一種受體拮抗劑在治療局灶性腦缺血損傷中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種受體拮抗劑在治療局灶性腦缺血損傷中的用途，具體包括在大鼠局灶性腦缺血模型中，HAMI 3379側(cè)腦室給藥對(duì)該腦缺血模型的急性損傷具有保護(hù)作用；HAMI 3379腹腔注射給藥對(duì)急性、亞急性損傷亦有保護(hù)作用，并可減輕炎癥反應(yīng)，尤其能抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活；HAMI 3379腹腔注射給藥對(duì)腦缺血慢性損傷仍具有保護(hù)作用，可促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。
【背景技術(shù)】
[0002]腦缺血再灌注后的炎癥變化是腦損傷的重要基礎(chǔ)之一。腦缺血再灌注損傷是高度復(fù)雜的病理過(guò)程，缺血誘發(fā)一系列細(xì)胞及分子事件。主要分三個(gè)階段:急性期(數(shù)小時(shí)到數(shù)天)，主要表現(xiàn)為能量失衡、氧化應(yīng)激、鈣超載、興奮性毒性等引起神經(jīng)元的死亡，伴有血腦屏障的破壞和腦水腫的發(fā)生；亞急性期(數(shù)天到數(shù)周)，主要病變?yōu)檠装Y和凋亡；慢性期(數(shù)周以后)，主要變化為修復(fù)和再生。由于亞急性期和慢性期的界限難以明確區(qū)分，也將亞急性期和慢性期合稱(chēng)為“后期(later phases) ”，在該時(shí)期，缺血中心區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞能夠清除細(xì)胞碎片并釋放多種生物活性物質(zhì)。而周邊區(qū)的星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)性增生，導(dǎo)致膠質(zhì)疤痕的形成，在限制病變擴(kuò)散的同時(shí)也阻礙神經(jīng)生長(zhǎng)。
[0003]CysLTs 是花生四稀酸(arachidonic acid，AA) 5-脂氧酶(5-lipoxygenase，5-L0X)途徑的代謝產(chǎn)物。當(dāng)細(xì)胞膜受到刺激時(shí)，胞內(nèi)磷脂酶A(cytosolic phospholipaseA2，cPLA2)活化，裂解膜磷脂生成AA，隨著細(xì)胞的激活，5-L0X移位到核膜上與5-脂氧酶激活蛋白(FLAP)結(jié)合，促進(jìn)AA逐步轉(zhuǎn)變?yōu)長(zhǎng)TC4、LTDJPLTE4，由于該類(lèi)物質(zhì)的第6位碳原子上都有半胱氨酸殘基，故統(tǒng)稱(chēng)為半胱氨酰白三稀(Cysteinyl leukotrienes, CysLTs)。半胱氨酰白三稀(cysteinyl leukotrienes, CysLTs)是一類(lèi)重要的炎癥介質(zhì)，在腦缺血、腦外傷等中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷性疾病中起重要作用。CysLTs通過(guò)激活半胱氨酰白三稀受體(cysteinylleukotriene receptor, CysLTR)起作用。目前，已克隆和鑒定了兩種半胱氨酰白三稀受體(即 CysLT1R 和 CysLT2R)。
[0004]自發(fā)現(xiàn)白三烯代謝途徑以來(lái)，對(duì)CysLTs的研宄主要側(cè)重于呼吸系統(tǒng)疾病，CysLTs能夠增強(qiáng)支氣管收縮、血管收縮、血管通透性及粘膜分泌，是很強(qiáng)的炎癥介質(zhì)，隨后發(fā)現(xiàn)CysLTs在心血管疾病、過(guò)敏性鼻炎、腫瘤等外周疾病中起重要作用。CysLTs通過(guò)激活其受體參與多種病理過(guò)程的調(diào)節(jié)。CysLTs激動(dòng)CysLT1R和CysLT2R后，可引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子的升高，可引起各種細(xì)胞效應(yīng)。CysLT1R和CysLT2R介導(dǎo)多種外周反應(yīng)，包括免疫反應(yīng)、血管和平滑肌反應(yīng)、炎癥以及組織修復(fù)等。CysLT1R有較多選擇性拮抗劑(圖2)，其抗炎效應(yīng)已確定，并在臨床用于治療支氣管哮喘等疾?。籆ysLT2R選擇性拮抗劑的發(fā)展較為滯后。
[0005]CysLT2R表達(dá)于心臟、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、提睪肌脈管系統(tǒng)、腸肌層神經(jīng)元等外周組織細(xì)胞中，在人類(lèi)大腦中，CysLT2R表達(dá)在血管平滑肌細(xì)胞及粒細(xì)胞上，而CysLT1R在腦內(nèi)表達(dá)相對(duì)較少。正常大鼠腦組織中，CysLT2Ri要表達(dá)于腦室周?chē)推拥男切文z質(zhì)細(xì)胞；大鼠局灶性腦缺血損傷早期CysLT2R表達(dá)于缺血中心區(qū)神經(jīng)元，后期表達(dá)于缺血中心區(qū)的小膠質(zhì)細(xì)胞以及周邊區(qū)的星形膠質(zhì)細(xì)胞，同CysLT1R表達(dá)的時(shí)空特征相似。CysLT2R介導(dǎo)缺血誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的損傷；在星形膠質(zhì)細(xì)胞中，CysLT2R還介導(dǎo)體外缺血損傷或LTD4處理后水通道蛋白AQP4的表達(dá)。
[0006]在外周系統(tǒng)，CysLT2RS與調(diào)節(jié)多種病理生理過(guò)程。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，CysLT2R在多個(gè)腦區(qū)都有分布，尤其是在下丘腦、丘腦、殼核、延髓和腺垂體等部位表達(dá)較高；而CysLT1R在腦內(nèi)表達(dá)相對(duì)較少。CysLT2R介導(dǎo)缺血誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷；體外缺血損傷或LTD4處理可上調(diào)星形膠質(zhì)細(xì)胞CysLT 2R表達(dá)；1^1)4通過(guò)激活CysLT 2R，上調(diào)水通道蛋白AQP4的表達(dá)而介導(dǎo)缺血誘導(dǎo)的細(xì)胞性腦水腫及星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷。然而，CysLT2R是否參與缺血后的神經(jīng)元損傷、小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥及星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，沒(méi)有任何相關(guān)報(bào)道。
[0007]大鼠局灶性腦缺血后，CysLTs釋放增加，CysLT1R表達(dá)上調(diào)，急性期表達(dá)在缺血中心區(qū)神經(jīng)元，慢性期表達(dá)在缺血中心區(qū)的激活小膠質(zhì)細(xì)胞以及周邊區(qū)的增生星形膠質(zhì)細(xì)；并于缺血后3-24h和7d達(dá)到峰值。在腦缺血性損傷或腦腫瘤病人的腦組織中，CysLT1R和CysLT2R在膠質(zhì)細(xì)胞樣及神經(jīng)元樣細(xì)胞上被誘導(dǎo)表達(dá)；大鼠局灶性腦缺血后CysLT1R表達(dá)增加，早期分布在缺血中心區(qū)的神經(jīng)元，后期主要分布缺血中心區(qū)的巨噬細(xì)胞/小膠質(zhì)細(xì)胞和缺血周邊區(qū)增殖的星形膠質(zhì)細(xì)胞。
[0008]HAMI 3379 對(duì) CysLT2R 親和力遠(yuǎn)強(qiáng)于 CysLT1R (約 10000 倍)。HAMI3379 雖然對(duì)皮層神經(jīng)元OGD/R誘導(dǎo)的損傷無(wú)明顯作用，但在皮層細(xì)胞混合培養(yǎng)體系中，可抑制細(xì)胞活性下降及LDH釋放，減少神經(jīng)元死亡，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活。CysLT2R介導(dǎo)皮層細(xì)胞混合培養(yǎng)中OGD誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活和神經(jīng)元損傷，表明神經(jīng)元損傷與小膠質(zhì)細(xì)胞激活密切相關(guān)，但HAMI 3379在整體水平上對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷是否有保護(hù)作用，現(xiàn)有技術(shù)沒(méi)有進(jìn)行任何披露。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有在腦缺血損傷治療上的技術(shù)不足，提供一種受體拮抗劑在治療局灶性腦缺血損傷中的用途，即一種新型的治療局灶性腦缺血損傷的藥物-即半胱氨酰白三烯受體-2選擇性拮抗劑HAMI 3379。本發(fā)明的HAMI 3379側(cè)腦室給藥對(duì)大鼠局灶性腦缺血急性損傷有保護(hù)作用，可有效地改善神經(jīng)功能。HAMI 3379腹腔注射給藥對(duì)大鼠局灶性腦缺血急性、亞急性損傷有保護(hù)作用，并可減輕炎癥反應(yīng)，尤其能較強(qiáng)抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活，腹腔注射給藥的有效劑量是0.1?0.4mg/kg，治療時(shí)間窗為術(shù)后Ih ；HAMI 3379腹腔注射給藥對(duì)大鼠局灶性腦缺血慢性損傷亦有保護(hù)作用，促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)，其作用與半胱氨酰白三烯受體-1選擇性拮抗劑普魯司特相似，但也有不同特點(diǎn)。
[0010]本發(fā)明是通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0011]本發(fā)明涉及一種半胱氨酰白三烯受體-2選擇性拮抗劑HAMI 3379在治療局灶性腦缺血損傷中的用途。
[0012]優(yōu)選地，所述用途具體為在治療局灶性腦缺血急性損傷中的用途。
[0013]優(yōu)選地，所述用途具體為在治療局灶性腦缺血亞急性期有關(guān)炎癥的用途。
[0014]優(yōu)選地，所述用途具體為在治療局灶性腦缺血慢性損傷中的用途。
[0015]優(yōu)選地，所述用途具體為恢復(fù)腦缺血后神經(jīng)功能損傷的用途。
[0016]優(yōu)選地，所述藥物的使用方式為腹腔注射給藥。
[0017]優(yōu)選地，所述腹腔注射給藥的有效劑量是0.1?0.4mg/kg。
[0018]優(yōu)選地，所述腹腔注射給藥的治療時(shí)間窗為術(shù)后lh。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果:
[0020](I)HAMI 3379側(cè)腦室給藥對(duì)大鼠局灶性腦缺血急性損傷有保護(hù)作用，可有效地改善神經(jīng)功能，減少梗死體積、神經(jīng)元壞死、IgG滲出，減輕腦水腫，該作用與普魯司特相似。
[0021](2)與側(cè)腦室給藥相似，HAMI 3379腹腔注射給藥對(duì)大鼠局灶性腦缺血急性損傷及炎癥亦有保護(hù)作用，HAMI 3379腹腔注射給藥的有效劑量是0.1-0.4mg/kg，治療時(shí)間窗為術(shù)后lh。
[0022](3) HAMI 3379腹腔注射給藥對(duì)大鼠局灶性腦缺血慢性損傷有保護(hù)作用，促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)。
【附圖說(shuō)明】
[0023]通過(guò)閱讀參照以下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯:
[0024]圖1為HAMI 3379 (1.c.V.)和普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24h神經(jīng)功能損傷的影響；
[0025]圖2為HAMI 3379 (1.c.V.)和普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24h腦梗死體積及腦水腫的影響；
[0026]圖3為HAMI 3379 (1.c.V.)和普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24h對(duì)皮層神經(jīng)元形態(tài)及密度的影響；
[0027]圖4為HAMI 3379 (1.c.V.)和普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24h皮層神經(jīng)元的影響；
[0028]圖5為HAMI 3379 (1.c.V.)和普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24h缺血半球IgG滲出的影響；
[0029]圖6為.腹腔注射不同劑量HAMI 3379對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24h缺血損傷的影響；
[0030]圖7為不同給藥時(shí)間腹腔注射HAMI 3379對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24h缺血損傷及HAMI 3379對(duì)缺血/再灌注72h損傷的影響；
[0031]圖8為HAMI 3379及普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24h血清及腦脊液中炎癥因子釋放的影響；
[0032]圖9為HAMI 3379及普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24、72h缺血皮層神經(jīng)元病理學(xué)改變和神經(jīng)元計(jì)數(shù)的影響；
[0033]圖10為HAMI 3379及普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24、72h缺血皮層神經(jīng)元變性的影響；
[0034]圖11為HAMI 3379及普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24、72h星形膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)的影響；
[0035]圖12為.HAMI 3379及普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24、72h小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量的影響；
[0036]圖13為HAMI 3379及普魯司特對(duì)大鼠局灶性腦缺血/再灌注24、72h激活小膠質(zhì)細(xì)胞的影響；
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