植物乳桿菌L.plantarum HM6055及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，尤其涉及植物乳桿菌Z.jC^a/7iar? /^防5及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們生活水平的提高和環(huán)保意識的加強(qiáng)，人們都非常關(guān)注自己生活的健康， 所以特別關(guān)心化學(xué)品對健康的影響，因而食品防腐劑也面臨著新的選擇。微生物防腐劑以 其安全、天然、健康的特點(diǎn)而備受關(guān)注，各國紛紛投入人力物力進(jìn)行研究。隨著我國對食品 安全的日益重視，用生物防腐劑代替化學(xué)防腐劑以成為食品保藏技術(shù)的發(fā)展趨勢。
[0003] 苯乳酸有很強(qiáng)的防腐保鮮功效，可用在果酒、飲料、肉類、食品、糕點(diǎn)制作、蔬菜 (橄欖、小黃瓜、珍珠洋蔥）腌制以及罐頭加工、糧食加工、水果的貯藏，具有調(diào)節(jié)pH值、抑 菌、延長保質(zhì)期、調(diào)味、保持食品色澤、提高產(chǎn)品質(zhì)量等作用； 近年來中國對烘焙面包類食品的消費(fèi)量逐年增加，對其品質(zhì)的要求也日益提高，出現(xiàn) 了不少利用植物乳桿菌和嗜熱鏈球菌輔助酵母發(fā)酵，以提高面包營養(yǎng)價值、延長其貨架期 的新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種新菌株植物乳桿菌Z.
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供植物乳桿菌Z. iar?選航巧反其特征在于，保藏 編號為CGMCCNo. 11213。
[0007] 另一方面，本發(fā)明還提供所述植物乳桿菌Z.選航巧5在微生態(tài)制劑、食 品中的用途。
[0008] 進(jìn)一步，所述用途為植物乳桿菌Z.Mi份?55用于產(chǎn)生較高含量的苯乳酸 的用途。
[0009] 另一方面，本發(fā)明還提供一種微生態(tài)制劑，所述微生態(tài)制劑包含所述植物乳桿菌 L.plantarumHM6055〇
[0010] 另一方面，本發(fā)明還提供一種食品，所述食品含有所述植物乳桿菌 或采用所述植物乳桿菌制備得到。
[0011] 進(jìn)一步，所述食品是食品添加劑。
[0012] 進(jìn)一步，所述食品是面團(tuán)。
[0013] 進(jìn)一步，所述食品是面包。
[0014] 本發(fā)明植物乳桿菌的篩選方法是采集自然發(fā)酵的泡菜發(fā)酵液，取1ml于9ml無菌 生理鹽水中稀釋到10 3 -10 7,吸取0. 2ml涂布于改良M17平板培養(yǎng)基上，37°C好氧培養(yǎng) 24-48h。選擇革蘭氏陽性、過氧化氫酶陰性的菌落進(jìn)一步分離純化，直到得到純菌株為止。 將初篩得到的菌株進(jìn)行面包應(yīng)用實(shí)驗(yàn)及通過HPLC測定其苯乳酸的產(chǎn)量，經(jīng)過復(fù)篩得到菌 株。
[0015] L.plantarumHM6055 {墻匆涕派魯LactobacillusplantarumHM6055')隹^ 自自然發(fā)酵酸菜樣品中的一株益生菌，本發(fā)明的植物乳桿菌（iar? /?紛已經(jīng)保 藏。
[0016]保藏信息： 菌株名稱：植物乳桿菌ZacioAaciUiA? 保藏日期：2015年8月10日， 保藏單位：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中心（CGMCC)， 保藏編號：CGMCCNo. 11213。
[0017] 本發(fā)明根據(jù)中國消費(fèi)者的膳食結(jié)構(gòu)和飲食習(xí)慣，利用植物乳桿菌 研制乳酸菌發(fā)酵面包，旨在延期其貨架保存期的同時，改善面包結(jié)構(gòu)，賦予面包特 殊風(fēng)味，拓展乳酸菌在食品特別是面包中的應(yīng)用范圍。
[0018]使用Z.發(fā)酵制備的面包可延長面包貨架期、改善面包風(fēng)味、改 善面包表觀特征。Z.MMiary? 作為一種益生菌，在食品(焙烤制品)領(lǐng)域具有廣泛 的應(yīng)用前景。
[0019] 微生態(tài)制劑（Porbioties)，也叫活菌制劑（Bigone)或生菌劑，是指運(yùn)用微生態(tài) 學(xué)原理，利用對宿主有益無害的益生菌或益生菌的促生長物質(zhì)，經(jīng)特殊工藝制成的制劑。目 前微生態(tài)制劑已被應(yīng)用于飼料、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥保健和食品等各領(lǐng)域中。
[0020] 由本發(fā)明的實(shí)施例可以看出，由菌粉發(fā)酵制備所得的面包酸 感適中不刺激，發(fā)酵香氣濃厚宜人，麥香味濃厚，整體香氣清新；表面呈金黃色，色澤均勻一 致，有光澤，面包為圓形，表面向外鼓凸，切面氣孔均勻細(xì)密，無大孔洞，內(nèi)質(zhì)潔白而富有彈 性，組織蓬松之海綿狀，無生心；其可檢測苯乳酸含量明顯高于對照菌株，從而可以有效延 長貨架期。
【附圖說明】
[0021] 圖1是實(shí)施例2空白組面包的外觀。
[0022] 圖2是實(shí)施例2由菌粉發(fā)酵制備所得的面包的外觀。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終 相同或類似的標(biāo)號表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附 圖描述的實(shí)施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。實(shí)施例 中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明 書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0028]實(shí)施例1:植物乳桿菌Z.Mi柳55的篩選鑒定 1、篩選 采集四川農(nóng)家自制泡菜（30度發(fā)酵240h)，取lml自然發(fā)酵的泡菜發(fā)酵液于9ml無菌生 理鹽水中，繼續(xù)添加無菌生理鹽水稀釋到10 3 -10 7,吸取0. 2ml涂布于改良M17平板培養(yǎng) 基上，37°C好氧培養(yǎng)24-48h。選擇革蘭氏陽性、過氧化氫酶陰性的菌落進(jìn)一步分離純化，直 到得到純菌株為止。挑選在37度培養(yǎng)24小時的平板上，菌落邊緣平整，光滑，乳白色，菌落 直徑為l-2mm，中間部分略有細(xì)小突起，37度培養(yǎng)48小時后，菌落呈扁平狀，表面略黃，菌落 直徑擴(kuò)大為2-3mm。將初篩得到的菌株進(jìn)行面包應(yīng)用實(shí)驗(yàn)(見實(shí)施例2的步驟)，經(jīng)過復(fù)篩 (具體標(biāo)準(zhǔn)為：測定應(yīng)用實(shí)驗(yàn)得到面包的苯乳酸含量比較高(提高10%以上)、風(fēng)味口感評價 發(fā)酵風(fēng)味更加柔和，酸感不刺激、面包比容增加10%以上評價及保質(zhì)期實(shí)驗(yàn)）得到菌株。
[0029] 改良M17平板培養(yǎng)基配方：大豆蛋白胨10g，酵母浸粉2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖 5g，抗壞血酸鈉 0. 5g，MgS04 0. 25g，瓊脂 17g，蒸餾水 1000ml，調(diào)節(jié)pH6. 5±0. 2。
[0030] 2、鑒定 1) 16srDNA鑒定 用細(xì)菌的16srDNA通用引物從HM6055的基因組DNA中PCR擴(kuò)增得到1條約1. 5kb的條 帶，將擴(kuò)增產(chǎn)物測序，獲得序列在GenBank中進(jìn)行同源序列檢索，結(jié)果顯示所檢索的100個 相似性較高的菌株的16SrDNA序列中，90%為ZacioAaciUiA?jOa/wiar·;與相關(guān)屬種16S rDNA序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，經(jīng)同源性比對發(fā)現(xiàn)菌株HM6055與ZacioAaciWiA?jOahiari/a?的 16SrDNA序列同源性超過99%，因此確定其為植物乳桿菌。
[0031] 2)微生物學(xué)特性 Z. 菌株為革蘭氏陽性，兼性厭氧，葡萄糖發(fā)酵類型為兼性異型發(fā)酵， 接觸酶陰性，聚肽糖組成B群為陰性，形態(tài)為規(guī)整桿狀，判斷其為乳桿菌屬；其阿拉伯糖、松 三糖、木糖發(fā)酵為陽性(利用率為11-89%)，判斷其為植物乳桿菌。
[0032] 顯微鏡觀察形態(tài)：呈規(guī)整桿狀，在液體培養(yǎng)基中成短鏈，不生芽孢； 根據(jù)《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》（2001東秀珠蔡妙英版）判斷其屬于植物乳桿菌屬。
[0033] 實(shí)施例2:植物乳桿菌7????在食品中的應(yīng)用 以下為1000重量份的量。
[0034] 1、含Z.iari/a?選航巧5乳酸菌面團(tuán)的制備： 將攪拌好的乳酸菌面團(tuán)（呈稀糊狀）置入37°C水浴恒溫培養(yǎng)3hl5min，得到乳酸菌發(fā)酵 面團(tuán)。此時面團(tuán)的pH應(yīng)為6.05±0.05。乳酸菌面團(tuán)配方(面粉171g，全脂乳粉19g，葡萄糖 2g，鹿糖 8g，AN脂肪酶 0· 03g，Picca