一種光甘草定的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種光甘草定的應(yīng)用，尤其是涉及一種光甘草定在制備用于預(yù)防和/ 或治療腦缺血性疾病藥物中的應(yīng)用，屬于有效成分應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 腦缺血性疾病嚴(yán)重威脅著人類的健康，并且隨著老年人口的不斷增加，其發(fā)病率 不斷升高，給家庭及社會(huì)帶來(lái)較重的壓力。急性缺血性中風(fēng)以其高發(fā)病率、高致殘率、高死 亡率對(duì)人類危害極大，急性缺血性中風(fēng)如果能夠早期治療能防止病情發(fā)展，減輕腦功能損 害及改善預(yù)后，研宄其預(yù)防、治療的藥物具有重要的理論和實(shí)際意義。
[0003] 光甘草定是光果甘草中的主要黃酮類成分之一。已有研宄表明，它顯示出抗自由 基氧化作用，可以防治與自由基氧化有關(guān)的某些病理變化，而至今，光甘草定是否有確切的 神經(jīng)保護(hù)作用及其作用機(jī)制還不清楚，而從以往研宄發(fā)現(xiàn)，自由基生成和過(guò)度炎癥反應(yīng)又 是造成缺血性腦血管病的中心環(huán)節(jié)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服現(xiàn)有技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種光甘草定的應(yīng)用，其在預(yù)防 和/或治療腦缺血性疾病中具有顯著療效。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為： 一種光甘草定在制備用于預(yù)防和/或治療腦缺血性疾病藥物中的應(yīng)用。
[0006] 進(jìn)一步，所述的用于治療腦缺血性疾病藥物為神經(jīng)保護(hù)劑。
[0007] 本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明通過(guò)將光甘草定應(yīng)用于預(yù)防和/或治療腦缺血性疾 病藥物中，對(duì)神經(jīng)損傷有顯著的保護(hù)作用，可用于腦缺血性疾病的預(yù)防和治療，具有重要的 現(xiàn)實(shí)意義。
【附圖說(shuō)明】
[0008] 圖1為氧糖缺乏誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞損傷實(shí)驗(yàn)細(xì)胞存活率比較（n=3); 圖2為光甘草定對(duì)大鼠缺血再灌注損傷引起的神經(jīng)功能缺損的影響； 圖3為光甘草定對(duì)大鼠缺血再灌注損傷梗死面積的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
[0010] 實(shí)施例1:光甘草定對(duì)氧糖缺乏誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞損傷的影響 I. 1藥品 光甘草定，由江蘇天晟藥業(yè)有限公司提供，符合相關(guān)國(guó)家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。藥物均按實(shí)驗(yàn) 要求配制成適宜濃度。
[0011] SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）細(xì)胞株購(gòu)自美國(guó)ATCC公司。
[0012] 1.2實(shí)驗(yàn)方法 SH-SY5Y細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化后，懸于含10%胎牛血清的MEM/F12培養(yǎng)液中。以2X105cells/ml的密度將SH-SY5Y細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板上，置于含5% C02的37°C 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)約24小時(shí)后，在給藥組中加入相應(yīng)濃度的待測(cè) 化合物，正常對(duì)照組及氧糖缺乏損傷組加入化合物溶劑對(duì)照。孵育2小時(shí)后，將氧糖缺 乏損傷組及給藥組均用無(wú)糖EBSS平衡鹽溶液潤(rùn)洗一遍細(xì)胞，隨后換成DMEM(無(wú)糖）培 養(yǎng)液，并再次在給藥組中加入相應(yīng)濃度的待測(cè)化合物，正常對(duì)照組換成含糖DMEM并加入 化合物溶劑對(duì)照。將給藥組及損傷組放入?yún)捬豕ぷ髡緝?nèi)，通入5%C02、10%H2、85%N2混合 氣體缺氧1小時(shí)。正常對(duì)照組放入含5% C02的37°C恒溫培養(yǎng)箱中。1小時(shí)后將培養(yǎng) 板從厭氧工作站內(nèi)取出，并將給藥組及損傷組加入l〇g/L的葡萄糖，終濃度為lg/L。繼 續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后，加入5 mg/ml MTT，進(jìn)行活細(xì)胞染色。孵育3小時(shí)后，棄去培養(yǎng)液，加 入100% DMS0,并在搖板機(jī)上振搖使之充分溶解。490nm的波長(zhǎng)下測(cè)定各組的OD值， 重復(fù)試驗(yàn)三次，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)算出細(xì)胞存活率，用平均值（Mean) 土標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM)表示。
[0013] 圖1為氧糖缺乏誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞損傷實(shí)驗(yàn)細(xì)胞存活率比較（n=3)。
[0014] 如圖1所示：圖1中數(shù)值為細(xì)胞存活率，用平均值（Mean) ±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM)表示， 正常對(duì)照組存活率設(shè)為100%，其余各組為與正常組相比的百分值。##p〈o. 01相比于正常對(duì) 照組，、〈0.01相比于模型組。
[0015] 以上檢測(cè)結(jié)果表明，光甘草定對(duì)于氧糖缺乏誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞損傷均有較強(qiáng)的 保護(hù)作用，且與其藥物濃度呈正相關(guān)（P< 0. 01)。
[0016] 實(shí)施例2:光甘草定對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO)的影響 2. 1藥品及動(dòng)物 水合氯醛、75%消毒酒精由國(guó)藥集團(tuán)提供；2, 3, 5-三苯基氯化四氮唑（TTC)購(gòu)自沃凱 公司；栓線2636#、2838#購(gòu)自北京沙東生物公司。
[0017] SD大鼠45只（購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），雄性，250-300g。實(shí)驗(yàn)前禁食12h， 自由飲水。
[0018] 2. 2實(shí)驗(yàn)方法 2. 2. 1實(shí)驗(yàn)分組 將大鼠隨機(jī)分成三組：假手術(shù)組（n=15)，缺血再灌注組（n=15)，光甘草定組（n=15)。
[0019] 2. 2. 2實(shí)驗(yàn)方法 短暫性MCAO模型主要依據(jù)（Longa,etal;Stroke，1989)所描述的方法進(jìn)行。大鼠 經(jīng)水合氯醛麻醉（400mg/Kg，i.p.)后，將大鼠固定于手術(shù)臺(tái)，監(jiān)測(cè)動(dòng)物的直腸溫度，手術(shù) 過(guò)程中控制溫度在37±0.5°C范圍內(nèi)；行頸部正中切口，鈍性分離組織，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈 (CCA)及頸外動(dòng)脈（ECA)與頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA)分叉處，細(xì)線在CCA下打活結(jié)，分離并用電凝器 電凝兩個(gè)小分支血管，分別是ECA上的分支、ECA與ICA的連接血管，用動(dòng)脈夾夾閉ICA;將 2636 (2838)號(hào)栓線從ECA的切口插入，稍微結(jié)扎ECA上栓線尾部，并松開ICA上的動(dòng)脈夾， 栓線經(jīng)ECA進(jìn)入ICA，沿ICA推進(jìn)至有阻力感即停止；結(jié)扎ECA上的栓線尾部，并剪斷ECA， 松開CCA上的活結(jié)，手術(shù)結(jié)束時(shí)，縫合頸部皮膚；缺血2h后，退出栓線即為再灌注，清醒后回 籠，自由進(jìn)食；手術(shù)結(jié)束后，按動(dòng)物體重肌肉注射抗生素（〇. 5mL/200g);假手術(shù)組手術(shù)步驟 同缺血組，只是將ECA結(jié)扎并剪斷，不進(jìn)栓線阻塞大腦中動(dòng)脈。
[0020] 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分：參照（Chen,etal; 2001 )提供的mNSS方法。0分：正常；1-6 分：輕度損傷；7-12分：中度損傷；13-18分：重度損傷。
[0021] 腦梗死區(qū)域測(cè)定：采用TTC染色方法，再灌注24h后大鼠斷頭處死，迅速分離取出 大腦，置冰箱（_80°C)內(nèi)冷凍組織僵化(約2min)，取出進(jìn)行冠狀面切片，均勻切成2mm厚的 腦片共6片，立即投入1 %TTC染色液中，在37°C下避光孵育約15min，染色過(guò)程翻動(dòng)腦片 一次，盡量使兩面染色均勻。24h后腦組織片拍照，使用圖像處理軟件計(jì)算各腦片梗死面積， 總的梗死體積=各面積相加X腦片厚度。因?yàn)槟X組織水腫，所以計(jì)算后還需校正，其校正 公式如下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種光甘草定在制備用于預(yù)防和/或治療腦缺血性疾病藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種應(yīng)用，其特征在于，所述的用于治療腦缺血性疾病藥物 為神經(jīng)保護(hù)劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種光甘草定在制備用于預(yù)防或治療腦缺血性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)將光甘草定應(yīng)用于預(yù)防和/或治療腦缺血性疾病藥物中，對(duì)神經(jīng)損傷有顯著的保護(hù)作用，可用于腦缺血性疾病的預(yù)防和治療，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
【IPC分類】A61K31-352, A61P25-00, A61P9-10
【公開號(hào)】CN104800206
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510176296
【發(fā)明人】季浩, 張宇, 闞建偉, 竇長(zhǎng)清, 劉佳
【申請(qǐng)人】江蘇天晟藥業(yè)有限公司
【公開日】2015年7月29日
【申請(qǐng)日】2015年4月15日