專利名稱：二乙酰大黃酸的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可藥用純度為非所需的蘆薈-大黃素衍生物總殘量低于20ppm的二乙酰大黃酸的制備方法，根據(jù)此方法獲得的二乙酰大黃酸和含有此化合物的藥物組合物。
下式二乙酰大黃酸
是具有抗關(guān)節(jié)炎、消炎、解熱和止痛活性的藥用活性化合物。因此，二乙酰大黃酸用于治療關(guān)節(jié)炎病(參見如DE-A-2711493和US-A-4，244，968)。
例如，通過(guò)蘆薈甙的乙?；陀萌趸t氧化全乙酰化獲得的蘆薈甙可以制備二乙酰大黃酸。另外，例如通過(guò)對(duì)由番瀉葉生藥中可獲得的大黃酸的乙?；饔每梢灾苽涠阴４簏S酸。
根據(jù)這些方法獲得的二乙酰大黃酸含有非所需的由三氧化鉻未完全氧化產(chǎn)生的或?qū)τ诜瑸a葉生藥的萃取共萃取伴生的蘆薈-大黃素衍生物。這些伴生物以相當(dāng)小的量存在，因而，通過(guò)常規(guī)的純化方法，只能很困難地分離出來(lái)。另外，對(duì)于上述第一種方法，還存在鉻殘余物，其必須以合適的方法除去。
因此，本發(fā)明的目的在于提供一種二乙酰大黃酸的制備方法，其進(jìn)行簡(jiǎn)便、產(chǎn)率高并且其中獲得的二乙酰大黃酸的可藥用純度為非所需蘆薈-大黃素衍生物的總殘量低于20ppm。
這樣，本發(fā)明提供了一種二乙酰大黃酸的制備方法，其中a)于僅能與水部分溶混的極性有機(jī)溶劑和水相之間進(jìn)行含有蘆薈-大黃素組分(即蘆薈-大黃素和/或其衍生物的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷的液-液配分，b)配分后將含于水相中的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷氧化成大黃酸-8-葡糖苷，c)于酸性介質(zhì)中將大黃酸-8-葡糖苷-8-位上的葡萄糖殘基裂解，并且d)將獲得的大黃酸乙?；⒒厥斩阴４簏S酸。
大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷的重要來(lái)源是含于番瀉葉生藥中的番瀉甙。因此，本發(fā)明優(yōu)選方案是制備其中基本上不含有蘆薈-大黃素組分的二乙酰大黃酸的方法，其中a)將番瀉甙混合物還原成相應(yīng)的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷和蘆薈-大黃素-9-蒽酮-8-葡糖苷化合物，b)于僅能與水部分溶混的極性有機(jī)溶劑和水相之間對(duì)所得化合物進(jìn)行液-液配分，c)配分后將含于水相中的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷氧化成相應(yīng)的蒽醌化合物，d)于酸性介質(zhì)中將蒽醌化合物8-位上的葡萄糖殘基裂解，并且e)將所得到的1，8-二羥基蒽醌化合物乙?；⒒厥斩阴４簏S酸。
番瀉苷的還原作用用作原料的番瀉甙混合物可以由例如番瀉葉生藥中獲得。番瀉葉生藥由番瀉葉植物的干燥葉和果實(shí)構(gòu)成，例如印度番瀉葉Cassia angustifolia(狹葉番瀉樹)和埃及番瀉葉Cassia acutifolia(尖葉番瀉樹)。番瀉葉生藥含有大黃酸和蘆薈-大黃素的二蒽酮葡糖苷。最主要的是番瀉甙A，B，Al，C，D和Dl。番瀉甙對(duì)應(yīng)于下列通式
對(duì)于番瀉甙A，B和Al，R表示COOH，而對(duì)于番瀉苷C，D和Dl，R表示CH2OH。番瀉甙A，B和Al與番瀉甙C，D和Dl立體異構(gòu)體并且10和10′碳原子的構(gòu)型各不相同。
例如，在DE-A-3200131中描述了由番瀉葉生藥如何得到番瀉甙，此處對(duì)此參考文獻(xiàn)做了更充分的說(shuō)明。根據(jù)此方法，首先用含水甲醇萃取番瀉葉生藥，完全除去甲醇后，濃縮的殘余物中含有以鉀鹽形式存在的番瀉甙，此濃縮物可用作本發(fā)明方法的原料。
此濃縮物也可以用于水中部分溶解的醇或酮，如丁-2-醇或丁-2-酮通過(guò)液體萃取而純化(殘液)。將殘液酸化至pH約1.5-2.0并用晶種使番瀉甙結(jié)晶。
獲得的粗品番瀉甙混合物也可以用作本發(fā)明方法的原料。如果需要，粗品番瀉甙混合物也可以被重結(jié)晶。
另外，與部分溶于水的醇或酮，特別是丁-2-醇混合的濃縮物也可以用作原料。
對(duì)于番瀉葉生藥的萃取，生藥與萃取溶劑的比率優(yōu)選地是1∶4-1∶15，特別是1∶4-1∶10。
萃取較優(yōu)選地是在如檸檬酸三鈉、甘氨酸、碳酸氫鈉或蔗糖緩沖劑存在下進(jìn)行。
根據(jù)本發(fā)明的方法，對(duì)這些原料進(jìn)行充分的還原得到下列通式相應(yīng)的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷(R＝COOH)和相應(yīng)的蘆薈-大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷(R＝CH2OH)
其中R是COOH或CH2OH。
具有合適的還原電位的還原劑包括，例如，氯化亞錫，二氧化硫、堿金屬硼氫化物并且較優(yōu)選的是堿金屬連二亞硫酸鹽，特別是連二亞硫酸鈉。
在進(jìn)行還原反應(yīng)時(shí)，原料可以以水溶液或懸浮液的形式存在并且以固體形式或溶于水的形式向其中加入還原劑。也可以在通過(guò)向其中加入與水部分溶混的極性有機(jī)溶劑，特別是丁-2-醇而形成的兩相混合物中進(jìn)行反應(yīng)。
還原可以于室溫或較高的溫度下進(jìn)行。還原較優(yōu)選地是于40-60℃并且特別是于50-55℃下進(jìn)行。反應(yīng)是在起始番瀉甙溶液或懸浮液的弱酸性至弱堿性pH值下，較優(yōu)選地是在pH7-9下進(jìn)行如果需要，還原反應(yīng)可以分幾次，特別是2-10次進(jìn)行。
通過(guò)加入酸，例如硫酸，使pH值至4-4.5沉淀出生成的9-蒽酮-8-葡糖苷，因此，反應(yīng)溫度較優(yōu)選地是不高于40℃。對(duì)于9-蒽酮-8-葡糖苷的沉淀及其分離，例如，通過(guò)過(guò)濾為了避免這些化合物的非控制性氧化，反應(yīng)較優(yōu)選地是于氮?dú)夥障逻M(jìn)行。
由于充分還原是至關(guān)緊要的，因此，較優(yōu)選地是使用大大過(guò)量的還原劑，對(duì)于連二亞硫酸鈉，通常相對(duì)于原料中番瀉甙的含量，使用1-4倍重量比的連二亞硫酸鈉并且令還原劑作用至少2小時(shí)，較優(yōu)選地是至少3小時(shí)。通常，還原反應(yīng)進(jìn)行不多于10小時(shí)。較優(yōu)選地是于所述條件下進(jìn)行補(bǔ)充還原。
在用于下一步驟之前，所獲得的產(chǎn)物較優(yōu)選地是用下述方法再沉淀通過(guò)加入如氫氧化鈉或氫氧化鉀的堿令pH升至約6-7使其溶解，水溶液用丁-2-醇、丙酮或丁-2-酮萃取并通過(guò)加入酸使pH至約2-4令產(chǎn)物再次沉淀出來(lái)。
液-液配分在此步驟中，蘆薈-大黃素組分，特別是蘆薈-大黃素-9-蒽酮-8-葡糖苷將被除去。為此目的，于只與水部分可溶混的極性有機(jī)溶劑和水相之間進(jìn)行所得產(chǎn)物的液-液分配。較合適的極性有機(jī)溶劑包括C4-C5-鏈烷醇和二-C1-C3-烷基酮，例如丙酮、丁-1-醇、丁-2-醇和丁-2-酮，較優(yōu)選地是使用丁-2-醇或丙酮。
在液-液配分全過(guò)程中，為了使水相達(dá)到-210mV或更負(fù)的氧化還原電勢(shì)較優(yōu)選地是向水相中加入還原劑。使用與步驟a)中相同的還原劑是較優(yōu)選的。至少使用作為還原劑的堿金屬連二硫酸鹽，通常為了維持所述電勢(shì)條件于7-11pH值下2-4%重量比溶液是足夠了。
水相(重相)與有機(jī)相(輕相)的體積比通常是在1∶5-1∶40范圍內(nèi)。
液-液萃取較優(yōu)選地是在逆流下進(jìn)行。從而，蒽酮化合物混合物以還原后所得到的溶液形式被分離，或者說(shuō)，當(dāng)蒽酮化合物被分離后，蒽酮化合物的混合物為3-15%重量比的溶液形式。
分配后，所需大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷存在于水相中，其通過(guò)加入酸使pH值至約2-4沉淀出并以常規(guī)方法回收。
大黃酸-9-蒽酮-葡糖苷的氧化大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷被氧化成下列通式的大黃酸-8-葡糖苷
為此目的可以使用的氧化劑包括例如氧、過(guò)氧化合物如過(guò)氧化氫以及于高氧化態(tài)下的鎂、鉻和鐵化合物，優(yōu)選使用地是鐵鹽，特別是硫酸鐵。反應(yīng)較優(yōu)選地是在升高的溫度下，但低于60℃下進(jìn)行。此時(shí)，可以避免非所需的和不明確的氧化產(chǎn)物的形成。當(dāng)氧化作用完成時(shí)，生成的大黃酸-8-葡糖苷以常規(guī)方法分離。
葡糖殘基的裂解于酸性溶液中8-位葡糖殘基被裂解。反應(yīng)較優(yōu)選地是于約85-95℃溫度下進(jìn)行。生成的產(chǎn)物以常規(guī)方法分離。
酸解后，通過(guò)與氯化鐵反應(yīng)直接將番瀉甙轉(zhuǎn)化成大黃酸是已知的(見例如DE-A-2711493)。但是，產(chǎn)率只達(dá)到約10%并且生成的大黃酸很難分離。
根據(jù)本發(fā)明的方法，番瀉甙的還原裂解，生成的蒽酮化合物氧化成相應(yīng)的蒽醌化合物以及蒽醌化合物8-位葡萄糖殘基的裂解，每種情況分步進(jìn)行。繼還原裂解之后，于本方法以后的過(guò)程中所有能導(dǎo)致蘆薈-大黃素或其衍生物生成的化合物通過(guò)液-液配分定量地被除去。另外，在適度的溫度下進(jìn)行氧化作用以避免生成非所需的和不明確的產(chǎn)物是可能的。而當(dāng)進(jìn)行此反應(yīng)時(shí)，所用鐵鹽幾乎可以等量收回，并于再氧化后，可再使用。實(shí)施氧化步驟和水解步驟的分離是以蒽酮葡糖苷較所述糖苷配基有較大的水溶解度為基礎(chǔ)。氧化作用于室溫或低于60℃下溫和地進(jìn)行，從而避免其他方法不可避免地生成的不明確的副產(chǎn)物。
1，8-二羥基蒽酮化合物的乙?；贸Ｒ?guī)方法進(jìn)行所得1，8-二羥基蒽酮化合物的乙?；＠?，按照于Arch.Pharm.，241，607/1903中所述方法于乙酸鈉存在下用乙酸酐可以進(jìn)行乙?；饔?。但是，乙酰化作用也可以通過(guò)本專業(yè)人員公知的其它方法進(jìn)行，例如通過(guò)與乙酰氯或類似物反應(yīng)。
按此方法獲得的二乙酰大黃酸基本上不含蘆薈-大黃素及其衍生物。而此不純物的含量仍達(dá)約50ppm(通過(guò)下列實(shí)施例中描述的分析方法測(cè)定)。當(dāng)所得二乙酰大黃酸以下列方法重結(jié)晶后，此不純物的含量可以進(jìn)一步減低通過(guò)用合適的堿處理將二乙酰大黃酸轉(zhuǎn)變成堿金屬鹽，合適的堿是如堿金屬乙酸鹽并且較優(yōu)選地是乙酸鉀，較優(yōu)選地是用等量的堿和含水C1-C3-鏈烷醇，例如80-90%乙醇作反應(yīng)介質(zhì)。于冷卻下，于含水C1-C3-鏈烷醇中聚集并通過(guò)加酸至pH值約3使其沉淀令二乙酰大黃酸堿金屬鹽結(jié)晶出，沉淀出的二乙酰大黃酸按常規(guī)方法分離并處理。
如此獲得的產(chǎn)物含有的上述非純物低于20ppm。另外，產(chǎn)物以特別適合于植物制劑的針狀結(jié)晶形式存在。
產(chǎn)物可以按常規(guī)方法干燥。較優(yōu)選地是先于相對(duì)較低的溫度下，例如不高于40℃下進(jìn)行真空干燥直至產(chǎn)物的水含量降至約3%或更低，隨后，溫度可以升至70-110℃。
本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明可以獲得的基本上純的二乙酰大黃酸以及含有此化合物的藥物組合物。其所適用領(lǐng)域、施用劑量以及合適的劑型是已知的并描述于例如US-A-4，244，968，US-A-4，346，103 US-A-4，950，687和DE-A-2711493以及Drugs Exptl.Clin.Res.，6(1)，53-64/1980。
下列給出的實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明實(shí)施例 1制備用作原料的番瀉甙(Sernoside)混合物各將40kg番瀉葉(含大約1.5%番瀉甙)裝入兩個(gè)體積為250升串聯(lián)著的滲濾器中，并蓋上鋼制孔板。用70%甲醇作為提取溶劑，使其通過(guò)第一個(gè)滲濾器中的生藥。將于第一個(gè)滲濾器中形成的溶液通過(guò)第二個(gè)滲濾器中的生藥。令溶劑自由地流過(guò)第一個(gè)滲濾器。
提取40kg番瀉葉生藥共需160升溶劑。在這樣大體積的70%甲醇通過(guò)兩個(gè)滲濾器，并且收集了相應(yīng)量的滲濾液后，將滲濾器的空管與后一滲濾液容器連接起來(lái)，并另加60升70%甲醇，使其通過(guò)滲濾器。此后，將第一個(gè)滲濾器的剩余的游離溶劑加入第二個(gè)滲濾器的上部，并收集后一滲濾液，使其體積達(dá)到120升。然后，倒空第一個(gè)滲濾器，再裝入40kg番瀉葉生藥并將后一滲濾液倒入此生藥中，120升后-滲濾液足以覆蓋滲濾器中的生藥。
隨后，將溶液溫度控制在+30℃。
將這個(gè)滲濾器與先前提取過(guò)的滲濾器連接，并按前述方法進(jìn)行提取。
每40kg生藥收集160升滲濾液，并用裝有填充柱的真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去甲醇。得到30升底部產(chǎn)物。將該濃縮物用等體積的水飽和的丁-2-醇提取。
步驟a)還原番瀉甙成大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖甙用48%氫氧化鈉水溶液將1.0升提取濃縮物調(diào)至pH7.5。溶液被加熱到60℃，伴隨著攪拌，在半個(gè)小時(shí)內(nèi)將90g連二亞硫酸鈉固體加入該溶液中。加完后，再將溶液攪拌1小時(shí)。隨后，向其中加入濃硫酸使pH為2。在2小時(shí)內(nèi)將溶液冷卻至室溫。濾得晶狀沉淀并用含二氧化硫的水洗滌。
如果需要可將粗品大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖甙再沉淀。通過(guò)加入48%氫氧化鈉水溶液使pH為7將仍潮濕的濾餅溶解在15體積丁-2-醇，85體積其中含0.5%重量比的焦亞硫酸鈉的水的混合液中，得到10%(W/V)的溶液。用濃鹽酸將該溶液酸化至pH2.8或更低并放置2小時(shí)。濾出所得沉淀，用含二氧化硫或焦亞硫酸鈉的水洗滌并干燥。產(chǎn)率90%。
按以下方法將所得產(chǎn)物進(jìn)行重新還原(后-還原)將3.0g干的大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖甙粗品或相應(yīng)量的濕產(chǎn)物溶解在15ml水中，加之1.4g連二亞硫酸鈉和2.3ml5N氫氧化鈉水溶液。隨后，用水補(bǔ)充至24ml并將溶液加熱到55℃保持20分鐘。然后，再向溶液中加入1.5g連二亞硫酸鈉并在55℃溫?zé)?0分鐘。隨后，再向其中加入0.9ml 5N氫氧化鈉水溶液和1.5g連二亞硫酸鈉。于55℃溫?zé)?0分鐘后，再向其中加入0.9ml5N氫氧化鈉水溶液。將所得溶液直接進(jìn)行下面液-液萃取。
步驟b)分離蘆薈-大黃素成分利用含有60混合沉降單位的裝置通過(guò)蒽酮-8-葡萄糖苷的液-液逆流配分可分離蘆薈-大黃素成分。作為較重的水相，這里所用的是3.0g連二亞硫酸鈉在3.5ml 5N氫氧化鈉水溶液和96ml水中的溶液。作為較輕的有機(jī)相，這里所用的是丁-2-醇或用水飽和的丙酮。按此方法以重相對(duì)輕相的體積比為1∶10的比率將兩相裝入裝置中。
以新配制的溶液的形式或以相應(yīng)的pH值和相應(yīng)濃度的溶液形式將含步驟a)中得到的9-蒽酮-8-葡萄糖苷的欲分離的混合物按每體積欲分離混合物使用30體積的有機(jī)相的比率加入儀器。
用甘氨酸緩沖劑使含混合物的溶液的pH保持在9到9.5。以每150g大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷240ml緩沖溶液的量加入由3體積7.5%甘氨酸溶液和1體積1N氫氧化鈉水溶液構(gòu)成的緩沖液。不需要的蘆薈-大黃素化合物富集在有機(jī)相中，而大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷留在水相。用硫酸將水相酸化至pH2.8，將形成的沉淀濾出并用水和丙酮洗滌，并在室溫下在空氣中干燥。以這種方法，得到含41ppm蘆薈-大黃素組分的大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷，按照本說(shuō)明書最后描述的方法測(cè)定蘆薈-大黃素。大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷的產(chǎn)率為97%。
步驟c)氧化為大黃酸-8-葡萄糖苷將步驟b)的產(chǎn)物(指3.0kg的番瀉甙A，Al和B)懸浮在185升軟化水和75.5kg硫酸鐵水合物(22%Fe3+)形成的溶液中。將懸浮液加熱到55至62℃并使用快速流動(dòng)分散劑(rapidly running disperser)氧化14小時(shí)。氧化完全后，濾出形成的大黃酸-8-葡萄糖苷并用50升用硫酸調(diào)節(jié)pH為2的軟化水洗滌。
步驟d)水解為大黃酸將步驟c)得到的濕的過(guò)濾殘留物懸浮于200kg20%重量比的硫酸中并在88到92℃攪拌8小時(shí)。濾出形成的大黃酸，為了貯存，可以在1mbar的真空下于40℃干燥48小時(shí)，或者立即在濕的狀態(tài)下用于步驟e)的乙?；?。
對(duì)于步驟a)所用番瀉甙A，Al和B，步驟a)到d)的總產(chǎn)率為79%。
步驟e)乙?；玫蕉阴；簏S酸將6.5kg步驟d)得到的大黃酸懸浮在100升乙酸酐中放置10分鐘，混入2kg乙酸鉀，攪拌下加熱至95℃，混入0.65kg活性碳并在90到95℃攪拌30分鐘。從熱溶液中濾出活性碳并在90℃將2.1kg96到98%重量比的硫酸混入濾液中。隨后，伴隨著攪拌，將在盡可能快地冷卻到20℃并將所得到的懸浮液過(guò)濾。用軟化水洗除殘留物中的硫酸鹽。產(chǎn)率為83%。
步驟f)重結(jié)晶，干燥和研磨隨著快速攪拌，將7.5kg步驟e)得到的二乙酰大黃酸(這里指干物質(zhì))懸浮在375升90%體積比的乙醇中。懸浮液加熱到70℃，然后混入3.75kg乙酸鉀。冷卻到0至2℃后，純的二乙?；簏S酸鉀鹽從新形成的澄清溶液中結(jié)晶出來(lái)。濾出鉀鹽，在20到30℃，隨著加入3kg乙酸鉀，將鉀鹽溶解在300升40%體積比的乙醇中。用10%重量比的硫酸將該澄清溶液的pH調(diào)至3.0。濾出結(jié)晶出的二乙?；簏S酸并用軟化水洗除硫酸鹽。
首先，在40℃和1mbar的真空中，將產(chǎn)物干燥24小時(shí)。當(dāng)殘留水的含量減少到3%以下時(shí)，將其粗略粉碎并在70℃和1mbar的真空中進(jìn)一步干燥24小時(shí)。隨后，將其研磨過(guò)0.5mm型號(hào)的篩并在70℃和1mbar真空中再干燥以除去殘留溶劑。
步驟f)的產(chǎn)率為95%。
實(shí)施例 2重復(fù)實(shí)施例1所述的番瀉葉提取和番瀉甙還原。然后按以下方法進(jìn)行隨后的還原將140g蔗糖，4.5g85%連二亞硫酸鈉和13.3g乙酸鉀溶于133ml水中，向其中加入1.3ml48%氫氧化鈉溶液和17.3g碳酸鉀。隨后，在反應(yīng)混合物中混入293ml丙酮和50ml水。將此混合物置分液漏斗中搖動(dòng)并分相，由此得到375ml上層相(丙酮相)和130ml下層相。
將1.4ml48%氫氧化鈉溶液和10g大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷粗品溶于98ml下層相中。將此溶液溫?zé)岬?5至50℃并保持這個(gè)溫度20至30分鐘。隨后，加入1.0ml48%氫氧化鈉溶液和3.4g連二亞硫酸鈉并再在45至50℃下溫?zé)?0至30分鐘。隨后，再加入1.0ml48%氫氧化鈉溶液和3.4g連二亞硫酸鈉，繼續(xù)在45至50℃下溫?zé)?0至30分鐘。
通過(guò)被還原溶液對(duì)上述上層相(丙酮相)的液-液逆流分配可分離蘆薈-大黃素成分。將流出的并含大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷的殘油層濃縮到400ml并與20ml丁-2-醇混合。
然后，加入鹽酸或硫酸使pH值為4.0至4.2。濾出形成的沉淀，用40ml水和30ml丙酮洗滌并干燥。隨后，按實(shí)施例1中描述的方法進(jìn)行氧化反應(yīng)。
實(shí)施例 3將番瀉葉提取濃縮物與約2升丁-2-醇混合在氮?dú)庾鳛楸Ｗo(hù)氣體的條件下進(jìn)行番瀉葉果實(shí)濃縮液和丁-2-醇混合物的7步還原反應(yīng)。在Ⅰ步還原之后，得到大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷的粗沉淀。
還原步驟Ⅰ將含大約4kg番瀉甙的100升番瀉葉果實(shí)濃提物和丁-2-醇的混合物放入攪拌器中并充入氮?dú)?。伴隨攪拌，將6升20%重量比的氫氧化鈉水溶液和350升水飽和的丁-2-醇，如來(lái)自步驟Ⅱ，依次加入并攪拌15分鐘。將每批溶液加到42至50℃，混以7kg連二亞硫酸鈉并進(jìn)一步攪拌45分鐘。用20%重量比的氫氧化鈉水溶液將pH值保持在7.5到8。如果需要，可以通過(guò)加入連二亞硫酸鈉將還原電位(對(duì)于Ag/AgCl電極)保持在-630mV以下。冷卻到30至35℃后，用10%重量比的硫酸調(diào)節(jié)pH＜4而使其沉淀1.5小時(shí)。將所得的懸浮液在＜25℃以低速攪拌約10小時(shí)并濾出所得沉淀。將沉淀懸浮在60升15%重量比的丁-2-醇中，在50至60℃攪拌30分鐘，隨后過(guò)濾。用100升軟化水洗滌殘留物。對(duì)于所用的番瀉甙，大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷的粗產(chǎn)率大于82%。
還原步驟Ⅱ?qū)?.3kg步驟Ⅰ所得大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷粗品懸浮于42升軟化水和7.4升丁-2-醇中。加入2升20%重量比的氫氧化鈉水溶液和9.9kg檸檬酸三鈉使懸浮液成為溶液，然后，混入3.3kg連二亞硫酸鈉和350升水飽和的丁-2-醇，如得自步驟Ⅲ。將每批溶液加熱到42至45℃，用20%重量比的氫氧化鈉水溶液保持pH值為8.5到9。如果需要，可通過(guò)加入連二亞硫酸鈉將還原電位(對(duì)于Ag/AgAl電極)保持在-750mV以下。放置30分鐘以后，除去上層相，將下層相在步驟Ⅲ中進(jìn)一步處理。
還原步驟Ⅲ用步驟Ⅱ所得下層相加入下列化學(xué)成分，重復(fù)步驟Ⅱ所述還原/提取過(guò)程1.65kg連二亞硫酸鈉0.8升20%重量比的氫氧化鈉溶液和350升水飽和的丁-2-醇，例如得自步驟Ⅳ。
還原步驟Ⅳ到Ⅶ用前面步驟所得到的下層相加入下列化學(xué)成分重復(fù)步驟Ⅱ所述的還原/提取過(guò)程0.825kg連二亞硫酸鈉0.4升20%重量比的氫氧化鈉溶液350升水飽和的丁-2-醇，例如得自以下使用逆流原則的步驟。
將步驟Ⅶ中分離的下層相冷卻到30至35℃，按步驟Ⅰ所述的方法將大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷沉淀出來(lái)。濾出所得的沉淀并用100升軟化水洗滌。隨后，將其轉(zhuǎn)入10升硫酸鐵溶液(如例1，步驟b制備)。
然后，按實(shí)施例1或2所述的方法將大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷轉(zhuǎn)化成番瀉甙。
藥理學(xué)研究二乙酰大黃酸的效果可在口服給藥后以慢性炎模型測(cè)定。
使用下列實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫竺耷驙钊庋磕[和通過(guò)關(guān)節(jié)內(nèi)使用維生素A誘導(dǎo)的家兔關(guān)節(jié)病。
a)大鼠棉球狀肉芽腫將年輕的性成熟的大鼠(n＝10)按25，50或100mg二乙酰大黃酸/kg或5mg消炎痛/kg或100mg乙酰水楊酸/kg每天給藥，一共5天。對(duì)照組僅用水處理。小球的植入發(fā)生在處理后的第一天。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)制備的新鮮的和干的肉芽腫的重量表明明顯地隨劑量減少。因此，100mg二乙酰大黃酸/kg的作用大致相當(dāng)于5mg消炎痛和100mg乙酰水楊酸。處理過(guò)程中胸腺和腎上腺的重量沒有變化。
b)維生素A關(guān)節(jié)病按照9天內(nèi)三次關(guān)節(jié)內(nèi)注射30，000IU維生素A的方法在每組為10只家兔(白色新西蘭種)的兩組中引起關(guān)節(jié)病樣關(guān)節(jié)變化。以后56天，用3mg二乙酰大黃酸/kg/天處理10只受試動(dòng)物共8周。與對(duì)照組相比，肉眼檢查和顯微鏡觀察處理組的關(guān)節(jié)變化顯著降低。
進(jìn)一步，在用三次10，000IU維生素A預(yù)處理6天和26天無(wú)處理間隔后的8周內(nèi)，通過(guò)每組7只的家兔分別接受5mg二乙?；簏S酸/kg/天(實(shí)驗(yàn)組)，15mg乙酰水楊酸/kg/天(正對(duì)照組)，或保持無(wú)處理(負(fù)對(duì)照組)，來(lái)比較二乙?；簏S酸與乙酰水楊酸的治療作用。在最后一次注射維生素A以后的24天里，所有三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都產(chǎn)生了明顯的后肢拖拉的運(yùn)動(dòng)障礙。在隨后的8周內(nèi)，負(fù)對(duì)照組動(dòng)物中，明顯的關(guān)節(jié)病的臨床癥狀增強(qiáng)。在處理8周內(nèi)，在實(shí)驗(yàn)組和正對(duì)照組的動(dòng)物中，這些癥狀明顯改善。
胃粘膜變化鑒于一次施用400mg二乙?；簏S酸或一次施用溶劑對(duì)大鼠胃粘膜不產(chǎn)生任何糜爛，而在使用布洛芬(200mg/kg)或消炎痛(20mg/kg)后，發(fā)現(xiàn)有點(diǎn)狀的(1mm直徑)到大約(3mm直徑)糜爛狀明顯的粘膜損傷。三天內(nèi)每天兩次使用100mg二乙?；簏S酸/kg也不帶來(lái)任何損傷，反之，相應(yīng)地使用10mg消炎痛/kg肯定產(chǎn)生具有1到3mm直徑的糜爛。
毒理學(xué)急性毒性LD50，依賴于受試物種(大鼠，小鼠，貓)，口服后為1.9到7.9g/kg。而大鼠證明是最不敏感的。非腸道給藥(i.v.或i.p.)后，就這些物種來(lái)說(shuō)，LD50值為從119到339mg/kg。
臨床研究1.在95(49/46)名髖關(guān)節(jié)病人和膝關(guān)節(jié)病人中對(duì)萘普生和隨后的術(shù)后安慰劑進(jìn)行雙盲試驗(yàn)來(lái)研究二乙酰基大黃酸的作用。使用劑量為每天兩次50ml二乙?；簏S酸或每天750mg萘普生。治療周期為7天沖洗階段后的60天。隨后的安慰劑治療超過(guò)60天。
按照分?jǐn)?shù)標(biāo)度的疼痛和運(yùn)動(dòng)癥狀，功能限制和相容性為試驗(yàn)參數(shù)。
在兩個(gè)試驗(yàn)組中(二乙?；簏S酸/萘普生)關(guān)于所有試驗(yàn)參數(shù)，與初值相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上明顯改善的比率(各自為P＜0.01和P＜0.05)。然而中斷治療后并隨后施用安慰劑，在90天和120天關(guān)于自發(fā)性疼痛和主動(dòng)及被動(dòng)的運(yùn)動(dòng)疼痛，與萘普生/安慰劑組相比顯示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的優(yōu)勢(shì)(P＜0.01)。在5%水平上，停止使用二乙?；簏S酸后30天內(nèi)可變的夜間疼痛和壓痛也證明這種差異。
2.在公開進(jìn)行的對(duì)照試驗(yàn)中，對(duì)70名(35/35)患脊柱和膝骨關(guān)節(jié)痛的病人進(jìn)行二乙?；簏S酸作用的研究。用藥劑量為每天100mg二乙?；簏S酸。治療周期為60天，觀察期為75天。試驗(yàn)參數(shù)為疼痛和運(yùn)動(dòng)限制。參數(shù)按分?jǐn)?shù)系統(tǒng)評(píng)估。
對(duì)照組包括35名全部作理療的病人。在二乙酰基大黃酸治療組中也進(jìn)行理療。
關(guān)于所有參數(shù)的結(jié)果評(píng)估表明治療組較對(duì)照組在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有明顯的改善。在停藥后，二乙酰大黃酸組的延續(xù)療效(hang-over effect)也可被確定。
3.在對(duì)萘普生的單盲交叉法中研究二乙?；簏S酸對(duì)20名局部關(guān)節(jié)痛病人的作用。將病人分為兩組第一組開始20天每天兩次施用50mg二乙?；簏S酸。隨后為三天沖洗階段。然后每天兩次施用250mg萘普生，共使用20天。第二組，將次序顛倒。總治療期為43天。按分?jǐn)?shù)系統(tǒng)測(cè)定疼痛，壓痛，被運(yùn)動(dòng)疼，功能限制和腫脹的試驗(yàn)參數(shù)。
試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)估顯示用二乙酰大黃酸比用萘普生優(yōu)越。既未觀察到顯著的副作用也無(wú)臨床試驗(yàn)室參數(shù)變化。
4.對(duì)23名(12/11)骨關(guān)節(jié)病患者使用“雙安慰劑技術(shù)”進(jìn)行隨機(jī)雙盲法研究(隨機(jī)性研究)來(lái)研究二乙酰大黃酸的作用。施用劑量為每天兩次50mg二乙酰大黃酸和每天三次250mg萘普生。治療周期為4周。試驗(yàn)參數(shù)為治療前后食管胃十二指腸鏡觀測(cè)結(jié)果。在此研究中，只用那些粘膜觀測(cè)結(jié)果正常的或有輕微粘膜損傷的(等級(jí)1)病人。
4周后，內(nèi)窺鏡觀察結(jié)果顯示，在二乙酰大黃酸組有一例(10%)有2級(jí)粘膜損傷，而在萘普生治療組有5位病人(50%)顯示2，3和4級(jí)粘膜損傷。所有病人都按常規(guī)方法觀測(cè)。
蘆薈-大黃素的分析測(cè)定將50mg二乙酰大黃酸溶于在分液漏斗中的25.3ml0.5M氫氧化鈉水溶液中并振搖10分鐘。隨后，向其加入74.6ml含0.5M甘氨酸和0.5M氯化鈉的溶液，得pH值為9.5。
此溶液用25ml氯仿萃取三次，合并的有機(jī)相用10ml0.5M pH9.5的緩沖液(甘氨酸、氫氧化鈉和氯化鈉)萃取一次并用10ml0.01M硫酸萃取一次。由有機(jī)相中除去溶劑并將殘余物溶于1ml甲醇。
標(biāo)準(zhǔn)溶液，將2mg蘆薈-大黃素溶于20ml N，N-二甲基乙酰胺并用甲醇稀釋至濃度為2μg/ml，相當(dāng)于40ppm。
通過(guò)HPLC測(cè)定溶液的含量。HPLC法的線性說(shuō)明蘆薈-大黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.11μg/ml(相當(dāng)于2.2ppm)至53.6μg/ml(相當(dāng)于1072ppm)的范圍。含量測(cè)定是用裝填Lichrospher-100RP-18的Merk HPLC柱Lichrocart 250-4，5μm，于40℃，用比率為49∶46∶5的1%乙酸乙醇液(V/V)、1%乙酸水溶液(V/V)、和乙腈作流動(dòng)相進(jìn)行。
步驟b)的產(chǎn)物，即蘆薈-大黃素組分含量為41ppm的大黃酸-9-蒽酮-8-葡萄糖苷的分析測(cè)定，測(cè)定蘆薈-大黃素。
通過(guò)用氯化鐵氧化同時(shí)用鹽酸水解將所得底物于水溶液和四氯化碳兩相混合物中轉(zhuǎn)變成大黃酸和蘆薈-大黃素。將大黃酸轉(zhuǎn)變成鹽以使其能夠通過(guò)液-液配分與蘆薈-大黃素分開。存在于有機(jī)相中的蘆薈-大黃素通過(guò)HPLC測(cè)定。
權(quán)利要求
1.基本上不含有蘆薈-大黃素組分的二乙酰大黃酸的制備方法，其中a)于僅能與水部分可混的極性有機(jī)溶劑和水相之間進(jìn)行含有蘆薈-大黃素組分的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷的液-液分配，b)分配后將含于水相中的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷氧化成大黃酸-8-葡糖苷，c)于酸性介質(zhì)中將大黃酸-8-葡糖苷8-位上的葡萄糖殘基裂解，并且d)將獲得的大黃酸乙酰化并回收二乙酰大黃酸。
2.基本上不含有蘆薈-大黃酸組分的二乙酰大黃酸的制備方法，其中a)將番瀉甙混合物還原成相應(yīng)的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷和蘆薈-大黃素-9-蒽酮-8-葡糖苷化合物，b)于僅能與水部分可混的極性有機(jī)溶劑和水相之間對(duì)所得化合物進(jìn)行液-液分配，c)分配后將含于水相中的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷氧化成相應(yīng)的蒽醌化合物，d)于酸性介質(zhì)中將蒽醌化合物8-位上的葡萄糖殘基裂解，并且e)將所得的1，8-二羥基蒽醌化合物乙?；⒒厥斩阴４簏S酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中堿金屬連二亞硫酸鹽在步驟a)中用作還原劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中反應(yīng)于pH值7-9下進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求2-4的任一方法，其中還原作用分幾次進(jìn)行。
6.根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中丙酮和丁-2-醇用作液-液分配中的極性有機(jī)溶液。
7.根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中對(duì)于液一液分配中，所用水相的氧化還原電勢(shì)在-210mV或更負(fù)。
8.根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中液-液分配于逆流下進(jìn)行。
9.根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中鐵鹽用作氧化劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中鐵鹽是硫酸鐵。
11.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中番瀉甙混合物通過(guò)用含水甲醇萃取番瀉葉生藥獲得。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中用甲醇的萃取是在緩沖劑存在下進(jìn)行的。
13.根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中獲得的二乙酰大黃酸是通過(guò)將二乙酰大黃酸轉(zhuǎn)變成堿金屬鹽，將其在C1-C3鏈烷醇中處理并通過(guò)加酸使二乙酰大黃酸再次沉淀重結(jié)晶得到。
14.實(shí)質(zhì)上如上所述和例證的根據(jù)權(quán)利要求1的二乙酰大黃酸的制備方法。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14任一方法獲得的二乙酰大黃酸。
16.基本不含有蘆薈-大黃素衍生物的二乙酰大黃酸。
17.含有任意與常規(guī)藥物載體和添加劑結(jié)合的根據(jù)權(quán)利要求15或16的二乙酰大黃酸的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種基本上不含有蘆薈一大黃素組分的二乙酰大黃酸的制備方法，其中(a)于僅能與水部分可混的極性有機(jī)溶劑和水相之間進(jìn)行含有蘆薈一大黃素組分的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷的液-液配分，(b)配分后將含于水相中的大黃酸-9-蒽酮-8-葡糖苷氧化成大黃酸-8-葡糖苷，(c)于酸性介質(zhì)中將大黃酸-8-葡糖苷8-位上的葡萄糖殘基裂解，并且(d)將獲得的大黃酸乙?；⒒厥斩阴４簏S酸。本發(fā)明還涉及用此方法獲得的二乙酰大黃酸和含有它的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61K31/19GK1088907SQ9310118
公開日1994年7月6日 申請(qǐng)日期1993年1月2日 優(yōu)先權(quán)日1993年1月2日
發(fā)明者A·卡卡桑納, W·格里明格, P·希耶塔拉, K·維特洪, H·采斯克 申請(qǐng)人:馬道斯有限公司