專利名稱：貫葉金絲桃素衍生物,其用途及含有它們的組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的貫葉金絲桃素衍生物，其治療抑郁和焦慮的用途及含有它們的組合物。
貫葉連翹的花頂部含有許多結構類型不同的物質(zhì)，它們可以直接或間接地作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。
更具體地，所述的化合物包括金絲桃素、貫葉金絲桃素以及二聚黃酮，它們在動物和人體身上具有抗抑郁和抗焦慮活性。
這些化合物的作用機制是不同的抗MAO作用，對5-羥色胺釋放的作用以及苯二氮雜樣作用，貫葉金絲桃素是貫葉連翹花頂部的主要親脂性成分，近來許多研究將其作為目標，使得其有可能以抗抑郁劑的身份扮演重要角色；由申請者進行的研究表明該分子具有5-羥色胺模擬活性。
在通常的提取和保存條件下貫葉金絲桃素不十分穩(wěn)定；根據(jù)WO97/13489(Schwabe)的報道，幾周后，St.-John’s-wort水-醇提取物中貫葉金絲桃素的含量已經(jīng)接近零。
另根據(jù)WO 97/13489，為了獲得含有恒定濃度貫葉金絲桃素的穩(wěn)定提取物，提取、純化、保存均應在有抗氧劑(例如維生素C及其酯類，硫酸化氨基酸等)存在下進行。
由于貫葉金絲桃素的高度不穩(wěn)定性，使其組合物的制備非常困難。
現(xiàn)在，在特定的藥理學實驗中發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定并更具抗抑郁活性的貫葉金絲桃素衍生物。本發(fā)明衍生物具有下列通式Ⅰ
其中R為-飽和或不飽和的直鏈或支鏈C1-C22?；溥x擇性具有一或多個取代基，取代基可以相同也可不同且選自鹵原子，硝基，氨基，-C1-C6-烷基氨基，二-C1-C6-烷基氨基，-C1-C6-?；被?環(huán)脂肪族基或芳香?；渲械姆枷慊鶊F任意地帶有一或多個取代基，它們可以相同也可不同且選自鹵原子，羥基，甲氧基，氨基；-縮水甘油基，其中的一或多個羥基基團任意地被烷基化或?；?br> “芳香?；眱?yōu)選的是指具有一或多個氨基或烷氧基的苯甲酰基或肉桂基。
“縮水甘油基”指通過醚鍵與吡喃糖基或呋喃糖基環(huán)的1-位上羥基連接的一個糖殘基，同時糖的其它羥基被任意地甲基化或乙?；?。
優(yōu)選的R基團是乙?；?，一氯代乙?；□；?，γ-氨基丁酰基，對-氨基芐基，三甲氧基苯甲?；?，三甲氧基肉桂基，β-葡糖基以及β-半乳糖基。
本發(fā)明貫葉金絲桃素衍生物可用常規(guī)的羥基?；蛱腔磻獊碇苽?。
例如，可使貫葉金絲桃素純品或富含金絲桃素的提取物在合適的溶劑中例如吡啶與RCOOH酸(R的定義同上)的酰氯或酸酐進行反應。
另一方面，可以采用所需糖(ROH)的適合保護的反應活性衍生物進行糖基化反應，例如α-D-吡喃葡糖四乙酸溴。
根據(jù)本發(fā)明一個非常便利的方面，可以在超臨界條件下，用二氧化碳對貫葉連翹花頂部進行提取，隨后使之在溶劑和生成的提取物中的衍生貫葉金絲桃素之間進行分配，從而制備得到式Ⅰ化合物。
在超臨界條件下，壓力為180-260巴范圍內(nèi)，優(yōu)選的壓力為240巴，溫度為35-50℃，優(yōu)選的是40℃下，用二氧化碳對分離或混合(主要是天然混合物)狀態(tài)的St.-John’s-wort的葉子和花頂部進行提取。獲得了含有約50％貫葉金絲桃素的親脂性提取物。該提取物含有大量的呫噸酮、蠟、脂肪酸以及甘油三酯。根據(jù)本發(fā)明進一步的方面，將生成的提取物溶解于甲醇中或溶解于部分水性的乙腈中，然后用正己烷或脂肪烴提取，貫葉金絲桃素百分比會增加。烴相含有要除去的不需要物質(zhì)；用約等體積的水和脂肪烴稀釋親水相。通過親脂相濃縮得到的St.-John’s-wort提取物可以用來制備上述衍生物。
本發(fā)明衍生物在體外對受體不顯示活性，而其在體內(nèi)特別活躍，顯示出強的與劑量有關的抗抑郁活性。
在小鼠和大鼠的體內(nèi)實驗中，本發(fā)明化合物比貫葉金絲桃素和金絲桃素的乙醇或甲醇提取物顯示出更高的活性。
為了在體內(nèi)實驗中證實抗抑郁效果，根據(jù)文獻中已知的模型，選擇了逃避缺陷進展實驗以及喜好醇的Sardinia大鼠乙醇消耗抑制實驗。在逃跑缺陷進展實驗中，本發(fā)明化合物顯示比已知提取物更高的活性和可與已知藥物(例如丙咪嗪)活性相比的活性。在這項研究中，使大鼠禁食，并受到溫和的、短的、不可避免的電擊50分鐘(預實驗)。24小時后，在不可能逃避的條件下，在動物尾部進行同樣的刺激，測試它們的逃避能力。在30次刺激中大鼠出現(xiàn)了26次逃避(自然對照)，而在進行過預實驗的動物中，僅出現(xiàn)了1-3次逃避(ED對照)。這種由于預實驗誘導的低反應性在預先用丙咪嗪或氟苯氧丙胺等抗抑郁藥物處理過1-3周的大鼠中沒有出現(xiàn)。在暴露于不可避免的刺激之前1小時給予大鼠的本發(fā)明化合物使得其對逃避實驗的反應活性增加，當預處理持續(xù)1-2周時，活性即有所提高。
例如用化合物Ⅰ(其中R為乙?；?處理大鼠，得到了下表中報告的結果表-在具有兩周預備性逃避實驗的大鼠中金絲桃素乙酸酯的抗抑郁效果。
物質(zhì)劑量mg/kg 逃避次數(shù)貫葉金絲桃素乙酸酯 6.2512.6±2.8貫葉金絲桃素乙酸酯 12.517.3±1.9貫葉金絲桃素乙酸酯 25.021.2±1.3金絲桃屬醇提取物 100015.6±2.4
金絲桃屬己烷提取物 600 16.9±1.2Ed對照 2.6±0.7自然對照 23.6±1.2統(tǒng)計分析Kruskal-Wallis非參數(shù)ANOVA KW=13.462 p=0.0012金絲桃屬醇提取物和己烷提取物對自然對照 p＜0.01金絲桃素乙酸酯25mg對自然對照是 n.s.自然對照對于ANDp＜0.01根據(jù)文獻中已知的步驟，在Sardinia大鼠醇消耗降低實驗(其為抑郁和焦慮的指標)中，給藥兩天后，與對照相比，本發(fā)明化合物可以引起60-75％的醇消耗降低且更傾向飲水。
式Ⅰ化合物可配制成軟明膠膠囊、硬明膠膠囊、片劑、栓劑；優(yōu)選的是將本發(fā)明化合物配制成軟明膠膠囊或控釋組合物。在常規(guī)組合物中，化合物的劑量為5-50mg/劑量，在控釋組合物中，劑量上升至200mg，在這種情況下，優(yōu)選的每日劑量為200mg。
實施例1-富含貫葉金絲桃素提取物的制備根據(jù)下列所述方法，在一個配備有兩個分離器的25L超臨界氣體提取裝置中對10Kg生物量的貫葉連翹進行提取。
收集到10Kg貫葉連翹花頂部后，在不超過60℃的溫度下對其進行機械干燥，然后擠壓成立方體使細胞破裂，在下列實驗條件下，用超臨界條件下的CO2進行提取-溫度提取器內(nèi)為45℃，第一個分離器中為30℃；第二個分離器中為20℃；-壓力提取器內(nèi)為240巴，第一個分離器中為100巴，第二個分離器中為50巴；CO2的流速為10L/分鐘，共計45分鐘。提取物在第二個分離器中濃縮，事實上大部分存在于植物基質(zhì)中的水份在第一個分離器被濃縮。將存在于第二個分離器中的提取物溶解于3.2L甲醇中，此溶液再用3×1.5L正己烷進行提取。
己烷提取相用98％的甲醇進行反相洗滌，以貫葉金絲桃素作為指示，其應留在甲醇相中。移去己烷相，用0.6L水對合并得到的甲醇溶液進行稀釋，用2×0.6L正己烷進行再次提取。
用0.3％的活性炭對合并的己烷相進行脫色，干燥(Na2SO4)并在不超過40℃下減壓濃縮至油狀物。最后得到0.22kg蠟狀提取物，其中約含有70％的貫葉金絲桃素。實施例2-貫葉金絲桃素乙酸酯的合成向實施例1中得到的植物提取物(12g)的吡啶溶液中加入Ac2O(9.8ml)，并在室溫下攪拌。用TLC來檢測反應情況(己烷-EtOAc955；貫葉金絲桃素的Rf值0.24；乙酸酯的Rf值0.49)。24小時后，用水稀釋反應混合物，并用己烷-乙醚混合物(3∶1)進行提取。有機相用稀HCl、飽和NaHCO3和鹽水洗滌。干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，殘余物用硅膠柱層析純化(大約30g)，先用石油醚洗脫除去脂肪，然后用己烷-EtOAc(95∶5)洗脫，直至開始洗脫出標題化合物，得到3.34g(0.28％)貫葉金絲桃素乙酸酯，其為無色膏狀物。C37H54O5,MW 578CI-MS579(M+H)+IR(liquid film):1779,1732,1660,1634,1447,1377,1339,1146 cm-11H NMR(200 MHz,CDCl3):5.03(br s,2H),5.00(br s,2H),3.05(dd,J=15,7Hz,1H),2.87(dd,J=15,7Hz,IH),2.22(s,OAc),1.66-1.53(br s,8 x 3H),1.08(d,J=6.5 Hz,3H),0.98(s,3H),0.85(d,J=6.5 Hz,3H).實施例3-貫葉金絲桃素3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯的制備向實施例1中植物提取物(1.0g)的吡啶溶液中加入3,4,5-三甲氧苯甲酰氯(323mg)并在室溫下攪拌24小時。由于在不同的溶劑中起始原料和產(chǎn)品的Rf值非常接近，因此無法用TLC來檢測反應情況。用水稀釋反應混合物，并用乙醚-己烷混合物(3∶1)進行提取。有機相用稀HCl及飽和NaHCO3(用鹽水洗滌會使之乳化)洗滌。干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，殘余物用硅膠柱層析純化(大約5g)先用石油醚洗脫除去脂肪，然后用己烷-EtOAc(95∶5)洗脫，得到貫葉金絲桃素三甲氧基苯甲酸酯(317mg)，其為無色油狀物。C45H62O8,MW 730CI-MS731(M+H)+IR(liquid film)1732,1660,1634,1589,1465,1331,1153,1130.914cm-11H NMR(200 MHz,CDCl3):7.27(s,2H),5.04(br S,2H),5.02(br s,2H),3.86(s,OMe),3.82(s,2 x OMe),3.10(dd,J=15,7 Hz,1H),2.92(dd,J=15,7 Hz,1H),1.66-1.53(br s, 8 x 3H),1.13(d,J=6,5 Hz,3H),1.04(s,3H),0.99(d,J=6.5 Hz,3H).實施例4-含有實施例2產(chǎn)品的包衣片劑貫葉金絲桃素乙酸酯 100mg大豆多糖 18.25mg交聯(lián)的羧甲基纖維素鈉 13.50mg二氧化硅 6.50mg聚乙烯吡咯烷酮 5.00mg硬脂酸鎂 0.50mg包衣劑羥丙甲基纖維素 3.75mg滑石 2.75mg二氧化鈦 1.25mg三乙酸甘油酯 0.75mg多乙氧基醚80 0.25mg紅鐵氧化物 1.00mg
權利要求
1．式Ⅰ化合物 其中R為-飽和或不飽和的直鏈或支鏈C1-C22?；?，其任意具有一或多個取代基，取代基可以相同也可不同且選自鹵原子，硝基，氨基，C1-C6-烷基氨基，二-C1-C6-烷基氨基，-C1-C6-?；被?；-環(huán)脂或芳香?；?，其中的芳香基團任意地帶有一或多個取代基，它們可以相同也可不同且選自鹵原子，羥基，甲氧基，氨基；-縮水甘油基，其中的一或多個羥基任意地被烷基化或酰基化。
2．權利要求1中所述的化合物，R選自乙?；?，一氯代乙酰基，丁酰基，γ-氨基丁?；?，對-氨基芐基，三甲氧基苯甲?；籽趸夤鸹?，β-葡糖基以及β-半乳糖基。
3．含有權利要求1或2中化合物的貫葉連翹提取物。
4．制備權利要求3中提取物的方法，其包括a)用超臨界二氧化碳對貫葉連翹花頂部進行提??；b)將步驟a)中的親脂性提取物溶解于甲醇或乙腈中，并用脂肪烴進行提??；c)用水稀釋親水相并用脂肪烴進行反提?。籨)濃縮親脂相；e)用RCOOH酸或ROH糖的反應活性衍生物、其中R的定義同權利要求1，處理步驟b)中得到的濃縮物。
5．含有合適載體及作為活性成分的權利要求1-2中化合物或權利要求3-4中提取物的藥物組合物。
6．作為抗抑郁藥物的式Ⅰ化合物。
全文摘要
式(Ⅰ)貫葉金絲桃素衍生物(其中R為?；蛱擒栈鶊F)具有優(yōu)越的藥理學性質(zhì)和良好的穩(wěn)定性。
文檔編號A61K31/05GK1304397SQ99807121
公開日2001年7月18日 申請日期1999年6月4日 優(yōu)先權日1998年6月10日
發(fā)明者E·博巴得利, P·瑪拉佐尼 申請人:因迪納有限公司