鉀，使用濃度為2～10%，其用量為每億單位用0.1～1.0M。，最好為0.4～0.5M。第二步氧化為用25～32%雙氧水進行兩次氧化首次用量為2～5%，第二次用量為1%。第一步氧化溫度為70～90℃，PH為8.0;第二步氧化溫度為10～30℃，PH為8.0～10.0，氧化最好在封閉容器中進行。
3.如權(quán)利要求1所述，本發(fā)明的特征是所述的分級沉淀是指經(jīng)過氧化后的肝素濾液按體積用0.8+(n-1)×0.2倍的95%乙醇沉淀n次，其中n＝2～5，最好為3。沉淀時溫度為0～10℃，PH為6.0～7.0，時間12小時以上。分級沉淀用少量水溶解再用四倍量的95%乙醇再次沉淀。
4.以肝素為主配以輔料制成實用劑型的方法，本發(fā)明的特征是按常規(guī)方法制成舌下含片的配方為肝素 1200000～1300000單位透明質(zhì)酸酶或粘多糖水解酶 150000單位蔗糖、乳糖、硬脂酸鎂 適量制成一千片，每片0.1克。肝素的效價為120～180單位/毫克，最好是130～140單位/毫克。
全文摘要
以動物臟器粘膜采用無機鹽提取、離子交換，乙醇沉淀法制得粗肝素，用高錳酸鉀、雙氧水兩步氧化，又用乙醇分級沉淀而制得精制肝素。用透明質(zhì)酸酶配伍而制得抗栓靈舌下含片。
文檔編號A61K35/37GK1053361SQ9010030
公開日1991年7月31日 申請日期1990年1月17日 優(yōu)先權(quán)日1990年1月17日
發(fā)明者王成忠 申請人:大連生物化學制藥廠