用于治療第二型糖尿病的羅伊氏乳桿菌gmnl-89組合物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及乳桿菌分離株的技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及用于治療第二型糖尿病的羅伊 氏乳桿菌GMNL-89組合物及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿?。―iabetesMellitus)是一種多病因性的代謝疾病，是由于胰島素分泌或 作用產(chǎn)生缺陷而引起廣泛性代謝障礙，所引起的疾病。糖尿病是以持續(xù)性慢性高血糖為主 要特征的疾病，且亦會造成體內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、水、電解質(zhì)等代謝失調(diào)。
[0003] 臨床上將糖尿病主要分成二類：
[0004]第一型：膜島素依賴型糖尿?。↖nsulin-dependentdiabeticmellitus,IDDM), 一般發(fā)作年齡于30歲以下者居多，因此過去曾稱為「青幼年發(fā)病型糖尿病」，事實(shí)上任 何年齡皆可能發(fā)生。第一型糖尿病是一種自身免疫系統(tǒng)對胰臟蘭氏小島（Isletof Langerhans)的0細(xì)胞進(jìn)行攻擊破壞的自體免疫疾?。ˋutoimmuneDisease)。原因與個(gè) 人的基因遺傳、環(huán)境因素中的病毒感染、或毒性物質(zhì)破壞胰臟的3細(xì)胞、及自體免疫形成 抗@細(xì)胞的抗體、及細(xì)胞免疫作用攻擊P細(xì)胞有關(guān)。最后導(dǎo)致患者的胰臟無法正常分泌 胰島素，而極易發(fā)生酮酸血癥，因此需注射胰島素來治療。
[0005]第二型：非膜島素依賴型糖尿?。╪on-insulindependentdiabetic mellitus，NIDDM)，大多發(fā)生于40歲以后，患者多為體型較肥胖者，過去稱為「成年型糖 尿病」，但亦可能發(fā)生于年輕人，以家族型發(fā)病較為常見，此類型糖尿病在臺灣占糖尿病 總?cè)丝跀?shù)的95%以上。此類型糖尿病是由于胰島素分泌缺陷，及胰島素抗阻性（insulin resistance)所引起的；雖有部分患者胰島素的分泌減少，但大多數(shù)患者分泌胰島素的能 力尚可，因此，大多靠飲食控制及口服降血糖藥物控制血糖，而不需立即注射胰島素治療。 此外，患者大多會伴隨胰島素抗阻性（insulinresistance)的癥狀。胰島素抗阻性的形成 主要是因胰臟蘭氏小島的P細(xì)胞過度地分泌胰島素（hyperinsulinamia)，造成骨骼肌、月旨 肪組織及肝臟等周邊組織對胰島素的敏感性（insulinsensitivity)降低。因而減低了組 織對葡萄糖的利用率，而造成高血糖的現(xiàn)象。此類型病程進(jìn)展緩慢，因此，早期并無典型糖 尿病癥狀，不易察覺。但常伴隨糖尿病性大血管（如心肌梗塞、腦中風(fēng)）、小血管（如腎臟、 眼網(wǎng)膜及神經(jīng)病變）等慢性并發(fā)癥。
[0006] 此外，在第二型糖尿病病患身上經(jīng)常伴隨著脂質(zhì)代謝異常的情況，如血漿中三酸 甘油酯（triglyceride，TG)濃度上升、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C)濃度下降以及低密度 脂蛋白膽固醇（LDL-C)濃度上升。這些癥狀會導(dǎo)致第二型糖尿病患者心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。 另，根據(jù)研究指出，嚴(yán)重糖尿病患者的肝臟血脂值清除能力會下降。當(dāng)肝臟中三酸甘油脂以 及低密度脂蛋白膽固醇不斷的累積后，肝細(xì)胞便會發(fā)生病變形成非酒精性脂肪肝進(jìn)而嚴(yán)重 影響肝功能。
[0007]目前用于治療糖尿病的方式，除可施予胰島素外，另分為非藥物治療與藥物治療 兩種。在非藥物治療方面，主要是利用飲食調(diào)控和運(yùn)動(dòng)的方式來加以治療。而在藥物治療 方面，主要的目的是使不足的胰島素上升、調(diào)降進(jìn)食后的高血糖和改善胰島素抗阻性等。目 前用于治療糖尿病的藥物可分為：
[0008] (1)磺酰尿素類（Sulfonylurea):此類藥物主要機(jī)轉(zhuǎn)為促進(jìn)胰臟胰島素的分泌， 特別是加強(qiáng)胰臟3細(xì)胞對葡萄糖刺激而釋放胰島素的作用；磺酰尿素類降血糖藥物常用 者為佑爾康（glibenclamide,商品名：euglucon)，克批噻（glipizide,商品名：minidiab) 及蜜克龍（gliclazide,商品名：diamicron)。然而，此類藥物除了已發(fā)現(xiàn)的副作用，諸如 皮疹、搔癢外，其施用對象亦有其局限，如有嚴(yán)重的肝、腎功能障礙者、孕婦及哺乳者、對磺 酰尿素類藥物出現(xiàn)嚴(yán)重過敏者均不宜使用這類降血糖藥物。
[0009] (2)a-葡萄醣苷酶（a-Glucosidase)抑制劑：此類藥物主要作用機(jī)轉(zhuǎn)為抑制胰 臟Ct-淀粉酶（ct-amylase)及腸內(nèi)a-葡萄醣苷酶（a-glucosidase)的活性，進(jìn)而抑制 碳水化合物在腸道的分解及吸收，此類藥物能有效的降低飯后血糖及胰島素濃度，但副作 用為腹脹或偶而腹瀉、腹痛及嘔心。
[0010] (3)噻唑燒二酮類（Thiazolidinedione)衍生物：此類藥物主要作用為增 加細(xì)胞核內(nèi)過氧化小體增生活化受體-Y(peroxisomeproliferator-activated receptor(PPAR) -ga_a)的活性，進(jìn)而加強(qiáng)了胰島素的作用，使細(xì)胞內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)移 蛋白GLUT2及GLUT4增加，將葡萄糖運(yùn)送至細(xì)胞內(nèi)利用。臨床上常用者為曲格列酮 (troglitazone,商品名：rezulin)、羅格列酮（rosiglitazone,商品名：avandia)、皮利酮 (pioglitazone,商品名：actos)等；不過，值得注意的是曲格列酮（troglitazone)曾引起 致命的肝毒性，因此，在英國上市（1997年10月）后二個(gè)月就被禁止使用。此外，噻唑烷二 酮類（Thiazolidinedione)衍生物也遭美國下令全面回收及禁用。
[0011] (4)雙胍類（Biguanides):雙胍類藥物為胍（guanidine)的衍生物，目前，雙胍類 降血糖藥物多以metformin為主。此類藥物本身不會刺激胰島素的分泌，其控制血糖機(jī)轉(zhuǎn) 為以下五點(diǎn)：a.抑制食欲，因此優(yōu)先使用于肥胖的第二型糖尿病人身上，使其進(jìn)食減少、體 重下降而改善胰島素的外圍作用、b.延緩腸道吸收葡萄糖、c.促進(jìn)葡萄糖在腸道的厭氧性 分解作用，進(jìn)而增加葡萄糖在腸道中的利用，但可能會產(chǎn)生過多的乳酸鹽（lactate)，易造 成乳酸中毒、d.加強(qiáng)胰島素在肝臟的作用，因此抑制肝臟的葡萄糖新生作用，減少葡萄糖從 肝臟釋出、e.促使貯藏于細(xì)胞內(nèi)的葡萄糖轉(zhuǎn)移蛋白GLUT4到細(xì)胞表面來參與輸送工作，使 細(xì)胞表面的葡萄糖轉(zhuǎn)移蛋白量顯著增加。此外，這類降血糖藥物的副作用，如初服可能有腸 胃道的不適，如厭食，惡心、嘔吐或腹瀉等，少數(shù)人可能出現(xiàn)皮疹，且長期使用后均可能會有 失活的現(xiàn)象發(fā)生。
[0012] 益生菌這個(gè)字原文為Probiotics，此字中文翻譯還有其它名稱例如原生物素、 生菌素、生菌劑或原生保健性菌種。由FoodandAgricultureOrganizationofthe UnitedNations(FAO)將益生菌定義為活菌且含有大量足夠的菌數(shù)并可以能夠維持宿主健 康。益生菌大多為乳酸菌，在腸道繁殖的代謝產(chǎn)生乳酸與醋酸及短鏈脂肪酸，并具有許多 生理功能。與代謝癥候群相關(guān)分別列述于下：一、預(yù)防腹瀉與便秘，乳酸與醋酸可阻止外來 侵入的病原菌及腐敗菌的增生，可促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，并幫助維持正常腸道運(yùn)動(dòng)，預(yù)防腹瀉與便 秘。二、調(diào)節(jié)血糖，研究發(fā)現(xiàn)乳酸菌能降低血糖，給予含有益生菌發(fā)酵乳的酸奶dahi對高 果糖的大鼠，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)dahi組8周后血糖、醣化血色素、0GTT、胰島素濃度顯著下降。 給予含有益生菌發(fā)酵乳對注射STZ所誘發(fā)糖尿病顯著降低血糖。三、降低膽固醇及調(diào)節(jié)血 月旨，乳酸菌降膽固醇的可能機(jī)制有多種方式，一方面是為乳酸菌本身具有的膽鹽水解酵素 活性，使膽固醇在代謝過程中產(chǎn)生去結(jié)合型態(tài)的膽鹽，若乳酸菌體對膽鹽共軛活性的增加， 使膽固醇與去結(jié)合型膽鹽產(chǎn)生共同沉淀作用，從而有更多的膽固醇量被沉淀下來，達(dá)到降 低膽固醇的效果。另一方面，乳酸菌細(xì)胞膜可鍵結(jié)膽固醇，甚至可將吸附的膽固醇進(jìn)行同化 作用，而代謝成細(xì)胞所需物質(zhì)，其中以乳桿菌的降膽固醇的能力較佳。四、調(diào)節(jié)血壓，在某些 發(fā)酵乳品中發(fā)現(xiàn)含有降血壓物質(zhì)，這是非活菌型益生物質(zhì)應(yīng)用在非腸道相關(guān)疾病的最佳例 子。L.helveticus在發(fā)酵過程中會分解乳蛋白而產(chǎn)生多種勝肽，其中VPP(Val-Pro-Pro) 與IPPdle-Pro-Pro)可抑制血管收縮素轉(zhuǎn)換酵素ACE的活性。當(dāng)高血壓患者飲用該酸 乳后，其血壓明顯較飲用前降低。五、乳酸菌能利用SOD或高濃度的錳離子來處理氧自由 基，或利用glutathione降低自由基及H202的毒性。六、益生菌可減少復(fù)雜的發(fā)炎過程中 細(xì)胞素的表現(xiàn)，Mattar舉例：益生菌可增強(qiáng)黏蛋白-2 (MUC-2)黏液素基因在Caco-2的表 現(xiàn)，以減少發(fā)炎反應(yīng)，此外另有細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LactobacillusPlantaruml0hk2可有顯著 降低促發(fā)炎因子，interleukin-iP(IL-1P)、interleukin-6 (IL-6)及tumornecrosis factor-a(TNF-a)并且增加抗發(fā)炎因子IL-10。七、其中人體腸道特定的菌種如乳桿菌和 雙叉桿菌，能夠透過攝取益生菌或提供營養(yǎng)物質(zhì)來調(diào)節(jié)腸道中共生的菌群。
[0013] 現(xiàn)今一些文獻(xiàn)或?qū)＠兄赋鑫故程悄虿±鲜笕闂U菌可有效的預(yù)防糖尿病以及降 低血糖的濃度。但是目前已發(fā)表有關(guān)于乳酸菌改善糖尿病的文獻(xiàn)或?qū)＠麅?nèi)容中，也僅局 限于控制血糖值、體重、血中脂值以及膽固醇濃度。對于其它糖尿病所可能引發(fā)的并發(fā) 癥，如體內(nèi)的發(fā)炎反應(yīng)以及肝臟功能衰退，沒有更進(jìn)一步的改善功用。本案申請人的前案 US7, 901，926 指出LactobacillusreuteriGMNL-89 具有抗發(fā)炎用途；US8, 298, 526 以第一 型糖尿病的造癥基礎(chǔ)下，發(fā)現(xiàn)LactobacillusreuteriGMNL-89可有效改善第一型糖尿病 的癥狀。然而目前對于以第二型糖尿病為造癥基礎(chǔ)的模式，益生菌是否能有效改善第二型 糖尿病的癥狀，則尚未有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)是否有其功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明的目的即在于提供一種益生菌用于制備治療第二型糖尿病癥狀及