專利名稱：超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法及其產(chǎn)品。
鹽酸阿霉素是目前臨床常用的抗腫瘤藥物之一，自70年代進(jìn)入臨床使用以來(lái)，經(jīng)過(guò)20多年臨床應(yīng)用，證明其抗腫瘤療效高，抗腫瘤范圍廣。對(duì)急性白血瘤、多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌、惡性淋巴病、消化道癌(胃癌、食道癌等)、卵巢癌、睪丸腫瘤、子宮頸癌、膀胱癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、骨及軟組織肉瘤等二十多種腫瘤有良好的療效。它已成為世界衛(wèi)生組織規(guī)定的十四個(gè)基本藥品之一。但鹽酸阿霉素對(duì)人體毒副作用較大，表現(xiàn)為心臟毒性與骨髓抑制，還有部分消化道反應(yīng)。臨床常規(guī)劑量?jī)H能保持9個(gè)月，另一方面許多癌癥逐漸發(fā)展為對(duì)鹽酸阿霉素耐藥，使其臨床應(yīng)用受到限制，為克服上述缺點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外對(duì)鹽酸阿霉素采取了兩種改進(jìn)途徑。其中有一種途徑是，將鹽酸阿霉素包入脂質(zhì)體中，使其緩慢釋放，降低毒副作用，提高治療效果。即利用脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞的親和作用，改變鹽酸阿霉素的給藥方式及其在各臟器的分布，降低其心臟毒性及骨髓抑制作用。該方法不改變鹽酸阿霉素的結(jié)構(gòu)即可提高療效，降低毒性且成本也較為低廉。而脂質(zhì)體生產(chǎn)技術(shù)已日漸成熟，注射用大豆磷脂已獲得衛(wèi)生部批準(zhǔn)文號(hào)，用其制成的脂肪乳劑已有臨床應(yīng)用多年，鹽酸阿霉素的生產(chǎn)也已實(shí)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)化，這就使得研制生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑成為可能。八十年代開(kāi)始，美、英、日等國(guó)即已開(kāi)始了鹽酸阿霉素脂質(zhì)體的研究工作，至90年代已研制出多種制備方法，有薄膜分散法、注入法、乳化法、PH梯度法、逆相蒸發(fā)法及冷凍干燥法等十多種。但生產(chǎn)規(guī)模無(wú)法擴(kuò)大，滅菌及除熱原困難(脂質(zhì)體不能加熱)，生產(chǎn)出的脂質(zhì)體穩(wěn)定性差，上述方法不能克服上述所有不足，因此上述方法僅適用于科研而無(wú)法規(guī)模生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的是提供一種超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法及其制品。使用該方法制得的鹽酸阿霉素脂質(zhì)體包裹率高，脂質(zhì)體粒徑均勻，穩(wěn)定性好，也方便于滅菌及除熱原，該方法可以規(guī)模生產(chǎn)。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案這種超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法包括下述步驟(1)配制緩沖溶液，調(diào)節(jié)其PH值為3.5-5.5，(2)制備大單層空白脂質(zhì)體先分別配制注射用大豆磷脂氯仿液和膽固醇氯仿液，并將上述兩種液體混合，其中注射用大豆磷脂與膽固醇的混合重量比為300-600∶50-150，然后將上述混合液體真空抽干成膜，再將該膜浸泡步驟(1)中得到的緩沖溶液中，之后，用水浴式超聲機(jī)使該膜成為乳狀液，然后將該乳狀液經(jīng)高溫蒸汽滅菌后再冷卻至室溫，最后再用水浴式超聲機(jī)使之還原為乳狀液，(3)制備滅菌小單層脂質(zhì)體將上述乳狀液放入超聲瓶中進(jìn)行超聲，超聲后將其置于冰浴中得到小單層空白脂質(zhì)體，再調(diào)節(jié)其PH值為7-8，再用層析柱除去部分大粒徑空白脂質(zhì)體和其它雜質(zhì)，即得到純化的小單層空白脂質(zhì)體，(4)制備鹽酸阿霉素脂質(zhì)體按鹽酸阿霉素原料與前述步驟中所用的注射用大豆磷脂、膽固醇的重量份數(shù)比為50-60∶300-600∶50-150進(jìn)行備料，然后將其放入35-40℃水浴中進(jìn)行溫?zé)?，溫?zé)岷螅尤氩襟E(3)中得到的純化的小單層空白脂質(zhì)體，進(jìn)行振蕩后，再在水浴式超聲機(jī)上超聲，使小單層空白脂質(zhì)體打開(kāi)，并使鹽酸阿霉素進(jìn)入小單層空白脂質(zhì)體中，冷卻至室溫后，經(jīng)柱層析除去游離的鹽酸阿霉素、熱原及其它雜質(zhì)，即得到鹽酸阿霉素脂質(zhì)體成品。
本方法是利用鹽酸阿霉素在酸性條件易溶而在堿性條件難溶的性質(zhì)，首先制備出酸性條件下的空白脂質(zhì)體，再將空白脂質(zhì)體外部PH值調(diào)至堿性，加入鹽酸阿霉素后，利用超聲波打開(kāi)脂質(zhì)體膜，使鹽酸阿霉素進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)。這樣制得的鹽酸阿霉素脂質(zhì)體包裹率高(大于92％)，且由于預(yù)先制備空白脂質(zhì)體，可使脂質(zhì)體粒徑均勻，穩(wěn)定性好，也方便于滅菌及除熱原，因此已具備了規(guī)模生產(chǎn)的條件。
用本發(fā)明的方法所制成的鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑，該鹽酸阿霉素脂質(zhì)體是由脂質(zhì)體包裹鹽酸阿霉素所組成，其中，鹽酸阿霉素與脂質(zhì)體中的注射用大豆磷脂、膽固醇的重量份數(shù)比為50-60∶300-600∶50-150。在該鹽酸阿霉素脂質(zhì)體的脂質(zhì)體中僅有注射用大豆磷脂與膽固醇兩種。其中注射用大豆磷脂是組成脂質(zhì)體的主要成份，它是構(gòu)成脂質(zhì)體雙分子層的基礎(chǔ)物質(zhì)，注射用大豆磷脂的組成為卵磷脂與少量腦磷脂的混合物，它在血漿中起乳化劑的作用，易被機(jī)體代謝分解，因此成為無(wú)毒無(wú)害的藥物載體。膽固醇在處方中僅占少數(shù)，它與注射用大豆磷脂是共同構(gòu)成脂質(zhì)體的基礎(chǔ)物質(zhì)，它具有調(diào)節(jié)膜的流動(dòng)性的作用。對(duì)脂質(zhì)體的相變及穩(wěn)定性有重要影響，若含量過(guò)高，則膜的成形性差無(wú)法制得均勻穩(wěn)定的空白脂質(zhì)體，若含量過(guò)低則膜很易破裂使得鹽酸阿霉素泄漏，造成鹽酸阿霉素脂質(zhì)體不穩(wěn)定。
在本發(fā)明的方法中，該方法還包括下述步驟將得到的鹽酸阿霉素脂質(zhì)體成品過(guò)0.22um微孔膜除菌封裝。
在本發(fā)明的方法中，在制備大單層空白脂質(zhì)體的步驟中，分別按450mg注射用大豆磷脂溶于15-20ml氯仿、80mg膽固醇溶于15-20ml氯仿的配比，配制注射用大豆磷脂氯仿液、膽固醇氯仿液。
在本發(fā)明的方法中，在配制緩沖溶液步驟中，是采用NaH2PO4溶液和Na2HPO4溶液混合均勻后，再加入固體NaCl溶解并混合均勻，再用HCl調(diào)節(jié)PH值。其中，所用的NaH2PO4的濃度為0.7％-0.9％(重量百分比)，Na2HPO4溶液的濃度為0.8％-1％(重量百分比)，HCl溶液的濃度為0.4-0.6mol.l-1，并按850-950ml的NaH2PO4溶液，90-110ml的Na2HPO4溶液，4.6-4.9克的NaCl的配比進(jìn)行混合。在制備大單層空白脂質(zhì)體的步驟中，所用的緩沖液的體積為所用的氯仿的1/2。用緩沖溶液浸泡該膜的時(shí)間為5-8分鐘。
在本發(fā)明的方法中，在制備大單層空白脂質(zhì)體的步驟中，其中用水溶式超聲機(jī)使該膜成為乳狀液的超聲時(shí)間為5-7分鐘。蒸汽滅菌的蒸汽溫度為120℃-125℃，蒸汽滅菌的時(shí)間為20-25分鐘。在水浴式超聲機(jī)中的超聲時(shí)間為20-25分鐘。
在本發(fā)明的方法中，在制備滅菌小單層脂質(zhì)體的步驟中，乳狀液在超聲瓶中的超聲時(shí)間為5-10分鐘。并采用0.4-0.6mol.l-1NaOH調(diào)節(jié)PH值。
在本發(fā)明的方法中，在制備鹽酸阿霉素脂質(zhì)體的步驟中，其中鹽酸阿霉素脂質(zhì)體在35-40℃水浴中的溫?zé)釙r(shí)間為3-5分鐘，加入純化的小單層空白脂質(zhì)體后的振蕩時(shí)間為2-3分鐘。用水浴式超聲機(jī)使空白脂質(zhì)打開(kāi)的超聲時(shí)間為3-4分鐘。
下面用實(shí)施例結(jié)合附圖作進(jìn)一步說(shuō)明。


圖1為超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的工藝流程圖。
實(shí)施例。如圖1所示。
(1)PH4.5的PBS緩沖溶液的配制配制0.8％NaH2PO4溶液和0.9437％Na2HPO4溶液，然后按0.8％NaH2PO4900ml與0.9437％ Na2HPO4100ml混和均勻，加入NaCl4.79克溶解并混合均勻。再用0.5mol.l-1HCl溶液調(diào)節(jié)其PH值為4.5。
(2)大單層空白脂質(zhì)體的制備與滅菌取注射用大豆磷脂450mg，膽固醇80mg分別溶于15-20ml氯仿中，置于圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上真空抽干成膜。加入PH4.5的PBS緩沖液15ml浸泡5分鐘后在水浴式超聲機(jī)上超聲5-7分鐘使膜完全洗脫并成為乳狀液。將乳狀液裝入滅菌瓶中，120℃蒸汽滅菌20分鐘后冷卻至室溫，在水浴式超聲機(jī)中超聲20分鐘使之還原為乳狀液。
(3)滅菌小單層脂質(zhì)體的制備與純化將制好的乳狀液放入超聲瓶中超聲8-9分鐘，其中探頭超聲功率100W，探頭直徑8mm。超聲停，置于冰浴中，得到小單層空白脂質(zhì)體，用0.5mol.l-1NaOH調(diào)節(jié)其PH值為7.2，再經(jīng)sepedex G-25層析柱以除去部分大粒徑空白脂質(zhì)體和其它雜質(zhì)，即得到純化的小單層空白脂質(zhì)體。
(4)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體的制備與純化準(zhǔn)確稱取鹽酸阿霉素原料藥56mg于三角燒瓶中，將其放入35-40℃水浴中溫?zé)?分鐘后，加入純化的小單層空白脂質(zhì)體，振蕩2-3分鐘后，在水浴式超聲機(jī)上超聲3-4分鐘，使空白脂質(zhì)體打開(kāi)，鹽酸阿霉素進(jìn)入空白脂質(zhì)體中。冷卻至室溫后，經(jīng)sephadex G-25柱層析除去游離的鹽酸阿霉素、熱原及其它雜質(zhì)，即得到鹽酸阿霉素脂質(zhì)體成品，過(guò)0.22um微孔膜除菌封裝。
采用本發(fā)明的工藝所制成的成品經(jīng)檢測(cè)鹽酸阿霉素的包裹率為92-93％，回收率90％。磷脂及膽固醇的回收率為84-86％。
權(quán)利要求
1.一種超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于該方法包括下述步驟(1)配制緩沖溶液，調(diào)節(jié)其PH值為3.5-5.5，(2)制備大單層空白脂質(zhì)體先分別配制注射用大豆磷脂氯仿液和膽固醇氯仿液，并將上述兩種液體混合，其中注射用大豆磷脂與膽固醇的混合重量比為300-600∶50-150，然后將上述混合液體真空抽干成膜，再將該膜浸泡步驟(1)中得到的緩沖溶液中，之后，用水浴式超聲機(jī)使該膜成為乳狀液，然后將該乳狀液經(jīng)高溫蒸汽滅菌后再冷卻至室溫，最后再用水浴式超聲機(jī)使之還原為乳狀液，(3)制備滅菌小單層脂質(zhì)體將上述乳狀液放入超聲瓶中進(jìn)行超聲，超聲后將其置于冰浴中得到小單層空白脂質(zhì)體，再調(diào)節(jié)其PH值為7-8，再用層析柱除去部分大粒徑空白脂質(zhì)體和其它雜質(zhì)，即得到純化的小單層空白脂質(zhì)體，(4)制備鹽酸阿霉素脂質(zhì)體按鹽酸阿霉素原料與前述步驟中所用的注射用大豆磷脂、膽固醇的重量份數(shù)比為50-60∶300-600∶50-150進(jìn)行備料，然后將其放入35-40℃水浴中進(jìn)行溫?zé)?，溫?zé)岷?，加入步驟(3)中得到的純化的小單層空白脂質(zhì)體，進(jìn)行振蕩后，再在水浴式超聲機(jī)上超聲，使小單層空白脂質(zhì)體打開(kāi)，并使鹽酸阿霉素進(jìn)入小單層空白脂質(zhì)體中，冷卻至室溫后，經(jīng)柱層析除去游離的鹽酸阿霉素、熱原及其它雜質(zhì)，即得到鹽酸阿霉素脂質(zhì)體成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于該方法還包括下述步驟將得到的鹽酸阿霉素脂質(zhì)體成品過(guò)0.22um微孔膜除菌封裝。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于在制備大單層空白脂質(zhì)體的步驟中，分別按450mg注射用大豆磷脂溶于15-20ml氯仿、80mg膽固醇溶于15-20ml氯仿的配比，配制注射用大豆磷脂氯仿液、膽固醇氯仿液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于在制備大單層空白脂質(zhì)體的步驟中，所用的緩沖液的體積為所用的氯仿的1/2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于在制備滅菌小單層脂質(zhì)體的步驟中，乳狀液在超聲瓶中的超聲時(shí)間為5-10分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于在制備大單層空白脂質(zhì)體的步驟中，其中用水溶式超聲機(jī)使該膜成為乳狀液的超聲時(shí)間為5-7分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的超聲濃差酸堿法生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法，其特征在于在制備鹽酸阿霉素脂質(zhì)體的步驟中，其中用水浴式超聲機(jī)使空白脂質(zhì)打開(kāi)的超聲時(shí)間為3-4分鐘。
8.用權(quán)利要求1的方法所制成的鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑，該鹽酸阿霉素脂質(zhì)體是由脂質(zhì)體包裹鹽酸阿霉素，其特征在于鹽酸阿霉素與脂質(zhì)體中的注射用大豆磷脂、膽固醇的重量份數(shù)比為50-60∶300-600∶50-150。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種生產(chǎn)鹽酸阿霉素脂質(zhì)體注射劑的方法及其產(chǎn)品。該方法包括下述步驟:(1)配制緩沖溶液,pH值為3.5—5.5,(2)配制注射用大豆磷脂氯仿液和膽固醇氯仿液,經(jīng)真空抽干成膜、浸泡緩沖溶液、超聲、滅菌、冷卻、超聲為乳狀液,(3)將乳狀液經(jīng)超聲、水浴得到小單層空白脂質(zhì)體,調(diào)pH值為7—8,并純化,(4)將小單層空白脂質(zhì)體經(jīng)振蕩、超聲、使鹽酸阿霉素進(jìn)入小單層空白脂質(zhì)體中,得到成品,該成品包裹率高、脂質(zhì)體粒徑均勻,穩(wěn)定性好。
文檔編號(hào)A61K9/127GK1270032SQ9910572
公開(kāi)日2000年10月18日 申請(qǐng)日期1999年4月13日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月13日
發(fā)明者吳道澄 申請(qǐng)人:北京中衛(wèi)華美醫(yī)藥技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司