專利名稱：一種具5－脂加氧酶抑制活性的新色酮衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于新穎色酮衍生物及其鹽以及以它們?yōu)橛行С煞莸?-脂加氧酶抑制劑。
現(xiàn)在已知在生物體內(nèi)，由于5-脂加氧酶的作用，由花生四烯酸生成5-過(guò)氧化氫二十碳四烯酸，然后以這個(gè)化合物為中間體，進(jìn)一步生成各種白三烯類化各物。其中，白三烯B4具有顯著的促進(jìn)白細(xì)胞遷移的作用。
白三烯C4以及白三烯D4為過(guò)敏的發(fā)病因子。因此，具有抑制5-脂加氧酶活性的化合物，就有希望成為因白三烯類脂氧化酶代謝產(chǎn)物引起的各種疾病的預(yù)防和治療。這些疾病包括支氣管哮喘、鼻腔過(guò)敏、眼睛發(fā)炎、先天過(guò)敏性皮膚炎等過(guò)敏性疾病，以及浮腫、貧血、高血壓、貧血性腦障礙等循環(huán)系統(tǒng)疾病。迄今為止，Wellcome公司的BW-755C，Merck公司的L-651896、小野藥品公司的ONO-LP-219等近200種5-脂加氧酶抑制劑的開發(fā)工作均由于毒性的問題以及吸收不好、代謝太快等方面的原因而終止。目前開發(fā)中的化合物非常少。
本發(fā)明的發(fā)明者們鑒于上述情況，以5-脂加氧酶的抑制活性為指標(biāo)，對(duì)中國(guó)西部藥用植物進(jìn)行提取，分離和純化，追蹤發(fā)現(xiàn)了具有顯著的對(duì)5-脂加氧酶產(chǎn)生抑制作用的新色酮衍生物，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明是新色酮衍生物及其鹽，以及以它們作為5-脂加氧酶抑制劑的有效成份而制備的東西。
也就是說(shuō)，本發(fā)明是下記式(I)
(式中，R1～R4，代表獨(dú)立的H、無(wú)取代基的1～6碳烷基、有取代基的1～6碳烷基、無(wú)取代基的2～6碳烯基、有取代基的2～6碳烯基、無(wú)取代基的2～6碳炔基、有取代基的2～6碳炔基、無(wú)取代基的4～12碳芳基、有取代基的4～12碳芳基、無(wú)取代基的1～6碳?；?、有取代基的1～12碳酰基。另外，R4也可表示硅烷基，X、Y表示各自獨(dú)立的氧原子、硫原子或氮原子，在X表示氮原子的情況下，Z表示氫原子、烷基或硅烷基，在X表示氧原子、硫原子的情況下，Z不存在，----表示碳碳單鍵或碳碳雙鍵。)上式表示的新色酮衍生物均為本發(fā)明之內(nèi)容。
本發(fā)明的化合物主要存在于中國(guó)四川省野生植物毛喉杜鵑[CIB035；Rhododendron cephaluntum]中。將全草干燥、粉碎后，用95％乙醇提取，除去熔劑后用柱層析等適當(dāng)?shù)姆蛛x方法分離純化，可得到下結(jié)構(gòu)式(I)所表示的色酮衍生物。
式中，R1～R4分別各自表示H、無(wú)取代基的1～6碳烷基、有取代基的1～6碳烷基、無(wú)取代基的2～6碳烯基、有取代基的2～6碳烯基、無(wú)取代基的2～6碳炔基，有取代基的2～6碳炔基，無(wú)取代基的4～12碳芳基、有取代基的4～12碳芳基、無(wú)取代基的1～6碳酰基，有取代基的1～12碳?；Ａ硗?，R4也可表示硅烷基。
取代基可以是鹵素、烷氧基、羥基、烷硫基、氨基、硝基、腈基、甲氨?；?、烷氧酰基、羧基等。
X、Y可各自表示氧、硫或氮原子。
當(dāng)X表示氮原子時(shí)，Z可表示氫原子、烷基或硅烷基，當(dāng)X表示氧、硫原子時(shí)，Z不存在。
----表示碳碳單鍵或碳碳雙鍵。
這樣得到的本發(fā)明的生理活性物質(zhì)如上記式(I)所示的新色酮衍生物，是通過(guò)波譜解析鑒定其結(jié)構(gòu)的。本發(fā)明的化合物作為醫(yī)藥品使用時(shí)，將本發(fā)明的化合物直接、或者是添加醫(yī)藥品中允許的添加劑制成醫(yī)藥制劑進(jìn)行給藥，或者是以混合物、以及含有它們的毛喉杜鵑的提取物或浸膏(浸膏是指去掉浸取溶劑的提取物)的形式進(jìn)行給藥。
本發(fā)明所說(shuō)藥理上所允許的鹽是指與無(wú)機(jī)堿所形式的鹽，與有機(jī)堿所形成的鹽，與氨基酸所形成的鹽等。無(wú)機(jī)堿是指堿金屬類，如鋰、鈉、鉀等；堿土金屬類，如鎂、鈣等，其它金屬如鋁、鉛、鐵等也含在本發(fā)明中。有機(jī)堿是指胺類，如氨、1級(jí)胺、2級(jí)胺、3級(jí)胺、含氮雜環(huán)(包括脂肪族和芳香族)。具體的說(shuō)是指甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、丙胺、二丙胺、異丙胺、二異丙胺、丁胺、二丁胺、異丁胺、特丁胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、吡咯烷、哌啶、嗎啉、吡咯、吡啶等。氨基酸是指賴氨酸、精氨酸、組氨酸等。
由于本發(fā)明物質(zhì)可以具有對(duì)5-脂加氧酶的抑制活性，故能抑制脂加氧酶的代謝產(chǎn)物白三烯類物質(zhì)的生成，因此可以治療及預(yù)防哺乳動(dòng)物(如人、狗、貓、兔、大鼠、小鼠等)因這些代謝產(chǎn)物而引起的支氣管哮喘、鼻過(guò)敏、眼炎、過(guò)敏性皮炎等過(guò)敏性疾?。桓∧[、貧血、高血壓、貧血性腦障害等循環(huán)系統(tǒng)疾病。
本發(fā)明中的5-脂加氧酶抑制劑的給藥方式可以是口服或非口服。劑型可以是錠劑、片劑、膠囊、顆粒劑、乳化劑、懸濁劑、注射劑等。上述劑型是通過(guò)加入各自合適的載體、成形劑、以及其它必要的添加劑，以一定的方法制備的。
上記式(I)所表示的色酮衍生物每天給藥量隨患者的病情、體重、以及衍生物的種類、給藥方式的不同而有所不同。如在非口服時(shí)，皮下、靜脈、肌肉或直腸內(nèi)給藥量大約為0.01～20mg/kg/日、最好是約0.1～10mg/kg/日，口服給藥量大約為0.1～100mg/kg/日，最好是約1～10mg/kg/日。以下用實(shí)例來(lái)具體說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不限于下述實(shí)施例。
實(shí)施例12，7-2甲基-5-羥基-2(4-甲基-4-過(guò)氧羥基-2戊烯基)色酮。
色酮(CIB035(2)-3AAPDEB)的分離從中國(guó)四川采集到的毛喉杜鵑[CIB035，Rhodendron cephalun-tum]的全草干燥、粉碎后，室溫下用95％乙醇提取，提取液在60℃以下減壓濃縮，所得浸膏取25g用水和乙酸乙酯分配，有機(jī)層(Fr.A)以氯仿∶甲醇∶水(4∶3∶2)溶劑系統(tǒng)用液-液離心分配色譜儀(CPC)(三鬼工程技術(shù)公司生產(chǎn))進(jìn)行分離，并通過(guò)藥理篩選評(píng)價(jià)各組份的抑制活性。活性組分(Fr.A)收量為5.94g，Rf＝0.9(氯仿∶甲醇/7∶3)。該組份用硅膠中壓柱層析(55×600)(梯度洗脫，正己烷-乙酸乙酯/9∶1-8∶2-1∶1-氧仿∶甲醇/1∶1)分離成為A～R共18個(gè)部份，進(jìn)行活性評(píng)價(jià)。
活性部份(Fr.P)收量為175.5mg，Rf＝0.5～0.6(正己烷∶乙酸乙酯/7∶3)，再用中壓柱層析Lobar正相硅膠柱，sizeB)，以二氯甲烷∶乙酸乙酯/98∶2洗脫，分成A～G共7個(gè)部分，進(jìn)行活性評(píng)價(jià)?；钚圆糠?Fr.D)收量為101.0mg，Rf＝～0.58(二氧甲烷；乙酸乙酯/95∶5)，再進(jìn)行中壓柱層析(Lobar正相硅膠柱，sizeB)以二氯甲烷∶乙酸乙酯梯度洗脫(98∶2-95∶5-甲醇)分離成A～G共7個(gè)部分，活性評(píng)價(jià)。活性部分(Fr.E)收量為11.4mg，Rf＝0.41(二氯甲烷∶乙酸乙酯/95∶5)。最后，這個(gè)部分經(jīng)中壓柱層析(Lobar正相硅膠柱、sizeA)，氯仿∶甲醇/99∶1洗脫，如此進(jìn)行三次純化，得活性成分(新化合物)2，7-二甲基-5-羥基-2-(4-甲基-4-過(guò)氧羥基-2-戊烯基)色酮。
活性成分(Fr.B)收量3.5mg，Rf＝0.26(氯仿∶甲醇/97∶3)波譜分析MSC17H22O4，290.36m/z＝291([M+H]+)，273([M-OH]+)，257([M-OOH]+)，1H-NMR(500MHz)溶劑CDCl3，內(nèi)標(biāo)(CH3)4Siδ1.26(s，3H)，1.26(s，3H)，1.40(s，3H)，2.19(s，3H)，2.4(m，2H)，4.65(bs，1H)，5.46(d，1H，J＝10Hz)，5.56(d，1H，J＝16Hz)，5.76(dt，1H，J＝16，7.5Hz)，6.10(bs，1H)，6.22(bs，1H)，6.64(d，1H，J＝10Hz)，7.17(bs，1H)ppm13C-NMR(125.8MHz)δ21.5(q)，24.2(q)，24.2(q)，26.6(q)，44.3(t)，77.5(s)，82.2(s)，106.8(s)，108.5(d)，109.6(d)，117.2(d)，126.4(d)，126.4(d)，137.0(d)，139.9(s)，151.1(s)，154.2(s)ppm.
IR(液膜)υ4300，3350，3054，2982，2932，1628，1580，1512，1456，1427，1379，1365，1330，1267，1203，11411096，1067，992，977，913，828，775，739，704cm-1
實(shí)施例25-脂加氧酶抑制實(shí)驗(yàn)該實(shí)驗(yàn)是為了評(píng)價(jià)發(fā)明化合物的5-脂加氧酶抑制活性。
1)酶溶液的配制大鼠好堿性白血病細(xì)胞(Rat.Basophilie Leukemia CellRBL-1，ATCCCRL1378)在含10％非動(dòng)化牛胎兒血清的Eagle培養(yǎng)液中培養(yǎng)，細(xì)胞用PBS洗三次后，以1×107個(gè)/ml的濃度分散，在含1mMEDTA的0.1MHEPES，pH7.0中，用超聲流使細(xì)胞破碎，以13000rpm的轉(zhuǎn)速離心60分鐘，取出上清液備用。
2)酶活性的測(cè)定方法取上述酶溶液54μl加到含有1m MEDTA，2mM氧化鈣和被檢測(cè)物質(zhì)(溶解于DMSO中)的0.1M HEPES，pH7.0中，總體積為120μl，在37℃下靜置10分鐘，加入6μl濃度為0.4mg/ml的花生四烯酸甲醇溶液，在37℃下反應(yīng)60分鐘，加入120μl乙腈終止反應(yīng)，以13000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，用反相柱HPLC檢測(cè)上清液中所含5-羥基二十碳四烯酸的含量。
檢測(cè)結(jié)果為5-脂加氧酶抑制率為50％時(shí)的樣品濃度(IC50)是0.3μM。
本發(fā)明的新色酮衍生物對(duì)5-脂加氧酶有抑制作用，作為抗過(guò)敏劑、抗哮喘劑、抗炎劑等是有用的。療效是好的。
權(quán)利要求
1.一種新的色酮衍生物，其特征是，化學(xué)結(jié)構(gòu)為下述記式
式中的R1～R4代表獨(dú)立的H、或沒有取代基的1～6碳烷基、或有取代基的1～6碳烷基、或沒有取代基的2～6碳烯基、或有取代基的2～6碳烯基、或沒有取代基的2～6碳炔基、或有取代基的2～6碳炔基、或沒有取代基的4～12碳芳基、或有取代基的4～12碳芳基、或沒有取代基的1～6碳酰基、或有取代基的1～12碳酰基。另外，R4也可表示硅烷基。X、Y可表示各自獨(dú)立的氧原子、硫原子或氮原子。在X代表氮原子的情況下，Z可表示氫原子、烷基或硅烷基。在X代表氧、硫原子的情況下，Z不存在，----表示碳碳單鍵或雙鍵。
2.按權(quán)利要求1所述新的色酮衍生物，其特征是，以1記載的化學(xué)結(jié)構(gòu)以及藥理上允許的它的鹽作為有效成分的醫(yī)藥品；
3.按權(quán)利要求2所述的新的色酮衍生物，其特征是，該衍生物和它的鹽為有效成份的醫(yī)藥品為5-脂加氧酶抑制劑；
4.按權(quán)利要求3所述的新的色酮衍生物，其特征是，5-脂加氧酶抑制劑作為抗過(guò)敏、抗哮喘、抗炎癥的治療劑；
5.按權(quán)利要求1或2所述的色酮衍生物，其特征是，該衍生物的藥理學(xué)上允許的鹽量是指與無(wú)機(jī)堿形成的鹽，與有機(jī)堿形成的鹽，與氨基酸所形成的鹽等；
6.按權(quán)利要求4所述的色酮衍生物，其特征是以此衍生物和它的鹽為有效成份的5-脂加氧酶抑制劑用作治療醫(yī)學(xué)品時(shí)，可為丸劑，膠囊劑、顆粒劑、乳化劑、懸濁劑、注射劑等，給藥方式可為是口服，也可非口服。
全文摘要
一種新的色酮衍生物,其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為(I),該化學(xué)結(jié)構(gòu)式以及它的藥理學(xué)上允許的鹽作為有效成分的醫(yī)藥品為5－脂加氧酶抑制劑。該抑制劑可作為抗過(guò)敏、抗哮喘、抗炎癥的治療劑。用于治療時(shí),其劑型可以是片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑,也可是乳化劑、懸濁劑、注射劑等。
文檔編號(hào)A61K31/35GK1190095SQ9710781
公開日1998年8月12日 申請(qǐng)日期1997年12月11日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月13日
發(fā)明者俞文勝, 德田昌彥, 川邊紀(jì)雄, 德田千尋, 戶上泰彥 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所, 東麗株式會(huì)社