一種負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于納米材料血管支架的制備領(lǐng)域，特別涉及一種制備負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，血管疾病患病率逐年上升，血管疾病已成為威脅人類健康的一大殺手，人造血管支架成為研宄的熱點(diǎn)并已廣泛用于心血管疾病的介入治療，但在人工血管移植中易出現(xiàn)內(nèi)膜增生、血栓形成等問題，無法滿足臨床的要求。理想的人造血管要盡可能的模擬人體的血管結(jié)構(gòu)和功能，必須具有良好的生物相容性、低免疫性；較好的力學(xué)性能來支撐血管的修復(fù)與再生；并且要在植入體內(nèi)后，具有良好的長(zhǎng)期抗凝血性能，以防止血栓的形成從而保證血液能夠暢通。
[0003]肝素鈉是一種含有硫酸酯的粘多糖，是目前最為有效的抗凝血藥物。然而，在人造血管支架中無論是通過以離子鍵或者共價(jià)鍵，還是通過物理吸附的方式固定的肝素鈉血管支架，其在體內(nèi)只能起到短期的抗凝血效果。如何使人工血管支架具備良好的長(zhǎng)期抗凝血性能成為研宄的重點(diǎn)。脂質(zhì)體一種具有雙分子層結(jié)構(gòu)的封閉囊狀體，由于其具有良好的藥物緩釋性及細(xì)胞親和性等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于藥物傳遞與釋放領(lǐng)域。
[0004]天然材料的優(yōu)勢(shì)在于其直接取自生物體內(nèi)，生物相容性好，本身也類似于細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)，可促進(jìn)細(xì)胞黏附、增殖和分化，但其力學(xué)性能差；而合成高分子材料力學(xué)性能好，但其生物相容性較天然材料差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的是現(xiàn)有人工血管支架不具備長(zhǎng)期釋放及效果良好的抗凝血性能的技術(shù)問題。
[0006]為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，包括以下具體步驟:
[0007]步驟I):制備肝素化脂質(zhì)體:稱取卵磷脂、膽固醇、十八胺加入到圓底燒瓶中，再加無水乙醇，室溫下攪拌溶解后，放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸徹底去除乙醇，得到脂質(zhì)膜；將肝素溶解于1ml 30-50%乙醇后，加到脂質(zhì)膜中，室溫下攪拌2h_4h得到肝素化脂質(zhì)體；
[0008]步驟2):配制紡絲液一:在天然聚合物溶液中加入步驟I)所制得到的肝素化脂質(zhì)，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢杈鶆?，即紡絲液一；
[0009]步驟3):選取合成材料，配制紡絲液二。
[0010]步驟4):先將步驟2)得到的紡絲液一進(jìn)行靜電紡絲，利用滾筒接收，得到血管支架內(nèi)層；然后以步驟3)得到的紡絲液二進(jìn)行紡絲，產(chǎn)物接收覆蓋于血管支架內(nèi)層上，即得到雙層血管支架；
[0011]步驟5):上述制得的雙層血管支架經(jīng)乙醇蒸汽交聯(lián)24小時(shí)即可應(yīng)用。
[0012]優(yōu)選地，所述步驟I)中卵磷脂、膽固醇、十八胺的質(zhì)量比為10:1: 5。
[0013]優(yōu)選地，所述步驟I)中肝素與乙醇的質(zhì)量體積比為0.3-0.5g/mlo
[0014]優(yōu)選地，所述步驟2)中天然聚合物為絲素蛋白、膠原蛋白、魚明膠或殼聚糖。
[0015]優(yōu)選地，所述步驟2)中內(nèi)層紡絲液為水溶液。
[0016]優(yōu)選地，所述步驟2)中肝素化脂質(zhì)體與天然聚合物溶液的體積比為1: 10?5: 10
[0017]優(yōu)選地，所述步驟3)中合成材料為聚氨酯、聚己內(nèi)酯、聚乳酸或聚乙烯醇。
[0018]優(yōu)選地，所述步驟3)中外層紡絲液的溶劑為有機(jī)溶劑，具體為六氟異丙醇、三氟乙酸或甲酸。
[0019]優(yōu)選地，所述步驟4)中的靜電紡絲工藝參數(shù)為:電壓為10_20kV，推進(jìn)速度為0.5-1.5ml/h，接收距離為 10-30cm，溫度為 20_50°C，濕度為 20-50%。
[0020]優(yōu)選地，所述步驟4)中滾筒參數(shù)設(shè)置為10-50MHz。
[0021]優(yōu)選地，所述步驟5)中乙醇為體積百分比為75%的乙醇水溶液。
[0022]本發(fā)明利用靜電紡技術(shù)制備雙層血管支架，以天然材料作為血管支架的內(nèi)結(jié)構(gòu)，并將肝素化脂質(zhì)體負(fù)載在天然材料支架上；以合成高分子材料作為血管支架的外結(jié)構(gòu)，有效的將肝素負(fù)載在脂質(zhì)體雙分子層的囊泡結(jié)構(gòu)內(nèi)，使肝素鈉能夠受控長(zhǎng)期釋放。本發(fā)明提供的制備方法簡(jiǎn)單且反應(yīng)條件溫和，所得的血管支架具有良好的生物相容性、良好的力學(xué)性能及爆破強(qiáng)度，而且該支架具有良好的長(zhǎng)期抗凝血性能。該支架在心血管領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。
[0023]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于:
[0024](I)本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、條件溫和；
[0025](2)本發(fā)明制備的雙層血管支架性能穩(wěn)定并易于保存；
[0026](3)本發(fā)明制備的雙層血管支架可長(zhǎng)時(shí)間緩釋肝素，抗凝血效果明顯，具良好應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0027]圖1為實(shí)施例1中制得的肝素化脂質(zhì)體的TEM圖片；
[0028]圖2為實(shí)施例1所得負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的圖片；
[0029]圖3為實(shí)施例2所得負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的圖片；
[0030]圖4為實(shí)施例3所得的抗血小板粘附的SEM圖片。
【具體實(shí)施方式】
[0031]為使本發(fā)明更明顯易懂，茲以優(yōu)選實(shí)施例，并配合附圖作詳細(xì)說明如下。
[0032]實(shí)施例1:負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的絲素蛋白/聚乳酸雙層血管支架
[0033](I)肝素化脂質(zhì)體的制備:稱取卵磷脂:膽固醇:十八胺(質(zhì)量比為10: I: 5)加入到圓底燒瓶中，再加無水乙醇，室溫下攪拌溶解后，放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸徹底去除乙醇，得到脂質(zhì)膜；將一定量的肝素溶解于1ml 30%乙醇中，加到上述脂質(zhì)膜中，室溫下攪拌2h得到肝素化脂質(zhì)體。
[0034](2)配制質(zhì)量體積比為20%絲素蛋白水溶液，加入質(zhì)量體積比為2%的PEO以提高絲素蛋白的可紡性，并按體積比30%的比例加入步驟(I)中的肝素化脂質(zhì)體，密封攪拌至透明。
[0035](3)以六氟異丙醇作為溶劑，配制質(zhì)量體積比為8%的聚乳酸紡絲液，密封攪拌至透明。
[0036](4)利用靜電紡技術(shù)將(2)進(jìn)行紡絲，利用滾筒接收，得到內(nèi)層血管支架；再利用靜電紡技術(shù)將(3)進(jìn)行紡絲，接收覆蓋于內(nèi)結(jié)構(gòu)上，得到外層血管支架；即得負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架。
[0037]步驟5):上述制得的雙層血管支架經(jīng)乙醇蒸汽交聯(lián)24小時(shí)即可應(yīng)用。制得的肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架如圖2所示，肝素化脂質(zhì)體的TEM圖片如圖1所示。
[0038]實(shí)施例2:負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的魚明膠/聚氨酯雙層血管支架
[0039](I)肝素化脂質(zhì)體的制備:稱取卵磷脂、膽固醇、十八胺(質(zhì)量比為10:1: 5)加入到圓底燒瓶中，再加無水乙醇，室溫下攪拌溶解后，放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸徹底去除乙醇，得到脂質(zhì)膜；將一定量的肝素溶解于1ml 30%乙醇中，加到上述脂質(zhì)膜中，室溫下攪拌2h得到肝素化脂質(zhì)體。
[0040](2)配制質(zhì)量體積比為60%的魚明膠水溶液，并按體積比30%的比例加入步驟
(I)中的肝素化脂質(zhì)體，密封攪拌至透明。
[0041](3)以三氟乙酸作為溶劑，配制質(zhì)量體積比為10%的聚氨酯紡絲液，密封攪拌至透明。
[0042](4)利用靜電紡技術(shù)將(2)進(jìn)行紡絲，利用滾筒接收，得到內(nèi)層血管支架；再利用靜電紡技術(shù)將(3)進(jìn)行紡絲，接收覆蓋于內(nèi)結(jié)構(gòu)上，得到外層血管支架；即得負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架。
[0043]步驟5):上述制得的雙層血管支架經(jīng)乙醇蒸汽交聯(lián)24小時(shí)即可應(yīng)用。制得的肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架如圖3所示。
[0044]實(shí)施例3:抗血小板粘附實(shí)驗(yàn)
[0045]取實(shí)施例1中制得的雙層血管支架做抗血小板粘附實(shí)驗(yàn):將制備好的血管支架置于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，加入3-5ml的動(dòng)物血液，于室溫下靜止3_5小時(shí)，用PBS洗5_10次，放入37°C真空干燥箱內(nèi)干燥后，利用SEM觀察血小板粘附情況(如圖4所示)。結(jié)果表明支架抗血小板粘附效果良好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，包括以下具體步驟: 步驟I):制備肝素化脂質(zhì)體:稱取卵磷脂、膽固醇、十八胺加入到圓底燒瓶中，再加無水乙醇，室溫下攪拌溶解后，放置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸徹底去除乙醇，得到脂質(zhì)膜；將肝素溶解于1ml 30-50%乙醇后，加到脂質(zhì)膜中，室溫下攪拌2h_4h得到肝素化脂質(zhì)體； 步驟2):配制紡絲液一:在天然聚合物溶液中加入步驟I)所制得到的肝素化脂質(zhì)，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢杈鶆?，即紡絲液一； 步驟3):選取合成材料，配制紡絲液二。 步驟4):先將步驟2)得到的紡絲液一進(jìn)行靜電紡絲，利用滾筒接收，得到血管支架內(nèi)層；然后以步驟3)得到的紡絲液二進(jìn)行紡絲，產(chǎn)物接收覆蓋于血管支架內(nèi)層上，即得到雙層血管支架； 步驟5):上述制得的雙層血管支架經(jīng)乙醇蒸汽交聯(lián)24小時(shí)即可應(yīng)用。2.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟I)中卵磷脂、膽固醇、十八胺的質(zhì)量比為10:1: 5。3.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟I)中肝素與乙醇的質(zhì)量體積比為0.3-0.5g/mlo4.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中天然聚合物為絲素蛋白、膠原蛋白、魚明膠或殼聚糖。5.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中內(nèi)層紡絲液為水溶液。6.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中肝素化脂質(zhì)體與天然聚合物溶液的體積比為1: 10?5: 10。7.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中合成材料為聚氨酯、聚己內(nèi)酯、聚乳酸或聚乙烯醇。8.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中外層紡絲液的溶劑為有機(jī)溶劑，具體為六氟異丙醇、三氟乙酸或甲酸。9.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中的靜電紡絲工藝參數(shù)為:電壓為10-20kV，推進(jìn)速度為0.5-1.5ml/h，接收距離為10-30cm，溫度為20-50°C，濕度為20-50%。10.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟4)中滾筒參數(shù)設(shè)置為10-50MHz。11.如權(quán)利要求1所述的負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，其特征在于，所述步驟5)中乙醇為體積百分比為75%的乙醇水溶液。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架的制備方法，該支架分成內(nèi)外兩層獨(dú)立的結(jié)構(gòu)，內(nèi)層結(jié)構(gòu)由負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的天然材料制備，外層結(jié)構(gòu)由合成材料制備。本發(fā)明提供的制備方法包括：肝素化脂質(zhì)體的制備方法；配制內(nèi)層紡絲液，即含有肝素化脂質(zhì)體的天然材料水溶液；選取合成材料，配制外層紡絲液；將內(nèi)層紡絲液進(jìn)行靜電紡絲，利用滾筒接收，得到血管支架內(nèi)層，再以外層紡絲液所得繼續(xù)紡絲，產(chǎn)物接收覆蓋于內(nèi)層結(jié)構(gòu)上即得到負(fù)載肝素化脂質(zhì)體的雙層血管支架。本發(fā)明所制備的雙層血管支架生物相容性好，具有良好的力學(xué)性能及爆破強(qiáng)度，制備方法簡(jiǎn)單且反應(yīng)條件溫和，肝素能夠受控長(zhǎng)期釋放發(fā)揮抗凝血作用。
【IPC分類】A61L31/06, A61L31/04, A61L31/16, A61L33/10
【公開號(hào)】CN104888287
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510242249
【發(fā)明人】王紅聲, 林思, 孫彬彬, 楊興興, 余凡
【申請(qǐng)人】東華大學(xué)
【公開日】2015年9月9日
【申請(qǐng)日】2015年5月13日