層面對入射弱相干光的背向反射或幾次散射信號，通過掃描可得到生物組織二維 或三維結(jié)構(gòu)圖像，可進(jìn)行活體眼組織結(jié)構(gòu)的非接觸式、非侵入性斷層成像。OCT通過光源的 相干特性，可測量小鼠眼球的各個屈光參數(shù)。腹腔注射0. 08~0. 2mL的氯胺酮和甲苯噻嗪 的混合液麻醉小鼠，將其放入固定器中，測量玻璃體腔深度（VCD)。測量3次，取平均值。OCT 測量數(shù)值為光學(xué)距離，計(jì)算時需根據(jù)各參數(shù)的屈光指數(shù)轉(zhuǎn)換為物理距離，各參數(shù)的屈光指 數(shù)分別為角膜1. 4015、房水1. 3336、玻璃體1. 332、眼軸1. 334,晶狀體的屈光指數(shù)隨著年齡 的增長會呈現(xiàn)線性變化的趨勢（y= 0. 0005x+l. 557,R2 = 0. 98)(SchmuckerC,SchaefTel F.AparaxialschematiceyemodelforthegrowingC57BL/6mouse.VisionRes2004； 44:1857-1867)。
[0039] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如表I所示，實(shí)驗(yàn)前，各組內(nèi)和各組間實(shí)驗(yàn)動物左右眼玻璃體腔深度 (V⑶）差異不顯著（P>〇. 05,配對t檢驗(yàn)，P>0. 05,單因素方差分析）。
[0040] 如表2及圖2所示，實(shí)驗(yàn)4周后，對照組和對照+氯硝柳胺組內(nèi)左右眼玻璃體腔深 度（VCD)之差差異不顯著（P>0. 05,單因素方差分析），說明氯硝柳胺不影響正常小鼠玻璃 體腔深度（VCD)發(fā)育。FDM組的剝奪眼較對側(cè)眼的玻腔深度增加0.022±0. 006mm(P〈0. 01， 配對t檢驗(yàn)），而在FDM+氯硝柳胺組中剝奪眼與對側(cè)眼玻腔深度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P =0. 785,配對t檢驗(yàn)），相較于對側(cè)眼，F(xiàn)DM組的玻腔深度的延長大于FDM+氯硝柳胺組 (P〈0. 001，單因素方差分析），說明氯硝柳胺口服給藥可以減緩形覺剝奪小鼠眼玻璃體腔 深度的延長。
[0041 ] 實(shí)施例3:氯硝柳胺對FDM小鼠眼軸長度（AL)的影響
[0042] 實(shí)驗(yàn)動物：同實(shí)施例1。
[0043] 分組：同實(shí)施例1。
[0044] 造模及給藥：同實(shí)施例1。
[0045] 眼軸長度測試方法：采用如實(shí)施例2所述的光學(xué)相干斷層掃描儀0CT、測試和計(jì)算 方法測量眼軸長度。眼軸長度定義為從角膜的前表面到視網(wǎng)膜神經(jīng)RGC細(xì)胞層。
[0046] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如表1所示，實(shí)驗(yàn)前，各組內(nèi)和各組間實(shí)驗(yàn)動物左右眼眼軸長度（AL)差 異不顯著（P>〇. 05,配對t檢驗(yàn)，P>0. 05,單因素方差分析）。
[0047] 如表2及圖3所示，實(shí)驗(yàn)4周后，F(xiàn)DM組的剝奪眼較對側(cè)眼的眼軸長度增加 0. 048±0. 003mm(P〈0. 01，配對t檢驗(yàn)）；而在FDM+氯硝柳胺組中剝奪眼與對側(cè)眼眼軸長度 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 〇. 447,配對t檢驗(yàn)），相較于對側(cè)眼，F(xiàn)DM組的眼軸長度的延長大 于FDM+氯硝柳胺組（P〈0. 001，單因素方差分析），說明氯硝柳胺口服給藥可以減緩形覺剝 奪眼眼軸長度的延長。
[0048] 實(shí)施例4:氯硝柳胺對眼角膜曲率半徑（cornealradiusofcurvature，CRC)的 影響
[0049] 實(shí)驗(yàn)動物：同實(shí)施例1。
[0050] 分組：同實(shí)施例1。
[0051] 造模及給藥：同實(shí)施例1。
[0052] 眼角膜曲率半徑測試方法：+20.OD的鏡片放置在角膜曲率計(jì)上，測量不同已知曲 率的鋼珠，讀取角膜曲率計(jì)上的讀數(shù)，以此讀數(shù)為X軸，以鋼珠真實(shí)半徑為Y軸，繪制散點(diǎn) 圖，得出一個關(guān)于X，Y的二元一次方程：Y= 0. 183X。測量時不需麻醉，固定小鼠頭頸部及 尾巴，將小鼠身體偏斜30°左右放置，角膜曲率計(jì)對準(zhǔn)小鼠眼球中心測量，單眼連續(xù)測量3 次取其平均值得到X值，根據(jù)Y= 0. 183X計(jì)算得到Y(jié)值，代表小鼠的實(shí)際角膜曲率徑。
[0053] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如表1所示，實(shí)驗(yàn)前，各組內(nèi)和各組間實(shí)驗(yàn)動物左右眼角膜曲率半徑差 異不顯著（P>〇. 05,配對t檢驗(yàn)，P>0. 05,單因素方差分析）。
[0054] 如表2所示，實(shí)驗(yàn)4周后，對照組和對照+氯硝柳胺組內(nèi)左右眼眼角膜曲率半徑之 差差異不顯著（P>〇. 05,單因素方差分析）。說明氯硝柳胺不影響正常小鼠眼角膜曲率半徑 發(fā)育。
[0055] 表1.實(shí)驗(yàn)前各組小鼠的屈光度和屈光系統(tǒng)參數(shù)
[0059] 實(shí)施例5 :氯硝柳胺對APCMlM、鼠屈光度（Diopter)的影響
[0060] 實(shí)驗(yàn)動物：APCMlVJ、鼠是一種家族性腺瘤性息肉病的模型動物。如圖4和圖5所 示，APCMlM、鼠出生后屈光狀態(tài)向近視方向發(fā)展，出生后70天屈光度達(dá)到-4. 39±1. 50,出 生后84天屈光度為-4. 42± 1. 95,與同齡WT小鼠的差異存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。APCMin 小鼠出生后瞳孔大小及角膜曲率半徑無明顯變化，晶狀體變小，玻璃體腔深度相對延長而 眼軸長度相對縮短，鞏膜膠原纖維粗細(xì)不均且排列紊亂，是作近視研究的模型動物之一。 C57BL/6J-ApcMin(3-4周齡）購買于南京大學(xué)-南京生物醫(yī)藥研究院。裂隙燈顯微鏡和EIR 檢查排除眼疾，除去小眼畸型，角膜混濁，白內(nèi)障和雙眼屈參差的小鼠。所有小鼠在參與實(shí) 驗(yàn)前均在SPF級條件下飼養(yǎng)，每天給予12小時光照，籠周光照強(qiáng)度為5001ux，室溫控制在 (25±2°C)，給予充足的食物和飲水。實(shí)驗(yàn)開始后轉(zhuǎn)入普通級條件下飼養(yǎng)，自由攝食；室溫 控制在20-25°C，光照強(qiáng)度為250-3001ux。
[0061] 分組：10周齡WT小鼠（野生型小鼠）和10周齡C57BL/6J-APCMlVJ、鼠若干只，隨 機(jī)分為3組：WT組，APCffin組，APCMin+氯硝柳胺組。
[0062] 給藥：APCffin+氯硝柳胺組小鼠每天胃灌注氯硝柳胺200mg/kg，WT組和APCMin組小 鼠灌注溶劑水。持續(xù)造模及給藥28天（即4周）。分別測量實(shí)驗(yàn)前后各組小鼠的眼部各項(xiàng) 參數(shù)。
[0063] 屈光度測試方法：同實(shí)施例1。
[0064] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)前，APCffin組和APCMin+氯硝柳胺組小鼠屈光度差異不顯著 (P>0. 05,獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)），而APCMin組和APCMin+氯硝柳胺組和WT組小鼠相比，屈光向近 視方向發(fā)展。
[0065] 如圖6所示，實(shí)驗(yàn)4周后，APCffin組小鼠右眼的屈光度數(shù)為-11. 12±4. 95D， 而APCMin+氯硝柳胺組中，右眼的屈光度數(shù)為-5.86±5.52D，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P〈0. 01，單因素方差分析），說明APCffin+氯硝柳胺組中小鼠的形覺剝奪性近視受到部分抑 制。
[0066] 實(shí)施例6:氯硝柳胺對APCmiMn鼠玻璃體腔深度（Vitreouschamberdepth，VO)) 的影響
[0067] 實(shí)驗(yàn)動物：同實(shí)施例5。
[0068] 分組：同實(shí)施例5。
[0069] 給藥：同實(shí)施例5。
[0070] 玻璃體腔深度測試方法：同實(shí)施例2。
[0071] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)前，APCffin組和APCffin+氯硝柳胺組小鼠左右眼玻璃體腔深度差異 不顯著（P>0. 05,獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)），而APCMin組和APCMin+氯硝柳胺組和WT組小鼠相比，屈 光向近視方向發(fā)展。
[0072] 如圖7所示，實(shí)驗(yàn)4周后，APCmi^小鼠右眼的玻璃體腔深度為0. 062±0. 01mm，而 APCMin+氯硝柳胺組小鼠右眼的玻璃體腔深度為0. 059±0. 01mm。說明口服給藥氯硝柳胺可 以減緩APCMlM、鼠玻璃體腔的延長。
[0073] 實(shí)施例7 :氯硝柳胺對APCMlM、鼠眼軸長度（Axiallength，AL)的的影響
[0074] 實(shí)驗(yàn)動物：同實(shí)施例5。
[0075] 分組：同實(shí)施例5。
[0076] 給藥：同實(shí)施例5。
[0077] 眼軸長度測試方法：同實(shí)施例3。
[0078] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)前，APCffin組和APCMin+氯硝柳胺組小鼠眼軸長度差異不顯著 (P>0. 05,獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)），而APCMin組和APCMin+氯硝柳胺組和WT組小鼠相比，屈光向近 視方向發(fā)展。
[0079] 如圖8所示，實(shí)驗(yàn)4周后，APCMin+氯硝柳胺組小鼠右眼的眼軸長度短于APrthJ、 鼠右眼的眼軸長度，說明口服給藥氯硝柳胺可以減緩APCMlVJ、鼠眼軸長度的延長。
[0080] 上述實(shí)施例之中，氯硝柳胺為口服給藥，小鼠的日劑量為200mg/kg，根據(jù)本領(lǐng)域常 規(guī)的藥理學(xué)體表面積換算等效劑量法，折算為人的等效劑量為日劑量20~25mg/kg。
[0081] 以上所述，僅為本發(fā)明較佳實(shí)施例而已，故不能依此限定本發(fā)明實(shí)施的范圍，即依 本發(fā)明專利范圍及說明書內(nèi)容所作的等效變化與修飾，皆應(yīng)仍屬本發(fā)明涵蓋的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 氯硝柳胺在制備預(yù)防和/或治療近視藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯硝柳胺在制備預(yù)防和/或治療近視藥物中的應(yīng)用，其特征 在于：所述預(yù)防和/或治療近視是指抑制屈光度的近視性偏移。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯硝柳胺在制備預(yù)防和/或治療近視藥物中的應(yīng)用，其特征 在于：所述預(yù)防和/或治療近視是指抑制近視性玻璃體腔深度的延長。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯硝柳胺在制備預(yù)防和/或治療近視藥物中的應(yīng)用，其特征 在于：所述預(yù)防和/或治療近視是指抑制近視性眼軸長度的延長。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯硝柳胺在制備預(yù)防和/或治療近視藥物中的應(yīng)用，其特征 在于：所述氯硝柳胺為口服給藥，日劑量為20~25mg/kg。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氯硝柳胺在制備防治近視藥物中的應(yīng)用，氯硝柳胺可通過抑制屈光度的近視性偏移、抑制近視性玻璃體腔深度的延長、抑制近視性眼軸長度的延長等方面來實(shí)現(xiàn)防治近視的作用，且對正常眼的屈光參數(shù)發(fā)育影響不大，說明氯硝柳胺可以作為一種防治近視的潛在藥物，具有一定的研究前景。
【IPC分類】A61P27/10, A61K31/167
【公開號】CN105030747
【申請?zhí)枴緾N201510386506
【發(fā)明人】劉祖國, 劉真, 楊文照, 朱貞貞, 邱芳芳, 李煒, 陳文生
【申請人】廈門大學(xué)
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年7月3日