專利名稱：氯喹和阿霉素共載脂質體及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及脂質體類藥劑技術領域，特別涉及一種氯喹和阿霉素共載脂質體及其 制備方法。
背景技術：
近50年來，癌癥的防治已經有重大的進展，但是由于癌癥早期診斷困難，以及缺 少治療癌癥轉移的有效技術方案，治愈癌癥仍然是一個難題，因此，尋找癌癥治療的新方法 顯得非常重要和迫切。阿霉素是癌癥化療常用的藥物(Multidrug resistance in cancer :role of ATP-dependent transporter)，上世紀60年代初由米蘭Faroitalia研究實驗室首次從一 種鏈霉菌中分離而得，是繼柔紅霉素后被發(fā)現(xiàn)的第二個蒽環(huán)霉素類抗生素。阿霉素和柔紅 霉素的結構基本相同，差異只在一個羥基上，但柔紅霉素只對急性白血病有效，而阿霉素具 有廣譜抗惡性腫瘤的治療效果。自1974年阿霉素在美國獲準臨床使用以來，在過去的30 年中己報道2000種以上的阿霉素類似物經歷抗腫瘤作用的試驗性篩選。但是，阿霉素等藥 物的大量使用容易使細胞產生耐藥性，這是當下臨床上成功地治療癌癥的一大障礙，為解 決這些問題，目前主要嘗試采用以下方法來逆轉多藥耐藥性(MDR) :1)MDR逆轉劑；2)化療 藥物的化學修飾；幻聯(lián)用化療敏感藥物；4)運用納米粒載體及后兩者相結合。一直以來氯喹(CQ)是作為一種安全、有效且價廉的預防和治療瘧原蟲感染的藥 物使用，也常常用于基因轉染實驗中，以提高轉染效率。已有國外文獻報道，CQ可作為多 藥耐藥蛋白I(MRPl)的抑制劑，與阿霉素聯(lián)用，可降低細胞的多藥耐藥性，從而達到較好的 抑癌效果(Reversal of MRP-Mediated Doxorubicin Resistance with Quinoline-Based Drugs)。多藥耐藥蛋白I(MRPl)屬于ATP結合盒(ABC)的轉運家庭，它能夠廣泛性 地將胞內的抗癌藥物泵出細胞外，從而大大削弱藥物的抗癌作用，使細胞產生耐藥 (Pharmacogenomics of ABC transporters and its role in cancer chemotherapy)0 但 早期研究已表明注射使用氯喹溶液毒性很大，甚至危及生命，還有阿霉素也具有較大的心 臟毒性及對正常細胞的毒性作用，降低劑量又很難達到預期效果，氯喹與阿霉素聯(lián)用也存 在上述問題，迫切需要解決。在過去的20年里，控制藥物釋放和腫瘤靶向的藥物運載系統(tǒng)作為一種有吸引力 的治療細胞毒素的治療窗口出現(xiàn)了。在運用的載體中，有納米粒、白蛋白微球以及脂質體。 脂質體作為一種化療藥物載體最近在牛身上被重新探討，以此開始了脂質體在控制藥物分 散方面的使用，用來改進抗癌效率和減少對正常細胞的毒性。藥物用脂質體包裹后，能靶向 作用于病變部位，從而提高藥物的治療指數(shù)，同時還可以減少藥物的治療劑量，降低全身不 良反應，提高用藥安全性。目前，已批準臨床使用或正在進行臨床評價的阿霉素制劑主要是 脂質體制劑，如用于再發(fā)性乳腺癌的聯(lián)合治療的產品名為Mycet的阿霉素脂質體，雖然一 定程度上降低了阿霉素對心臟毒性及對正常細胞的毒性，但是仍存在著容易使細胞產生耐 藥性以致抗癌效果不佳的問題。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供了一種載體選擇面廣、藥物包封率高的氯喹和阿霉素共載脂質體，利 用氯喹和阿霉素的協(xié)同作用，克服了由MRPl介導的多藥耐藥性并降低了阿霉素和氯喹以 游離形式使用時不可忽視的毒性。本發(fā)明還提供了一種氯喹和阿霉素共載脂質體的制備方法，采用pH梯度法將氯 喹和阿霉素兩者同時裝載入脂質體制得氯喹和阿霉素共載脂質體，制備工藝簡單，控制的 參數(shù)較少，反應條件較低，有利于降低生產成本，易于工業(yè)化生產。一種氯喹和阿霉素共載脂質體，由藥物、磷脂、膽固醇類化合物、內部緩沖系統(tǒng)和 PH值調節(jié)劑制成；其中，藥物、磷脂和膽固醇類化合物的重量比為1 2 100 1 35;所述的藥物為氯喹類藥物和阿霉素類藥物。優(yōu)選的，所述的藥物、磷脂和膽固醇類化合物的重量比為1 10 40 2. 5 10 ；進一步優(yōu)選為1 25 5。所述的氯喹類藥物和阿霉素類藥物為主要的藥效成分，氯喹類藥物和阿霉素類藥 物的比例可以根據(jù)實際需要任意調整，氯喹類藥物和阿霉素類藥物的質量比可以是1 100 1 100，優(yōu)選為1 2 1 5。所述的氯喹類藥物包括氯喹、氯喹與酸所成的鹽中一種或多種；所述的氯喹與酸 所成的鹽可選用磷酸氯喹、鹽酸氯喹、硫酸氯喹中一種或多種。所述的阿霉素類藥物包括阿霉素、阿霉素與酸所成的鹽中一種或多種；所述的阿 霉素與酸所成的鹽可選用鹽酸阿霉素。所述的磷脂可選用天然磷脂、合成磷脂中的一種或兩種；所述的天然磷脂為大豆 磷脂、卵磷脂中的一種或兩種；所述的合成磷脂為中性磷脂、負電性磷脂或聚乙二醇修飾 磷脂中的至少一種，合成磷脂具體為二豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿 (DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二棕櫚酰磷脂酰甘油酯(DPPG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、 磷脂酰絲氨酸(PS)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)中的至少一種。所述的膽固醇類化合物為普通膽固醇、聚乙二醇(PEG)修飾膽固醇中的一種或者 兩種，所述的聚乙二醇(PEG)修飾膽固醇如聚乙二醇單甲醚膽固醇琥珀酸酯(CHS-PEG)。所述的內部緩沖系統(tǒng)可選用檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)、磷酸鹽緩沖系統(tǒng)或碳酸鹽緩沖系 統(tǒng)；所述的檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)優(yōu)選為0. 05mol/L 0. 5mol/L的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。 所述的內部緩沖系統(tǒng)主要是用于乳化磷脂和膽固醇得到脂質體，其用量并沒有嚴格的限 制，一般每1重量份的藥物中添加5mL 15mL。所述的pH值調節(jié)劑為堿液，可選用氫氧化鈉水溶液、磷酸氫二鈉水溶液、碳酸鈉 水溶液、碳酸氫鈉水溶液等中的一種或多種，堿液的濃度一般為0. 05mol/L 0. 5mol/L,以 方便調節(jié)PH值。所述的pH值調節(jié)劑用于調節(jié)氯喹和阿霉素共載脂質體的pH值在5. 5 8. 0，pH值太小則磷脂雙份子層內外形成不了濃度差，藥物進不了脂質體內部，pH過大則會 產生脂質體破裂等問題，優(yōu)選調節(jié)PH值為7。所述的氯喹和阿霉素共載脂質體的制備方法，包括以下步驟1)將磷脂和膽固醇類化合物溶于有機溶劑中，再加入內部緩沖系統(tǒng)，混合均勻，除 去有機溶劑，得到空白脂質體懸液；
或者，將磷脂和膽固醇類化合物溶于有機溶劑中，混合均勻，除去有機溶劑，再加 入內部緩沖系統(tǒng)混合均勻，得到空白脂質體懸液；2)將氯喹和阿霉素溶解在步驟1)制備的空白脂質體懸液中，用PH值調節(jié)劑調節(jié) pH至5. 5 8. 0，在30°C 50°C水浴孵育IOmin 60min，分離出游離藥物，得到氯喹和阿 霉素共載脂質體。步驟1)中，所述的有機溶劑選用乙醚或者氯仿(三氯甲烷)。步驟1)中，除去有機溶劑后或者除去有機溶劑再加入內部緩沖系統(tǒng)后，可通過高 壓勻乳、超聲或微射流進行粉碎，得到粒徑低于200nm的空白脂質體懸液。步驟2~)中，分離出游離藥物的方法可采用kphadex G_50凝膠柱層析法或透析法。所述的氯喹和阿霉素共載脂質體可作為抗癌藥物治療癌癥等疾病，對腫瘤細胞具 有較高的殺傷力。本發(fā)明采用動態(tài)光散射粒徑儀(Malvern Zetasizer NanO-S90，英國)檢測粒徑。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(1)磷脂選擇面廣，可使用天然卵磷脂或大豆磷脂，也可使用合成的中性磷脂或負 電性磷脂；(2)通過本發(fā)明方法制得的氯喹和阿霉素共載脂質體藥物包封率可達到90%以 上，粒徑可低于200nm，具有包封率高、穩(wěn)定性好、成本低等優(yōu)點；(3)本發(fā)明方法制得的氯 喹和阿霉素共載脂質體，能夠有效抑制由MRPl介導的多藥耐藥性，對因MRPl高表達而產生 耐藥性的細胞具有耐藥逆轉作用，逆轉倍數(shù)達10倍左右，是阿霉素脂質體的3倍左右；(4) 在氯喹的毒性范圍內(<20 μ g/ml)，氯喹和阿霉素共載脂質體隨著氯喹的量的增多，IC5tl 降低；( 氯喹和阿霉素共載脂質體使氯喹和阿霉素協(xié)同作用，從而提高了對腫瘤細胞的 殺傷力，并且氯喹和阿霉素的協(xié)同作用相對可以減少藥物的使用量，減小了毒副作用；(6) 利用阿霉素和氯喹的PKa值相近，都在4. 0左右，采用獨特的兩步pH梯度法將兩者同時裝 載入脂質體，制備氯喹和阿霉素共載脂質體，制備方法操作簡便，可控性和重現(xiàn)性好。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但不作為對本發(fā)明權利范圍的限 制?？瞻字|體的制備實施例1稱取500mg大豆磷脂(磷脂酰膽堿純度> 76% )和IOOmg膽固醇溶解于20mL乙 醚中，再加入IOmLpH = 4. 0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，混合均勻進行乳化，然后減壓蒸去有 機溶劑乙醚，用細胞粉碎儀超聲5min，得到IOmL空白脂質體懸液，備用，作為空白脂質體。 測得該空白脂質體懸液的平均粒徑(數(shù)均)為U9nm。實施例2稱取420mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、60mg磷脂酰乙醇胺(PE)和IOOmg膽固 醇，溶解于IOmL乙醚中，混合均勻，將該溶液置于磨口圓底燒瓶中，于37°C恒溫水浴上用旋 轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)有機溶劑乙醚，使磷脂等成膜材料在燒瓶底部形成均勻脂膜；向脂膜中 加入5mL 0. lmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH = 3. 6)，在旋轉蒸發(fā)儀上旋轉，直至脂膜水化變成乳白色脂質體混懸液，超聲粉碎IOmin減小粒徑，得到空白脂質體懸液10mL，備 用，作為空白脂質體。測得該空白脂質體懸液的平均粒徑為133nm。實施例3稱取500mg大豆磷脂(磷脂酰膽堿純度> 76% )、40mg膽固醇和聚乙二醇單甲醚 (分子量為2000)膽固醇琥珀酸酯(CHS-PEG ^1J 80mg，溶解于20mL乙醚中，混合均勻，然后 加入IOmL 0. lmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH = 3. 6)，混合均勻成乳液，然后減壓蒸 去有機溶劑乙醚，用細胞粉碎儀超聲5min，得到空白脂質體懸液10mL，備用，作為空白脂質 體。測得該空白脂質體懸液的平均粒徑為137nm。實施例4稱取450mgDSPC、IOOmgDPPG和IOOmg膽固醇溶解于50mL乙醚中，混合均勻，然后 加入20mL 0. lmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH = 3. 6)，二者混合成乳液，將該乳液置 于磨口圓底燒瓶中，于37°C恒溫水浴上用旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)有機溶劑乙醚，直至變成乳 白色脂質體混懸液，經微射流減小粒徑，得到空白脂質體懸液40mL，備用，作為空白脂質體。 測得該空白脂質體懸液的平均粒徑為131nm。實施例5稱取500mg 二豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、50mg磷脂酰絲氨酸(PS)、20mg膽固醇 溶解于20mL乙醚中，混合均勻，然后加入IOmL 0. lmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH =3. 6)，稱取二者混合進行乳化，然后減壓蒸去有機溶劑乙醚，用細胞粉碎儀超聲5min， 得到空白脂質體懸液10mL，備用，作為空白脂質體。測得該空白脂質體懸液的平均粒徑為 134nm。實施例6稱取420mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、60mg磷脂酰乙醇胺(PE)、IOOmg膽固 醇，溶解于IOmL乙醚中，混合均勻，將該溶液置于磨口圓底燒瓶中，于40°C恒溫水浴上用旋 轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)有機溶劑，使磷脂等成膜材料在燒瓶底部形成均勻脂膜；向脂膜中加入 5mL 0. lmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH = 3. 6)，在旋轉蒸發(fā)儀上旋轉蒸發(fā)除去乙 醚，直至脂膜水化變成乳白色脂質體混懸液，超聲粉碎5min減小粒徑，得到空白脂質體懸 液10mL，備用，作為空白脂質體。測得該空白脂質體懸液的平均粒徑為200nm。實施例7稱取500mg大豆磷脂、40mg膽固醇、聚乙二醇單甲醚(分子量為2000)膽固醇琥 珀酸酯(CHS-PEG 2Qj80mg，溶解于20mL乙醚中，混合均勻，然后加入IOml 0. lmol/L檸檬 酸-檸檬酸鈉緩沖溶液(pH = 3. 6)，二者混合成乳液，然后減壓蒸去有機溶劑乙醚，用細胞 粉碎儀超聲5min，得到空白脂質體懸液10mL，備用，作為空白脂質體。測得該空白脂質體懸 液的平均粒徑為95nm。氯喹和阿霉素共載脂質體實施例8將氯喹與阿霉素質量比為1 20的氯喹和阿霉素的混合物10. 5mg溶解到實施例 1的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L磷酸氫二鈉水溶液調pH至7. 0，之后在40°C水浴 中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封在內 的游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體25mL，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為94%和99%，載藥量分別為0. 08%和1.6%。實施例9將氯喹與阿霉素質量比為1 10氯喹和阿霉素的混合物12mg溶解到實施例1 的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C水浴中 孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封在內的 游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體27mL，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為95%和 99%，載藥量分別為0. 3%和1.6%。實施例10將氯喹與阿霉素質量比為2 1氯喹和阿霉素的混合物15mg溶解到實施例1的 IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C水浴中孵育 20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封在內的游離 藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體24mL，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為93%、99%， 載藥量分別為1.5%和0.8%。實施例11將氯喹與阿霉素質量比為1 1氯喹和阿霉素的混合物20mg溶解到實施例1的 IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C水浴中孵育 20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封在內的游離 藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體^mL,測得氯喹和阿霉素的包封率分別為96%、97%， 載藥量分別為1.5%和1.6%。實施例12將氯喹與鹽酸阿霉素質量比為1 2氯喹和鹽酸阿霉素的混合物30mg溶解到實 施例1的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C 水浴中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封 在內的游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體27mL，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為 91%、94%，載藥量分別為1.4%和3.0%。實施例13將磷酸氯喹與阿霉素質量比為1 5磷酸氯喹和阿霉素的混合物18mg溶解到實 施例1的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4調pH至7. 0，之后在40°C水浴中 孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封在內的 游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體24mL，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為94%、 98%，載藥量分別為0. 5%和1.6%。實施例14將氯喹與鹽酸阿霉素質量比為1 2的氯喹和鹽酸阿霉素的混合物30mg溶解到 實施例2的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C 水浴中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封 在內的游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體27ml，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為 91%、95%，載藥量分別為1.4%和3.0%。實施例15將鹽酸氯喹與阿霉素質量比為1 1的鹽酸氯喹和阿霉素的混合物20mg溶解到實施例3的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C 水浴中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封 在內的游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體^mL,測得氯喹和阿霉素的包封率分別為 95%、96%，載藥量分別為1.5%和1.6%。實施例16將鹽酸氯喹與阿霉素質量比為1 1鹽酸氯喹和阿霉素的混合物20mg溶解到實 施例5的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C 水浴中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封 在內的游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體^mL,測得氯喹和阿霉素的包封率分別為 94%、96%，載藥量分別為1.5%和1.6%。實施例17將氯喹與鹽酸阿霉素質量比為1 2氯喹和鹽酸阿霉素的混合物30mg溶解到實 施例4的40mL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C 水浴中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封 在內的游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體27mL，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為 92%、95%，載藥量分別為1.4%和3.0%。實施例18將氯喹與鹽酸阿霉素質量比為1 2氯喹和鹽酸阿霉素的混合物30mg溶解到實 施例6的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C 水浴中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封 在內的游離藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體27mL，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為 92%、95%，載藥量分別為1.4%和3.0%。實施例19將氯喹與阿霉素質量比為1 2氯喹和阿霉素的混合物30mg溶解到實施例7的 IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L Na2HPO4水溶液調pH至7. 0，之后在40°C水浴中孵育 20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱層析法分離脂質體和未被包封在內的游離 藥物，得到氯喹和阿霉素共載脂質體27mL，測得氯喹和阿霉素的包封率分別為93%、96%， 載藥量分別為1.4%和3.0%。對比例1將阿霉素IOmg溶解到實施例1的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L磷酸氫二 鈉水溶液調PH至7. 0，之后在40°C水浴中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠 柱層析法分離脂質體和未被包封在內的游離藥物，得到阿霉素脂質體(DOXL) 23mL,阿霉素 的包封率為96 %，載藥量為4. 6 %。對比例2將氯喹IOmg溶解到實施例1的IOmL空白脂質體懸液中，用0. 2mol/L磷酸氫二鈉 水溶液調PH至7. 0，之后在40°C水浴中孵育20min，冷卻至室溫后，用kphadexG-50凝膠柱 層析法分離脂質體和未被包封在內的游離藥物，得到氯喹脂質體(CQL) 24mL,氯喹的包封率 為96%，載藥量為1.6%。細胞毒性對比實驗
將作為對照組1的游離鹽酸阿霉素水溶液(FDOX)和作為對照組2游離磷酸氯喹 水溶液(FCQ)、對比例制備的脂質體、實施例制備的各種氯喹和阿霉素不同比例的脂質體分 別用于細胞實驗，采用MTT(噻唑藍)比色法進行實驗，步驟如下對數(shù)生長期的的癌細胞用胰蛋白酶消化、PBS緩沖液(即含0. 05%吐溫-20的 PH7.4的磷酸鹽緩沖液)洗滌、離心后將其制備成濃度為lX105/ml的細胞懸液，將該懸 液按100 μ 1/孔均勻加入96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔細胞數(shù)為5000 10000個。將細胞板 置于37°C孵箱中，孵育Mh，顯微鏡下觀察可見細胞融合貼壁生長。分別將載藥膠束及阿 霉素溶于生理鹽水中，所有溶液以其中阿霉素的含量為基準，稀釋成不同濃度，折算成阿霉 素濃度分別為 0. 5 μ g/ml，1 μ g/ml，2 μ g/ml，5 μ g/ml，10 μ g/ml，100 μ g/ml，500 μ g/ml。 向上述96孔細胞培養(yǎng)板中加入不同濃度的聚合物溶液25 μ 1/孔，培養(yǎng)24h后，每孔加入 31. 5 μ 1濃度為5mg/ml噻唑藍(MTT)溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h，吸出上清液，加入200 μ 1 二甲基 亞砜(DMSO)，然后放置于(X)2培養(yǎng)箱15分鐘。用酶標儀檢測各孔570nm處的OD值，記錄結 果。上述實驗，每組重復3次，每個濃度設4個復孔。IC50即50%抑制濃度，是抑制半數(shù)癌細胞生長時的藥物濃度，IC5tl值越低，說明細 胞毒性作用越大。試驗中IC5tl值由IC5tl. exe軟件計算得到。并且實驗結果顯示，同一氯喹 和阿霉素比例，不同種類的磷脂對于IC5tl幾乎沒有影響。對照組1、對照組2，對比例1、對比例2及實施例8、9、10、11和13制備的脂質體對 藥物敏感細胞株MCF-7 (人乳腺癌細胞)和耐藥細胞株MCF-7/ADR的IC5tl ( μ g/ml)值，如表 1所示；對照組1、對照組2，對比例1、對比例2及實施例8、9、10、11和13制備的脂質體對 藥物敏感細胞株HL60 (急性白血病細胞)和耐藥細胞株HL60/ADR IC50 (μ g/ml)值，如表2 所示。表 權利要求
1.一種氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，由藥物、磷脂、膽固醇類化合物、內部 緩沖系統(tǒng)和PH值調節(jié)劑制成；其中，藥物、磷脂和膽固醇類化合物的重量比為1 2 100 1 35 ；所述的PH值調節(jié)劑調節(jié)脂質體pH至5. 5 8. 0 ；所述的藥物為氯喹類藥物和阿霉素類藥物；所述的氯喹類藥物為氯喹、氯喹與酸所成的鹽中一種或多種；所述的阿霉素類藥物為阿霉素、阿霉素與酸所成的鹽中一種或多種；所述的膽固醇類化合物為膽固醇、聚乙二醇修飾膽固醇中的一種或者兩種。
2.根據(jù)權利要求1所述的氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，所述的藥物、磷脂和 膽固醇類化合物的重量比為1 10 40 2. 5 10。
3.根據(jù)權利要求2所述的氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，所述的藥物、磷脂和 膽固醇類化合物的重量比為1 25 5。
4.根據(jù)權利要求1所述的氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，所述的氯喹與酸所 成的鹽為磷酸氯喹、鹽酸氯喹、硫酸氯喹中一種或多種；所述的阿霉素與酸所成的鹽為鹽酸阿霉素。
5.根據(jù)權利要求1所述的氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，所述的磷脂為天然 磷脂、合成磷脂中的一種或兩種；所述的天然磷脂為大豆磷脂、卵磷脂中的一種或兩種；所 述的合成磷脂為中性磷脂、負電性磷脂或聚乙二醇修飾磷脂中的一種或多種。
6.根據(jù)權利要求5所述的氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，所述的合成磷脂為 二豆蔻酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油 酯、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇中的一種或多種。
7.根據(jù)權利要求1所述的氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，所述的內部緩沖系 統(tǒng)為檸檬酸鹽緩沖系統(tǒng)、磷酸鹽緩沖系統(tǒng)或碳酸鹽緩沖系統(tǒng)；所述的PH值調節(jié)劑為堿液。
8.根據(jù)權利要求7所述的氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，所述的檸檬酸鹽緩 沖系統(tǒng)為0. 05mol/L 0. 5mol/L的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液；所述的堿液為氫氧化鈉水溶液、磷酸氫二鈉水溶液、碳酸鈉水溶液、碳酸氫鈉水溶液中 的一種或多種。
9.根據(jù)權利要求1所述的氯喹和阿霉素共載脂質體，其特征在于，所述的氯喹類藥物 和阿霉素類藥物的質量比為1 100 1 100。
10.根據(jù)權利要求1 9任一項所述的氯喹和阿霉素共載脂質體的制備方法，包括以下 步驟1)將磷脂和膽固醇類化合物溶于有機溶劑中，再加入內部緩沖系統(tǒng)，混合均勻，除去有 機溶劑，得到空白脂質體懸液；或者，將磷脂和膽固醇類化合物溶于有機溶劑中，混合均勻，除去有機溶劑，再加入內 部緩沖系統(tǒng)混合均勻，得到空白脂質體懸液；2)將氯喹和阿霉素溶解在步驟1)制備的空白脂質體懸液中，用PH值調節(jié)劑調節(jié)pH至 5. 5 8. 0，在30°C 50°C水浴孵育IOmin 60min，分離出游離藥物，得到氯喹和阿霉素共 載脂質體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種氯喹和阿霉素共載脂質體，由藥物、磷脂、膽固醇類化合物、內部緩沖系統(tǒng)和pH值調節(jié)劑制成；其中，藥物、磷脂和膽固醇類化合物的重量比為1∶2～100∶1～35；所述的藥物為氯喹類藥物和阿霉素類藥物。利用氯喹和阿霉素的協(xié)同作用，使氯喹和阿霉素共載脂質體具有抑制多藥耐藥性和降低用藥毒性的特點。本發(fā)明還公開了一種氯喹和阿霉素共載脂質體的制備方法，制備工藝簡單，控制的參數(shù)較少，反應條件較低，有利于降低生產成本，易于工業(yè)化生產。
文檔編號A61K31/4706GK102138927SQ201110025330
公開日2011年8月3日 申請日期2011年1月27日 優(yōu)先權日2011年1月27日
發(fā)明者姚銘飛, 邱利焱 申請人:浙江大學