實(shí)質(zhì)性富集和/或感興趣化合物得到部分或?qū)嵸|(zhì)性純化的樣品內(nèi)的化 合物。
[0075] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"多肽"指任何長(zhǎng)度的氨基酸鏈，不管是否修飾（例如磷酸 化或糖基化）。
[0076] 如本文中使用的，"變異"多肽與相應(yīng)野生型多肽的氨基酸序列相比含有至少一處 氨基酸序列改變。
[0077] 如本文中使用的，"氨基酸序列改變"可以是例如一個(gè)或多個(gè)氨基酸的替代、缺失 或插入。
[0078] 如本文中使用的，"載體"為復(fù)制子，諸如質(zhì)粒、噬菌體或粘粒，其中可以插入另一 DNA區(qū)段，從而致使插入的區(qū)段復(fù)制。本文中描述的載體可以是表達(dá)載體。
[0079] 如本文中使用的，"表達(dá)載體"為包括一種或多種表達(dá)調(diào)控序列的載體。
[0080] 如本文中使用的，"表達(dá)調(diào)控序列"為控制及調(diào)節(jié)另一 DNA序列的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯 的DNA序列。
[0081] 如本文中使用的，"可操作連接的"意味著摻入遺傳構(gòu)建物，使得表達(dá)控制序列有 效調(diào)控感興趣編碼序列的表達(dá)。
[0082] 如本文中使用的，多肽的"片段"指多肽的任何子集，其是比全長(zhǎng)蛋白質(zhì)要短的多 肽。通常，片段的長(zhǎng)度會(huì)是五個(gè)或更多個(gè)氨基酸。
[0083] 如本文中使用的，"效價(jià)"指每個(gè)分子可得的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)目。
[0084] 如本文中使用的，"保守性"氨基酸替代為如下的替代，其中替代的氨基酸具有相 似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)特性。
[0085] 如本文中使用的，"非保守性"氨基酸替代為如下的替代，其中替代的氨基酸的電 荷、疏水性或體積有顯著改變。
[0086] 如本文中使用的，"分離的核酸"指如下的核酸，其與哺乳動(dòng)物基因組中存在的其 它核酸分子（包括正常情況下在哺乳動(dòng)物基因組中位于該核酸一側(cè)或兩側(cè)側(cè)翼的核酸）分 開(kāi)。
[0087] 如本文中使用的，關(guān)于核酸，術(shù)語(yǔ)"分離的"包括任何非天然存在的核酸序列，因?yàn)?此類(lèi)非天然存在序列在自然界中找不到，而且在天然存在基因組中沒(méi)有緊鄰的序列。
[0088] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"宿主細(xì)胞"指如下的原核和真核細(xì)胞，其中可引入重組表 達(dá)載體。
[0089] 如本文中使用的，"轉(zhuǎn)化的"和"轉(zhuǎn)染的"涵蓋通過(guò)本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)將核酸 (例如載體）引入細(xì)胞。
[0090] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"抗體"意圖包括完整分子以及包括抗原結(jié)合位點(diǎn)的其片 段。這些包括Fab和F(ab'） 2片段，它們?nèi)鄙偻暾贵w的Fc片段。
[0091] 術(shù)語(yǔ)"個(gè)體"、"宿主"、"受試者"和"患者"在本文中可互換使用，而且指哺乳動(dòng)物， 包括但不限于人、嚙齒類(lèi)動(dòng)物諸如小鼠和大鼠及其它實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物。
[0092] 如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)"有效量"或"治療有效量"意指足以治療、抑制或減輕所治 療疾病狀態(tài)的一種或多種癥狀或以其它方式提供想要的藥理學(xué)和/或生理學(xué)效果的劑量。 精確的劑量會(huì)隨多種因素而變化，諸如依賴(lài)受試者的變量（例如年齡、免疫系統(tǒng)健康等）、 疾病和所施用的治療。
[0093] II. PD-I 拮抗劑
[0094] 用于干擾ro-i和ro-Li之間相互作用的一種優(yōu)選ro-i拮抗劑化合物是ro-L2 (也 稱(chēng)作B7-DC)、PD-L2的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、PD-L2的融合蛋白及其變體，它們結(jié)合及阻斷I3D-I且 不觸發(fā)經(jīng)由ro-1的抑制性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，及阻止ro-Li結(jié)合ro-i。別的ro-i拮抗劑包括結(jié)合 ro-i且不觸發(fā)經(jīng)由ro-i的抑制性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的ro-Li片段，結(jié)合ro-i配體及阻止結(jié)合T細(xì) 胞上內(nèi)源ro-i受體的ro-i或其可溶性片段，及能結(jié)合ro-Li及阻止PD-Li結(jié)合ro-i的 B7. 1或其可溶性片段。在某些實(shí)施方案中，PD-I拮抗劑提高受試者中的T細(xì)胞細(xì)胞毒性。 多重功能性ro-1拮抗劑有助于在受試者誘導(dǎo)有力的免疫應(yīng)答及克服T細(xì)胞衰竭和T細(xì)胞 無(wú)反應(yīng)性。
[0095] ro-i拮抗劑結(jié)合ro-i配體及干擾或抑制配體結(jié)合ro-i受體，或直接結(jié)合ro-i受 體且不參與經(jīng)由ro-i受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，ro-i拮抗劑直接結(jié)合ro-i 及阻斷ro-i抑制性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在其它實(shí)施方案中，PD-i拮抗劑結(jié)合ro-i配體及降低或抑 制配體觸發(fā)經(jīng)由ro-i的抑制性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在還有一個(gè)實(shí)施方案中，ro-i拮抗劑能通過(guò)結(jié) 合ro-i受體以外的受體來(lái)活化T細(xì)胞。
[0096] PD-I拮抗劑可以是小分子詰抗劑。術(shù)語(yǔ)"小分子"指如下的有機(jī)小分子，其分子量 大于100且小于約2, 500道爾頓，優(yōu)選介于100和2000之間，更優(yōu)選介于約100和約1250 之間，更優(yōu)選介于約100和約1000之間，更優(yōu)選介于約100和約750之間，更優(yōu)選介于約 200和約500道爾頓之間。小分子常常包括環(huán)形碳或雜環(huán)結(jié)構(gòu)和/或芳香族或多芳香族結(jié) 構(gòu)，其被一種或多種官能團(tuán)取代。小分子拮抗劑通過(guò)結(jié)合ro-1配體諸如ro-Li和ro-L2及 阻止配體與ro-i相互作用或通過(guò)直接結(jié)合ro-i受體且不觸發(fā)經(jīng)由ro-i受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 來(lái)降低或干擾ro-i受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
[0097] 例示性的ro-1拮抗劑包括但不限于PD-L2、ro-Ll、ro-1或B7-1多肽，及其變體、 片段或融合蛋白。別的實(shí)施方案包括結(jié)合任何這些蛋白質(zhì)的抗體。
[0098] A.基于PD-L2的PD-I拮抗劑
[0099] 1?結(jié)合ro-i的基于ro-L2的ro-i拮抗劑
[0100] ro-i拮抗劑結(jié)合免疫細(xì)胞上的ro-i并阻斷抑制性ro-i信號(hào)傳導(dǎo)。認(rèn)為ro-i信號(hào) 轉(zhuǎn)導(dǎo)要求與免疫聯(lián)會(huì)內(nèi)的TCR = MHC復(fù)合物極近的ro-i配體（PD-L2或ro-Ll ;通常是ro-Ll) 結(jié)合ro-i。因此，阻斷經(jīng)由ro-i的抑制性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及任選阻止T細(xì)胞膜上的ro-i和TCR 共連接的蛋白質(zhì)、抗體或小分子是有用的ro-i拮抗劑。
[0101] 代表性的多肽拮抗劑包括但不限于ro-L2多肽、其片段、其融合蛋白及其變體。結(jié) 合ro-i及阻斷經(jīng)由ro-i的抑制性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的ro-L2多肽是優(yōu)選的實(shí)施方案之一。其它實(shí) 施方案包括阻止ro-i的天然配體結(jié)合及觸發(fā)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的ro-i拮抗劑。在某些實(shí)施方案中， 認(rèn)為所公開(kāi)的ro-L2多肽具有降低的或沒(méi)有觸發(fā)經(jīng)由ro-i受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力，因?yàn)闆](méi) 有免疫聯(lián)會(huì)背景中肽-MHC復(fù)合物對(duì)TCR的共連接。因?yàn)榻?jīng)由ro-i受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)傳輸削 弱T細(xì)胞活化和T細(xì)胞增殖的負(fù)信號(hào)，所以抑制ro-i信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑容許細(xì)胞活化，這在其 它情況中會(huì)被削弱。
[0102] 2.例示性的ro-L2多肽ro-i拮抗劑
[0103] 鼠ro-L2多肽可以與下述序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列 同一性：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 多肽制備藥物的用途，其中所述多肽由SEQ ID N0:57的氨基酸序列組成、施用量為 5mg/kg至20mg/kg，所述藥物誘導(dǎo)、提升或增強(qiáng)受試者的免疫應(yīng)答。
2. 權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物是用于治療癌癥的藥物，所述癌癥包括腫瘤。
3. 權(quán)利要求1或2的用途，其中所述免疫應(yīng)答是抗腫瘤免疫應(yīng)答。
4. 權(quán)利要求2或3的用途，其中所述腫瘤的微環(huán)境包含衰竭的T細(xì)胞、無(wú)反應(yīng)性T細(xì) 胞、或它們的組合。
5. 權(quán)利要求4的用途，其中所述衰竭的或無(wú)反應(yīng)性T細(xì)胞包含衰竭的或無(wú)反應(yīng)性 ⑶8+T細(xì)胞。
6. 權(quán)利要求5的用途，其中所述衰竭的或無(wú)反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞表達(dá)H)-l。
7. 權(quán)利要求2-6之一的用途，其中所述腫瘤是來(lái)自選自下組的癌癥：膀胱、腦、乳房、子 宮頸、結(jié)直腸、食管、腎、肝、肺、肥大細(xì)胞瘤、鼻咽、胰、前列腺、皮膚、胃、子宮、卵巢、睪丸和 血液。
8. 權(quán)利要求7的用途，其中所述腫瘤是結(jié)直腸腫瘤。
9. 權(quán)利要求7的用途，其中所述腫瘤是肥大細(xì)胞瘤。
10. 權(quán)利要求1-9之一的用途，其中所述藥物進(jìn)一步包括腫瘤抗原。
11. 權(quán)利要求1-9之一的用途，其中所述藥物進(jìn)一步包括免疫調(diào)控劑。
12. 權(quán)利要求11的用途，其中所述免疫調(diào)控劑選自消減Tregs或抑制Tregs功能的藥 劑和共刺激分子。
13. 權(quán)利要求11或12的用途，其中所述免疫調(diào)控劑是消減⑶4+⑶25+Tregs或抑制 CD4+CD25+Tregs功能的藥劑。 14?權(quán)利要求13的用途，其中所述消減CD4+CD25+Tregs或抑制CD4+CD25+Tregs功能 的藥劑是施用量為l〇〇-300mg/m2的環(huán)磷酰胺。
15.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中所述藥物是每周兩次施用的配制劑。
【專(zhuān)利摘要】提供了用于增強(qiáng)和/或延長(zhǎng)T細(xì)胞活化(即提高T細(xì)胞的抗原特異性增殖、增強(qiáng)T細(xì)胞的細(xì)胞因子生成、刺激T細(xì)胞的分化和效應(yīng)器功能和/或促進(jìn)T細(xì)胞存活)或克服T細(xì)胞衰竭和/或無(wú)反應(yīng)性的組合物和方法。合適的組合物包括結(jié)合及阻斷內(nèi)源PD-1受體且不觸發(fā)來(lái)自PD-1的抑制信號(hào)，或者結(jié)合及阻斷PD-1受體配體及阻止它們與PD-1受體相互作用的PD-1受體拮抗劑。提供了使用PD-1受體拮抗劑來(lái)增強(qiáng)有所需要的受試者中的免疫應(yīng)答的方法。
【IPC分類(lèi)】A61P37-04, A61K38-17, A61P35-00, A61K45-00, A61K39-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104740610
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510091659
【發(fā)明人】所羅門(mén).蘭格曼, 琳達(dá).劉
【申請(qǐng)人】安普利穆尼股份有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月1日
【申請(qǐng)日】2009年8月25日
【公告號(hào)】CA2735006A1, CN102203125A, EP2324055A2, EP2328919A2, EP2328920A2, EP2662383A1, US20110159023, US20110195068, US20110223188, US20140227262, WO2010027827A2, WO2010027827A3, WO2010027828A2, WO2010027828A3, WO2010098788A2, WO2010098788A3