天后觀察雙眼角膜的角膜曲率Kj (j = 1、2~10)及角膜中央厚度（CCT)Hj (j = 1、 2…10) 〇
[0077] 3、結(jié)果分析
[0078] 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對處理前與處理15天后的雙眼角膜平均曲率
[0079] (Km = 1/10(K1+K2+…K10)，K'm = 1/10(K' 1+K' 2+...+K' 10))、角膜中央厚度 (CCT) (Hm= 1/10(H1+H2+…H10)，H'm= 1/10(H' 1+H' 2+…H' 10))進行分析，所有數(shù)據(jù)結(jié) 果以均數(shù)土標準差表示，實驗數(shù)據(jù)結(jié)果見表1和表2。每只兔子的左右眼的角膜平均曲率 及角膜中央厚度改變值分別進行配對t檢驗，P〈0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0080] 實施例2
[0081] I、II型膠原酶溶液的配制
[0082] I. IPBS溶液的配制
[0083]將0? 27g的磷酸二氫鉀（KH2P04)、1?42g的磷酸氫二鈉（Na2HP(M)、8g的氯化鈉 (NaCl)、0. 2g的氯化鉀（KCl)用800mL的去離子水充分攪拌溶解，定容到1L，并使用濃鹽酸 調(diào)pH至7. 4,得到PBS溶液。
[0084] I. 211型膠原酶溶液的配制
[0085] 將24mg右旋糖酐粉末和I. 8g II型膠原酶粉末溶解于100mL的PBS緩沖液中， 輕輕渦旋振蕩，使其充分溶解，然后用低蛋白結(jié)合的0. 22um的濾膜過濾除菌，分裝成小份 量，-20°C保存避光凍存。
[0086] 2、活體圓錐角膜模型的建立
[0087]術(shù)前對10只實驗兔進行常規(guī)裂隙燈、直接眼底線、角膜曲率、中央角膜厚度等檢 查，排除眼前節(jié)病變，10只新西蘭白兔采用右眼為實驗眼和左眼為對照眼。將實驗兔固定 于試驗操作臺上，將5%戊巴比妥鈉注射液以0. 5ml/Kg行實驗兔耳緣靜脈緩慢推注將兔麻 醉，鹽酸奧卡因滴眼液滴3滴，使角膜表面浸潤麻醉；采用手持角膜曲率計和手持角膜超聲 測厚儀觀測右眼角膜曲率Ki(i = 1、2…10)、左眼角膜曲率K'i(i = 1、2…10)及角膜中央 厚度（CCT)Hi (i = 1、2~10)。采用小圓刀片和角膜刮刀去刮除角膜中心直徑8mm的角膜 上皮，采用移液器將步驟1配置的18mg/ml的膠原酶溶液滴入右眼，滴入量為200ul，浸泡右 眼角膜20min，同時左眼角膜使用含有24%右旋糖苷的PBS溶液浸泡20min。隨后采用棉 簽吸干溶液，PBS溶液沖洗多次洗凈殘留溶液，在手術(shù)眼部涂抹迪可羅眼膏預(yù)防感染，在處 理5天后觀察雙眼角膜的角膜曲率Kj (j = 1、2*" 10)及角膜中央厚度（CCT)Hj (j = 1、2… 10) 〇
[0088] 3、結(jié)果分析
[0089] 采用SPSS17. 0統(tǒng)計學(xué)軟件對處理前與處理5天后的雙眼角膜平均曲率
[0090] (Km = 1/10(K1+K2+…K10)，K'm = 1/10(K' 1+K' 2+...+K' 10))、角膜中央厚度 (CCT) (Hm= 1/10(H1+H2+…H10)，H'm= 1/10(H' 1+H' 2+…H' 10))進行分析，所有數(shù)據(jù)結(jié) 果以均數(shù)土標準差表示，實驗數(shù)據(jù)結(jié)果見表1和表2。每只兔子的左右眼的角膜平均曲率 及角膜中央厚度改變值分別進行配對t檢驗，P〈0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0091] 實施例3
[0092] 1、II型膠原酶溶液的配制
[0093] I. IPBS溶液的配制
[0094]將0?27g的磷酸二氫鉀（KH2P04)、1?42g的磷酸氫二鈉（Na2HP(M)、8g的氯化鈉 (NaCl)、0. 2g的氯化鉀（KCl)用800mL的去離子水充分攪拌溶解，定容到1L，并使用濃鹽酸 調(diào)pH至7. 4,得到PBS溶液。
[0095] I.211型膠原酶溶液的配制
[0096] 將IOmg右旋糖酐粉末和1.0 g II型膠原酶粉末溶解于100mL的PBS緩沖液中， 輕輕渦旋振蕩，使其充分溶解，然后用低蛋白結(jié)合的0. 22um的濾膜過濾除菌，分裝成小份 量，-20°C保存避光凍存。
[0097] 2、活體圓錐角膜模型的建立
[0098] 術(shù)前對10只實驗兔進行常規(guī)裂隙燈、直接眼底線、角膜曲率、中央角膜厚度等檢 查，排除眼前節(jié)病變，10只新西蘭白兔采用右眼為實驗眼和左眼為對照眼。將實驗兔固定 于試驗操作臺上，將5%戊巴比妥鈉注射液以0. 5ml/Kg行實驗兔耳緣靜脈緩慢推注將兔麻 醉，鹽酸奧卡因滴眼液滴3滴，使角膜表面浸潤麻醉；采用手持角膜曲率計和手持角膜超聲 測厚儀觀測右眼角膜曲率Ki(i = 1、2…10)、左眼角膜曲率K'i(i = 1、2…10)及角膜中央 厚度（CCT)Hi (i = 1、2…10)。采用小圓刀片和角膜刮刀去刮除角膜中心直徑8mm的角膜上 皮，采用移液器將步驟1配置的lOmg/ml的膠原酶溶液滴入右眼，滴入量為200ul，浸泡右眼 角膜40min，同時左眼角膜使用含有10%右旋糖苷的PBS溶液浸泡40min。隨后采用棉簽吸 干溶液，PBS溶液沖洗多次洗凈殘留溶液，在手術(shù)眼部涂抹迪可羅眼膏預(yù)防感染，在處理10 天后觀察雙眼角膜的角膜曲率Kj (j = 1、2…10)及角膜中央厚度（CCT)Hj (j = 1、2…10)。
[0099]3、結(jié)果分析
[0100] 采用SPSS17. O統(tǒng)計學(xué)軟件對處理前與處理10天后的雙眼角膜平均曲率 [0101] (Km = 1/10(K1+K2+…K10)，K'm = 1/10(K' 1+K' 2+…+K' 10))、角膜中央厚度 (CCT) (Hm= 1/10(H1+H2+…H10)，H'm= 1/10(H' 1+H' 2+…H' 10))進行分析，所有數(shù)據(jù)結(jié) 果以均數(shù)土標準差表示，實驗數(shù)據(jù)結(jié)果見表1和表2。每只兔子的左右眼的角膜平均曲率 及角膜中央厚度改變值分別進行配對t檢驗，P〈0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0102] 表1實驗前后角膜平均曲率數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析結(jié)果
[0103]
[0104] 根據(jù)表1，以上不同實施例中右眼實驗前后的角膜平均曲率都明顯高于處理前的 角膜平均率，而且P值均小于〇. 01，而左眼對照組實驗前后的角膜平均曲率差異不明顯，計 算得到的P值無統(tǒng)計學(xué)意義，證明經(jīng)過各個實施例處理方案實驗前后的角膜平均曲率均具 有顯著性差異，左眼對照組角膜平均曲率在實驗前后無差異。
[0105] 表2實驗前后角膜平均中央厚度數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析結(jié)果
[0106]
[0107] 根據(jù)表2,以上不同實施例中右眼實驗前后的角膜中央厚度都明顯低于處理前的 角膜平均率，而且P值均小于〇. 01，而左眼對照組實驗前后的角膜中央厚度差異不明顯，分 析計算得到的P值遠大于〇. 05,無統(tǒng)計學(xué)意義，證明經(jīng)過各個實施例處理方案實驗前后的 角膜中央厚度均具有顯著性差異，左眼對照組角膜中央厚度在實驗前后無差異。
[0108] 通過以上不同實施例中不同濃度的II型膠原酶處理并在不同處理時間下檢測角 膜曲率數(shù)據(jù)與角膜中央厚度差值數(shù)據(jù)（CCT)，進一步分析結(jié)果，證明在實驗前后活體的兔角 膜的平均曲率顯著增加，并且角膜的中央厚度也顯著減少，這與臨床圓錐角膜的病理狀態(tài) 所呈現(xiàn)的曲率增加、中央厚度減少是一致的。由此，可得出該模型可作為有效可靠的活體角 膜擴張模型，可用來研究圓錐角膜發(fā)病機制和探索安全有效的治療方法。此外，本裝置中所 述的工具和材料來源充足、成本低、涉及到的手術(shù)操作構(gòu)建方法簡單，更加有利于臨床上的 廣泛推廣應(yīng)用。
【主權(quán)項】
1. 一種實現(xiàn)兔角膜擴張模型的裝置，其特征在于，包括： 去上皮工具，用于除去兔角膜的上皮； 角膜浸泡工具，用于對除去上皮的兔角膜進行浸泡處理，使兔角膜擴張； 涂膏工具，用于將防感染劑涂抹在浸泡處理后的兔角膜上。2. 如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，還包括麻醉工具，用于除去兔角膜的上皮之 前，對兔角膜進行麻醉處理。3. 如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述的角膜浸泡工具包括： 作用于角膜上，用于浸泡角膜的II型膠原酶溶液； 用于將所述II型膠原酶溶液施用于角膜上的移液器； 由于清除殘留的膠原酶溶液的棉簽； 用于沖洗角膜的PBS溶液； 用于將PBS溶液對角膜進行沖洗處理的注射器。4. 如權(quán)利要求3所述的裝置，其特征在于，所述II型膠原酶的濃度為3-18mg/ml。5. 如權(quán)利要求1所述的裝置，其特征在于，所述涂膏工具包括： 用于防病原菌侵入浸泡處理后的兔角膜上的防感染處理劑； 用于將所述放感染處理劑涂抹在兔角膜上的無菌棉簽。6. 如權(quán)利要求5所述的裝置，其特征在于，所述防感染處理劑選自迪可羅眼膏、紅霉素 眼膏或托百士眼膏中的一種。7. 如權(quán)利要求2所述的裝置，其特征在于，所述麻醉工具包括： 用于麻醉兔角膜，使其失去感知能力的麻醉劑； 用于將麻醉劑注射入兔角膜的注射器。8. 如權(quán)利要求7所述的裝置，其特征在于，所述麻醉劑選自鹽酸奧布卡因滴眼液、奧布 卡因凝膠或奧布卡因滴眼液中的一種。9. 一種兔角膜擴張模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括： 使用去上皮工具，除去兔角膜的上皮結(jié)構(gòu)，得到除去上皮的兔角膜； 使用角膜浸泡工具，對除去上皮的兔角膜進行浸泡處理，使角膜上的膠原發(fā)生降解，得 到膠原降解的兔角膜； 利用涂膏工具，將防感染劑涂抹在膠原降解的兔角膜上，得到具有抵抗病原菌侵入的 兔角膜； 將所述手術(shù)處理角膜的實驗兔飼養(yǎng)5-15天，即得到活體兔角膜擴張模型。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種實現(xiàn)活體兔角膜擴張模型的裝置及其構(gòu)建方法，涉及醫(yī)學(xué)動物模型技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明中構(gòu)建兔角膜擴張模型的裝置包括去上皮工具、角膜浸泡工具以及麻醉工具等。采用該裝置，進行手術(shù)操作，如去角膜上皮、不同濃度的膠原酶對角膜進行浸泡處理等，從而實現(xiàn)活體兔角膜的成功構(gòu)建。本裝置中所述的工具和材料來源充足、成本低、涉及到的手術(shù)操作構(gòu)建方法簡單；所構(gòu)造的模型與臨床圓錐角膜的病理狀態(tài)一致，可用于圓錐角膜的機理性研究。
【IPC分類】A61K49/00, A61K38/48
【公開號】CN105031668
【申請?zhí)枴緾N201510570341
【發(fā)明人】晏曉明, 喬靜, 湯韻, 宋文靜, 李海麗, 榮蓓, 楊松霖, 吳元
【申請人】北京大學(xué)第一醫(yī)院
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年9月9日