(3)將步驟(2)中得到的絲膠/(絲素/羥基磷灰石)混合液添加到1ml殼聚糖中，攪拌混合均勻；此時調(diào)控混合體系的溫度為8°C后，再逐滴加入步驟(I)得到的甘油磷酸鈉溶液2ml，攪拌30min ；將混合溶液置入模具中并調(diào)節(jié)pH為7.0，將模具放入37 °C水浴溫度中，約1min可完成溶-凝膠轉(zhuǎn)化，將凝膠材料放入-20 V冰箱中預(yù)凍2h，解凍2h，轉(zhuǎn)移到-80 V的冰箱中冷凍8h，轉(zhuǎn)入到冷凍干燥機中干燥24h，真空度為50Kpa，即可得到骨組織工程支架材料。
[0043]實施例4:
一種骨組織工程支架材料的制備方法，具體包括以下步驟:
(1)將絲膠蛋白粉末溶解于去離子水中，配成濃度為5.0%(ff/V)的絲膠蛋白溶液；
將殼聚糖溶解于濃度為0.lmol/L的稀鹽酸溶液中，配成濃度為2.5%(ff/V)的殼聚糖溶液；
將甘油磷酸鈉溶解于去離子水中，配成濃度為50% (W/V)的甘油磷酸鈉溶液；
(2)將室溫條件下，稱取0.05g絲素/羥基磷灰石粉末添加到步驟(I)中得到的1.34ml絲膠蛋白溶液中，攪拌均勻；
(3)將步驟(2)中得到的絲膠/(絲素/羥基磷灰石)混合液添加到1ml殼聚糖中，攪拌混合均勻；此時調(diào)控混合體系的溫度為7°C后，再逐滴加入步驟(I)得到的甘油磷酸鈉溶液2ml，攪拌30min ；將混合溶液置入模具中并調(diào)節(jié)pH為7.0，將模具放入37 °C水浴溫度中，約15min可完成溶-凝膠轉(zhuǎn)化，將凝膠材料放入-20 V冰箱中預(yù)凍3h，解凍2h，轉(zhuǎn)移到-80 V的冰箱中冷凍8h，轉(zhuǎn)入到冷凍干燥機中干燥24h，真空度為28Kpa，即可得到骨組織工程支架材料。
[0044]實施例5: 一種骨組織工程支架材料的制備方法，具體包括以下步驟:
(1)將絲膠蛋白粉末溶解于去離子水中，配成濃度為5.0%(ff/V)的絲膠蛋白溶液；
將殼聚糖溶解于濃度為0.lmol/L的稀鹽酸溶液中，配成濃度為2%(W/V)的殼聚糖溶液；
將甘油磷酸鈉溶解于去離子水中，配成濃度為50% (W/V)的甘油磷酸鈉溶液；
(2)將室溫條件下，稱取0.05g絲素/羥基磷灰石粉末添加到步驟(I)中得到的1.5ml絲膠蛋白溶液中，攪拌均勻；
(3)將步驟(2)中得到的絲膠/(絲素/羥基磷灰石)混合液添加到1ml殼聚糖中，攪拌混合均勻；此時調(diào)控混合體系的溫度為4°C后，再逐滴加入步驟(I)得到的甘油磷酸鈉溶液2ml，攪拌30min ;將混合溶液置入模具中并調(diào)節(jié)pH為7.0，將模具放入37.5°C水浴溫度中，約20min可完成溶-凝膠轉(zhuǎn)化，將凝膠材料放入-20°C冰箱中預(yù)凍4h，解凍2h，轉(zhuǎn)移到_80°C的冰箱中冷凍8h，轉(zhuǎn)入到冷凍干燥機中干燥24h，真空度為40Kpa，即可得到骨組織工程支架材料。
[0045]實施例6:
一種骨組織工程支架材料的制備方法，具體包括以下步驟:
(1)將絲膠蛋白粉末溶解于去離子水中，配成濃度為5.0%(ff/V)的絲膠蛋白溶液；
將殼聚糖溶解于濃度為0.lmol/L的稀鹽酸溶液中，配成濃度為2%(W/V)的殼聚糖溶液；
將甘油磷酸鈉溶解于去離子水中，配成濃度為50% (W/V)的甘油磷酸鈉溶液；
(2)將室溫條件下，稱取0.05g絲素/羥基磷灰石粉末添加到步驟(I)中得到的1.34ml絲膠蛋白溶液中，攪拌均勻；
(3)將步驟(2)中得到的絲膠/(絲素/羥基磷灰石)混合液添加到1ml殼聚糖中，攪拌混合均勻；此時調(diào)控混合體系的溫度為10°C后，再逐滴加入步驟(I)得到的甘油磷酸鈉溶液2ml，攪拌30min ;將混合溶液置入模具中并調(diào)節(jié)pH為7.0，將模具放入37°C水浴溫度中，約15min可完成溶-凝膠轉(zhuǎn)化，將凝膠材料放入-20°C冰箱中預(yù)凍2h，解凍2h，轉(zhuǎn)移到-77V的冰箱中冷凍8h，轉(zhuǎn)入到冷凍干燥機中干燥24h，真空度為24Kpa，即可得到骨組織工程支架材料。
[0046]最后說明的是，上述實施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項】
1.一種骨組織工程支架材料制備方法，其特征在于:步驟如下， O溶液的準(zhǔn)備: 將絲素蛋白粉末溶解于去離子水中，配成濃度為8-15mg/ml的絲素蛋白溶液； 將磷酸溶液用去離子水稀釋，配成濃度為0.01-0.lmol/L的磷酸溶液； 將氫氧化鈣粉末溶于去離子水中，配成濃度為0.01-0.05mol/L的氫氧化鈣溶液； 將絲膠蛋白粉末溶解于去離子水中，配成濃度為4%-8% (W/V)的絲膠蛋白溶液； 將殼聚糖溶解于稀酸溶液中，配成濃度為2-3%(W/V)的殼聚糖溶液； 將甘油磷酸鈉溶解于去離子水中，配成濃度為50-60% (W/V)的甘油磷酸鈉溶液； 2)制備絲素/羥基磷灰石粉末:將第I)步準(zhǔn)備的絲素蛋白溶液與磷酸溶液均勻混合；然后在60-80°C恒溫水浴中，將絲素蛋白與磷酸的混合液以40-60滴/min的速度緩慢的滴入到氫氧化鈣溶液中，加完后，以150-220r/min攪拌2_3h，攪拌結(jié)束后調(diào)節(jié)反應(yīng)溶液pH值為9-10，在反應(yīng)溫度水浴中沉化24-48h，真空抽濾，用去離子水漂洗至少三次，即得到絲素/羥基磷灰石粉末；其中，絲素蛋白溶液與磷酸溶液、氫氧化鈣溶液的體積比為1: (1.5-2):(10-15)； 3)將步驟2)中得到的絲素/羥基磷灰石粉末添加到步驟I)準(zhǔn)備的絲膠蛋白溶液中攪拌混合均勻，得到的絲膠/(絲素/羥基磷灰石)懸濁液，其中絲膠蛋白與絲素/羥基磷灰石粉末的質(zhì)量比為1:0.5-1 ； 4)將步驟3)得到的絲膠/(絲素/羥基磷灰石)懸濁液，緩慢地加入到殼聚糖溶液中，攪拌均勻，調(diào)整體系的溫度為1-1o°c，再逐滴加入步驟I)準(zhǔn)備的甘油磷酸鈉溶液攪拌30min，得到混合溶液；其中絲膠/(絲素/羥基磷灰石)懸濁液、殼聚糖溶液、甘油磷酸鈉溶液的體積比為(0.67-1): (5-6):1; 5)將第4)步得到的混合溶液倒入模具中，將模具放入37-38?恒溫水浴中，使混合溶液完成溶-凝膠轉(zhuǎn)化，將凝膠材料先放在-10—20°C的溫度下預(yù)冷凍2-5h，解凍l-3h，然后轉(zhuǎn)到-70—80°C的冰箱中冷凍6-10h，然后放入冷凍干燥機干燥24h以上，真空度控制在10-50 Kpa，即得骨組織工程支架材料。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨組織工程支架材料制備方法，其特征在于:步驟I)中所述絲素蛋白粉末的制備方法為:采用鹽溶酶解工藝，將廢次繭殼或繭絲依次經(jīng)醚類、醇類有機溶劑浸泡以除去其中的蠟質(zhì)物、碳水化合物及灰分雜質(zhì)，再經(jīng)水煮沸脫膠鹽溶后冷凍干燥即得到微米級絲素蛋白粉末。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨組織工程支架材料制備方法，其特征在于，步驟I)中絲膠蛋白粉末的制備方法為:將繭殼經(jīng)醚類、醇類依次分別浸泡24-48h，用蒸餾水洗凈、干燥，以除去蠟質(zhì)和部分有機物和雜質(zhì)；再將繭殼用蒸餾水煮沸至少6h，將絲膠蛋白溶于蒸餾水中，抽濾得到絲膠蛋白溶液，然后將絲膠蛋白溶液濃縮、冷凍干燥即得絲膠蛋白粉末。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的骨組織工程支架材料的制備方法，其特征在于，步驟I)中的稀酸為稀鹽酸或稀醋酸，濃度為0.05-0.2mol/Lo5.一種骨組織工程支架材料，其特征在于，采用權(quán)利要求1?4任一所述的制備方法制備得到，其孔徑為10?200 μ m。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種骨組織工程支架材料及其制備方法，首先根據(jù)仿生原理合成絲素/羥基磷灰石粉末，溶于絲膠蛋白溶液中，然后將絲膠蛋白溶液（含絲素/羥基磷灰石）、殼聚糖溶液、甘油磷酸鈉溶液混合，再將混合溶液通過控溫轉(zhuǎn)化成凝膠，將凝膠經(jīng)預(yù)冷凍、解凍、再冷凍，以及最終的冷凍干燥，即得骨組織工程支架材料。該組織工程支架材料具有力學(xué)性能優(yōu)異，生物相容性好，與骨細(xì)胞生長性匹配的降解性，成型性好，以及能誘導(dǎo)骨細(xì)胞長入材料的優(yōu)點。該支架材料能加快骨細(xì)胞長入的生理過程，具有促骨生長性，能縮短病人的康復(fù)時間，加快臨床治療的過程，降低病人的痛苦。制備方法具有反應(yīng)條件溫和，工藝簡單，成本低廉，適于放大生產(chǎn)的優(yōu)點。
【IPC分類】A61L27/22, A61L27/12, A61L27/56, A61L27/20, A61L27/26
【公開號】CN104984393
【申請?zhí)枴緾N201510353363
【發(fā)明人】陳忠敏, 李江峰, 王富平, 龐亞妮, 胡奇
【申請人】重慶理工大學(xué)
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年6月24日