專利名稱：新的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了新的三唑并[4，5-d]嘧啶類化合物、它們作為藥物的應(yīng)用、含有它們的組合物以及制備它們的方法。
血小板粘附和聚集，是動(dòng)脈血栓形成中的起始過程。雖然血小板粘附于內(nèi)皮下表面的過程對(duì)受損傷血管壁的修復(fù)可能具有重要的作用，但是由此引發(fā)的血小板聚集可促使活性血管床的急性血栓形成性閉塞，結(jié)果導(dǎo)致具有高發(fā)病率的情況如心肌梗塞和不穩(wěn)定性心絞痛。常用于預(yù)防或緩解所述病癥的成功措施如血栓溶解和血管成形術(shù)，也受血小板介導(dǎo)的阻塞或再阻塞的危害。
有多種會(huì)聚途徑可以導(dǎo)致血小板聚集。任何一種開始的刺激，最后共同的結(jié)果都是借助于血纖維蛋白原對(duì)膜結(jié)合位點(diǎn)、糖蛋白IIb/IIIa(GP IIb/IIIa)的結(jié)合，從而引起血小板的交聯(lián)。針對(duì)GP IIb/IIIa的抗體或拮抗劑的高度抗血小板效力，可通過它們干擾所述最后共同結(jié)果來加以解釋。但是，該效力也可以解釋應(yīng)用該類藥物時(shí)所觀察到的出血問題。凝血酶可以導(dǎo)致血小板聚集，這很大程度上不取決于其他的途徑，但是，沒有其他機(jī)制對(duì)血小板的預(yù)先激活作用，就不大可能存在相當(dāng)大量的凝血酶。某些凝血酶抑制劑如水蛭素是高效的抗血栓形成劑，但是，也同樣可能導(dǎo)致過度出血，因?yàn)樗鼈兗扔锌寡“宓墓δ?，也有抗凝血?jiǎng)┑淖饔?The TIMI 9a Investigators(1994)，Circulation90，pp.1624-1630；The Global Use of Strategies to OpenOccluded Coronary Arteries(GUSTO)IIa Investigators(1994)Circulation 90，pp.1631-1637；Neuhaus K.L.等(1994)Circulation90，pp.1638-1642)。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，ADP對(duì)血栓形成起關(guān)鍵性介體的作用。ADP的關(guān)鍵作用受到以下事實(shí)的支持其他一些作用劑如腎上腺素和5-羥色胺(5HT，血清素)，只有在ADP存在時(shí)才會(huì)引起聚集作用。阿斯匹林有限的抗血栓形成效力可能反映了如下事實(shí)它僅阻斷一種來源的ADP，即在血小板粘附之后以與促凝血素有關(guān)的方式釋放ADP(參見例如Antiplatelet Trialists′Collaboration(1994)，Br.Med.J.308，pp.81-106；Antiplatelet Trialists′Collaboration(1994)，Br.Med.J.308，pp.159-168)。阿斯匹林對(duì)由其他來源ADP(例如來源于損傷細(xì)胞的ADP或者在血液紊流條件下釋放的ADP)引起的聚集作用沒有效果。ADP誘發(fā)的血小板聚集作用是由專門定位于血小板膜上的P2T-受體亞型介導(dǎo)的。最近的研究已表明，與其他抗血栓形成劑相比，在該受體上的拮抗劑可以提供顯著的改善效果。因此，有必要尋找P2T-拮抗劑作為抗血栓形成的藥物。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)一系列三唑并[4，5-d]嘧啶類衍生物是P2T-拮抗劑。第一方面，本發(fā)明提供了式(I)化合物或其藥學(xué)上適用的鹽或其溶劑合物，
其中R1為C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或苯基，每一個(gè)基團(tuán)可以由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11或C1-6烷基(其本身可以由1個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代)的取代基任意地取代；R2為由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C3-8環(huán)烷基、芳基(可以由1個(gè)或多個(gè)烷基和/或鹵原子任選取代)，或C1-6烷基的取代基任意取代的C1-8烷基；或者R2為由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基或苯基的取代基任意取代的C3-8環(huán)烷基(其中所述取代基中的后2個(gè)基團(tuán)可以由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、NO2、C(O)R8、OR8、SR11、NR12R13、由1個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代的苯基和C1-6烷基的取代基任意地取代)；R3和R4中之一為羥基，另一個(gè)為氫、羥基或NR9R10；R5為(CH2)nNR14R15，這里n為零～6，并且R14和R15獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基；或者R5為CONR16R17，這里R16為氫或C1-6烷基，R17為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基，它們中每個(gè)可由NR18R19取代，并且它們可由苯基任選取代，或者R17為由苯基取代的C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基，而苯基又可由NR18R19取代，這里R18和R19獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基；或者R17為含有1個(gè)或多個(gè)氮原子的并且在氮原子上由氫、C1-6烷基或苯基任選取代的五～八元飽和雜環(huán)；或者R16和R17與它們所連結(jié)的氮原子一起形成由如上定義的NR18R19取代的五～八元環(huán)；或者R16與R19一起形成含有2個(gè)氮原子的六～八元環(huán)，這里R17和R18的定義同上；或者R5為(CH2)pNR20CO(CH2)qOR21或(CH2)pNR22(CH2)qNR23COR24，這里p和q獨(dú)立地為1～4，R20、R21、R22、R23和R24獨(dú)立地為C1-4烷基或苯基；或者R5為CH＝CHCH2NR25R26，這里R25為氫、C1-6烷基或苯基，R26為氫或(CH2)yNR27R28，這里y為2-4，R27和R28獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基；R8、R9、R10和R11獨(dú)立地為氫或C1-6烷基；R12和R13獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或?；?。
烷基(無論是獨(dú)立的或作為其他基團(tuán)的部分)可以是直鏈的或支鏈的。式(I)化合物可以立體異構(gòu)體形式(包括對(duì)映異構(gòu)體)存在，本發(fā)明包括每種立體異構(gòu)形式以及它們的混合物(包括外消旋體)。本發(fā)明還包括任一互變異構(gòu)形式以及它們的混合物。
優(yōu)選的式(1)化合物具有以下立體化學(xué)結(jié)構(gòu)，
合適的R1為C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或苯基，每一個(gè)基團(tuán)可以由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11或C1-6烷基(其本身可由1個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代)的取代基任意地取代。優(yōu)選的R1為C1-8烷基。更好的是R1為丙基。
合適的R2為由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C3-8環(huán)烷基、芳基(可以由1個(gè)或多個(gè)烷基和/或鹵原子任選取代)的取代基任意取代的C1-8烷基，或C1-6烷基；或者R2為由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基或苯基的取代基任意取代的C3-8環(huán)烷基，其中所述取代基中的后2個(gè)基團(tuán)可以由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、NO2、C(O)R8、OR8、SR11、NR12R13、苯基和C1-6烷基任選取代。優(yōu)選的R2為C1-6烷基或由苯基任選取代的C3-8環(huán)烷基。更好的是R2為丁基或由苯基取代的環(huán)丙基。
合適的是R3或R4中之一為羥基，另一個(gè)為氫、羥基或NR9R10。優(yōu)選R3或R4兩者均為羥基。
合適的R5為(CH2)nNR14R15，這里n為零～6，R14和R15獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基；或者R5為CONR16R17，這里R16為氫或C1-6烷基，R17為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基，它們中每個(gè)可由NR18R19取代，并且它們可由苯基任選取代，或者R17為由苯基取代的C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基，而苯基又可由NR18R19取代，這里R18和R19獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基；或者R17為含有1個(gè)或多個(gè)氮原子的并且在氮原子上可由氫、C1-6烷基或苯基任選取代的五～八元飽和的雜環(huán)；或者R16和R17與它們所連接的氮原子一起形成由以上定義的NR18R19取代的五～八元環(huán)；或者R16與R19一起形成含有2個(gè)氮原子的六～八元環(huán)，其中R17和R18定義同上；或者R5為(CH2)pNR20CO(CH2)qOR21或(CH2)pNR22(CH2)qNR23COR24，這里p和q獨(dú)立地為1～4，R20、R21、R22、R23和R24獨(dú)立地為C1-4烷基或苯基；或者R5為CH＝CHCH2NR25R26，這里R25為氫、C1-6烷基或苯基，R26為氫或(CH2)yNR27R28，這里y為2～4，R27和R28獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基。
優(yōu)選R5為(CH2)nNH2(這里n為零、1或2)、CONR16R17，這里R16為氫，R17為由NR18R19任選取代的C1-5烷基，這里R18和R19均為氫，或者一個(gè)為C1-6烷基(尤其是甲基)，另一個(gè)為苯基，或者R5為CONR16R17，這里R16為氫，R17為CH2苯基或環(huán)己基，它們中每1個(gè)均可由氨基取代，或者R5為CONR16R17，這里R16和R17形成哌嗪環(huán)，或者R5為CH＝CHCH2NR25R26，這里R25和R26均為氫，或者R25為氫，R26為(CH2)2NH2，或者R5為CH2R20CO(CH2)2OR21，這里R20和R21為C1-4烷基，優(yōu)選分別為乙基和甲基，或者R5為CH2NH(CH2)2NHCOR24，這里R24為C1-4烷基，尤其為甲基。
更優(yōu)選的R5基團(tuán)為本文所例舉的那些。
特別優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括以下化合物或其藥學(xué)上適用的鹽或其溶劑合物，[1S-(1α，2β，3β，4α)]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-N-[[3-(N-甲基-N-苯基)氨基]丙基]-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽，[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[5-氨基戊基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽，[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[3-氨基丙基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽，[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[(3-氨基苯基)甲基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽，[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-N-[3-氨基丙基]-2，3-二羥基-4-[7-[2-(苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷甲酰胺三氟乙酸鹽，[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-N-[4-氨基環(huán)己基]-2，3-二羥基-4-[7-[2-(苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷甲酰胺，二(三氟乙酸鹽)，[1S-(1α，2α，3β，5β)]-3-氨基-5-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-(1α，2α，3β，5β)]-3-(氨甲基)-5-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-氨基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(乙氨基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1R*，2S*)]]-3-[(甲氨基)甲基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-[(乙氨基)甲基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(氨甲基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(2-氨乙基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇[1S-[1α，2α，3β(E)，5β(1S*，2R*)]]-3-(3-氨基丙-1-烯基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，N-乙基-N-[[1R-[1α，2β，3β，4α(1R*，2S*)]]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊基甲基]-3-甲氧基-丙酰胺，[1S-[1α，2α，3β(E)，5β(1S*，2R*)]]-3-[3-(2-二甲氨基乙基)氨基]-丙-1-烯基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，二-三氟乙酸鹽，[1R-[1α，2β，3β，4α(1R*，2S*)]]-N-[2-[2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊基甲基氨基]乙基]-乙酰胺，[1S-[1α，2α，3α，5β(1S*，2R*)]]-3-氨基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，1-[[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]環(huán)戊基羰基]哌嗪。
本發(fā)明還提供了制備式(I)化合物的方法，該方法包括(a)對(duì)于其中R5為CONHR16R17的式(I)化合物，使式(II)化合物或其受保護(hù)的衍生物與式(III)化合物反應(yīng)，
其中R1、R2、R3和R4同式(I)中的定義，HNR16R17(III)其中R16和R17同式(I)中的定義，或(b)對(duì)于其中R5為氨基的式(I)化合物，將以上定義的式(II)化合物進(jìn)行Curtis重排，或在(a)或(b)之后以任何次序任選進(jìn)行●將1個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌倌軋F(tuán)●脫去任何保護(hù)基●形成藥學(xué)上適用的鹽或溶劑合物。
應(yīng)用偶合化學(xué)，例如在偶合劑存在下，按照肽合成的已知方法，完成式(II)化合物與式(III)化合物的反應(yīng)(見M.Bodanszky和A.Bodanszky，The Practice of Peptide Synthesis，Springer-Verlag，1984)。合適的偶合劑包括1，1′-羰基二咪唑和二環(huán)己基碳二亞胺；優(yōu)選的偶合劑是溴三-吡咯烷子基-六氟磷酸鏻(bromo-tris-pyrrolidino-phosphonium hexafluorophosphat)，在N，N-二異丙基乙基胺存在下應(yīng)用。該反應(yīng)優(yōu)選在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氫呋喃(THF)中進(jìn)行，優(yōu)選的反應(yīng)溫度為-15～120℃，為0℃～室溫更好。
式(II)化合物可以用已知試劑如重鉻酸吡啶鎓或氧化鉻(VI)氧化式(IV)化合物或其受保護(hù)衍生物制得，
其中R1、R2、R3和R4同式(I)中的定義。
式(IV)化合物可以由式(V)化合物與NH2R2或NH2R2的鹽(這里R2的定義同上)于堿存在下反應(yīng)制得，
其中R1同式(I)中的定義，P1、P2和P3為氫或?yàn)橄嗤虿煌谋Ｗo(hù)基，L1為離去基團(tuán)如鹵原子。NH2R2合適的鹽包括鹽酸鹽。合適的堿包括有機(jī)堿如三乙胺或無機(jī)堿如碳酸鉀。
式(V)化合物可以由式(VI)化合物與金屬亞硝酸鹽如堿金屬亞硝酸鹽，尤其是亞硝酸鈉在稀含水酸如2M HCl中，或與C1-6烷基亞硝酸酯在惰性溶劑中，于-20℃～100℃進(jìn)行重氮化反應(yīng)制得；優(yōu)選的反應(yīng)條件是用亞硝酸異戊酯，于乙腈中，在80℃進(jìn)行，
其中R1、L1、P1、P2和P3定義同上。
其中P1為OH的式(VI)化合物可以通過還原式(VIII)化合物制得，
其中R1、L1、P2和P3定義同上。硝基的還原反應(yīng)可以按下法進(jìn)行例如用過渡金屬催化劑在約室溫進(jìn)行氫化，如用鈀/炭為催化劑在氫氣壓下進(jìn)行氫化，優(yōu)選在1-5個(gè)大氣壓下在溶劑如乙醇中進(jìn)行，或者用鐵粉于酸性溶劑如乙酸中在約100℃進(jìn)行。
內(nèi)酰胺的還原可以用復(fù)合的金屬氫化物如氫化鋁鋰于合適的溶劑如乙醚中進(jìn)行。該還原反應(yīng)優(yōu)選用硼氫化鈉于甲醇中進(jìn)行。
式(VII)化合物可以按下法制備使式(VIII)化合物與式(IX)化合物在堿如C1-6烷基-M或MH(這里M為金屬離子)例如丁基鋰存在下，于惰性溶劑如四氫呋喃(THF)中，在約-10～100℃進(jìn)行反應(yīng)。優(yōu)選應(yīng)用氫化鈉于THF中在室溫下進(jìn)行，
其中L1和R1定義同上，L2為離去基團(tuán)如鹵原子，這里L(fēng)1和L2最好是相同的，
其中P2和P3定義同上。為了得到式(Ia)化合物，優(yōu)選式(IX)化合物具有以下立體化學(xué)結(jié)構(gòu)，
式(II)化合物還可以由式(VII)化合物進(jìn)行以上所述的硝基還原反應(yīng)，接著進(jìn)行水解而制得。水解可以用無機(jī)酸如鹽酸或強(qiáng)有機(jī)酸如三氟乙酸進(jìn)行。所述還原和水解最好同時(shí)進(jìn)行應(yīng)用鐵粉在含有堿土金屬鹵化物如氯化鈣的醇溶劑(如乙醇)中，于約80℃進(jìn)行反應(yīng)。應(yīng)用以上所述方法，可以將得到的中間體轉(zhuǎn)變?yōu)槭?II)化合物。
所有新的中間體又形成了本發(fā)明的另一方面。
應(yīng)用已知的反應(yīng)條件，可以添加或脫去保護(hù)基。保護(hù)基的應(yīng)用詳見“Protective Groups in Organic Chemistry”，由J.W.F.McOmie編輯，Plenum Press(1973)，以及“Protective Groups in OrganicSynthesis”第2版，T.W.Greene & P.G.M.Wutz，Wiley-Interscience(1991)。
通過堿性水解可以脫去酯保護(hù)基，例如通過應(yīng)用金屬氫氧化物，優(yōu)選堿金屬氫氧化物如氫氧化鈉或氫氧化鋰，或季銨氫氧化物，于溶劑如含水乙醇或含水四氫呋喃中，在10°～100℃(優(yōu)選在大約室溫)下進(jìn)行堿性水解；或者用無機(jī)酸如鹽酸或強(qiáng)有機(jī)酸如三氯乙酸于溶劑如含水1，4-二噁烷中進(jìn)行酸性水解。
通過應(yīng)用例如氟化物離子源如四-正丁基氟化銨或氟化氫可以脫去三烷基甲硅烷基保護(hù)基。
通過應(yīng)用過渡金屬催化劑如鈀/炭，于氫氣流下，在1-5巴壓力，于溶劑如乙酸中進(jìn)行氫解，可以脫去芐基。
應(yīng)用已知的方法，通過轉(zhuǎn)變官能團(tuán)，可以將式(I)化合物轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪皇?I)化合物。例如(a)為了制得其中R5為CH2NH2的式(I)化合物，使其中R5為CH2Hal(這里Hal為鹵素)的式(I)化合物與疊氮化鈉反應(yīng)，然后進(jìn)行還原反應(yīng)，(b)為了制得其中R5為(CH2)2NH2的式(I)化合物，使其中R5為CH2Hal(這里Hal為鹵素)的式(I)化合物與氰化物反應(yīng)，接著進(jìn)行還原反應(yīng)，(c)為了制得其中R5為(CH2)NR14R15的式(I)化合物，使其中R5為(CH2)nNH2的式(I)化合物與合適的酮于還原劑存在下進(jìn)行反應(yīng)，(d)為了制得其中R5為CH＝CH·CH2NR22R23并且R3和R4定義同上的式(I)化合物，使其中R5為CH＝CHCH2L的式(I)化合物與式HNR22R23的化合物反應(yīng)，這里L(fēng)為離去基團(tuán)如溴、氯或甲磺酸酯，R22和R23定義同上，(e)為了制得其中R5為CH＝CHCH2L的式(I)化合物，可以按一般方法從其中R5為CH＝CHCH2OH的式(I)化合物制備，(f)為了制得其中R5為CH＝CHCH2OH的式(I)化合物，可以由其中R5為CH＝CHCO2R30(這里R30為C1-6烷基)的式(I)化合物經(jīng)還原，例如用DIBAL-H進(jìn)行還原制備。
其中R5為CH＝CHCO2R30(這里R30為C1-6烷基)的式(I)化合物可以按WO 97/03084中所述方法進(jìn)行制備。
使式(I)化合物游離的酸，或其鹽，或游離的堿，或其鹽或它們的衍生物，與1個(gè)或多個(gè)當(dāng)量合適的堿(例如由C1-6烷基任選取代的氫氧化銨或堿金屬或堿土金屬氫氧化物)或酸(例如氫鹵酸(尤其是鹽酸)、硫酸、草酸或磷酸)反應(yīng)，可以得到式(I)化合物的鹽。該反應(yīng)可以在該鹽不溶的溶劑或介質(zhì)或者在該鹽可溶的溶劑或介質(zhì)例如水、乙醇、THF或乙醚中進(jìn)行，經(jīng)真空或冷凍干燥除去溶劑或介質(zhì)。該反應(yīng)也可以為復(fù)分解的過程或可以在離子交換樹脂上進(jìn)行。雖然其他鹽也是有用的，例如用于分離或純化產(chǎn)品，但優(yōu)選無毒的生理上適用的鹽。
本發(fā)明化合物用作為P2T受體拮抗劑。因此，本發(fā)明化合物可用于治療，尤其是輔助治療，它們特別可以用作為血小板激活、聚集和脫粒的抑制劑，抗血栓劑，或用于治療或預(yù)防不穩(wěn)定性心絞痛、冠狀動(dòng)脈成形術(shù)(PTCA)、心肌梗塞、周圍血栓溶解、動(dòng)脈粥樣硬化的原發(fā)性動(dòng)脈血栓并發(fā)癥如血栓或栓塞中風(fēng)、外周血管疾病、有或無血栓溶解的心肌梗塞、動(dòng)脈粥樣硬化中由于干預(yù)例如血管形成術(shù)、動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)、斯坦特印模、冠狀血管或其他血管移植手術(shù)而出現(xiàn)的動(dòng)脈并發(fā)癥，外科或機(jī)械損傷而引起的血栓并發(fā)癥如偶然外傷或外科損傷后的器官組織搶救、重建外科手術(shù)包括皮膚瓣和肌瓣的重建外科手術(shù)而引起的血栓并發(fā)癥，帶有擴(kuò)散的血栓形成/血小板消耗成分的疾病如擴(kuò)散的血管內(nèi)凝血，血栓形成的血小板減少性紫癜，溶血的尿毒綜合癥，敗血病的血栓形成并發(fā)癥，成人呼吸道疾病綜合癥，抗磷脂綜合癥，肝素引起的血小板減少癥和子癇前期/子癇或靜脈血栓形成如深靜脈血栓形成，靜脈閉塞疾病，血液學(xué)疾病如脊椎增生疾病，包括血小板增多；或預(yù)防體內(nèi)由于用器械方法如心-肺分流術(shù)(預(yù)防微小血栓栓塞)引起的血小板激活，預(yù)防體外由于用器械方法所引起的血小板激活如血制品(如血小板濃縮物)的保存，或分流閉塞如腎透析或血漿取出法，血管損傷的繼發(fā)性血栓形成/炎癥如脈管炎、關(guān)節(jié)炎、腎小球性腎炎、炎癥性腸病和器官移植排斥反應(yīng)，病癥如偏頭痛、雷諾現(xiàn)象，動(dòng)脈粥樣化蝕斑形成/漸進(jìn)、血管狹窄/再狹窄以及其中在疾病過程中血小板衍生的因子涉及的免疫疾病例如哮喘。
本發(fā)明還提供了應(yīng)用本發(fā)明化合物制備治療上述疾病的藥物的用途。尤其是本發(fā)明化合物可用于治療心肌梗塞、血栓中風(fēng)、短暫的局部缺血、外周血管疾病和心絞痛，尤其是不穩(wěn)定性心絞痛。本發(fā)明還提供了治療上述疾病的方法，該方法包括給患有上述疾病的患者施用治療有效劑量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物可以經(jīng)局部給藥，例如以溶液劑、混懸液劑、HFA氣溶膠劑和干粉劑向肺和/或氣道給藥；或經(jīng)全身給藥，例如以片劑、小丸劑、膠囊劑、糖漿劑、粉劑或顆粒劑經(jīng)口服給藥，或以無菌的非經(jīng)胃腸道給藥的溶液劑或混懸液劑經(jīng)非胃腸道給藥，或經(jīng)皮下給藥，或以栓劑經(jīng)直腸給藥或經(jīng)透皮吸收給藥。
可以給予本發(fā)明化合物本身，或者給予藥物組合物，所述藥物組合物含有本發(fā)明化合物以及藥學(xué)上適用的稀釋劑、輔助劑或載體。特別優(yōu)選不含有能夠引起有害反應(yīng)(如過敏)的物質(zhì)的組合物。
本發(fā)明化合物的干粉劑和加壓的HFA氣溶膠可以經(jīng)口或鼻吸收給藥。對(duì)于吸入給藥，要求將化合物細(xì)粉碎。
本發(fā)明化合物還可以用干粉吸入器給藥。該吸入器可以是單一劑量或多劑量的，并且可以是呼吸式精確的干粉吸入器。
另一方法是將細(xì)碎的化合物與載體物質(zhì)如單糖或二糖或多糖、糖醇或其他的多元醇一起混合。合適的載體包括蔗糖和淀粉。另外，細(xì)碎化合物可以用另一物質(zhì)進(jìn)行包衣?？梢詫⒎勰罨旌衔镅b入硬明膠膠囊中，每一粒含有所需劑量的有效化合物。
又一方法是將細(xì)碎粉末制成小球，該小球在吸入過程中破碎。可以將該球化粉末裝入多劑量吸入器(即稱為Turbuhaler)的藥物貯存器中，其中劑量單元計(jì)量患者所需吸入的劑量。應(yīng)用該系統(tǒng)，可以將有效化合物與載體(或沒有載體)一起輸送給患者。
含有本發(fā)明化合物的藥物組合物可以是適用于口服給藥的片劑、小丸劑、膠囊劑、糖漿劑、粉劑或顆粒劑；適用于非經(jīng)胃腸道給藥的無菌的非經(jīng)胃腸給藥或皮下給藥的溶液劑、混懸液劑、或適用于直腸給藥的栓劑。
對(duì)于口服給藥，可以將有效化合物與輔助劑或載體例如乳糖、蔗糖、小梨糖醇、甘露糖醇、淀粉(如馬鈴薯淀粉、玉米淀粉或淀粉精)、纖維素衍生物、粘合劑(如明膠或聚乙烯吡咯烷酮)以及潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、聚乙二醇、蠟、石蠟等一起混合，然后壓制成片劑。如果需要包衣片劑，那么可以將上述制得的片芯用含有例如阿拉伯樹膠、明膠、滑石、二氧化鈦等的濃的糖溶液進(jìn)行包衣。另外，該片劑還可以用溶于易揮發(fā)性有機(jī)溶劑或含水溶液中合適的聚合物進(jìn)行包衣。
為了制備軟明膠膠囊劑，可以將本發(fā)明化合物與例如植物油或聚乙二醇一起混合。硬明膠膠囊劑可以含有應(yīng)用上述片劑任一賦形劑例如乳糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、纖維素衍生物或明膠制成的化合物顆粒。液體或半固體藥物的配方也可以裝入硬明膠膠囊中。
口服給藥的液體制劑可以為糖漿劑或混懸液劑，例如含有本發(fā)明化合物、糖以及乙醇、水、甘油和丙二醇的混合物。所述液體制劑可以任選含有著色劑、調(diào)味劑、糖精和作為增稠劑的羧甲基纖維素或本技術(shù)領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟知的其他賦形劑。
以下述實(shí)施例詳述本發(fā)明。在實(shí)施例中，用Varian Unity Inova300或400核磁共振儀測(cè)定NMR譜，MS譜測(cè)定如下用VG70-250S或Finnigan Mat Incos-XL光譜儀測(cè)定EI譜，用VG70-250SEQ光譜儀測(cè)定FAB譜，用Finnigan Mat SSQ 7000或Micromass Platform光譜儀測(cè)定ESI和APCI譜。制備性HPLC分離通常用裝有二氧化硅的BDSC-18反相Novapak、Bandapak或Hypersil柱進(jìn)行。快速色譜(實(shí)施例中以(SiO2)簡(jiǎn)要表示)用Fisher Matrix二氧化硅(30～70μm)進(jìn)行。有機(jī)溶液經(jīng)硫酸鎂或硫酸鈉干燥，然后經(jīng)過濾除去干燥劑。對(duì)于存在旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的實(shí)施例，在質(zhì)子NMR譜中僅提供主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的化學(xué)位移。實(shí)施例1[1S-(1α，2β，3β，4α)]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-N-[[3-(N-甲基-N-苯基)氨基]丙基]-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽a)4，6-二羥基-2-(丙硫基)嘧啶向含有氫氧化鈉(55.6g)的4，6-二羥基-2-巰基嘧啶(200g)的水(800ml)混懸液中加入丙基碘(136ml)。反應(yīng)混合物攪拌2周，然后濃縮至1/2體積，加入2N鹽酸，通過過濾分離出產(chǎn)物(167g)。MS(EI)186(M+，100％)。
b)4，6-二羥基-5-硝基-2-(丙硫基)嘧啶向冰冷的發(fā)煙硝酸(323ml)中緩慢地加入步驟a)產(chǎn)物(70g)。將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)并倒入冰中，通過過濾分離出產(chǎn)物(65g)。MS(EI)231(M+)，41(100％)。
c)4，6-二氯-5-硝基-2-(丙硫基)嘧啶向攪拌的步驟b)產(chǎn)物(134g)在磷酰氯(500ml)的混懸液中滴加N，N-二乙基苯胺(150ml)，然后所得的溶液加熱回流1小時(shí)。將冷卻的反應(yīng)混合物倒入冰中，隨后用乙醚(3×500ml)萃取。將合并的萃取液干燥并濃縮。經(jīng)色譜(SiO2，異己烷∶乙醚，19∶1為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(128g)。MS(EI)271，269，267(M+)，41(100％)。
d)[3aS-(3aα，4β，7β，7aα)]-5-[6-氯-5-硝基-2-(丙硫基)嘧啶-4-基]-四氫-4，7-亞甲基-2，2-二甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烯并[4，5-c]吡啶-6(3aH)-酮將氫化鈉(60％，4.00g)分次加到[3aS-(3aα，4β，7β，7aα)]四氫-2，2-二甲基-4，7-亞甲基-1，3-二氧雜環(huán)戊烯并[4，5-c]吡啶-6(3aH)-酮(18.3g)的THF(500ml)溶液中。攪拌1小時(shí)，將該溶液滴加到步驟c)產(chǎn)物(54.0g)的THF(500ml)溶液中。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?5分鐘，然后濃縮并經(jīng)色譜純化(SiO2，二氯甲烷∶異己烷，3∶2為洗脫劑)，得到小標(biāo)題化合物(79.2g)MS(APCI)417，415(M+H+)，415(100％)。
e)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[[5-氨基-6-氯-2-(丙硫基)-4-嘧啶基]氨基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酸向攪拌的步驟d)產(chǎn)物(10.0g)和氯化鈣的乙醇(140ml)溶液中加入鐵粉(10.0g)。反應(yīng)混合物加熱回流10分鐘，然后通過硅藻土過濾，用熱乙醇洗滌若干次。濾液經(jīng)濃縮得到所需產(chǎn)物(9.3g)。MS(FAB)405，403(M+H+)，405(100％)f)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[7-氯-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酸向步驟e)產(chǎn)物(9.28g)的乙腈(80ml)溶液中加入亞硝酸異戊酯(6.02ml)，溶液于70℃加熱1小時(shí)。將冷卻的反應(yīng)混合物濃縮并純化(SiO2，乙酸乙酯∶異己烷2∶1為洗脫劑)，得到小標(biāo)題化合物(7.9g)。MS(FAB)416，414(M+H+)，414(100％)。
g)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酸步驟f)產(chǎn)物(5.52g)和正丁基胺(5ml)在1，4-二噁烷(25ml)中的混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮，殘余物經(jīng)純化(SiO2，二氯甲烷∶乙酸乙酯2∶1為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(2.2g)。MS(FAB)451(M+H+，100％)。
h)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-N-[3-(N-甲基-N-苯基氨基)丙基]-4H-環(huán)戊烯并-[d]-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲酰胺向步驟g)產(chǎn)物(0.24g)、溴-三吡咯烷子基-六氟磷酸鏻(0.32g)和N，N-二異丙基乙基胺(0.28ml)在N，N-二甲基甲酰胺(8ml)的溶液中加入N-(3-氨基丙基)-N-甲基苯胺(0.1g)。混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，濃縮并純化(SiO2，乙酸乙酯∶汽油3∶2)，得到小標(biāo)題化合物(0.23g)。MS(APCI)597(M+H+，100％)i)[1S-(1α，2β，3β，4α)]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-N-[3-[(N-甲基-N-苯基)氨基]丙基]-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽步驟h)產(chǎn)物(0.22g)在三氟乙酸(8ml)和水(1ml)中的溶液于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后濃縮并純化(HPLC NovapakC18柱，0.1％乙酸銨水溶液甲醇，30∶70～0∶100，在15分鐘內(nèi)作梯度洗脫)，得到標(biāo)題化合物(0.12g)。MS(APCI)557(M+H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)9.00(1H，t)，8.00(1H，t)，7.21(2H，m)，6.85(3H，m)，4.95(1H，m)，4.41(1H，m)，4.15(1H，m)，3.90(2H，m)，3.51(2H，q)，3.38(2H，m)，3.11(4H，m)，2.92(3H，m)，2.78(1H，m)，2.36-2.25(2H，m)，1.73-1.58(6H，m)，1.36(2H，m)，1.00(3H，t)，0.91(3H，t).實(shí)施例2[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[5-氨基戊基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽用實(shí)施例1步驟g)產(chǎn)物和1，5-二氨基戊烷，按實(shí)施例1步驟h)的方法，隨后按實(shí)施例1步驟i)的方法制備。MS(APCI)495(M+H+，100％)NMR δH(d6-DMSO)4.91(1H，m)，4.47(1H，t)，4.31(1H，t)，3.75 and 3.37(2H，m)，3.09(2H，t)，2.95(2H，m)，2.80(3H，m)，2.45(1H，m)，1.48(8H，br m)，1.24(4H，m)，0.83(3H，t)，0.75(3H，t).實(shí)施例3[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[3-氨基丙基]-4-[7-(丁氨基)-5，-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽a)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-N-[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丙基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲酰胺按實(shí)施例1步驟h)的方法，用實(shí)施例1步驟g)產(chǎn)物和(3-氨基丙基)氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯制備。MS(APCI)495(M+H+，100％)。
b)[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[3-氨基丙基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽按實(shí)施例1步驟i)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI)465(M-H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)9.01(1H，t)，8.14(1H，t)，7.75(3H，br s)，5.21(1H，br s)，5.04(1H，br s).4.96(1H，m)，4.41(1H，m)，4.13(1H，m)，3.50(2H，q)，3.13(4H，m)，2.77(3H，m)，2.29(2H，m)，1.68(6H，m)，1.34(2H.sextet)，0.99(3H，t)，0.91(3H，t).實(shí)施例4[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[(3-氨基苯基)甲基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽a)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-N-[(3-氨基苯基)甲基]-6-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲酰胺按實(shí)施例1步驟h)的方法，用實(shí)施例1步驟g)產(chǎn)物和3-氨基芐基胺制備。MS(APCI)555(M+H+，100％)。
b)[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[(3-氨基苯基)甲基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽按實(shí)施例1步驟i)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI)515(M+H+100％)NMRδH(d6-DMSO)8.99(1H，t)，8.54(1H，t)，6.95(1H，m)，6.48-6.43(3H，m)，5.30(2H，br s)，5.13(1H，br s)，5.00-4.93(2H，m)，4.45(1H，br m)，4.16(3H，d)，3.52-3.47(2H，m)plus rotamer at 3.90，3.13-3.07(2H，m)，2.86-2.81(1H，m)，2.37-2.24(2H，m)，1.73-1.56(4H，m)，1.39-1.32(2H，m)，0.98(3H，t).實(shí)施例5[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-N-[3-氨基丙基]-2，3-二羥基-4-[7-[2-(苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽a)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα(1R*，2S*))]-四氫-2，2-二甲基-6-[7-[2-(苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酸按實(shí)施例1步驟g)的方法，用實(shí)施例1步驟f)產(chǎn)物和(1R-反式)-2-苯基-環(huán)丙胺，[R-(R*，R*)]-2，3-二羥基丁二酸酯(1∶1)(按L.A.Mitscher等，J.Med.Chem.1986，29，2044所述方法制備)制備。MS(APCI)511(M+H+，100％)b)[3aR-[3aα，4α，6α，6aα(1R*，2S*)]]-四氫-2，2-二甲基-N-[3-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]丙基]-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲酰胺按實(shí)施例1步驟h)的方法，用步驟a)產(chǎn)物和(3-氨基丙基)-氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯制備。MS(APCI)667(M+H+)c)[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-N-[3-氨基丙基]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷甲酰胺三氟乙酸鹽按實(shí)施例1步驟i)的方法，用步驟b)產(chǎn)物制備。MS(APCI)527(M+H+)NMRδH(d6-DMSO)9.36(1H，d)，8.12(1H，t)，7.69 (3H，br s)，7.31-7.16(5H，m)，5.20(1H，br s)，4.97(2H，m)，4.41(1H，t)，4.12(1H，t)，3.25-3.04(3H，m)，3.02-2.72(5H，m)，2.42-2.08(3H，m)，1.77-1.40(5H，m)，1.33(1H，m)，0.81(H，3t).實(shí)施例6[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-N-[反式-4-氨基環(huán)己基]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷甲酰胺，二(三氟乙酸鹽)a)[3aR-[3aα，4α，6α，6aα(1R*，2S*)]]-N-[反式-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]環(huán)己基]-四氫-2，2-二甲基-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲酰胺按實(shí)施例1步驟h)的方法，用實(shí)施例5步驟a)產(chǎn)物和反式-(4-氨基環(huán)己基)氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯(按J.Smith等，J.Org.Chem.，1996，61，8811所述方法制備)制備。MS(APCI)707(M+H+，100％)b)[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-N-[反式-4-氨基環(huán)己基]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷甲酰胺二(三氟乙酸鹽)按實(shí)施例1步驟i)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI) 567(M+H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)9.36(1H，d)，7.88(1H，d)，7.83(3H，br s)，7.29(2H，m)，7.18(3H，m)，4.98(1H，q)，4.45(1H，m)，4.08(1H，t)，3.48(1H，m)，3.25-2.74(5H，m)，2.40-2.07(3H，m)，2.00-1.72(5H，m)，1.53-1.19(7H，m)，0.81(3H，t).實(shí)施例7[1S-(1α，2α，3β，5β)]-3-氨基-5-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇a)[3aR-[3aα，4α，6α，6aα]]-6-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并[d]-1，3]-二唑-4-基]氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯向?qū)嵤├?步驟g)產(chǎn)物(0.25g)的叔丁醇(5ml)溶液中加入二苯基磷酰疊氮(0.15g)和三乙胺(0.056g)?；旌衔锛訜峄亓?0小時(shí)并濃縮。殘余物溶于乙酸乙酯中，并用5％檸檬酸水溶液、鹽水和碳酸氫鈉水溶液洗滌，干燥并濃縮。經(jīng)純化(SiO2，乙酸乙酯∶異己烷1∶9～2∶8為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.13g)。MS，(APCI)522(M+H+，100％)。
b)[1S-(1α，2α，3β，5β)]-3-氨基-5-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇按實(shí)施例1步驟i)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI)382(M+H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)9.08(1H，t)，8.50(3H，s)，5.00(3H，m)，4.46(1H，t)，4.14(1H，t)，3.50(3H，m)，3.08(2H，m)，2.64(1H，m)，2.14(1H，m)，1.72(2H，m)，1.61(2H，m)，1.34(2H，m)，1.00(3H，t)，0.91(3H，t).實(shí)施例8[1S-(1α，2α，3β，5β)]-3-(氨基甲基)-5-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇
a)N-丁基-3-[[3aS-(3aα，4α，6α，6aα)]-四氫-6-(碘代甲基)-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺于-60℃向[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲醇(按WO 9703084所述方法制備)(1g)的二氯甲烷(30ml)溶液中加入甲基三苯氧基碘化鏻(3.12g)的二氯甲烷(40ml)溶液。4小時(shí)后混合物用二氯甲烷稀釋，并用硫代硫酸鈉水溶液和碳酸氫鈉水溶液洗滌。經(jīng)純化(SiO2，二氯甲烷∶乙酸乙酯4∶1為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(1.4g)。MS(APCI)547(M+H+，100％)。
b)3-[[3aS-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-(疊氮基甲基)-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-丁基-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺步驟a)產(chǎn)物(0.3g)和疊氮化鈉(0.1g)在N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的混合物于80℃加熱2小時(shí)。加入水，產(chǎn)物用二氯甲烷萃取。經(jīng)純化(SiO2，二氯甲烷∶乙酸乙酯9∶1為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.2g)。MS(APCI)462(M+H+，100％)c)3-[[3aS-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-(氨基甲基)-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-丁基-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺在1大氣壓氫氣壓下，將步驟b)產(chǎn)物(0.3g)在含乙酸(0.5ml)的乙醇(50ml)中的溶液與10％ Pd/C催化劑一起攪拌18小時(shí)。混合物經(jīng)過濾，濃縮和純化(SiO2，乙酸乙酯-甲醇為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.1g)。MS(APCI)436(M+H+，100％)。
d)[1S-(1α，2α，3β，5β)]-3-(氨基甲基)-5-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇按實(shí)施例1步驟i)的方法，用步驟c)產(chǎn)物制備。MS(APCI)396(M+H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)5.06(1H，m)，4.80(1H，br s)，4.50(1H，t)，4.19(1H，t)，3.55(2H，t)，3.35-3.15(2H，m)，3.12(2H，t)，2.67(1H，m)，2.47(1H，m)，1.99(1H，m)，1.75-1.60(4H，m)，1.40-1.30(2H，m)，0.99(3H，t)，0.90(3H，t).實(shí)施例9[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-氨基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇a)[3aR-[3aα，4α，6α(1R*，2S*)，6aα]]-[6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4基]-氨基甲酸，1，1-二甲基乙基酯按實(shí)施例7步驟a)的方法，用實(shí)施例5步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI)582(M+H+，100％)b)[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-氨基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇按實(shí)施例1步驟i)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI)442(M+H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)9.42(1H，d4.2Hz)，8.21(3H，br s)，7.35-7.16(5H，m)，4.95(1H，q6.4Hz)，4.43(1H，t 6.0Hz)，4.09(1H，t 6.0Hz)，3.50(1H，br)，3.22(1H，m)，2.95(1H，m)，2.80(1H，m)，2.65(1H，m)，2.10(2H，m)，1.50(3H，m)，1.34(1H，m)，0.78(3H，t，7.6H2)實(shí)施例10[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(乙氨基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇用乙酸將實(shí)施例9步驟b)產(chǎn)物(0.72g)的甲醇(20ml)溶液調(diào)至pH5，向其中加入乙醛(60μl)和氰基硼氫化鈉(74mg)。反應(yīng)液于室溫?cái)嚢?2小時(shí)，然后用氫氧化鈉溶液調(diào)至pH14，并用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)相干燥和濃縮，然后經(jīng)純化(HPLC，NovapakC18柱，0.1％乙酸銨水溶液∶乙腈60∶40作恒溶劑成分洗脫)得到標(biāo)題化合物(0.21g)。MS(APCI)470(M+H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)9.66(1H，d 4.4Hz)，9.16(2H，br m)，7.50(2H，m)，7.40(3H，m，)5.17(1H，q 7.2Hz)，4.66(1H，t 6.4Hz)，4.44(1H，t 5.6Hz)，3.75(1H，m)，3.46(1H，m)，3.30(2H，m)，3.16(1H，m)，3.05(1H，m)，2.90(1H，m)，2.35(2H，m)，1.77(1H，m)，1.68(2H，m)，1.56(1H，m)，1.44(3H，t 7.2Hz)，1.00(3H，t 7.2Hz).實(shí)施例11[1S-[1α，2α，3β，5β(1R*，2S*)]]-3-[(甲氨基)甲基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇a)[3aR-[3aα，4α，6α(1S*，2R*)，6aα]]-四氫-2，2-二甲基-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲醇按實(shí)施例5步驟a)的方法，用(1S-反式)-2-苯基-環(huán)丙胺，[S-(R*，R*)]-2，3-二羥基丁二酸酯(1∶1)制備。MS(APCI)497(M+H+，100％)b)3-[[3aS-[3aα，4α(]R*，2S*)，6α，6aα]]-四氫-6-(碘代甲基)-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-(2-苯基環(huán)丙基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺按實(shí)施例8步驟a)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI)606(M+H+，100％)c)[1S-[1α，2α，3β，5β(1R*，2S*)]]-3-(碘代甲基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]環(huán)戊烷-1，2-二醇步驟b)產(chǎn)物(0.34g)在甲醇(5ml)和四氫呋喃(5ml)混合液中的溶液用2M鹽酸水溶液(2ml)處理。反應(yīng)混合物于室溫放置6小時(shí)。將該混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)中，用乙酸乙酯(200ml)萃取，并將萃取液干燥和濃縮。經(jīng)純化(SiO2，甲醇∶氯仿1∶49為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.26g)。MS(APCI)567(M+H+，100％)d)[1S-[1α，2α，3β，5β(1R*，2S*)]]-3-[(甲氨基)甲基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇步驟c)產(chǎn)物(0.25g)的二甲亞砜(3ml)溶液用40％甲胺水溶液(1ml)處理。反應(yīng)混合物于室溫放置18小時(shí)，然后倒入乙酸乙酯(200ml)中，用飽和鹽水水溶液(3×100ml)洗滌，干燥并濃縮。經(jīng)純化(SiO2，甲醇∶氯仿1∶4為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.27g)。MS(APCI)470(M+H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)9.32(1H，d)，7.31-7.15(5H，m)，4.96(2H，q)，4.42-4.39(1H，m)，3.84(1H，t)，3.22-3.18(1H，m)，2.95-2.85(2H，m)，2.70-2.64(1H，m)，2.34-2.27(4H，m)，2.17-2.11(2H，m)，1.85-1.75(1H，m)，1.54-1.47(3H，m)，1.36-1.31(1H，m)，0.82(3H，t).實(shí)施例12[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-[(乙氨基)甲基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)丙烷-1，2-二醇a)[3aR-[3aα，4α，6α(1R*，2S*)，6aα]]-四氫-2，2-二甲基-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲醇向[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[7-氯-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-甲醇(按WO 9703084所述方法制備)(55g)和(1R-反式)-2-苯基-環(huán)丙胺，[R-(R*，R*)]-2，3-二羥基丁二酸酯(1∶1)(按L.A.Mitscher等，J.Med.Chem.1986，29，2044所述方法制備)(11.3g)的二氯甲烷(500ml)溶液中加入N，N-二異丙基乙基胺(21ml)。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后用水洗滌，干燥和蒸發(fā)。殘余物經(jīng)純化(SiO2，乙酸乙酯∶二氯甲烷3∶7為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(19g)。MS(APCI)497(M+H+，100％)b)3-[[3aS-[3aα，4α(1S*，2R*)，6α，6aα]]-四氫-6-(碘代甲基)-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-(2-苯基環(huán)丙基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺按實(shí)施例8步驟a)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI)606(M+H+，100％)c)[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(碘代甲基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇按實(shí)施例11步驟c)的方法，用步驟b)產(chǎn)物制備。MS(APCI)567(M+H+，100％)d)[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-[(乙氨基)甲基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇按實(shí)施例11步驟c)的方法，用步驟c)產(chǎn)物和乙胺水溶液制備。MS(APCI)484(M+H+，100％)NMRδH(d6-DMSO)9.35(1H，d)，7.31-7.15(5H，m)，5.03-4.97(2H，m)，4.42(1H，q)，3.86(1H，t)，3.23-3.19(1H，m)，3.00-2.80(2H，m)，2.80-2.70(1H，m)，2.64-2.57(3H，m)，2.40-2.25(1H，m)，2.15-2.12(2H，m)，1.85-1.78(1H，m)，1.54-1.47(2H，m)，1.32-1.28(1H，m)，1.11-1.01(4H，m)，0.86-0.80(3H，m).實(shí)施例13[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(氨基乙基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，鹽酸鹽a)[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-疊氮基甲基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇實(shí)施例12步驟c)產(chǎn)物(0.9g)的二甲亞砜(5ml)溶液用疊氮化鈉(0.125g)處理。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后倒入乙酸乙酯(200ml)中，用鹽水(3×100ml)洗滌，干燥并濃縮。殘余物與乙醚一起研制，得到小標(biāo)題化合物(0.64g)。MS(APCI)482(M+H+，100％)b)[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(氨基甲基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，鹽酸鹽步驟a)產(chǎn)物(0.22g)的乙醇(7ml)溶液用10％鈀-炭(0.03g)處理，所得的混懸液在4個(gè)大氣壓力氫氣壓下攪拌24小時(shí)。將反應(yīng)混合物過濾，所得的溶液用過量乙醚氫氯酸處理以析出白色固體。分離出固體，并用乙酸乙酯洗滌得到標(biāo)題化合物(0.13g)。MS(APCI)456(M+H+，100％)NMR δH(d6-DMSO)9.39(1H，d)，8.02(3H，s)，7.31-7.18(5H，m)，4.96(1H，q)，4.33(1H，t)，3.96(1H，t)，3.22-3.19(1H，m)，3.15-3.05(1H，m)，2.95-2.80(3H，m)，2.33-2.28(2H，m)，2.13-2.11(1H，m)，1.87-1.79(1H，m)，1.55-1.45(3H，m)，1.35-1.31(1H，m)，0.81(3H，t).實(shí)施例14[1S-[1α，2α，3β，5β(1 S*，2R*)]]-3-(2-氨基乙基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，鹽酸鹽a)[3aR-[3aα，4α，6α(1R*，2S*)，6aα]]-四氫-2，2-二甲基-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-乙腈實(shí)施例12步驟b)產(chǎn)物(1.25g)的二甲亞砜(10ml)溶液用氰化鈉(0.22g)處理，反應(yīng)混合物攪拌6小時(shí)?；旌衔锏谷胍宜嵋阴?200ml)中，用鹽水(3×100ml)洗滌，干燥和濃縮。經(jīng)純化(SiO2，乙酸乙酯∶異己烷1∶2為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.88g)。MS(APCI)506(M+H+，100％)b)[3aR-[3aα，4α，6α(1R*，2S*)，6aα]-四氫-2，2-二甲基-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙基磺?；?-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-乙腈步驟a)產(chǎn)物(0.88g)的乙醇(20ml)溶液用3-氯過苯甲酸(1.58g，含量57％)處理。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?8小時(shí)，然后濃縮。殘余物溶于乙酸乙酯(200ml)中，用飽和焦亞硫酸鈉水溶液(100ml)，隨后用飽和碳酸氫鈉水溶液(3×100ml)洗滌，然后干燥和濃縮。經(jīng)純化(SiO2，乙酸乙酯∶異己烷1∶1為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.89g)。MS(APCI)538(M+H+，100％)c)3-[[3aS-(3aα，4α(1S*，2R*)，6α，6aα]]-6-(2-氨基乙基)-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙基磺?；?-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺，乙酸鹽步驟b)產(chǎn)物(0.82g)的冰醋酸(7ml)溶液用氧化鉑(0.15g)處理，所得的混懸液在4個(gè)大氣壓力氫氣壓下攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物過濾并濃縮。殘余物與乙醚一起研制，經(jīng)過濾收集得到小標(biāo)題化合物(0.75g)。MS(APCI)542(M+H+，100％)d)3-[[3aS-(3aα，4α(1S*，2R*)，6α，6aα)]]-6-(2-氨基乙基)-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺向丙烷硫醇鈉(1.49g)的DMF(10ml)溶液中加入步驟c)產(chǎn)物(0.74g)的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(5ml)溶液。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后倒入飽和鹽水溶液(100ml)中，接著用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。合并的有機(jī)相用鹽水(3×100ml)法滌，隨后干燥和濃縮。經(jīng)純化(SiO2，甲醇∶氯仿1∶4為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.58g)。MS(APCI)510(M+H+，100％)e)[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(2-氨基乙基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]環(huán)戊烷-1，2-二醇，鹽酸鹽步驟d)產(chǎn)物(0.52g)的甲醇(5ml)溶液用2M鹽酸水溶液(2ml)處理，反應(yīng)液放置6小時(shí)，然后濃縮。經(jīng)純化(HPLC，NovapakC18柱，在15分鐘內(nèi)用0.1％三氟乙酸∶乙腈70∶30～0∶100作梯度洗脫)得到標(biāo)題化合物(0.13g)。MS(APCI)470(M+H+，100％)NMR δH(d6-DMSO)9.36(1H，d)，7.90(3H，s)，7.31-7.15(5H，m)，4.93(1H，q)，4.31(1H，t)，3.81(1H，t)，3.22-3.18(1H，m)，2.95-2.82(4H，m)，2.44-2.38(1H，m)，2.13-2.11(1H，m)，2.03-2.01(1H，m)，1.91-1.86(1H，m)，1.74-1.64(2H，m)，1.55-1.47(3H，m)，1.35-1.31(1H，m)，0.82(3H，t).實(shí)施例15[1S-[1α，2α，3β(E)，5β(1S*，2R*)]]-3-(3-氨基丙-1-烯基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，鹽酸鹽a)[3aR-[3aα，4α(E)，6α(1R*，2S*)，6aα]]-3-[四氫-2，2-二甲基-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-2-丙烯酸，乙基酯實(shí)施例12步驟a)產(chǎn)物(1.60g)的二甲亞砜(15ml)溶液用吡啶(0.25g)，隨后用三氟乙酸(0.18g)和N，N-二環(huán)己基碳二亞胺(1.99g)處理。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后加入乙酯基亞甲基三苯基正膦(1.82g)，再繼續(xù)攪拌18小時(shí)。混合物再用乙酸乙酯(300ml)稀釋，并在冰浴上冷卻，再加入草酸(1.59g)。30分鐘后將混合物過濾，所得溶液用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×100ml)，隨后用飽和鹽水水溶液(2×100ml)洗滌。將乙酸乙酯溶液濃縮，經(jīng)純化(SiO2，乙酸乙酯∶異己烷1∶4為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(1.52g)。MS(APCI)565(M+H+，100％)b)3-[[3aR-[3aα，4α(E)，6α(1R*，2S*)，6aα]]-四氫-2，2-二甲基-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-2-丙醇于-78℃步驟a)產(chǎn)物(1.45g)的四氫呋喃(40ml)溶液用DIBAL-H(1.5M甲苯溶液，7.0ml)處理?；旌衔镉?℃攪拌1小時(shí)，然后加入甲醇(1ml)，并將反應(yīng)混合物倒入稀的氫氧化鈉水溶液(100ml)中。該混合物用乙酸乙酯(100ml)萃取，萃取液用鹽水水溶液洗滌，然后濃縮。經(jīng)純化(SiO2，乙酸乙酯∶異己烷1∶1為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(1.20g)。MS(APCI)523(M+H+，100％)c)3-[[3aS-[3aα，4α(E)，6α(1S*，2R*)，6aα]]-四氫-6-(3-碘-丙-1-烯基)-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-(2-苯基環(huán)丙基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺按實(shí)施例8步驟a)的方法，用步驟b)產(chǎn)物制備。MS(APCI)633(M+H+，100％)d)3-[[3aS-[3aα，4α(1S*，2R*)，6α(E)，6aα]]-6-(3-氨基丙-1-烯基)-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺步驟c)產(chǎn)物(0.60g)的甲醇(5ml)/四氫呋喃(5ml)溶液用濃氨水(2ml)處理。反應(yīng)混合物于室溫放置7小時(shí)，然后濃縮，經(jīng)純化(SiO2，甲醇∶氯仿1∶4為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(0.21g)。MS(APCI)522(M+H+，100％)e)[1S-[1α，2α，3β(E)，5β(1S*，2R*)]]-3-(3-氨基丙-1-烯基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，鹽酸鹽按實(shí)施例14步驟e)的方法，用步驟d)產(chǎn)物制備。MS(APCI)482(M+H+，100％)NMR δH(d6-DMSO)9.37(1H，d)，8.04(3H，s)，7.31-7.15(5H，m)，5.98-5.93(1H，m)，5.63-5.58(1H，m)，4.31(1H，t)，3.89(1H，t)，3.43(2H，t)，3.21-3.18(1H，m)，2.94-2.83(2H，m)，2.72-2.69(1H，m)，2.44-2.39(1H，m)，2.18-2.10(1H，m)，1.98-1.85(1H，m)，1.54-1.46(3H，m)，1.36-1.32(1H，m)，0.81(3H，t).實(shí)施例16N-乙基-N-[[1R-[1α，2β，3β，4α(1R*，2S*)]]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊基甲基]-3-甲氧基-丙酰胺按實(shí)施例1步驟h)的方法，用實(shí)施例12產(chǎn)物和3-甲氧基-丙酸制備。MS(APCI)570(M+H+)，100％)NMR δH(d6-DMSO)9.34(1H，d)，7.31-7.15(5H，m)，5.16-4.73(3H，m)，4.50-4.40(1H，m)，3.85-3.78(1H，m)，3.65-3.60(1H，m)，3.55(2H，t)，3.40-3.35(2H，m)，3.20(3H，s)，2.95-2.85(2H，m)，2.60-2.55(2H，m)，2.32-2.28(2H，m)，2.16-2.14(1H，m)，1.80-1.70(1H，m)，1.55-1.50(2H，m)，1.38-1.35(1H，m)，1.18-1.10(2H，m)，1.07-1.00(1H，m)，0.84-0.80(3H，m).實(shí)施例17[1S-[1α，2 α，3β(E)，5β(1S*，2R*)]]-3-[3-(2-二甲氨基乙基)氨基]-丙-1-烯基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇二-三氟乙酸鹽，a)3-[[3aS-[3aα，4α(1S*，2R*)，6α(E)，6aα]]-6-[3-[(2-二甲氨基乙基)氨基]-丙-1-烯基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺將實(shí)施例15步驟c)產(chǎn)物(0.50g)的二氯甲烷(6ml)溶液用N，N-二甲基乙二胺(0.10g)處理，并于室溫放置2小時(shí)。再將溶液濃縮，殘余物與乙醚(20ml)一起研制得到小標(biāo)題化合物(0.45g)。MS(APCI)593(M+H+，100％)b)[1S-[1α，2α，3β(E)，5β(1S*，2R*)]]-3-[3-[(2-二甲氨基乙基)氨基]-丙-1-烯基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇二-三氟乙酸鹽按實(shí)施例14步驟e)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。
MS(APCI)553(M+H+，100％)NMR δH(d6-DMSO)9.37(1H，d)，8.21(3H，s)，7.32-7.16(5H，m)，6.21-6.18(1H，m)，5.80-5.75(1H，m)，5.01-4.99(1H，m)，4.32(1H，t)，4.03-3.96(3H，m)，3.46-3.43(2H，m)，3.36-3.32(2H，m)，3.22-3.20(1H，m)，3.04(6H，s)，2.95-2.78(3H，m)，2.13-2.10(1H，m)，2.02-1.95(1H，m)，1.54-1.45(3H，m)，1.35-1.32(1H，m)，0.80(3H，t).實(shí)施例18[1R-[1α，2β，3β，4α(1R*，2S*)]]-N-[2-[2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]環(huán)戊基甲氨基]乙基]-乙酰胺實(shí)施例12步驟c)產(chǎn)物(0.70g)的二甲亞砜(3ml)溶液用N-乙?；叶?0.38g)處理，然后于65℃加熱3小時(shí)?；旌衔镌儆靡宜嵋阴?100ml)稀釋，該溶液用飽和鹽水(2×100ml)洗滌。有機(jī)相放置1小時(shí)，將生成的白色沉淀分離得到標(biāo)題化合物(0.23g)。MS(APCI)541(M+H+)，100％)NMR δH(d6-DMSO)9.33(1H，d)，7.80(1H，s)，7.31-7.15(5H，m)，5.02-4.97(2H，m)，4.78(1H，s)，4.41(1H，q)，3.84(1H，t)，3.20-3.18(1H，m).3.13-3.09(2H，m)，2.95-2.83(2H，m)，2.71-2.69(1H，m)，2.60-2.53(2H，m)，2.34-2.32(1H，m)，2.14-2.09(2H，m)，1.53-1.48(3H，m)，1.33-1.31(1H，m)，0.82(3H，t).實(shí)施例19[1S-[1α，2α，3α，5β(1S*，2R*)]]-3-氨基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，鹽酸鹽a)(1R-順式)-雙(1，1-二甲基乙基)-4-羥基-2-環(huán)戊基亞氨基二碳酸酯向用乙醚洗滌過的氫化鈉(60％油分散物；0.31g)的THF(30ml)溶液中加入亞氨基二碳酸雙-(1，1-二甲基乙基)酯(1.84g)?；旌衔镉?0℃攪拌1小時(shí)。于室溫向混合物中再加入(1S-順式)-4-乙酰氧基-2-環(huán)戊烯-1-醇(0.5g)和四(三苯基膦)鈀(O)(0.185g)。反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，并經(jīng)純化(SiO2，乙酸乙酯∶己烷1∶9為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物，為無色固體(0.9g)。NMR δH(d6-DMSO)1.43(18H，s)，1.61(1H，ddd，J＝12.3，7.7，6.4Hz)，2.54(1H，dt，J＝12.6，7.4Hz)，4.51-4.57(1H，m)，4.86(1H，tq，J＝8.0，1.8Hz)，4.91(1H，d，J＝5.4Hz)，5.71-5.77(2H，m).
b)[1R-(1α，2β，3β，4α)]-2，3，4-三羥基環(huán)戊烯基亞氨基二碳酸雙(1，1-二甲基乙基)酯按實(shí)施例1步驟f)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備小標(biāo)題化合物。NMR δH(d6-DMSO)1.44(18H，s)，1.46-1.60(1H，m)，1.97-2.05(1H，m)，3.55-3.58(1H，m)，3.66-3.73(1H，m)，4.11-4.21(2H，m)，4.54(1H，d，J＝4.8Hz)，4.56(1H，d，J＝5.9Hz)，4.82(1H，d，J＝4.6Hz)c)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-氨基-2，2-二甲基-四氫-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-醇，鹽酸鹽步驟b)產(chǎn)物(17.37g)在6M HCl(100ml)和甲醇(500ml)中的溶液攪拌18小時(shí)。將混合物蒸發(fā)，然后與甲苯(4×200ml)共沸蒸餾得到無色粉末狀物(8.67g)。該固體混懸于丙酮(250ml)中，加入2，2-二甲氧基丙烷(25ml)和濃HCl(0.2ml)，反應(yīng)液加熱回流2小時(shí)。將混合物冷卻、蒸發(fā)并與甲苯(3×200ml)共沸蒸餾。殘余物溶于20％乙酸水溶液中，并攪拌2小時(shí)。將混合物蒸發(fā)并與甲苯(4×200ml)共沸蒸餾，得到小標(biāo)題化合物，為無色固體(10.1g)。MS(APCI)174(M+H+，100％)d)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[[6-氯-5-硝基-2-(丙硫基)-嘧啶-4-基]氨基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-醇步驟c)產(chǎn)物(10.0g)和N，N-二異丙基乙基胺(35ml)的THF(600ml)溶液攪拌1小時(shí)。將混合物過濾，在1小時(shí)內(nèi)將該溶液加到4，6-二氯-5-硝基-2-(丙硫基)-嘧啶(按WO 9703084所述方法制備)(25.57g)的THF(1000ml)溶液中，并再攪拌1小時(shí)。在真空下減少溶劑體積，并加入乙酸乙酯(1000ml)?；旌衔镉盟礈?，將有機(jī)層干燥(MgSO4)，蒸發(fā)，并經(jīng)純化(SiO2，異己烷-乙酸乙酯為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(14.22g)。MS(APCI)405(M+H+，100％)
e)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[(5-氨基-6-氯-2-丙硫基嘧啶-4-基)氨基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-醇向攪拌的步驟d)產(chǎn)物(2.61g)的乙酸(100ml)溶液中加入鐵粉(2.30g)。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，濃縮至1/2體積，用乙酸乙酯稀釋，并用水洗滌。將有機(jī)相干燥和濃縮得到小標(biāo)題化合物(2.28g)。MS(APCI)375(M+H+，100％)f)[3aR-(3aα，4α，6α，6aα)]-6-[7-氯-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-醇按實(shí)施例1步驟f)的方法，用步驟e)產(chǎn)物制備。MS(APCI)386(M+H+，100％)g)(1R-反式)-N-[(2，4-二甲氧基苯基)甲基]-2-苯基-環(huán)丙胺(1R-反式)-2-苯基環(huán)丙胺，[R-(R*，R*)]-2，3-二羥基丁二酸酯(1∶1)(按L.A.Mitscher等，J.Med.Chem.1986，29，2044所述方法制備)(1.92g)在1N NaOH水溶液(50ml)中的溶液攪拌10分鐘，并用二氯甲烷萃取。將萃取液干燥，蒸發(fā)，殘余物溶于甲醇(30ml)中。向該溶液中加入2，4-二甲氧基苯甲醛(1.12g)，并用乙酸調(diào)節(jié)至pH5。加入氰基硼氫化鈉(0.46g)?；旌衔飻嚢柽^夜，用2N NaOH堿化，并用乙酸乙酯萃取。將萃取液干燥，蒸發(fā)，并經(jīng)純化(SiO2，甲醇∶二氯甲烷∶0.880氨水2∶98∶0.1為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(1.10g)。NMR δH(CDCl3)7.23-6.97(6H，m)，6.49-6.41(2H，m)，3.73(3H，s)，3.69(3H，s)，3.66(2H，s)，2.21-2.16(1H，m)，1.82-1.76(1H，m)，1.01-0.87(2H，m).
h)[3aR-[3aα，4α，6α(1R*，2S*)，6aα]]-6-[7-[N-[(2，4-二甲氧基苯基)甲基]-(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-醇按實(shí)施例12步驟a)的方法，用步驟g)產(chǎn)物和步驟f)產(chǎn)物制備小標(biāo)題化合物。MS(APCI)633(M+H+，100％)i)三氟甲磺酸，[3aR-[3aα，4α，6α(1R*，2S*)，6aα]-[四氫-2，2-二甲基-6-[7-[N-(2，4-二甲氧基苯基)甲基-(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]酯向步驟h)產(chǎn)物(147mg)和吡啶(0.08ml)的二氯甲烷(2ml)溶液中加入三氟甲磺酸酐(0.08ml)，并攪拌18小時(shí)。加入水，混合物用二氯甲烷萃取。將有機(jī)層干燥(MgSO4)，蒸發(fā)，并經(jīng)純化(SiO2，石油醚∶乙醚3∶2為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物，為白色泡沫狀物(166mg)。MS(APCI)765(M+H+，100％)。
j)3-[[3aS-[3aα，4α(1S*，2R*)，6β，6aα]-6-氨基-四氫-2，2-二甲基-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-基]-N-[(2，4-二甲氧基苯基)甲基]-N-(2-苯基環(huán)丙基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺步驟i)產(chǎn)物(957mg)和疊氮化鈉(289mg)的DMSO(10ml)溶液攪拌18小時(shí)。加入水，混合物用乙醚萃取。將有機(jī)層蒸發(fā)，殘余物倒入THF(15ml)/水(1ml)中。加入三苯基膦(326mg)，溶液攪拌24小時(shí)。在真空下除去溶劑，殘余物經(jīng)純化(SiO2，二氯甲烷∶甲醇9∶1為洗脫劑)得到小標(biāo)題化合物(424mg)。MS(APCI)632(M+H+，100％)。
k)[1S-[1α，2α，3α，5β(1S*，2R*)]]-3-氨基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，鹽酸鹽步驟j)產(chǎn)物(252mg)的5M HCl(6ml)/甲醇(10ml)溶液于20℃攪拌3天，然后于50℃攪拌6小時(shí)。在真空下除去溶劑，殘余物經(jīng)純化(SiO2，二氯甲烷∶甲醇∶氨水40∶7∶1為洗脫劑)得到一固體，將該固體溶于二氯甲烷(2ml)/乙酸乙酯(2ml)中，加入1M HCl乙醚溶液。收集生成的沉淀并干燥，得到標(biāo)題化合物(59mg)。m.p.225-7℃.MS(APCI)442(M+H+，100％)NMR δH(d6-DMSO)9.39(1H，d)，8.18-8.13(3H，m)，7.33-7.14(5H，m)，5.26(6H，br)，5.16(1H，q)，4.57(1H，dd)，4.15-4.13(1H，m)，3.92-3.80(1H，m)，3.23-3.19(1H，m)，2.97-2.79(2H，m)，2.38 2H，t)，2.16-2.10(1H，m)，1.57-1.29(3H，m)，0.82(3H，t).實(shí)施例201-[[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]環(huán)戊基羰基]-哌嗪a)4-[[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-四氫-2，2-二甲基-6-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-4H-環(huán)戊烯并-1，3-二氧雜環(huán)戊烯-4-羰基]-哌嗪-1-羧酸，1，1′-二甲基乙基酯按實(shí)施例1步驟h)的方法，用實(shí)施例5步驟a)產(chǎn)物和1-哌嗪羧酸，1，1-二甲基乙基酯制備。MS(APCI)679(M+H+，100％)。
b)1-[[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]環(huán)戊基羰基]-哌嗪按實(shí)施例1步驟i)的方法，用步驟a)產(chǎn)物制備。MS(APCI)539(M+H+，100％)NMR δH(d6-DMSO)9.36(1H，d)，7.56-7.31(5H，m)，5.25-5.10(2H，m)，5.04-5.01(1H，m)，4.50-4.38(1H，m)，4.14(1H，br s)，3.36-3.30(7H，m)，2.97-2.92(1H，m)，2.86-2.81(1H，m)，2.37-2.32(3H，m)，2.15-2.10(2H，m)，1.53-1.45(3H，m)，1.38-1.31(1H，m)，0.86(3H，t)藥理學(xué)資料按如下步驟制備用于測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)于洗過的人血小板中P2T-受體激動(dòng)劑/拮抗劑活性的制品。
將人靜脈血(100ml)等分在3支各含有3.2％檸檬酸三鈉(4ml)作抗凝血?jiǎng)┑脑嚬軆?nèi)。將各試管以240G離心15分鐘，獲得富含血小板的血漿(PRP)，向該血漿中加入300ng/ml前列環(huán)素，以便在洗滌過程中使血小板穩(wěn)定。通過以125G離心10分鐘，隨后再以640G離心15分鐘，獲得了無紅細(xì)胞的PRP。棄去上清液，將血小板小球再懸浮于經(jīng)改進(jìn)的無鈣Tyrode液(10ml)(CFT)中，其組成成分為NaCl137mM，NaHCO311.9mM，NaH2PO40.4mM，KCl2.7mM，MgCl21.1mM，葡萄糖5.6mM，以95％ O2/5％CO2通氣，并保持在37℃。再加入300ng/ml PGI2之后，將合并的混懸液以640G再次離心15分鐘。棄去上清液，將血小板開始再懸浮于10ml CFT中，并進(jìn)一步加入CFT，校準(zhǔn)至最后的血小板計(jì)數(shù)為2×105/ml。將該最后的混懸液吸入排除了空氣的60ml注射器中，在3℃保存，為了能夠從PGI2的抑制作用下恢復(fù)其正常功能，應(yīng)在最后一次重新混懸剛2小時(shí)，就將血小板用于聚集研究。
在所有的研究中，將3ml等分量血小板混懸液加入含有CaCl2溶液的試管中(50mM的溶液60μl，最后濃度為1mM)。再加入人血纖維蛋白原(Sigma，F(xiàn)4883)和8-磺基苯基苯堿(8-SPT，用于阻斷化合物的任何P1-激動(dòng)劑活性)，分別得到0.2mg/ml(在生理鹽水中的10mg/ml可凝結(jié)的蛋白質(zhì)溶液60μl)和300nM(在6％葡萄糖中的15nM溶液10μl)的最終濃度。按150μl的體積適當(dāng)?shù)貙⒀“寤蚓彌_液加入96孔培養(yǎng)板的各個(gè)孔中。對(duì)來自各個(gè)獻(xiàn)血者的血小板一式三份，進(jìn)行所有的測(cè)定。
按如下方法進(jìn)行激動(dòng)劑/拮抗劑效力測(cè)定。
應(yīng)用培養(yǎng)板測(cè)定儀在660nm處測(cè)定的光密度改變，測(cè)定96孔培養(yǎng)板中的聚集反應(yīng)。Bio-Tec Ceres 900C或者Dynatech MRX均可用作這種培養(yǎng)板測(cè)定儀。
先在660nm處測(cè)定培養(yǎng)板中每個(gè)孔的光密度，以便確定基線讀數(shù)。再按10μl的體積對(duì)每個(gè)孔加入生理鹽水或適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)化合物溶液，形成0，0.01，0.1，1，10或100mM的最后濃度。然后在設(shè)定10的有軌搖床上振搖培養(yǎng)板5分鐘，并在660nm處測(cè)定光密度。在這點(diǎn)的聚集作用指示試驗(yàn)化合物的激動(dòng)劑活性。然后對(duì)每個(gè)孔加入生理鹽水或ADP(30mM；450mM的10μl)，將該培養(yǎng)板再振搖5分鐘，然后在660nm處再次測(cè)定光密度。
以對(duì)于對(duì)照ADP反應(yīng)的％抑制作用來表示拮抗效力，得到IC50。舉例化合物的pIC50值均大于5.0。
權(quán)利要求
1.式(1)化合物或其藥學(xué)上適用的鹽或其溶劑合物，
其中R1為C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基或苯基，每一個(gè)基團(tuán)可以由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11或其本身可以由1個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代的C1-6烷基的取代基任意地取代；R2為由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C3-8環(huán)烷基、任選由1個(gè)或多個(gè)烷基和/或鹵原子取代的芳基或C1-6烷基的取代基任意取代的C1-8烷基；或者R2為由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、OR8、NR9R10、SR11、C1-6烷基或苯基的取代基任意取代的C3-8環(huán)烷基，其中所述取代基中的后2個(gè)基團(tuán)可以由1個(gè)或多個(gè)選自鹵素、NO2、C(O)R8、OR8、SR11、NR12R13、由1個(gè)或多個(gè)鹵原子任選取代的苯基和C1-6烷基的取代基任意地取代；R3或R4中之一為羥基，另一個(gè)為氫、羥基或NR9R10；R5為(CH2)nNR14R15，這里n為零～6，并且R14和R15獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基；或者R5為CONR16R17，這里R16為氫或C1-6烷基，R17為C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基，它們中每個(gè)可由NR18R19取代，并且它們可由苯基任選取代，或者R17為由苯基取代的C1-6烷基或C3-6環(huán)烷基，而苯基又可由NR18R19取代，這里R18和R19獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基；或者R17為含有1個(gè)或多個(gè)氮原子的并且在氮原子上由氫、C1-6烷基或苯基任選取代的五～八元飽和雜環(huán)；或者R16和R17與它們所連結(jié)的氮原子一起形成由如上定義的NR18R19取代的五～八元環(huán)；或者R16與R19一起形成含有2個(gè)氮原子的六～八元環(huán)，其中的R17和R18的定義同上；或者R5為(CH2)pNR20CO(CH2)qOR21或(CH2)pNR22(CH2)qNR23COR24，這里p和q獨(dú)立地為1～4，R20、R21、R22、R23和R24獨(dú)立地為C1-4烷基或苯基；或者R5為CH＝CHCH2NR25R26，這里R25為氫、C1-6烷基或苯基，R26為氫或(CH2)yNR27R28，這里y為2-4，R27和R28獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或苯基；R8、R9、R10和R11獨(dú)立地為氫或C1-6烷基；R12和R13獨(dú)立地為氫、C1-6烷基或酰基。
2.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物具有以下立體化學(xué)結(jié)構(gòu)
3.權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R1為C1-8烷基。
4.權(quán)利要求1～3中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中R2為C1-6烷基或由苯基取代的C3-8環(huán)烷基。
5.權(quán)利要求1～4中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中R3或R4為羥基。
6.權(quán)利要求1～5中任何一項(xiàng)所述的化合物，其中R5為(CH2)nNH2，其中n為零、1或2；CONR16R17，這里R16為氫，R17為由NR18R19任選取代的C1-5烷基，這里R18和R19均為氫，或者一個(gè)為C1-6烷基，尤其是甲基，另一個(gè)為苯基，或者R5為CONR16R17，這里R16為氫，R17為CH2苯基或環(huán)己基，它們各自被氨基取代，或者R5為CONR16R17，這里R16和R17形成哌嗪環(huán)，或者R5為CH＝CHCH2NR25R26，這里R25和R26均為氫，或R25為氫，R26為(CH2)2NH2，或者R5為CH2R20CO(CH2)2OR21，這里R20和R21為C1-4烷基，或者R5為CH2NH(CH2)2NHCOR24，這里R24為C1-4烷基。
7.權(quán)利要求1所述化合物或其藥學(xué)上適用的鹽或其溶劑合物，它們是[1S-(1α，2β，3β，4α)]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-N-[[3-(N-甲基-N-苯基)氨基]丙基]-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽，[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[5-氨基戊基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基-環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽，[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[3-氨基丙基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽，[1S-(1α，2β，3β，4α)]-N-[(3-氨基苯基)甲基]-4-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-2，3-二羥基環(huán)戊烷甲酰胺，三氟乙酸鹽，[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-N-[3-氨基丙基]-2，3-二羥基-4-[7-[2-(苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷甲酰胺三氟乙酸鹽，[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-N-[4-反式氨基環(huán)己基]-2，3-二羥基-4-[7-[2-(苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷甲酰胺，二(三氟乙酸鹽)，[1S-(1α，2α，3β，5β)]-3-氨基-5-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-(1α，2α，3β，5β)]-3-(氨甲基)-5-[7-(丁氨基)-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-氨基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(乙氨基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1R*，2S*)]]-3-[(甲氨基)甲基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-[(乙氨基)甲基]-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(氨甲基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β，5β(1S*，2R*)]]-3-(2-氨乙基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，[1S-[1α，2α，3β(E)，5β(1S*，2R*)]]-3-(3-氨基丙-1-烯基)-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，N-乙基-N-[[1R-[1α，2β，3β，4α(1R*，2S*)]]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊基甲基]-3-甲氧基-丙酰胺，[1S-[1α，2α，3β(E)，5β(1S*，2R*)]]-3-[3-(2-二甲氨基乙基)氨基]-丙-1-烯基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，二-三氟乙酸鹽，[1R-[1α，2β，3β，4α(1R*，2S*)]]-N-[2-[2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊基甲基氨基]乙基]-乙酰胺，[1S-[1α，2α，3α，5β(1S*，2R*)]]-3-氨基-5-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]-環(huán)戊烷-1，2-二醇，1-[[1S-[1α，2β，3β，4α(1S*，2R*)]]-2，3-二羥基-4-[7-[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]-5-(丙硫基)-3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基]環(huán)戊基羰基]哌嗪。
8.藥物組合物，該組合物含有權(quán)利要求1～7中任何一項(xiàng)所述的化合物以及藥學(xué)上適用的稀釋劑、輔助劑或載體。
9.用于治療的權(quán)利要求1～7中任何一項(xiàng)所述的化合物。
10.用于治療或預(yù)防心肌梗塞、血栓形成的中風(fēng)、短暫的局部缺血發(fā)作、外周血管疾病和心絞痛的權(quán)利要求1～7中任何一項(xiàng)所述的化合物。
11.用于治療或預(yù)防心絞痛的權(quán)利要求1～7中任何一項(xiàng)所述的化合物。
12.制備式(I)化合物的方法，該方法包括(a)制備其中R5為CONHR16R17的式(I)化合物，使式(II)化合物或其胺保護(hù)的衍生物與式(III)化合物反應(yīng)，
其中R1、R2、R3和R4同式(I)中的定義，HNR16R17(III)其中R16和R17同式(I)中的定義，或(b)制備其中R5為氨基的式(I)化合物，將以上定義的式(II)化合物進(jìn)行Curtis重排，或在(a)或(b)之后以任何次序任選進(jìn)行●將1個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌倌軋F(tuán)●脫去任何保護(hù)基●形成藥學(xué)上適用的鹽或溶劑合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了新的三唑并[4,5－d]嘧啶類化合物(Ⅰ)、它們作為藥物的應(yīng)用、含有它們的組合物以及制備它們的方法。
文檔編號(hào)A61K31/519GK1271359SQ9880913
公開日2000年10月25日 申請(qǐng)日期1998年7月15日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月22日
發(fā)明者D·哈德恩, B·斯普林托佩 申請(qǐng)人:英國(guó)阿斯特拉藥品有限公司