并且不希望受理論的束縛，所述糖苷酶療法至少部分地通過(guò)補(bǔ)體活化增強(qiáng)免疫功能。例如，使用單純皰瘆(HSV-1)作為模型病毒時(shí)，體外研宄表明:相對(duì)于對(duì)照，將適當(dāng)水平的神經(jīng)氨酸苷酶和補(bǔ)體一起孵育既顯著地降低了 HSV-1對(duì)Veix)細(xì)胞的感染性又顯著地減少了游離病毒自預(yù)感染的細(xì)胞的釋放(圖1和圖2)。
[0024]在各個(gè)實(shí)施方案中，并且不希望受理論的束縛，所述糖苷酶療法至少部分地通過(guò)細(xì)胞因子刺激增強(qiáng)免疫功能，所述細(xì)胞因子包括例如白細(xì)胞介素-2(IL-2)、干擾素α (IFN-α)、干擾素γ (IFN-γ )、腫瘤壞死因子a (TNF_ a )、白細(xì)胞介素-4 (IL_4)和白細(xì)胞介素-6 (IL-6)。在體外細(xì)胞系統(tǒng)中使用時(shí)，相對(duì)于各自的對(duì)照，至少四種細(xì)胞因子的產(chǎn)生在適當(dāng)水平的神經(jīng)氨酸苷酶的存在下受到刺激。因此，在一些實(shí)施方案中，通過(guò)神經(jīng)氨酸苷酶的被保持或永久的信號(hào)級(jí)聯(lián)增強(qiáng)了這些細(xì)胞因子的功能，產(chǎn)生對(duì)免疫刺激的控制。
[0025]在各個(gè)實(shí)施方案中，并且不希望受理論的束縛，所述糖苷酶療法至少部分地通過(guò)提高免疫細(xì)胞相互作用的效率增強(qiáng)免疫功能。在適當(dāng)水平的神經(jīng)氨酸苷酶以及其他糖苷酶的存在下，所述提高的免疫細(xì)胞相互作用的效率可能是因去除帶負(fù)電荷的唾液酸分子所導(dǎo)致，產(chǎn)生更大的細(xì)胞間接觸。在各個(gè)實(shí)施方案中，所述糖苷酶組合物和方案通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性和/或免疫細(xì)胞活化增強(qiáng)了免疫功能。
[0026]在各個(gè)實(shí)施方案中，并且不希望受理論的束縛，所述糖苷酶方案至少部分地通過(guò)提高感染因子如病毒(例如，HIV、HSV、EBV、HCV、HPV、腺病毒))和受病毒感染的細(xì)胞對(duì)免疫機(jī)制的暴露而發(fā)揮作用。除了可能的補(bǔ)體活化之外，通過(guò)神經(jīng)氨酸苷酶從HIV或感染HIV的細(xì)胞的gpl20去除末端唾液酸殘基可具有另外的免疫刺激作用。從HIV的gpl20/gpl60去除末端唾液酸殘基和/或其他聚糖暴露了隱藏的表位或改變了糖蛋白的構(gòu)象，使得所述病毒更容易受到宿主的免疫系統(tǒng)的各個(gè)部分的攻擊。本文所述的糖苷酶制劑和方案使免疫防御和病毒感染之間的微妙平衡向有利于宿主一方傾斜。
[0027]在各個(gè)實(shí)施方案中，不希望受理論束縛，可以包括神經(jīng)氨酸苷酶、半乳糖苷酶、α-甘露糖苷酶、巖藻糖苷酶(以及其他糖苷酶，包括本文所述的那些)中的一種或多種的糖苷酶方案將維生素D結(jié)合蛋白(也被稱為組特異性組分或Ge)體內(nèi)轉(zhuǎn)化為有效的巨噬細(xì)胞活化因子，從而活化巨噬細(xì)胞抵抗患者的感染性疾病。參見(jiàn)，例如美國(guó)專利5，326，749，其在此通過(guò)引用并入；Yamamoto等人，J Immunology卷151:2794-2802 (1993)。維生素D結(jié)合蛋白(也被稱為DBP)是一種進(jìn)化上保守的糖蛋白并且是遺傳多態(tài)性的。DBP具有約52，000的相對(duì)分子量，并且通常構(gòu)成約0.5%的血漿蛋白質(zhì)。如本文所述的糖苷酶的適當(dāng)劑量和方案可以導(dǎo)致抵抗特定的致病病原體(包括其抗原狀態(tài)的特異性靶向)的有效、持續(xù)和長(zhǎng)期的體內(nèi)巨噬細(xì)胞活化，這對(duì)不斷地改變暴露表位的病原體而言是至關(guān)重要的。因此，體內(nèi)施用所述糖苷酶組合物(包括方便的舌下給藥)導(dǎo)致抵抗病原體的有效的巨噬細(xì)胞活化。
[0028]在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于治療具有慢性病毒感染的患者的方法。所述方法包括對(duì)患者施用免疫耐受的和免疫信號(hào)傳導(dǎo)的糖苷酶組合物的非急性方案，以治療、改善和/或控制所述感染。在一些實(shí)施方案中，病毒是與宿主基因組整合(例如，作為原病毒)或者是可以為隱匿性的或以其他方式逃避免疫監(jiān)護(hù)的病毒，從而難以或不可能完全消除。不例性的病毒包括逆轉(zhuǎn)錄病毒(如HIV)、單純皰瘆病毒(如HSV-1或HSV-2)、肝炎病毒(例如，HAV、HBV、HCV)和腺病毒。在這樣的實(shí)施方案中，本文所述的糖苷酶組合物和方案可以取代抗病毒化療或免疫療法(例如，細(xì)胞因子或趨化因子(如干擾素)療法或單克隆抗體治療)用于長(zhǎng)期疾病控制，或者可以與這樣的療法組合以改善結(jié)果，也就是說(shuō)，或者同時(shí)組合或者按順序組合。
[0029]在一些實(shí)施方案中，所述患者是HIV陽(yáng)性，并且在一些實(shí)施方案中所述患者是癥狀性AIDS患者。HIV感染是一個(gè)世界性的問(wèn)題，并且各國(guó)政府已經(jīng)作出部署以讓其國(guó)民有機(jī)會(huì)獲得抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物。盡管付出這些努力，有時(shí)藥物因?yàn)榍啡睖贤ê徒煌ú槐銓?dǎo)致無(wú)法獲得，這導(dǎo)致患者錯(cuò)過(guò)了用藥。此外，很多時(shí)候，患者不能耐受這些藥物。在一些實(shí)施方案中本發(fā)明提供了抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的替代，并且在其他實(shí)施方案中提供了另外的藥劑以減少對(duì)長(zhǎng)期使用抗逆轉(zhuǎn)錄病毒劑或其他化療療法或抗病毒療法的需求。
[0030]因此，在一些實(shí)施方案中，在所述糖苷酶治療期間所述患者沒(méi)有接受抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法，例如，因?yàn)樗龌颊卟荒苣褪芸鼓孓D(zhuǎn)錄病毒療法，或這樣的ARV療法對(duì)患者而言無(wú)法獲得。所述HIV可以是任何亞型，如HIV-1或HIV-2。在一些實(shí)施方案中，所述HIV耐抗病毒化療，使得替代療法的可獲得性是至關(guān)重要的。在一些實(shí)施方案中，在抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法之后施用或啟動(dòng)所述糖苷酶以控制慢性AIDS，由此提供更有效和成本敏感的長(zhǎng)期疾病控制。
[0031]所述糖苷酶方案也可以與抗逆轉(zhuǎn)錄病毒化療一起施用，例如，以幫助逆轉(zhuǎn)疾病軌跡。一旦疾病軌跡被逆轉(zhuǎn)，則所述糖苷酶方案可以任選地持續(xù)至少一個(gè)月、至少兩個(gè)月、至少四個(gè)月、至少六個(gè)月、或至少一年、或至少兩年、或至少五年或更長(zhǎng)，以提供所述疾病的具有成本效益的控制?？梢匀绫疚乃稣{(diào)節(jié)用于長(zhǎng)期治療的頻率或每日劑量。
[0032]在一些實(shí)施方案中，免疫耐受的糖苷酶信號(hào)傳導(dǎo)補(bǔ)償了 CD4細(xì)胞的損失，同時(shí)給予宿主時(shí)間來(lái)恢復(fù)和補(bǔ)充它的這些關(guān)鍵細(xì)胞的供應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，所述糖苷酶組合物允許抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法的受試者停止抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法一段時(shí)間(例如，約一至六個(gè)月、或約一至四個(gè)月、或約一至兩個(gè)月)，由此允許所述主體從這些藥物的毒性作用中恢復(fù)，同時(shí)還提供成本優(yōu)勢(shì)。所述方案還實(shí)現(xiàn)了病毒和病毒顆粒，以及優(yōu)先于宿主細(xì)胞的受感染的(例如，溶原的)細(xì)胞的免疫靶向。在一些實(shí)施方案中，AVR和糖苷酶治療的這種“周期”在整個(gè)療法中被重復(fù)一次或多次。在另外其他的實(shí)施方案中，所述糖苷酶療法與抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法一起施用防止了通常由逆轉(zhuǎn)錄病毒療法表現(xiàn)出的免疫系統(tǒng)的部分衰減。與其他化療方案一起施用，如在本段落中所述，對(duì)于其他病毒感染(例如，HSV-1或HSV-2、EBV、HAV、HBV、HCV、HPV、腺病毒)可提供相同或類似的優(yōu)點(diǎn)。
[0033]被設(shè)計(jì)成對(duì)抗HIV的藥物已被集中于病毒生命周期的不同階段。一些藥物已被設(shè)計(jì)成阻斷病毒對(duì)CD4T細(xì)胞的附著。其他藥物以參與細(xì)胞內(nèi)的組裝階段的各種酶為目標(biāo)；例如，齊多夫定(zidovudine) (AZT)是一種眾所周知的藥物，其作用是抑制逆轉(zhuǎn)錄酶(即HIV使用所述酶以將其RNA基因組復(fù)制到DNA中的酶)的活性。這些合成藥物中的一些藥物已經(jīng)減緩了至AIDS的進(jìn)展，但沒(méi)有藥物能停止它或消除病毒。一個(gè)主要的問(wèn)題是HIV的高突變率，其中最初顯示出一些希望的藥物變得無(wú)效，因?yàn)椴《緦⑵湫问阶優(yōu)椴辉俦凰幬镒R(shí)別出的形式。所述糖苷酶方案還以允許增強(qiáng)ARV以及其他可能的化療的HIV突變衍生物為目標(biāo)，以降低突變病毒規(guī)避治療劑的傾向。
[0034]如本文所用，術(shù)語(yǔ)抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法指被施用于HIV和AIDS患者的活性劑(通常是活性劑的混合物)。這些包括例如包括進(jìn)入抑制劑(例如，馬拉韋羅(maravi1C)和/或恩夫韋地(enfuvirtide))、CCR5受體拮抗劑、逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(例如，齊多夫定、地丹諾辛(didanosine)、扎西他濱(zalcitabine)、司他夫定(stavudine)、勝甲酸(foscarnet)和/或拉米夫定(Iamivudine))、蛋白酶抑制劑(例如，利托那韋(ritonavir)、地瑞那韋(darunavir)、阿扎那韋(atazanavir)、沙奎那韋(saquinavir))、整合酶抑制劑(例如，雷特格韋(raltegravir))、成熟抑制劑(例如，α-干擾素、貝韋立馬(bevirimat)和/或vivecon)的療法。在一些實(shí)施方案中，逆轉(zhuǎn)錄病毒療法包括兩種核苷類似物和一種非核苷類似物或蛋白酶抑制劑的組合。三種藥物的這種組合通常被稱為“三藥混合物(cocktail)”。實(shí)例包括C0MBIVIR(齊多夫定+拉米夫定)、TRIZIVIR(阿巴卡韋(abacavir) +齊多夫定+拉米夫定)、KALETRA (洛匹那韋(1pinavir) +利托那韋)、EPZIC0M (阿巴卡韋+拉米夫定)、TRUVADA (替諾福韋(tenofovir) +恩曲他濱(emtricitabine))、ATRIPLA(依非韋倫(efavirenz)+替諾福韋+恩曲他濱)。其他組合包括:替諾福韋/恩曲他?兵/雷特格韋、替諾福韋/恩曲他?兵/利托那韋、和地瑞那韋/替諾福韋/恩曲他濱/利托那韋/阿扎那韋。
[0035]在一些實(shí)施方案中，所述抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法包括兩種核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和一種非核苷酸逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，所述ARV療法包括司他夫定、拉米夫定和/或奈韋拉平(Nevirapine)。在一些實(shí)施方案中，所述ARV療法包括依法韋侖。這樣的療法，如果施用，在過(guò)渡到長(zhǎng)期糖苷酶治療之前被有節(jié)制地使用，或以降低初始疾病軌跡。這種采用糖苷酶療法的長(zhǎng)期疾病控制引發(fā)了抵抗游離病毒(包括突變病毒)和受感染的細(xì)胞的免疫級(jí)聯(lián)。
[0036]在各個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的方案適于治療在AIDS的不同階段的患者。在一些實(shí)施方案中，在所述方案開(kāi)始時(shí)患者的CD4計(jì)數(shù)小于約500個(gè)細(xì)胞/mm3。例如，在所述方案開(kāi)始時(shí)患者的CD4計(jì)數(shù)可以在約200和約400之間。在所述方案開(kāi)始時(shí)患者的CD4計(jì)數(shù)可以小于約400、小于約350、小于約300、小于約200、小于約100或小于約50。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)CD4計(jì)數(shù)小于400時(shí)，單獨(dú)地或與所述糖苷酶組合物一起施用抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法，并且一旦CD4計(jì)數(shù)正常化(例如，高于約400或高于約500或高于約800)則將所述糖苷酶組合物用于長(zhǎng)期護(hù)理。在一些實(shí)施方案中，患者可能繼續(xù)具有低于正常的CD4計(jì)數(shù)，但所述糖苷酶組合物幫助免疫系統(tǒng)對(duì)此缺損發(fā)揮作用。在另外其他的實(shí)施方案中，所述患者具有如所述的低CD4計(jì)數(shù)，并且在無(wú)逆轉(zhuǎn)錄病毒療法下施用所述糖苷酶組合物，可以使CD4計(jì)數(shù)從長(zhǎng)遠(yuǎn)來(lái)看正常化。
[0037]在一些實(shí)施方案中，在所述方案開(kāi)始時(shí)患者的病毒載量高于約10，000/ml。例如，在所述方案開(kāi)始時(shí)所述病毒載量可以是至少約25，000/ml、至少約40，000/ml、至少約50，000/ml、至少約 75，000/ml、至少約 100，000/ml、至少約 500，000/ml、至少約 I 百萬(wàn) /ml或至少約5百萬(wàn)/ml。在一些實(shí)施方案中，患者接受抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法以將病毒載量變?yōu)樾∮诩s50，000/ml、或小于10，000/ml或檢測(cè)不到的，然后再過(guò)渡到糖苷酶治療作為長(zhǎng)期護(hù)理。在一些實(shí)施方案中，抗病毒療法和糖苷酶的組合可以更快地或更完全地降低病毒載量。
[0038]在一些實(shí)施方案中，糖苷酶療法的好處可至少部分地通過(guò)患者的健康評(píng)估(包括情緒和精神狀態(tài)、食欲、能量水平、繼發(fā)感染/并發(fā)癥、毛發(fā)生長(zhǎng)以及其他改善整體健康的癥狀)來(lái)辨識(shí)。采用AIDS治療的常規(guī)定量(例如CD4水平或病毒滴度)可辨識(shí)出或未辨識(shí)出這樣的